GC‑MS/MS测定食用香精中3‑乙酰基‑2,5‑二甲基噻吩的方法与流程

本发明属于食品添加剂检测技术领域，具体涉及gc-ms/ms测定食用香精中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法。

背景技术：

合成香料3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩具有烧烤、坚果的气味，于2002年通过世界卫生组织和联合国粮农组织下设的食品添加剂联合专家委员会的安全评估，开始作为食品用香料使用。目前，我国允许其作为食品用合成香料使用，收录于国标gb2760-2014中。2013年6月4日，欧洲食品安全管理局公布了对该物质重新评估的意见，认为其在体内和体外试验均表现出致突变性，作为食品用香料使用存在安全问题。2013年6月14日，欧盟委员会通过法规（regulation(ec)no545/2013），禁止该物质作为食品用香料使用，将其从食品用香料法规附录ⅰ食品用香料清单中删除。中国香精香料化妆品工业协会针对这一情况迅速做出反应，于2013年8月14日发布自律文件（香化协字[2013]62号），要求香料生产企业不得生产用作食品用香料的3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩，食品用香精生产企业调整配方，不得使用该物质。

目前对3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的检测在国标中尚属空白，国内针对此物质的定量检测研究开展的也不多，仅有一篇专利报道以气相色谱-质谱联用仪测定，公开号为：cn1046557775a，其公开了选择性离子监测（sim）模式检测，内标法进行定量。该法存在的主要缺陷是：由于食用香精成分复杂，通常含结构相近化合物，各组分在检测中并不一定能完全分离，容易相互干扰，采用单极质谱检测，准确度和灵敏度都有待考证。

技术实现要素：

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种gc-ms/ms测定食用香精中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法。本发明与单级质谱sim模式相比，本发明中采用多级质谱mrm模式能更准确的定性，同时，因为从干扰严重的一级碎片中抽取了母离子，进一步碎裂得到子离子来定量，灵敏度也高于单级质谱，更适合于微量、痕量物质的检测。

所述的gc-ms/ms测定食用香精中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）将食用香精香料样品用提取溶剂进行超声提取，冷却后用提取溶剂定容，混匀后静置，取上部溶液过微孔滤膜，所述的提取溶剂为正己烷或正庚烷；

2）取步骤1）得到的滤液，采用gc-ms/ms进行测定，外标法定量。

所述的gc-ms/ms测定食用香精中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法，其特征在于所述的步骤1）中超声提取时间至少为15min。

所述的gc-ms/ms测定食用香精中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法，其特征在于所述的步骤1）中微孔滤膜为有机滤膜，孔径为0.22μm或0.45μm。

所述的gc-ms/ms测定食用香精中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法，其特征在于所述的步骤2）中gc-ms/ms的色谱条件为：

色谱柱：hp-innowax或相当者；

进样口温度：240℃；

程序升温条件：50℃保持1min，20℃/min升至200℃，保持3min，再25℃/min升至240℃，保持7min；

分流比为10:1；

柱流速为1.0ml/min；

进样量为1.0μl；

gc-ms/ms质谱条件为：

离子源：电子轰击源；

电子电离能量：70ev；

离子源温度：230℃；

四级杆温度：150℃；

碰撞气体（n2）流速：1.5ml/min；

淬灭气体（he）流速：2.25ml/min；

溶剂延迟：8min；

扫描方式：mrm；

母离子、子离子及碰撞能量如表1：

表1母离子、子离子及碰撞能量表（*为定量离子）

所述的gc-ms/ms测定食用香精中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法，其特征在于所述的步骤2）中外标法定量为用提取溶剂溶解3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩，并用提取溶剂稀释至所需浓度，上机测定，以峰面积或峰高绘制标曲。

所述的gc-ms/ms测定食用香精中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法，其特征在于所述的色谱柱规格为30m×0.25mm×0.25μm或相当者。

本发明首次采用gc-ms/ms检测食用香精中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩；采用mrm模式能有效消除基质效应，提高灵敏度和准确度；外标法线性良好，定量准确，检出限为0.1mg/kg，如图3所示。本方法前处理简单，结果可靠，灵敏度高，对监测食用香精中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的使用情况，保护消费者健康具有一定的现实意义。

附图说明

图1是标准品典型图谱；

图2是加标回收试验样品中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的典型图谱；

图3是检出限（加标量0.1mg/kg）图谱。

具体实施方式

下面结合附图对本发明的技术方案做进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本发明的技术方案进行修改或等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。

实施例：本发明实施例中的样品为粉末状肉味香精

一、标准储备液的制备

精确称取3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩标准品，用正己烷或正庚烷溶解并定容，配制成浓度为1mg/ml的标准储备液。

二、线性标准溶液的制备

取1mg/ml的标准储备液100.0μl，用正己烷或正庚烷稀释并定容至10ml，得10μg/ml的标准使用液。

取10μg/ml的标准使用液10.0μl、20.0μl、40.0μl、80.0μl、100.0μl，150.0μl、200.0μl、0.25ml，用正己烷分别稀释并定容至10ml，得浓度为10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml、100ng/ml、150ng/ml、200ng/ml、250ng/ml的线性标准溶液，供gc-ms/ms测定。

三、气相色谱/质谱条件

色谱条件:采用agilenthp-innowax色谱柱进行分离；进样口温度为240℃；程序升温条件为50℃保持1min，20℃/min升至200℃，保持3min，再25℃/min升至240℃，保持7min；分流比为10:1；柱流速为1.0ml/min；进样量为1.0μl。

质谱条件：离子源为电子轰击源；电子电离能量为70ev；离子源温度为230℃；四级杆温度为150℃；碰撞气体（n2）流速为1.5ml/min；淬灭气体（he）流速为2.25ml/min；溶剂延迟时间为8min；扫描方式为mrm；母离子、子离子及碰撞能量如下表所示。

四、样品测定

准确称取样品0.1g于10ml容量瓶中，加入约7ml正己烷，超声提取15min，静置冷却后用正己烷定容，混匀后静置数分钟，上部提取液过0.22μm有机相滤膜，取续滤液待上机测定。同时做试剂空白。

经测试发现，试剂空白无干扰，样品未检出。

五、加标回收试验样品测定

准确称取样品0.1g于10ml容量瓶中，按表2中所列的加标量进行加标，然后同样品处理，续滤液待上机测定。考察回收率。各加标水平平行测定3份。

表2三水加标试验加标量及平均回收率表

从表2可知，样品的加标回收率在94.9~100.3之间，说明本方法回收率较好。

图1是标准品典型图谱；图2是加标回收试验样品中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的典型图谱。从图中可以得到，目标物峰型对称，响应良好。

六、方法精密度试验

上述加标（中水平）样品平行制备6份，测定结果见表3。

表3方法精密度试验结果表

从表3可知，本方法重复性好。