一种丹绿补肾胶囊的薄层色谱鉴别方法与流程

本发明属于药物分析技术领域，更具体地说，是涉及一种丹绿补肾胶囊的薄层色谱鉴别方法。

背景技术：

在防病治病方面，中药复方提取制剂占据着重要的位置，中药提取之后，其植物组织已不符存在，显微鉴别亦无能为力，所以其质量控制方法都是以各种有效成分为指标，进行薄层鉴别与含量测定。但在各类国家质量标准中，薄层鉴别多是处理一个样品溶液，一块薄层板，展开一次，一种显色剂，鉴别一味药材。为排除干扰，样品的前处理程序多复杂、烦琐，需用大量的有机试剂反复纯化处理，费力、费时、费试剂、污染环境，危害健康，检测周期长。检测速度严重制约着中药现代化生产速度。所以寻找简便、快捷的检测方法、提高检测效率、降低检测成本，成为中药质量控制必须突破的难关。

丹绿补肾胶囊(国药准字z20025620)是由白花丹、绿包藤、射干、胡椒、干姜5味药组成的中成药制剂，为云南神威施普瑞药业有限公司的独家品种。中医补肾滋阴壮阳。用于阴阳两虚所致阳痿遗精，腰膝酸软，身体乏力。2013年本品标准地标升国标由试行标准ws-10436(zd-0436)-2002转为正式标准ws-10436(zd-0436)-2002-2012z。

丹绿补肾胶囊执行的现行国家药品标准ws-10436(zd-0436)-2002-2012z中薄层鉴别包括白花丹、绿包藤及胡椒碱的鉴别，需要分别制备供试品溶液，其中用到丙酮、乙醚等易制毒试剂处理供试品，并且处理方法涉及到浸渍24h及加热回流等方式。该鉴别过程复杂、繁琐，耗费较多人力、物力、时间。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种丹绿补肾胶囊的薄层色谱鉴别方法，旨在解决供试品溶液制备过程复杂，所用试剂毒性大，且鉴别过程复杂、繁琐的问题。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种丹绿补肾胶囊的薄层色谱鉴别方法，所述丹绿补肾胶囊由白花丹、绿包藤、射干、胡椒、干姜制备而成，取所述丹绿补肾胶囊内容物0.8-1.2g，加入甲醇4-6ml，超声提取15-60min，过滤，滤液即为包含白花丹、绿包藤、射干、胡椒的供试品溶液；

白花丹的薄层色谱鉴别至少包括以下步骤：

步骤1、取白花丹对照药材0.8-1.2g，加入甲醇4-6ml，超声提取15-60min，过滤，滤液即为白花丹对照品溶液；

步骤2、分别吸取所述供试品和白花丹对照品溶液各2-10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以石油醚-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝乙醇溶液，加热，置于365nm紫外光灯下检视；得到的所述供试品色谱中，在与所述白花丹对照品溶液的色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

绿包藤的薄层色谱鉴别至少包括以下步骤：

步骤1、取绿包藤对照药材0.8-1.2g，加甲醇4-6ml，超声处理15-60min，过滤，滤液即为绿包藤对照品溶液；

步骤2、分别吸取所述供试品和绿包藤对照品溶液各2-10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，得到的所述供试品色谱中，在与所述绿包藤对照品溶液的色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

射干薄层色谱鉴别至少包括以下步骤：

步骤1、取射干对照药材0.8-1.2g，加甲醇4-6ml，超声处理15-60min，过滤，滤液即为射干对照品溶液；

步骤2、分别吸取所述供试品和射干对照品溶液各2-10μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以三氯甲烷-丁酮-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置于254nm紫外光灯下检视；得到的所述供试品色谱中，在与所述射干对照品溶液的色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

胡椒的薄层色谱鉴别至少包括以下步骤：

步骤1、取胡椒碱对照品，加甲醇，制成每1ml甲醇中含4.8-5.2mg胡椒碱对照品的溶液，即为胡椒碱对照品溶液；

步骤2、分别吸取所述供试品和胡椒碱对照品溶液各2-10μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置于254nm紫外光灯下检视；得到的所述供试品色谱中，在与所述胡椒碱对照品溶液的色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

优选地，所述石油醚-三氯甲烷-甲醇展开剂中，按照体积比为石油醚：三氯甲烷：甲醇＝6-10：3-5：0.5-2。

优选地，所述正己烷-乙酸乙酯展开剂中，按照体积比为正己烷-乙酸乙酯＝6-10：0.5-2.5。

优选地，所述三氯甲烷-丁酮-甲醇展开剂中，按照体积比为三氯甲烷-丁酮-甲醇＝2-4：0.5-2：0.5-2。

优选地，所述环己烷-乙酸乙酯-甲醇展开剂中，按照体积比为环己烷-乙酸乙酯-甲醇＝8-10：1-4：0.5-2。

优选地，所述供试品溶液、白花丹对照品溶液、绿包藤对照品溶液、射干对照品溶液、胡椒碱对照品溶液制备过程中甲醇的体积浓度均为90-100％。

优选地，所述供试品溶液、白花丹对照品溶液、绿包藤对照品溶液、射干对照品溶液制备过程中超声处理功率均为50-600w、频率均为20-50khz。

优选地，所述三氯化铝乙醇溶液的密度为2-5％，所述磷钼酸乙醇溶液的密度为8-12％。

优选地，所述白花丹、绿包藤所用的硅胶g薄层板的加热温度均为100-110℃。

优选地，所述石油醚的沸程为30-60℃。

本发明提供的一种丹绿补肾胶囊的薄层色谱鉴别方法的有益效果在于：与现有技术相比，本发明供试品与对照品溶液制备过程简单，试剂低毒性及用量少，鉴别方法简单快捷，斑点清晰，重复性好，阴性对照无干扰。

附图说明

图1为本发明制剂中白花丹专属性考察结果示意图；

图2为本发明实施例采用温度7℃相对湿度32％对白花丹考察结果示意图；

图3为本发明实施例采用温度20℃相对湿度43％对白花丹考察结果示意图；

图4为本发明实施例采用温度40℃相对湿度75％对白花丹考察结果示意图；

图5为本发明实施例采用青岛海洋薄层板对白花丹考察结果示意图；

图6为本发明实施例采用自铺薄层板对白花丹考察结果示意图；

图7为本发明实施例采用青岛胜海薄层板对白花丹考察结果示意图；

图8为本发明制剂中绿包藤专属性考察结果示意图；

图9为本发明实施例采用温度7℃相对湿度35％对绿包藤考察结果示意图；

图10为本发明实施例采用温度22℃相对湿度41％对绿包藤考察结果示意图；

图11为本发明实施例采用温度40℃相对湿度75％对绿包藤考察结果示意图；

图12为本发明实施例采用青岛海洋薄层板对绿包藤考察结果示意图；

图13为本发明实施例采用自铺薄层板对绿包藤考察结果示意图；

图14为本发明实施例采用青岛胜海薄层板对绿包藤考察结果示意图；

图15为本发明制剂中射干专属性考察结果示意图；

图16为本发明实施例采用温度7℃相对湿度37％对射干考察结果示意图；

图17为本发明实施例采用温度20℃相对湿度46％对射干考察结果示意图；

图18为本发明实施例采用温度40℃相对湿度75％对射干考察结果示意图；

图19为本发明实施例采用青岛海洋薄层板对射干考察结果示意图；

图20为本发明实施例采用自铺薄层板对射干考察结果示意图；

图21为本发明实施例采用青岛胜海薄层板对射干考察结果示意图；

图22为本发明制剂中胡椒专属性考察结果示意图；

图23为本发明实施例采用温度7℃相对湿度31％对胡椒考察结果示意图；

图24为本发明实施例采用温度23℃相对湿度46％对胡椒考察结果示意图；

图25为本发明实施例采用温度40℃相对湿度75％对胡椒考察结果示意图；

图26为本发明实施例采用青岛海洋薄层板对胡椒考察结果示意图；

图27为本发明实施例采用自铺薄层板对胡椒考察结果示意图；

图28为本发明实施例采用青岛胜海薄层板对胡椒考察结果示意图。

具体实施方式

为了使本发明所要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

一种丹绿补肾胶囊的薄层色谱鉴别方法，所述丹绿补肾胶囊由白花丹、绿包藤、射干、胡椒、干姜制备而成，取所述丹绿补肾胶囊内容物0.8-1.2g，加入甲醇4-6ml，超声提取15-60min，过滤，滤液即为包含白花丹、绿包藤、射干、胡椒的供试品溶液；

白花丹的薄层色谱鉴别至少包括以下步骤：

步骤1、取白花丹对照药材0.8-1.2g，加入甲醇4-6ml，超声提取15-60min，过滤，滤液即为白花丹对照品溶液；

步骤2、分别吸取所述供试品和白花丹对照品溶液各2-10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以石油醚-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝乙醇溶液，加热，置于365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与白花丹对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

绿包藤的薄层色谱鉴别至少包括以下步骤：

步骤1、取绿包藤对照药材0.8-1.2g，加甲醇4-6ml，超声处理15-60min，过滤，滤液即为绿包藤对照品溶液；

步骤2、分别吸取所述供试品和绿包藤对照品溶液各2-10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与绿包藤对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

射干薄层色谱鉴别至少包括以下步骤：

步骤1、取射干对照药材0.8-1.2g，加甲醇4-6ml，超声处理15-60min，过滤，滤液即为射干对照品溶液；

步骤2、分别吸取所述供试品和射干对照品溶液各2-10μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以三氯甲烷-丁酮-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置于254nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与射干对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

胡椒的薄层色谱鉴别至少包括以下步骤：

步骤1、取胡椒碱对照品，加甲醇，制成每1ml甲醇中含4.8-5.2mg胡椒碱对照品的溶液，即为胡椒碱对照品溶液；

步骤2、分别吸取所述供试品和胡椒碱对照品溶液各2-10μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置于254nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与胡椒碱对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

具体地，上述本发明所述的丹绿补肾胶囊，按重量份计，由以下原料组成：白花丹：2-4份，绿包藤：8-12份，射干：8-12份，胡椒：1-3份，干姜：2-4份。

进一步地，本发明所述丹绿补肾胶囊的按照以下方法制备而成：按重量份计算，称取白花丹、绿包藤、射干、胡椒、干姜五味药；所述绿包藤、射干粉碎成粗粉，用乙醇作溶剂，浸渍48小时后渗漉，收集漉液，回收乙醇并浓缩成清膏；干姜切片，用水蒸气蒸馏提取挥发油；白花丹、胡椒粉碎成粗粉，混匀，加乙醇提取三次，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩成清膏，合并上述两种清膏，在水浴上浓缩成稠膏，干燥，与用淀粉吸附的姜油混合，粉碎，过筛，混匀，装入胶囊，即得丹绿补肾胶囊。

为了确保本发明的效果，申请人对制剂中白花丹、绿包藤、射干、胡椒的鉴别方法进行了相应的试验研究与论证，具体如下：

1、白花丹的鉴别

供试品溶液的制备：取本品内容物1g，加入甲醇5ml，超声提取30min，过滤，滤液即为白花丹供试品溶液。

对照品溶液的制备：取白花丹对照药材1g，加入甲醇5ml，超声提取30min，过滤，滤液即为白花丹对照品溶液。

阴性样品溶液制备：按处方配比，取除白花丹以外的其他药味按工艺制得胶囊剂，再按上述供试品溶液制备方法制得白花丹阴性样品溶液。

薄层条件：照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，分别吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以体积比为8：4：1的石油醚(30-60℃)-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以密度为2％的三氯化铝乙醇溶液，在105℃下加热2min，置于365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与白花丹对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(1)专属性考察

丹绿补肾胶囊由云南神威施普瑞药业有限公司提供，分别采用10个不同批次的样品，按照上述方法进行实验，结果如图1所示，图1中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10分别为10个批次样品，s为白花丹对照品；由图1可知：在于白花丹对照品相应的位置上，显相同颜色清晰斑点，斑点圆整，分离效果好。该方法专属性强，斑点显色清晰。

经过上述中药质量标准分析方法验证，表明该薄层鉴别方法可行，专属性强，操作简单。

(2)耐用性考察

连续用三个批次的样品，按照上述方法进行实验：

a、不同温度及相对湿度的考察，如表1所示，考察结果如图2、图3、图4所示；图2、图3、图4中，1、2、3分别为3批样品，4为阴性对照，s为白花丹对照。

表1不同温度及湿度的考察

b、不同厂牌硅胶g薄层板的考察结果如图5、图6、图7所示，其中图5为青岛海洋薄层板，图6为自铺薄层板，图7为青岛胜海薄层板，图5、图6、图7中，1、2、3为3批样品，4为阴性对照，s为白花丹对照。

由上述的不同厂牌硅胶g薄层板、不同温度及相对湿度的考察实验结果可知：供试品色谱中，在与白花丹对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；斑点圆整，分离效果好，阴性对照无干扰；细微的变动，该鉴别方法仍然有效。

2、绿包藤的鉴别

供试品溶液的制备：取本品内容物1g，加入甲醇5ml，超声提取30min，过滤，滤液即为绿包藤供试品溶液。

对照品溶液的制备：取绿包藤对照药材1g，加入甲醇5ml，超声提取30min，过滤，滤液即为绿包藤对照品溶液。

阴性样品溶液制备：按处方配比，取除绿包藤以外的其他药味按工艺制得胶囊剂，再按上述供试品溶液制备方法制得绿包藤阴性样品溶液。

薄层条件：照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，分别吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以体积比8.5：1.5的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以密度为10％的磷钼酸乙醇溶液，在100℃下加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与绿包藤对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(1)专属性考察

丹绿补肾胶囊由云南神威施普瑞药业有限公司提供，分别采用10个不同批次的样品，按照上述方法进行实验，结果如图8所示，图8中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10分别为10个批次样品，s为绿包藤对照；由图8可知：在于对照品相应的位置上，显相同颜色清晰斑点，斑点圆整，分离效果好。该方法专属性强，斑点显色清晰。

经过上述中药质量标准分析方法验证，表明该薄层鉴别方法可行，专属性强，操作简单。

(2)耐用性考察

连续用三个批次的样品，按照上述方法进行实验：

a、不同温度及相对湿度的考察，如表2所示，考察结果如图9、图10、图11所示；图9、图10、图11中，1、2、3为3批样品，4为阴性对照，s为绿包藤对照。

表2不同温度及湿度的考察

b、不同厂牌硅胶g薄层板的考察结果如图12、图13、图14所示，其中图12为青岛海洋薄层板，图13为自铺薄层板，图14为青岛胜海薄层板，图12、图13、图14中，1、2、3为3批样品，4为阴性对照，s为绿包藤对照。

由上述的不同厂牌硅胶g薄层板、不同温度及相对湿度的考察实验结果可知：绿包藤供试品色谱中，在与绿包藤对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；斑点圆整，分离效果好，阴性对照无干扰；细微的变动，该鉴别方法仍然有效。

3、射干的鉴别

供试品溶液的制备：取本品内容物1g，加入甲醇5ml，超声提取30min，过滤，滤液即为射干供试品溶液。

对照品溶液的制备：取射干对照药材1g，加入甲醇5ml，超声提取30min，过滤，滤液即为射干对照品溶液。

阴性样品溶液制备：按处方配比，取除射干以外的其他药味按工艺制得胶囊剂，再按上述供试品溶液制备方法制得射干阴性样品溶液。

薄层条件：照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，分别吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以体积比为3：1：1的三氯甲烷-丁酮-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置于254nm紫外光灯下检视；射干供试品色谱中，在与射干对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(1)专属性考察

丹绿补肾胶囊由云南神威施普瑞药业有限公司提供，分别采用10个不同批次的样品，按照上述方法进行实验，结果如图15所示，图15中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10分别为10个批次样品，s为射干对照；由图15可知：在与射干对照品相应的位置上，显相同颜色清晰斑点，斑点圆整，分离效果好。该方法专属性强，斑点显色清晰。

经过上述中药质量标准分析方法验证，表明该薄层鉴别方法可行，专属性强，操作简单。

(2)耐用性考察

连续用三个批次的样品，按照上述方法进行实验：

a、不同温度及相对湿度的考察，如表3所示，考察结果如图16、图17、图18所示；图16、图17、图18中，1、2、3为3批样品，4为阴性对照，s为射干对照。

表3不同温度及湿度的考察

b、不同厂牌硅胶g薄层板的考察结果如图19、图20、图21所示，其中图19为青岛海洋薄层板，图20为自铺薄层板，图21为青岛胜海薄层板，图19、图20、图21中，1、2、3为3批样品，4为阴性对照，s为射干对照。

由上述的不同厂牌硅胶g薄层板、不同温度及相对湿度的考察实验结果可知：射干供试品色谱中，在与射干对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；斑点圆整，分离效果好，阴性对照无干扰；细微的变动，该鉴别方法仍然有效。

4、胡椒的鉴别

供试品溶液的制备：取本品内容物1g，加入甲醇5ml，超声提取30min，过滤，滤液即为胡椒供试品溶液。

对照品溶液的制备：取胡椒碱对照品，加甲醇，制成每1ml甲醇中含5mg胡椒碱对照品的溶液，即为胡椒碱对照品溶液。

阴性样品溶液制备：按处方配比，取除胡椒以外的其他药味按工艺制得胶囊剂，再按上述供试品溶液制备方法制得胡椒阴性样品溶液。

薄层条件：照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，分别吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以体积比为10：3：1的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置于254nm紫外光灯下检视；胡椒供试品色谱中，在与胡椒碱对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(1)专属性考察

丹绿补肾胶囊由云南神威施普瑞药业有限公司提供，分别采用10个不同批次的样品，按照上述方法进行实验，结果如图22所示，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10分别为10个批次样品，s为胡椒碱对照；由图22可知：在于胡椒对照品相应的位置上，显相同颜色清晰斑点，斑点圆整，分离效果好。该方法专属性强，斑点显色清晰。

经过上述中药质量标准分析方法验证，表明该薄层鉴别方法可行，专属性强，操作简单。

(2)耐用性考察

连续用三个批次的样品，按照上述方法进行实验：

a、不同温度及相对湿度的考察，如表4所示，考察结果如图23、图24、图25所示；图23、图24、图25中，1、2、3为3批样品，4为阴性对照，s为胡椒碱对照。

表4不同温度及湿度的考察

b、不同厂牌硅胶g薄层板的考察结果如图26、图27、图28所示，其中图26为青岛海洋薄层板，图27为自铺薄层板，图28为青岛胜海薄层板，图26、图27、图28中，1、2、3为3批样品，4为阴性对照，s为胡椒碱对照。

由上述的不同厂牌硅胶g薄层板、不同温度及相对湿度的考察实验结果可知：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；斑点圆整，分离效果好，阴性对照无干扰；细微的变动，该鉴别方法仍然有效。

为了更好的解释说明本发明的技术方案，下面通过具体的实施例对丹绿补肾胶囊的薄层色谱鉴别方法做详细的解释说明。

所述包含白花丹、绿包藤、射干、胡椒的供试品溶液与白花丹、绿包藤、射干、胡椒的对照品溶液，分别加入甲醇4-6ml，超声提取15-60min，过滤即得，试剂低毒性，且用量少，制备过程简单。

实施例1

丹绿补肾胶囊的制备

所述丹绿补肾胶囊，按重量份计，由以下原料组成：白花丹：2-4份，绿包藤：8-12份，射干：8-12份，胡椒：1-3份，干姜：2-4份。

所述丹绿补肾胶囊的按照以下方法制备而成：按重量份计算，称取白花丹、绿包藤、射干、胡椒、干姜五味药；所述绿包藤、射干粉碎成粗粉，用乙醇作溶剂，浸渍48小时后渗漉，收集漉液，回收乙醇并浓缩成清膏；干姜切片，用水蒸气蒸馏提取挥发油；白花丹、胡椒粉碎成粗粉，混匀，加乙醇提取三次，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩成清膏，合并上述两种清膏，在水浴上浓缩成稠膏，干燥，与用淀粉吸附的姜油混合，粉碎，过筛，混匀，装入胶囊，即得丹绿补肾胶囊。

性状：本品为硬胶囊，内容物应为棕黄色至棕褐色粉末及颗粒；味辛、苦，具胡椒气味。

实施例2

对实施例1制备的丹绿补肾胶囊的薄层鉴别方法，包括对白花丹、绿包藤、射干、胡椒的薄层色谱鉴别。

取丹绿补肾胶囊内容物1g，加入甲醇5ml，超声提取15min，过滤，滤液即为含有白花丹、绿包藤、射干、胡椒的供试品溶液。

白花丹的薄层色谱鉴别至少包括以下步骤：

步骤1、取白花丹对照药材1g，加入甲醇5ml，超声提取15min，过滤，滤液即为白花丹对照品溶液；

步骤2、照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，分别吸取白花丹供试品和白花丹对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以体积比为6：3：0.5的石油醚(30-60℃)-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以密度为2％的三氯化铝乙醇溶液，在110℃下加热，置于365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与白花丹对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

绿包藤的薄层色谱鉴别至少包括以下步骤：

步骤1、取绿包藤对照药材1g，加甲醇5ml，超声处理15min，过滤，滤液即为绿包藤对照品溶液；

步骤2、照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，分别吸取绿包藤供试品和对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以体积比6：0.5的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以密度为8％的磷钼酸乙醇溶液，在110℃下加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与绿包藤对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

射干薄层色谱鉴别至少包括以下步骤：

步骤1、取射干对照药材1g，加甲醇5ml，超声处理15min，过滤，滤液即为射干对照品溶液；

步骤2、照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，分别吸取射干供试品和射干对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以体积比为2：0.5：0.5三氯甲烷-丁酮-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置于254nm紫外光灯下检视；射干供试品色谱中，在与射干对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

胡椒的薄层色谱鉴别至少包括以下步骤：

步骤1、取胡椒碱对照品，加甲醇，制成每1ml甲醇中含5mg胡椒碱对照品的溶液，即为胡椒碱对照品溶液；

步骤2、照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，分别吸取胡椒供试品和胡椒碱对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以体积比为8：1：0.5的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置于254nm紫外光灯下检视；胡椒供试品色谱中，在与胡椒碱对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

实施例3

对实施例1制备的丹绿补肾胶囊的薄层鉴别方法，包括对白花丹、绿包藤、射干、胡椒的薄层色谱鉴别。

取丹绿补肾胶囊内容物1g，加入甲醇5ml，超声提取30min，过滤，滤液即为含有白花丹、绿包藤、射干、胡椒的供试品溶液。

白花丹的薄层色谱鉴别至少包括以下步骤：

步骤1、取白花丹对照药材1g，加入甲醇5ml，超声提取30min，过滤，滤液即为白花丹对照品溶液；

步骤2、照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，分别吸取白花丹供试品和白花丹对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以体积比为8：4：1的石油醚(30-60℃)-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以密度为3％的三氯化铝乙醇溶液，在105℃下加热，置于365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与白花丹对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

绿包藤的薄层色谱鉴别至少包括以下步骤：

步骤1、取绿包藤对照药材1g，加甲醇5ml，超声处理30min，过滤，滤液即为绿包藤对照品溶液；

步骤2、照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，分别吸取绿包藤供试品和绿包藤对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以体积比8.5：1.5的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以密度为10％的磷钼酸乙醇溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰。绿包藤供试品色谱中，在与绿包藤对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

射干薄层色谱鉴别至少包括以下步骤：

步骤1、取射干对照药材1g，加甲醇5ml，超声处理30min，过滤，滤液即为射干对照品溶液；

步骤2、照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，分别吸取射干供试品和射干对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以体积比为3：1：1的三氯甲烷-丁酮-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置于254nm紫外光灯下检视；射干供试品色谱中，在与射干对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

胡椒的薄层色谱鉴别至少包括以下步骤：

步骤1、取胡椒碱对照品，加甲醇，制成每1ml甲醇中含5mg胡椒碱对照品的溶液，即为胡椒碱对照品溶液；

步骤2、照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，分别吸取胡椒供试品和胡椒碱对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以体积比为10：3：1的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置于254nm紫外光灯下检视；胡椒供试品色谱中，在与胡椒碱对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

实施例4

对实施例1制备的丹绿补肾胶囊的薄层鉴别方法，包括对白花丹、绿包藤、射干、胡椒的薄层色谱鉴别。

取丹绿补肾胶囊内容物1g，加入甲醇5ml，超声提取60min，过滤，滤液即为含有白花丹、绿包藤、射干、胡椒的供试品溶液。

白花丹的薄层色谱鉴别至少包括以下步骤：

步骤1、取白花丹对照药材1g，加入甲醇5ml，超声提取60min，过滤，滤液即为白花丹对照品溶液；

步骤2、照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，分别吸取白花丹供试品和白花丹对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以体积比为10：5：2的石油醚(30-60℃)-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以密度为5％的三氯化铝乙醇溶液，在100℃下加热，置于365nm紫外光灯下检视；白花丹供试品色谱中，在与白花丹对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

绿包藤的薄层色谱鉴别至少包括以下步骤：

步骤1、取绿包藤对照药材1g，加甲醇5ml，超声处理60min，过滤，滤液即为绿包藤对照品溶液；

步骤2、照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，分别吸取绿包藤供试品和绿包藤对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以体积比10：2.5的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以密度为12％的磷钼酸乙醇溶液，在100℃下加热至斑点显色清晰。绿包藤供试品色谱中，在与绿包藤对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

射干薄层色谱鉴别至少包括以下步骤：

步骤1、取射干对照药材1g，加甲醇5ml，超声处理60min，过滤，滤液即为射干对照品溶液；

步骤2、照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，分别吸取射干供试品和射干对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以体积比为2：1：1的三氯甲烷-丁酮-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置于254nm紫外光灯下检视；射干供试品色谱中，在与射干对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

胡椒的薄层色谱鉴别至少包括以下步骤：

步骤1、取胡椒碱对照品，加甲醇，制成每1ml甲醇中含5mg胡椒碱对照品的溶液，即为胡椒碱对照品溶液；

步骤2、照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，分别吸取胡椒供试品和胡椒碱对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以体积比为6：2：1的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置于254nm紫外光灯下检视；胡椒供试品色谱中，在与胡椒碱对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。