快速测定营养健康产品中原花青素含量的紫外分光光度法的制作方法

本发明涉及营养健康产品组分分析测定技术领域，具体而言，涉及一种通过对样品处理及光谱条件的选择，实现对特定的复杂组分样品中原花青素的含量进行准确的定性和定量分析测定的快速测定营养健康产品中原花青素含量的紫外分光光度法。

背景技术：

原花青素，是一种有着特殊分子结构的生物类黄酮，是国际上公认的清除人体内自由基有效的天然抗氧化剂；为了改善血液循环、治疗糖尿病性视网膜病、减轻水肿和抑制静脉曲张等，目前许多保健食品添加了原花青素；但原花青素在食品和一些基质成分复杂的营养健康产品中含量很低，这对原花青素的测定造成了很大的困难。

目前原花青素的测定方法已有比色法、沉淀法和色谱法等；比色法测定结果不精确，对原花青素缺乏专一性；沉淀法的灵敏度受到参与反应的单宁化合物特性的影响，对原花青素缺乏专一性；目前建立的uv方法，采用正丁醇盐酸法，对原花青素进行检测，较比色法和沉淀法相比，已有的uv方法在一般检测过程中提高了灵敏度和专属性，但对于一些组分复杂的营养健康产品，比如含有其他提取物的产品，进行测定时，原有方法为先得到原花青素样品溶液后过滤，取滤液在盐酸存在的条件下加热降解产生红色花青素，红色花青素在545nm处有最大吸收锋；这个过滤过程，一般情况下都是用定性滤纸过滤，由于样品溶液是乙醇提取并洗涤，极易挥发并扩散至滤纸的整个部分，不易全部洗涤下来，从而引起原花青素的损失，导致原花青素含量偏低，重复性不高，达不到检测要求。

技术实现要素：

本发明目的是提供快速测定营养健康产品中原花青素含量的紫外分光光度法，解决了以上技术问题。

为了实现上述技术目的，达到上述的技术要求，本发明所采用的技术方案是：快速测定营养健康产品中原花青素含量的紫外分光光度法；其特征是：主要包括以下步骤：

步骤一、盐酸溶液制备：取70ml浓盐酸，加水稀释至100ml；

步骤二、供试品样品制备：精密称取适量样品，用30.0ml乙醇溶液溶解，加热回流30min，放冷；加入10.0ml乙醇溶液，并加入15.0ml盐酸溶液和10.0ml水，加热回流80min，放冷；用真空泵抽滤并用乙醇溶液洗涤残渣至滤液无色；将滤液移至250ml量瓶中，并用乙醇溶液稀释至刻度，混匀；取此溶液50.0ml至圆底烧瓶中，挥发至剩余液体约为3ml时移入分液漏斗中，用10ml水和5ml水分两次洗涤烧瓶，洗液并入分液漏斗，分三次，每次15ml正丁醇萃取，合并有机层，并用正丁醇稀释至100.0ml，混匀；

步骤三、检测条件设定：

a.1cm比色皿；

b.波长为：545nm；

c.空白：正丁醇；

步骤四、通过待测样品的浓度与吸光度成正比，确定样品中原花青素的含量：

计算公式：

式中75：氯化矢车菊素的吸光度；

a：样品溶液的吸光度；

m：样品的重量，g。

作为优选的技术方案：所述的乙醇溶液的浓度为70%。

作为优选的技术方案：所述的步骤三，以正丁醇作空白，在545nm处用1cm比色皿测定待测样品溶液的吸光度。

本发明的有益效果是：快速测定营养健康产品中原花青素含量的紫外分光光度法，与传统方法相比：对现有uv方法测定保健食品中原花青素含量的样品前处理方法进行改进，方法更加合理，而且由原先的过滤改成直接真空泵抽滤，时间短，速度快，洗涤完全，从而减少了原花青素的损失，实现直接对复杂基质营养健康产品中原花青素含量的准确测定，灵敏度高，选择性好，适用于营养健康产品中原花青素的实际检验。

附图说明

图1为本发明现有技术方法对标准品a和实际样品b分别进行测定的结果；

图2为本发明对标准品c和实际样品d分别进行测定的结果。

具体实施方式

下面结合附图对本发明进一步描述；

在附图中：第一实施例：

快速测定营养健康产品中原花青素含量的紫外分光光度法；主要包括以下步骤：

步骤一、盐酸溶液制备：取70ml浓盐酸，加水稀释至100ml；

步骤二、供试品样品制备：精密称取适量样品，用30.0ml乙醇溶液（70%，v/v）溶解，加热回流30min，放冷；加入10.0ml乙醇溶液（70%，v/v），并加入15.0ml盐酸溶液和10.0ml水，加热回流80min，放冷；用真空泵抽滤并用乙醇溶液（70%，v/v）洗涤残渣至滤液无色；将滤液移至250ml量瓶中，并用乙醇溶液（70%，v/v）稀释至刻度，混匀；取此溶液50.0ml至圆底烧瓶中，挥发至剩余液体约为3ml时移入分液漏斗中，用10ml水和5ml水分两次洗涤烧瓶，洗液并入分液漏斗，分三次，每次用15ml正丁醇萃取，合并有机层，并用正丁醇稀释至100.0ml，混匀；

步骤三、检测条件设定：

a.1cm比色皿；b.波长为：545nm；c.空白：正丁醇；以正丁醇作空白，在545nm处用1cm比色皿测定待测样品溶液的吸光度；

步骤四、通过待测样品的浓度与吸光度成正比，确定样品中原花青素的含量：

计算公式：

式中75：氯化矢车菊素的吸光度；

a：样品溶液的吸光度；

m：样品的重量，g。

第一实施例与现有技术方法测定对比：

多次实验证明该方法的线性范围为20mg-60mg，方法检出限为4mg，回收率为100.6%；事实证明利用此方法能够准确的测出相关样品中原花青素含量，方法满足检测的需要，灵敏度高，选择性好，适用于营养健康产品中原花青素的实际检验。

上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的描述，而并非对实施方式的限定，对于所属领域的技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举，而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。

技术特征：

技术总结
本发明公开了快速测定营养健康产品中原花青素含量的紫外分光光度法；主要包括以下步骤：步骤一、盐酸溶液制备：取70ml浓盐酸，加水稀释至100ml；步骤二、供试品样品制备；步骤三、检测条件设定：以正丁醇作空白，在545nm处用1cm比色皿测定待测样品溶液的吸光度；步骤四、通过待测样品的浓度与吸光度成正比，确定样品中原花青素的含量；对现有UV方法测定保健食品中原花青素含量的样品前处理方法进行改进，方法更加合理，而且由原先的过滤改成直接真空泵抽滤，时间短，速度快，洗涤完全，从而减少了原花青素的损失，实现直接对复杂基质营养健康产品中原花青素含量的准确测定，灵敏度高，选择性好，适用于营养健康产品中原花青素的实际检验。

技术研发人员：刘晴换;包亚君;夏旭东;张沛霞;华建君;徐慧萍
受保护的技术使用者：江苏艾兰得营养品有限公司
技术研发日：2017.11.20
技术公布日：2018.04.24