本发明涉及医学检验领域，特别涉及一种检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒及其定量检测方法。
背景技术：
：脂肪组织(adiposetissue)主要由大量聚集成团的脂肪细胞构成，脂联素(adiponectin)是脂肪细胞分泌的一种内源性生物活性多肽或蛋白质。正常人血清中脂联素的浓度范围在3～30μg/ml，占血浆蛋白总量的0.01％，不随饮食或昼夜节律而改变，女性血清中的脂联素含量大于男性。随着对脂联素研究的不断深入，已发现，脂联素在肥胖症患者和ii型糖尿病患者血清中的浓度明显低于非肥胖者，其浓度的降低导致了胰岛素抵抗和高胰岛素血症，而脂联素有防止动脉粥样硬化斑块形成的作用，因此，脂联素与肥胖症患者ii型糖尿病及冠心病的发生发展密切相关，即脂联素的明显降低预示着ii型糖尿病及冠心病的发生明显增加。测定血中脂联素水平，对这些疾病的诊断和预后有重要意义。而现有技术中一般采用酶联免疫分析试剂盒来检测脂联素浓度，虽然酶联免疫法检测的准确度较高，但是该方法检测过程繁琐，耗时较长，且样本需要批量检测，不适用于及时检测。因此，如何开发一种方便快捷，操作简单，结果准确，灵敏度高，便于临床推广应用的脂联素检测方法和检测产品成为亟待解决的问题。技术实现要素：本发明的主要目的是提出一种检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒及其定量检测方法，具有方便快捷、操作简单、结果准确、灵敏度高的优点，且有利于进行临床推广应用。为实现上述目的，本发明提出的检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒，包括脂联素层析器、样本稀释液、洗涤液及胶体金标记脂联素抗体，所述脂联素层析器包括盒体、盒盖、吸水垫及硝酸纤维素膜，所述盒体具有一开口朝上的容置腔，所述吸水垫设置于所述容置腔内，所述硝酸纤维素膜设置于所述容置腔内且位于所述吸水垫的上方，所述盒盖盖设于所述盒体的开口端，所述盒盖开设有贯穿所述盒盖的上下表面的反应孔，以露出部分所述硝酸纤维素膜；其中，所述硝酸纤维素膜上包被有脂联素抗体。优选地，所述盒盖的下表面向下凸设有位于所述反应孔外缘的导流圈，所述导流圈自上而下呈渐缩设置。优选地，所述导流圈的上端缘的直径为0.6cm，所述导流圈的下端缘的直径为0.3cm。优选地，所述盒体的容置腔内设有安装槽，所述吸水垫与所述硝酸限位素膜均设置于所述安装槽内。优选地，所述盒盖的边缘向下延伸而形成周壁，所述周壁的内壁面沿周向设置有环形凸缘，所述盒体的外壁面凹陷形成与所述环形凸缘适配的环形卡槽。优选地，所述盒盖的上表面凹陷形成容置槽，所述容置槽环设于所述反应孔的外围。优选地，所述样本稀释液为含有1％triton-100的0.01mol/l磷酸盐缓冲液；所述洗涤液为含有0.7％牛血清白蛋白的0.01mol/l磷酸盐缓冲液。优选地，所述胶体金标记脂联素抗体按如下步骤制备：将质量分数为1％氯金酸与双蒸水按体积比1∶79配成a液；将质量分数为1％柠檬酸三钠、质量分数为1％鞣酸、25mmk2co3与双蒸水按体积比4∶0.035～0.080∶0.035～0.080∶15.84～15.93配成b液；再将所述a液和所述b液在水浴内同时加热到59～61℃，搅拌a液，快速加入b液，继续搅拌1分钟，在10～13分钟内加热至沸腾，得到胶体金液；利用0.25mk2co3调整所述胶体金液的ph值为6.8～7.1；将人血清白蛋白标记抗体原液在4℃下6000～13000r/min离心60分钟，吸取上清液；将所述上清液装入透析袋，用双蒸水透析去除盐分后，装瓶冷冻，得到脂联素抗体；将0.27～0.30mg脂联素抗体缓慢加入100ml胶体金液中进行标记，搅拌15分钟后，依次加入10％迭氮钠500μl和1％牛血清白蛋白100μl，搅匀后在2.5～4.0℃，6000r/min条件下离心30分钟，去除上清液，沉淀物即为胶体金标记脂联素抗体。本发明还提出一种检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒的定量检测方法，包括如下步骤：采集血样2～3ml，室温放置15min-120min，以3000r/min速度离心30min，吸取上清液至样本稀释液中混匀，即得待测样本；利用移液器准确吸取25μl待测样本，滴加在检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒的样本垫片上；待测样本层析完全后，检测荧光试纸条的测试带信号值和控制带信号值，通过仪器结合定标卡信息计算待测样本的脂联素浓度，定量判定其质量浓度。本发明提供了一种检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒及其定量检测方法，其中，所述检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒包括脂联素层析器，所述脂联素层析器包括盒体、盒盖、吸水垫及硝酸纤维素膜，所述盒体具有一开口朝上的容置腔，所述吸水垫设置于所述容置腔内，所述硝酸纤维素膜设置于所述容置腔内且位于所述吸水垫的上方，所述盒盖盖设于所述盒体的开口端，所述盒盖开设有贯穿所述盒盖的上下表面的反应孔，以露出部分所述硝酸纤维素膜；其中，所述硝酸纤维素膜上包被有脂联素抗体。与现有技术相比，本发明的检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒具有方便快捷，操作简单，结果准确，灵敏度高，便于临床推广应用等优点。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图示出的结构获得其他的附图。图1为本发明检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒的分解结构示意图；图2为图1中盒盖一视角的结构示意图；图3为图1中盒盖另一视角的结构示意图；图4为图1中盒体的结构示意图。附图标号说明：标号名称标号名称100脂联素层析器22导流圈10盒体23周壁11容置腔24容置槽12安装槽25环形凸缘13环形卡槽30吸水垫20盒盖40硝酸纤维素膜21反应孔本发明目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。具体实施方式下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本发明提出了一种检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒。斑点免疫金渗滤法是让待测样本垂直渗滤过微孔膜，被微孔膜上包被的捕获探针捕获；再让胶体金标探针渗滤过微孔膜，与微孔膜上捕获的配体结合形成肉眼可见的红色。这种方法的缺陷是大部分待测样本和标记探针从斑点以外的非相关区域流失，影响检测灵敏度，致使该技术尚未在临床检验中广泛使用。本发明斑点免疫金标渗滤法以亲和层析原理为基础，采用硝酸纤维素膜为固相载体，以吸附在硝酸纤维素上的抗体为固相，以人血清中抗原以及胶体金标记脂联素抗体为液相，并同时以胶体金标记脂联素抗体作为探针和指示剂，而建立起来的一种新型的免疫检测方法。其中胶体金颗粒的表面带负电荷与脂联素抗体蛋白分子的正电荷基团因静电作用形成牢固的结合，同时胶体金颗粒又有高电子密度的特性，当被胶体金颗粒标记的脂联素抗体与相应的抗原配体结合，胶体金颗粒在抗体配体位点大量聚集时，便形成肉眼可见的红色斑点。参照图1至图4，本发明提出的检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒包括脂联素层析器100、样本稀释液、洗涤液及胶体金标记脂联素抗体，所述脂联素层析器100包括盒体10、盒盖20、吸水垫30及硝酸纤维素膜40，所述盒体10具有一开口朝上的容置腔11，所述吸水垫30设置于所述容置腔11内，所述硝酸纤维素膜40设置于所述容置腔11内且位于所述吸水垫30的上方，所述盒盖20盖设于所述盒体10的开口端，所述盒盖20开设有贯穿所述盒盖20的上下表面的反应孔21，以露出部分所述硝酸纤维素膜40；其中，所述硝酸纤维素膜40上包被有脂联素抗体。具体地，所述检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒可以为圆形、椭圆形或者方形，在此不做具体限制。下面将以圆形为例进行详细描述。所述盒体10与所述盒盖20均可采用塑胶材质加工成型，所述塑胶材质可以为聚乙烯、聚丙烯、聚氯乙烯等。在本实施例中，为了使得脂联素层析器100方便安装与拆卸，所述盒盖20的边缘向下延伸而形成周壁23，所述周壁23的内壁面沿周向设置有环形凸缘25，所述盒体10的外壁面凹陷形成与所述环形凸缘25适配的环形卡槽13。为了便于液体更好地流至硝酸纤维素膜40上，所述盒盖20的下表面向下凸设有位于所述反应孔21外缘的导流圈22，所述导流圈22自上而下呈渐缩设置。在此，所述导流圈22的上端缘的直径等于所述反应孔21的直径。优选地，所述导流圈22的上端缘的直径为0.6cm，所述反应孔21的下端缘的直径为0.3cm。并且，所述导流圈22的下端抵接于所述硝酸纤维素膜40上。进一步地，所述盒盖20的上表面凹陷形成容置槽24，所述容置槽24环设于所述反应孔21的外围。为了更好地固定所述吸水垫30和所述硝酸纤维素膜40，所述盒体10的容置腔11内设有安装槽12，所述吸水垫30与所述硝酸限位素膜均设置于所述安装槽12内。所述安装槽12可以为圆形、方形或者多边形，在此不做具体限制。在一较佳实施例中，所述安装槽12为圆形，所述吸水垫30与所述硝酸纤维素膜40均为正方形。具体地，所述吸水垫30的边长与所述硝酸纤维素膜40的边长均为1.3cm。所述硝酸纤维素膜40的孔径为0.2um～5um，优选地，所述硝酸纤维素膜40的孔径为0.3um。所述吸水垫30为吸水纸垫、吸水纤维垫、吸水棉垫、吸水性树脂或复合吸水材料。优选地，所述吸水垫30的厚度为2mm～3mm。其中，所述硝酸纤维素膜40的制备方法如下：(1)抗体的纯化。将抗体原液在4℃下以6000～13000r/min速度离心60min，吸取上清液即为脂联素抗体；将上清液装入透析袋，用双蒸水透析去除盐分后，超滤浓缩后装瓶冷冻，得到脂联素抗体。(2)用ph值为6.5的磷酸盐缓冲液或tris缓冲液稀释脂联素抗体，得到0.8mg/ml包被液。具体地，所述磷酸盐缓冲液按重量计包括：na2hpo40.263-0.376份，kh2po41.000-1.109份，nacl6份，kcl0.2份，蒸馏水1000份；所述tris缓冲液按重量计包括：三羟甲基氨基甲烷4.6-5.5份，kh2po42.0-3.0份，nacl8份，kcl0.4份，牛血清白蛋白9份，蒸馏水1200份。(3)将0.02ml包被液滴加至裁切好的硝酸纤维素膜40上，再将硝酸纤维素膜40置于烘箱中干燥，即得包被有脂联素抗体的硝酸纤维素膜40。所述胶体金标记脂联素抗体按如下步骤制备：将质量分数为1％氯金酸与双蒸水按体积比1∶79配成a液；将质量分数为1％柠檬酸三钠、质量分数为1％鞣酸、25mmk2co3与双蒸水按体积比4∶0.035～0.080∶0.035～0.080∶15.84～15.93配成b液；再将所述a液和所述b液在水浴内同时加热到59～61℃，搅拌a液，快速加入b液，继续搅拌1分钟，在10～13分钟内加热至沸腾，得到胶体金液；利用0.25mk2co3调整所述胶体金液的ph值为6.8～7.1；将人血清白蛋白标记抗体原液在4℃下6000～13000r/min离心60分钟，吸取上清液；将所述上清液装入透析袋，用双蒸水透析去除盐分后，装瓶冷冻，得到脂联素抗体；将0.27～0.30mg脂联素抗体缓慢加入100ml胶体金液中进行标记，搅拌15分钟后，依次加入10％迭氮钠500μl和1％牛血清白蛋白100μl，搅匀后在2.5～4.0℃，6000r/min条件下离心30分钟，去除上清液，沉淀物即为胶体金标记脂联素抗体。在上述实施例中，所述样本稀释液为含有1％triton-100的0.01mol/l磷酸盐缓冲液；所述洗涤液为含有0.7％牛血清白蛋白的0.01mol/l磷酸盐缓冲液。具体地，该磷酸盐缓冲液按重量计包括：na2hpo40.263-0.376份，kh2po41.000-1.109份，nacl6份，kcl0.2份，牛血清白蛋白7份，蒸馏水1000份。所述样本稀释液的ph值优选为6.5～6.7，所述洗涤液的ph值优选为6.2～6.4。此外，检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒还包括定标卡，所述定标卡为人脂联素梯度质量浓度溶液所检测颜色相对应的检测信号值。优选地，所述梯度质量浓度分别为0.5mg/l、1mg/l、2mg/l、4mg/l、10mg/l、20mg/l、40mg/l。本发明检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒具有方便快捷，操作简单的优点，其测试误差为10％，相对偏差为10％，灵敏度为10ug/ml，线性范围为0.5～40ug/ml。因此，与现有技术相比，本发明提供的检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒准确度高，精密度好，灵敏度高，此外，本发明检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒还便于临床推广应用。本发明还提供一种检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒的定量检测方法，包括如下步骤：采集血样5～10ml，室温放置15min-120min，以3000r/min速度离心30min，吸取上清液至样本稀释液中混匀，即得待测样本；利用移液器准确吸取25μl待测样本，滴加在脂联素层析器100的反应孔21内硝酸纤维素膜40上；待测样本完全渗入后，再向脂联素层析器100的反应孔21内硝酸纤维素膜40上滴加25ul胶体金标记脂联素抗体；待胶体金标记脂联素抗体完全渗入后，再向脂联素层析器100的反应孔21内硝酸纤维素膜40上滴加25μl洗涤液；待洗涤液完全渗入后，检测脂联素层析器100的信号值，通过仪器结合定标卡信息计算待测样本的脂联素浓度，定量判定其质量浓度。需要说明的是，所述血样可以为血清、血浆或者全血。所述样本稀释液为含0.2％tween-20的0.01mol/l磷酸盐缓冲液(pbs)溶液，样本稀释液的ph值为6.5～6.7。为了进一步对本发明进行解释，下面将结合具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明，本发明的保护范围不受以下实施例的限制。实施例1一种检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒包括脂联素层析器100、样本稀释液、洗涤液及胶体金标记脂联素抗体，所述脂联素层析器100包括盒体10、盒盖20、吸水垫30及硝酸纤维素膜40，所述盒体10上端开口，所述吸水垫30设置于所述盒体10内，所述硝酸纤维素膜40设置于所述吸水垫30上，所述盒盖20盖设于所述盒体10的开口端且压住所述硝酸纤维素膜40，所述盒盖20开设有贯穿所述盒盖20的上下表面的反应孔21，以露出部分所述硝酸纤维素膜40；其中，所述硝酸纤维素膜40上包被有脂联素抗体。所述胶体金标记脂联素抗体按如下步骤制备：(1)将质量分数为1％氯金酸与双蒸水按体积比1∶79配成a液；将质量分数为1％柠檬酸三钠、质量分数为1％鞣酸、25mmk2co3与双蒸水按体积比4∶0.080∶0.080∶15.84配成b液；再将所述a液和所述b液在水浴内同时加热到59～61℃，搅拌a液，快速加入b液，继续搅拌1分钟，在10～11分钟内加热至沸腾，得到胶体金液。其中，该胶体金液的颜色由黑→蓝→紫→红色时即成，胶体金颗粒直径为10nm～11nm。(2)利用0.25mk2co3调整所述胶体金液的ph值为6.8。(3)将人血清白蛋白标记抗体原液在4℃下6000r/min离心60分钟，吸取上清液；将所述上清液装入透析袋，用双蒸水透析去除盐分后，装瓶冷冻，得到脂联素抗体；(4)将0.27mg脂联素抗体缓慢加入100ml胶体金液中进行标记，搅拌15分钟后，依次加入10％迭氮钠500μl和1％牛血清白蛋白100μl，搅匀后在2.5～4.0℃，6000r/min条件下离心30分钟，去除上清液，沉淀物即为胶体金标记脂联素抗体。一种检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒的定量检测方法，包括如下步骤：采集血样5～10ml，室温放置15min-120min，以3000r/min速度离心30min，吸取上清液至样本稀释液中混匀，即得待测样本；利用移液器准确吸取25μl待测样本，滴加在脂联素层析器100的反应孔21内硝酸纤维素膜40上；待测样本完全渗入后，再向脂联素层析器100的反应孔21内硝酸纤维素膜40上滴加25ul胶体金标记脂联素抗体；待胶体金标记脂联素抗体完全渗入后，再向脂联素层析器100的反应孔21内硝酸纤维素膜40上滴加25μl洗涤液；待洗涤液完全渗入后，检测脂联素层析器100的信号值，通过仪器结合定标卡信息计算待测样本的脂联素浓度，定量判定其质量浓度。本实施例检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒测试结果的误差为10％，相对偏差为10％。实施例2一种检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒包括脂联素层析器100、样本稀释液、洗涤液及胶体金标记脂联素抗体，所述脂联素层析器100包括盒体10、盒盖20、吸水垫30及硝酸纤维素膜40，所述盒体10上端开口，所述吸水垫30设置于所述盒体10内，所述硝酸纤维素膜40设置于所述吸水垫30上，所述盒盖20盖设于所述盒体10的开口端且压住所述硝酸纤维素膜40，所述盒盖20开设有贯穿所述盒盖20的上下表面的反应孔21，以露出部分所述硝酸纤维素膜40；其中，所述硝酸纤维素膜40上包被有脂联素抗体。所述胶体金标记脂联素抗体按如下步骤制备：(1)将质量分数为1％氯金酸与双蒸水按体积比1∶79配成a液；将质量分数为1％柠檬酸三钠、质量分数为1％鞣酸、25mmk2co3与双蒸水按体积比4∶0.055∶0.055∶15.88配成b液；再将所述a液和所述b液在水浴内同时加热到59～61℃，搅拌a液，快速加入b液，继续搅拌1分钟，在10～11分钟内加热至沸腾，得到胶体金液。其中，该胶体金液的颜色由黑→蓝→紫→红色时即成，胶体金颗粒直径为10nm～11nm。(2)利用0.25mk2co3调整所述胶体金液的ph值为6.9。(3)将人血清白蛋白标记抗体原液在4℃下6000r/min离心60分钟，吸取上清液；将所述上清液装入透析袋，用双蒸水透析去除盐分后，装瓶冷冻，得到脂联素抗体；(4)将0.28mg脂联素抗体缓慢加入100ml胶体金液中进行标记，搅拌15分钟后，依次加入10％迭氮钠500μl和1％牛血清白蛋白100μl，搅匀后在2.5～4.0℃，6000r/min条件下离心30分钟，去除上清液，沉淀物即为胶体金标记脂联素抗体。一种检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒的定量检测方法，包括如下步骤：采集血样5～10ml，室温放置15min-120min，以3000r/min速度离心30min，吸取上清液至样本稀释液中混匀，即得待测样本；利用移液器准确吸取25μl待测样本，滴加在脂联素层析器100的反应孔21内硝酸纤维素膜40上；待测样本完全渗入后，再向脂联素层析器100的反应孔21内硝酸纤维素膜40上滴加25ul胶体金标记脂联素抗体；待胶体金标记脂联素抗体完全渗入后，再向脂联素层析器100的反应孔21内硝酸纤维素膜40上滴加25μl洗涤液；待洗涤液完全渗入后，检测脂联素层析器100的信号值，通过仪器结合定标卡信息计算待测样本的脂联素浓度，定量判定其质量浓度。本实施例检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒测试结果的误差为10％，相对偏差为10％。实施例3一种检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒包括脂联素层析器100、样本稀释液、洗涤液及胶体金标记脂联素抗体，所述脂联素层析器100包括盒体10、盒盖20、吸水垫30及硝酸纤维素膜40，所述盒体10上端开口，所述吸水垫30设置于所述盒体10内，所述硝酸纤维素膜40设置于所述吸水垫30上，所述盒盖20盖设于所述盒体10的开口端且压住所述硝酸纤维素膜40，所述盒盖20开设有贯穿所述盒盖20的上下表面的反应孔21，以露出部分所述硝酸纤维素膜40；其中，所述硝酸纤维素膜40上包被有脂联素抗体。所述胶体金标记脂联素抗体按如下步骤制备：(1)将质量分数为1％氯金酸与双蒸水按体积比1∶79配成a液；将质量分数为1％柠檬酸三钠、质量分数为1％鞣酸、25mmk2co3与双蒸水按体积比4∶0.035∶0.035∶15.93配成b液；再将所述a液和所述b液在水浴内同时加热到59～61℃，搅拌a液，快速加入b液，继续搅拌1分钟，在10～11分钟内加热至沸腾，得到胶体金液。其中，该胶体金液的颜色由黑→蓝→紫→红色时即成，胶体金颗粒直径为10nm～11nm。(2)利用0.25mk2co3调整所述胶体金液的ph值为7.1。(3)将人血清白蛋白标记抗体原液在4℃下6000r/min离心60分钟，吸取上清液；将所述上清液装入透析袋，用双蒸水透析去除盐分后，装瓶冷冻，得到脂联素抗体；(4)将0.30mg脂联素抗体缓慢加入100ml胶体金液中进行标记，搅拌15分钟后，依次加入10％迭氮钠500μl和1％牛血清白蛋白100μl，搅匀后在2.5～4.0℃，6000r/min条件下离心30分钟，去除上清液，沉淀物即为胶体金标记脂联素抗体。一种检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒的定量检测方法，包括如下步骤：采集血样5～10ml，室温放置15min-120min，以3000r/min速度离心30min，吸取上清液至样本稀释液中混匀，即得待测样本；利用移液器准确吸取25μl待测样本，滴加在脂联素层析器100的反应孔21内硝酸纤维素膜40上；待测样本完全渗入后，再向脂联素层析器100的反应孔21内硝酸纤维素膜40上滴加25ul胶体金标记脂联素抗体；待胶体金标记脂联素抗体完全渗入后，再向脂联素层析器100的反应孔21内硝酸纤维素膜40上滴加25μl洗涤液；待洗涤液完全渗入后，检测脂联素层析器100的信号值，通过仪器结合定标卡信息计算待测样本的脂联素浓度，定量判定其质量浓度。本实施例检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒测试结果的误差为10％，相对偏差为10％。实施例4一种检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒包括脂联素层析器100、样本稀释液、洗涤液及胶体金标记脂联素抗体，所述脂联素层析器100包括盒体10、盒盖20、吸水垫30及硝酸纤维素膜40，所述盒体10上端开口，所述吸水垫30设置于所述盒体10内，所述硝酸纤维素膜40设置于所述吸水垫30上，所述盒盖20盖设于所述盒体10的开口端且压住所述硝酸纤维素膜40，所述盒盖20开设有贯穿所述盒盖20的上下表面的反应孔21，以露出部分所述硝酸纤维素膜40；其中，所述硝酸纤维素膜40上包被有脂联素抗体。所述胶体金标记脂联素抗体按如下步骤制备：(1)将质量分数为1％氯金酸与双蒸水按体积比1∶79配成a液；将质量分数为1％柠檬酸三钠、质量分数为1％鞣酸、25mmk2co3与双蒸水按体积比4∶0.035∶0.035∶15.93配成b液；再将所述a液和所述b液在水浴内同时加热到59～61℃，搅拌a液，快速加入b液，继续搅拌1分钟，在10～11分钟内加热至沸腾，得到胶体金液。其中，该胶体金液的颜色由黑→蓝→紫→红色时即成，胶体金颗粒直径为10nm～11nm。(2)利用0.25mk2co3调整所述胶体金液的ph值为7.1。(3)将人血清白蛋白标记抗体原液在4℃下6000r/min离心60分钟，吸取上清液；将所述上清液装入透析袋，用双蒸水透析去除盐分后，装瓶冷冻，得到脂联素抗体；(4)将0.30mg脂联素抗体缓慢加入100ml胶体金液中进行标记，搅拌15分钟后，依次加入10％迭氮钠500μl和1％牛血清白蛋白100μl，搅匀后在2.5～4.0℃，6000r/min条件下离心30分钟，去除上清液，沉淀物即为胶体金标记脂联素抗体。一种检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒的定量检测方法，包括如下步骤：采集血样5～10ml，室温放置15min-120min，以3000r/min速度离心30min，吸取上清液至样本稀释液中混匀，即得待测样本；利用移液器准确吸取25μl待测样本，滴加在脂联素层析器100的反应孔21内硝酸纤维素膜40上；待测样本完全渗入后，再向脂联素层析器100的反应孔21内硝酸纤维素膜40上滴加25ul胶体金标记脂联素抗体；待胶体金标记脂联素抗体完全渗入后，再向脂联素层析器100的反应孔21内硝酸纤维素膜40上滴加25μl洗涤液；待洗涤液完全渗入后，检测脂联素层析器100的信号值，通过仪器结合定标卡信息计算待测样本的脂联素浓度，定量判定其质量浓度。本实施例检测脂联素的斑点金渗滤试剂盒测试结果的误差为10％，相对偏差为10％。以上所述仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是在本发明的发明构思下，利用本发明说明书及附图内容所作的等效变换，或直接/间接运用在其他相关的
技术领域：
均包括在本发明的专利保护范围内。当前第1页12