用于宠物感染标志物检测的蛋白芯片的制备方法及应用与流程

文档序号:15612454发布日期:2018-10-09 20:43阅读:402来源:国知局
本发明涉及生物
技术领域
,尤其是涉及用于宠物感染标志物检测的蛋白芯片的制备方法及应用。
背景技术
:宠物越来越多,注重宠物的健康,犬和猫crp、saa、cpl指标的重要性,市面上已有的各类试剂盒基于elisa和胶体金,灵敏度低,线性范围窄,定性不定量,蛋白芯片基于化学发光,灵敏度高,线性范围宽,定量,联检通量高,成本底。技术实现要素:本发明的目的是:提供一种用于犬和猫感染标志物检测的蛋白芯片,本发明的另一个目的是提供一种用于犬和猫感染标志物检测的蛋白芯片的制备方法。为解决上述技术问题,本发明采用的技术方案如下:一种用于宠物感染标志物检测的蛋白芯片的制备方法,所述制备方法包括以下步骤:(1)载玻片预处理;(2)抗体溶液点样;(3)封闭工艺,制得所述蛋白芯片。优选的,所述步骤(1)中载玻片预处理的方法为:①将载玻片置于含有2%的h2so4的玻片预处理液中浸泡16~24h,之后采用纯化水清洗2~8次;②将载玻片置于质量浓度为0.05~1%的硅烷水溶液中浸泡40~80min;③将浸泡好的载玻片放入烘箱中,于150~210℃条件下烘烤0.5~1h。优选的,所述步骤(2)中抗体溶液包括犬crp、saa、cpl单克隆抗体溶液和猫crp、saa、cpl单克隆抗体溶液。优选的,所述步骤(2)中所述点样的方法为机器自动化点样,点样后载玻片上包括平行排列的若干列检测亚区和对照斑区。优选的,所述步骤(3)中所述封闭过程为:将点样好的载玻片没入封闭液中2~8h,之后取出载玻片,并离心去除残余封闭液,制得所述蛋白芯片。优选的,所述封闭液为含有1%的封闭蛋白的缓冲溶液;所述缓冲液为pbs缓冲液、tris缓冲液、heps缓冲液、mops缓冲液中的一种或多种。优选的,所述封闭蛋白为牛血清白蛋白或酪蛋白。一种蛋白芯片的应用,其特征在于:将所述蛋白芯片制成试剂盒。所述试剂盒还包括标记有hrp酶的第二抗体溶液、对hrp酶敏感的化学发光底物。采用本发明的技术方案的有益效果是:本发明蛋白芯片用于检测两个重要的犬和猫感染标志物,应用蛋白芯片技术实现联合检测可以有效地提高检测效率,降低检测成本;同时包含有crp和saa两个或crp、saa和cpl三个指标的蛋白芯片诊断试剂盒,具有快速,高效,低成本等优点。配合本公司的自动化蛋白芯片阅读仪,可以实现自动化检测。由于有效地将两至三个指标集成在一张芯片中进行检测,只需要一份犬或猫的血样就可以实现两至三个指标的同时快速检测。本产品和技术作为一种新颖的检测方法,目前世界上还没有同类产品面市。本发明采用经典的免疫学双抗体夹心法。在玻璃为载体的芯片基质上固定捕获抗体,这些抗体可以捕获被测样本中特异性的抗原,被捕获的抗原与标记有hrp酶的第二抗体相结合,形成夹心式结合产物。加入对hrp酶敏感的化学发光底物进行化学发光,其光信号通过ccd摄像头采集,通过光信号的强弱可以判断被测样本中特定标志物抗原的浓度。本试剂盒使用了蛋白芯片技术平台,而国内其他厂家的单项检测方法使用的是elisa或胶体金技术。与之相比,本产品的优势在于:①由于抗原与本产品抗体结合的特异性高、亲和力强,并且受到其他杂质影响较低,因此,对生物样品的要求非常低,可简化样品的前处理过程;②能够快速高通量、平行化定量分析大量的蛋白质样品;③操作简单,结果正确率高;④病人只需采一份血样,且迅速可以给出监测结果。⑤所需试剂和样品少,价格低廉。具体实施方式下面结合具体实施方式对本发明作进一步说明。实施例1一种用于犬感染标志物检测的蛋白芯片,所述蛋白芯片的制备方法包括如下步骤:(1)载玻片预处理;①将载玻片置于含有2%h2so4的玻片预处理液中浸泡20h,之后采用纯化水清洗2~8次;②将载玻片置于质量浓度为1%的硅烷水溶液中浸泡60min;③将浸泡好的载玻片放入烘箱中,于200℃条件下烘烤1h。(2)抗体溶液点样;如下表所示,采用机器自动化点样犬crp单克隆抗体溶液和犬saa单克隆抗体溶液,抗体溶液浓度为0.1mg/ml,每点点样20nl,各抗体点样分布如下表所示。第一列第二列第三列第四列第五列hrp抗体空白犬crp抗体犬saa抗体无关抗体(3)封闭工艺;将点样好的载玻片没入封闭液(内含1%牛血清白蛋白的pbs缓冲液)中6h,之后取出载玻片,并离心去除残余封闭液,制得所述蛋白芯片。(4)试剂盒将所述蛋白芯片与标记有hrp酶的第二抗体溶液(浓度为1ug/ml,其中介质为外购的赛默飞公司的酶标二抗稀释液,ph=6.0)、检测液a(含1%过氧化氢)和检测液b(含1%鲁米诺和2%tris)共同包装成试剂盒。实施例2一种用于犬和猫感染标志物检测的蛋白芯片,所述蛋白芯片的制备方法包括如下步骤:(1)载玻片预处理;①将载玻片置于含有2%h2so4的玻片预处理液中浸泡20h,之后采用纯化水清洗2~8次;②将载玻片置于质量浓度为1%的硅烷水溶液中浸泡60min;③将浸泡好的载玻片放入烘箱中,于200℃条件下烘烤1h。(2)抗体溶液点样;如下表所示,采用机器自动化点样犬crp单克隆抗体溶液、犬saa单克隆抗体溶液和犬cpl单克隆抗体溶液,抗体溶液浓度为0.1mg/ml,每点点样20nl,各抗体点样分布如下表所示。(3)封闭工艺;将点样好的载玻片没入封闭液(内含1%牛血清白蛋白的pbs缓冲液)中6h,之后取出载玻片,并离心去除残余封闭液,制得所述蛋白芯片。(4)试剂盒将所述蛋白芯片与标记有hrp酶的第二抗体溶液(浓度为1ug/ml,其中介质为外购的赛默飞公司的酶标二抗稀释液,ph=6.0)、检测液a(含1%过氧化氢)和检测液b(含1%鲁米诺和2%tris)共同包装成试剂盒。实施例3一种用于猫感染标志物检测的蛋白芯片,所述蛋白芯片的制备方法包括如下步骤:(1)载玻片预处理;①将载玻片置于含有2%h2so4的玻片预处理液中浸泡20h,之后采用纯化水清洗2~8次;②将载玻片置于质量浓度为0.5%的硅烷水溶液中浸泡45min;③将浸泡好的载玻片放入烘箱中,于180℃条件下烘烤40min。(2)抗体溶液点样;如下表所示,采用机器自动化点样猫crp单克隆抗体溶液和猫saa单克隆抗体溶液,抗体溶液浓度为0.1mg/ml,每点点样20nl,各抗体点样分布如下表所示。第一列第二列第三列第四列第五列hrp抗体空白猫crp抗体猫saa抗体无关抗体(3)封闭工艺;将点样好的载玻片没入封闭液(内含1%酪蛋白的tris缓冲液)中8h,之后取出载玻片,并离心去除残余封闭液,制得所述蛋白芯片。(4)试剂盒将所述蛋白芯片与标记有hrp酶的第二抗体溶液(浓度为1ug/ml,其中介质为外购的赛默飞公司的酶标二抗稀释液,ph=6.0)、检测液a(含1%过氧化氢)和检测液b(含1%鲁米诺和2%tris)共同包装成试剂盒。实施例4一种用于猫感染标志物检测的蛋白芯片,所述蛋白芯片的制备方法包括如下步骤:(1)载玻片预处理;①将载玻片置于含有2%h2so4的玻片预处理液中浸泡20h,之后采用纯化水清洗2~8次;②将载玻片置于质量浓度为0.5%的硅烷水溶液中浸泡45min;③将浸泡好的载玻片放入烘箱中,于180℃条件下烘烤40min。(2)抗体溶液点样;如下表所示,采用机器自动化点样猫crp单克隆抗体溶液、猫saa单克隆抗体溶液和猫cpl单克隆抗体溶液,抗体溶液浓度为0.1mg/ml,每点点样20nl,各抗体点样分布下表所示。(3)封闭工艺;将点样好的载玻片没入封闭液(内含1%酪蛋白的tris缓冲液)中8h,之后取出载玻片,并离心去除残余封闭液,制得所述蛋白芯片。(4)试剂盒将所述蛋白芯片与标记有hrp酶的第二抗体溶液(浓度为1ug/ml,其中介质为外购的赛默飞公司的酶标二抗稀释液,ph=6.0)、检测液a(含1%过氧化氢)和检测液b(含1%鲁米诺和2%tris)共同包装成试剂盒。综上所述:本试剂盒使用了蛋白芯片技术平台,而国内其他厂家的单项检测方法使用的是elisa或胶体金技术。与之相比,本产品的优势在于:①由于抗原与本产品抗体结合的特异性高、亲和力强,并且受到其他杂质影响较低,因此,对生物样品的要求非常低,可简化样品的前处理过程;②能够快速高通量、平行化定量分析大量的蛋白质样品;③操作简单,结果正确率高;④病人只需采一份血样,且迅速可以给出监测结果。⑤所需试剂和样品少,价格低廉。以上述依据本发明的理想实施例为启示,通过上述的说明内容,相关工作人员完全可以在不偏离本项发明技术思想的范围内,进行多样的变更以及修改。本项发明的技术性范围并不局限于说明书上的内容,必须要根据权利要求范围来确定其技术性范围。当前第1页12
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