表达前列腺特异性膜抗原（PSMA）或其修饰形式的工程化细胞及相关方法与流程

相关申请的交叉引用

本申请要求以下申请的优先权：2017年4月7日提交的标题为“表达前列腺特异性膜抗原(psma)或其修饰形式的工程化细胞及相关方法(engineeredcellsexpressingprostate-specificmembraneantigen(psma)oramodifiedformthereofandrelatedmethods)”的美国临时申请号62/483,313；2017年8月30日提交的标题为“表达前列腺特异性膜抗原(psma)或其修饰形式的工程化细胞及相关方法(engineeredcellsexpressingprostate-specificmembraneantigen(psma)oramodifiedformthereofandrelatedmethods)”的美国临时申请号62/552,354；2017年9月7日提交的标题为“表达前列腺特异性膜抗原(psma)或其修饰形式的工程化细胞及相关方法(engineeredcellsexpressingprostate-specificmembraneantigen(psma)oramodifiedformthereofandrelatedmethods)”的美国临时申请号62/555,635；2017年11月7日提交的标题为“表达前列腺特异性膜抗原(psma)或其修饰形式的工程化细胞及相关方法(engineeredcellsexpressingprostate-specificmembraneantigen(psma)oramodifiedformthereofandrelatedmethods)”的美国临时申请号62/582,913；以及2018年1月19日提交的标题为“表达前列腺特异性膜抗原(psma)或其修饰形式的工程化细胞及相关方法(engineeredcellsexpressingprostate-specificmembraneantigen(psma)oramodifiedformthereofandrelatedmethods)”的美国临时申请号62/619,724，将它们的内容通过引用以其整体并入。

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本公开文本在一些方面涉及表达前列腺特异性膜抗原(psma)(通常经修饰的psma)的工程化细胞，如工程化t细胞。所述细胞还含有与抗原特异性结合的基因工程化重组受体，如嵌合抗原受体。本公开文本还提供了检测、鉴定、选择或靶向表达psma的细胞的方法，例如与将此类细胞给予至受试者结合，包括过继细胞疗法的方法，或者与制造工程化细胞的方法结合。

背景技术：

各种策略可用于治疗疾病或病症(如癌症或肿瘤)，包括给予细胞疗法。此外，策略可用于将免疫细胞工程化以表达基因工程化重组受体如嵌合抗原受体(car)，并且向受试者给予含有此类细胞的组合物。需要改进的策略，例如，以改善在给予至受试者后结合此类疗法监测、检测或调节工程化细胞的能力。提供了满足此类需求的组合物、细胞和方法。

技术实现要素：

本文提供了包括前列腺特异性膜抗原(psma)或其修饰形式和重组受体的工程化细胞。本文还提供了工程化细胞，所述工程化细胞包括编码前列腺特异性膜抗原(psma)或其修饰形式的核酸；以及编码重组受体的核酸。在一些任何所提供的实施方案中，重组受体是嵌合受体和/或重组抗原受体，如嵌合抗原受体(car)。

在一些实施方案中，psma或其修饰形式在细胞表面上表达。在一些实施方案中，psma或其修饰形式包括细胞外部分和跨膜结构域。在一些实施方案中，psma或其修饰形式，任选地细胞外部分，能够由psma靶向分子或其部分识别。

在一些实施方案中，psma靶向分子或其部分：能够结合psma和/或其修饰形式，和/或能够结合psma的活性位点和/或psma的修饰形式的活性位点，和/或能够被psma和/或被psma的修饰形式切割；和/或是psma和/或其修饰形式的拮抗剂、选择性拮抗剂、反向激动剂、选择性反向激动剂、激动剂、选择性激动剂、抑制剂和/或选择性抑制剂。

在一些实施方案中，psma或其修饰形式包含n-乙酰化α-连接的酸性二肽酶(naaladase)结构域，和/或包含一个或多个活性位点残基和/或参与psma底物结合和/或psma催化活性的残基，其参考seqidno:23所示的氨基酸序列中的位置任选地是在位置210、257、269、272、377、387、387、424、424、425、433、436、453、517、518、519、552、553、534、535、536、552、553、628、666、689、699和/或700处的残基。

在一些实施方案中，psma或其修饰形式是人psma或其修饰形式。在一些实施方案中，psma或其修饰形式是野生型psma，任选地野生型人psma。在一些实施方案中，psma或其修饰形式包括seqidno:23所示的氨基酸序列或其细胞外和/或跨膜结构域，或展现与seqidno:23或其细胞外和/或跨膜结构域至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，psma或其修饰形式是经修饰的psma，所述经修饰的psma与野生型或未经修饰的psma相比含有一个或多个氨基酸修饰。

在一些实施方案中，野生型或未经修饰的psma是人psma和/或包括seqidno:23所示的氨基酸序列或展现与其至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，所述一个或多个氨基酸修饰包括一个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入。在一些实施方案中，与野生型或未经修饰的psma相比，经修饰的psma(i)展现出降低的内源性信号传导；(ii)展现出增加的细胞表面表达；和/或(iii)展现出降低的细胞内化。

在一些实施方案中，参考seqidno:23所示的氨基酸序列中的位置，所述经修饰的psma包括与w2g对应的至少一个氨基酸取代或者不包含w2或者不包含在位置2处的任何残基。在一些实施方案中，经修饰的psma包括seqidno:24所示的氨基酸序列或其片段，或展现与seqidno:24或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且包括所述至少一个氨基酸取代的氨基酸序列。

在一些实施方案中，与野生型或未经修饰的psma相比，经修饰的psma包括细胞内部分中的一个或多个n末端氨基酸残基的缺失。在一些实施方案中，与野生型或未经修饰的psma相比，经修饰的psma包括至多2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个或18个n末端氨基酸残基的缺失。在一些实施方案中，参考seqidno:23所示的氨基酸序列中的位置，与野生型或未经修饰的psma相比，经修饰的psma包含在从位置2、3、4或5的残基开始并且直至位置6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19的n末端处的连续氨基酸序列的缺失。在一些实施方案中，参考seqidno:23所示的氨基酸序列中的位置，经修饰的psma包含在位置2-19、2-18、2-17、2-16、2-15、2-14、2-13、2-12、2-11、2-10、2-9、2-8、2-7、2-6、2-5、2-4或2-3处的残基的缺失。

在一些实施方案中，psma或其修饰形式包括seqidno:52所示的氨基酸序列或其片段；或展现与seqidno:52或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且包括所述一个或多个n末端氨基酸残基的缺失并且任选地含有甲硫氨酸作为第一残基或甲硫氨酸起始密码子的氨基酸序列。

在一些实施方案中，psma或其修饰形式包括seqidno:25所示的氨基酸序列或其片段；或展现与seqidno:25或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且包括所述一个或多个n末端氨基酸残基的缺失的氨基酸序列。

在一些实施方案中，psma或其修饰形式由以下编码：seqidno:26或53所示的核酸序列或其片段；或展现与seqidno:26或53或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且任选地含有编码甲硫氨酸作为第一残基或甲硫氨酸起始密码子的核酸的核酸序列。

在一些实施方案中，psma或其修饰形式由被修饰为无cpg和/或经密码子优化的核酸序列编码。在一些实施方案中，psma或其修饰形式由以下编码：seqidno:27所示的核酸序列或其片段；或展现与seqidno:27或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且任选地含有编码甲硫氨酸作为第一残基或甲硫氨酸起始密码子的核酸的核酸序列。

在一些实施方案中，经修饰的psma包括野生型或未经修饰的psma的跨膜结构域的全部或基本上全部；或者经修饰的psma包括具有与野生型或未经修饰的psma的跨膜结构域相同或至少相同数量的氨基酸的跨膜结构域。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括小分子、配体、抗体或其抗原结合片段、适体、肽或其缀合物。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括小分子。在一些实施方案中，小分子选自2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)、(氨基苯乙烯基)吡啶鎓(asp)染料、2-(3-[1-羧基-5-[(5-碘-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基]-脲基)-戊二酸(yc-vi-11)、2-[3-[1-羧基-5-(4-碘-苯甲酰氨基)-戊基]-脲基]-戊二酸(dcibzl或yc-7)、1-(3-羧基-4-(3-羟基-6-氧代-6h-呫吨-9-基)苯基氨基)-9,16,24-三氧代-1-硫氧代-2,8,17,23,25-五氮杂二十八烷-7,22,26,28-四甲酸(yc-36)、glu-nh-co-nh-lys(ahx)-hbed-cc(psma-hbed-cc)、9-(4-氟-3-[羟基甲基]丁基)鸟嘌呤(fhbg)、glu-脲-lys-(ahx)-[(hbed-cc)](psma-11)、psma-617、2-(膦酰基甲基)戊二酸、2-pmpa、氟苯甲酰氨基磷酸酯、(2s,4s)-2-氟-4-(膦酰基甲基)戊二酸(bay1075553)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-s-甲基-l-半胱氨酸(-dcmc)、euk-subkff-dotaga、2-[3-(1,3-二羧基丙基)脲基]戊二酸(dupa)、psman、n'-双[2-羟基-5-(羧基乙基)苄基]乙二胺-n,n'-二乙酸、mip-1072、mip-1095、mip-1404、mip-1405和n-[[[(1s)-1-羧基-3-甲基丁基]氨基]羰基]-l-谷氨酸(zj43)、(s)-2-(4-碘苄基膦酰基甲基)-戊二酸(gpi-18431)、2-[(3-{4-[(2-氨基-4-羟基-蝶啶-6-基甲基)-氨基]-苯甲酰氨基}-3-羧基-丙基)-羟基-磷酰基甲基]-戊二酸(mpe)、(2s,3's)-{[(3'-氨基-3'-羧基-丙基)-羟基磷酰基]甲基}-戊二酸(epe)和(2s)-2-{[(2-羧基-乙基)-羟基-磷酰基]甲基}-戊二酸(spe)。在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)或n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段任选地具有与psma特异性结合的结合位点。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段选自j591、dfo-j591、cyt-356、j415、3/a12、3/f11、3/e7、d2b、107-1a4、ypsma-1、ypsma-2、3e6、2g7、24.4e6、gcp-02、gcp-04、gcp-05、j533、e99、1g9、3c6、4.40、026、d7-fc、d7-ch3、4d4、a5、及其抗原结合片段和衍生物，或包括cdr3、vh和/或vl，和/或竞争与psma结合或结合与任何前述相同的psma表位。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括适体或其缀合物。在一些实施方案中，适体包括a9、a10、a10g、a10-3.2或szt101或其缀合物。

在一些实施方案中，重组受体是或包括嵌合受体和/或重组抗原受体。在一些实施方案中，重组受体能够结合靶抗原，所述靶抗原与疾病或障碍的细胞或组织相关、对疾病、障碍或病症的细胞或组织是特异的，和/或在疾病或障碍的细胞或组织上表达。在一些实施方案中，所述疾病、障碍或病症是感染性疾病或障碍、自身免疫性疾病、炎性疾病、或肿瘤或癌症。在一些实施方案中，靶抗原是肿瘤抗原。

在一些实施方案中，靶抗原选自αvβ6整合素(avb6整合素)、b细胞成熟抗原(bcma)、b7-h3、b7-h6、碳酸酐酶9(ca9，也称为caix或g250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1b(ctag，也称为ny-eso-1和lage-2)、癌胚抗原(cea)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、cc基序趋化因子配体1(ccl-1)、cd19、cd20、cd22、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、cd44v6、cd44v7/8、cd123、cd133、cd138、cd171、硫酸软骨素蛋白聚糖4(cspg4)、表皮生长因子蛋白(egfr)、截短的表皮生长因子蛋白(tegfr)、iii型表皮生长因子受体突变(egfrviii)、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、肝配蛋白b2、肝配蛋白受体a2(epha2)、雌激素受体、fc受体样蛋白5(fcrl5；也称为fc受体同源物5或fcrh5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿achr)、叶酸结合蛋白(fbp)、叶酸受体α、神经节苷脂gd2、o-乙酰化gd2(ogd2)、神经节苷脂gd3、糖蛋白100(gp100)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖(gpc3)、g蛋白偶联受体5d(gpcr5d)、her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-b2)、her3(erb-b3)、her4(erb-b4)、erbb二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(hmw-maa)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原a1(hla-a1)、人白细胞抗原a2(hla-a2)、il-22受体α(il-22rα)、il-13受体α2(il-13rα2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、l1细胞粘附分子(l1-cam)、l1-cam的ce7表位、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员a(lrrc8a)、路易斯y、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、mage-a10、间皮素(msln)、c-met、鼠类巨细胞病毒(cmv)、粘蛋白1(muc1)、muc16、自然杀伤细胞2族成员d(nkg2d)配体、黑色素a(mart-1)、神经细胞粘附分子(ncam)、癌胚胎抗原、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(psca)、前列腺特异性膜抗原(psma)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ror1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(tpbg，也称为5t4)、肿瘤相关糖蛋白72(tag72)、酪氨酸酶相关蛋白1(trp1，也称为tyrp1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(trp2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ异构酶或dct)、血管内皮生长因子受体(vegfr)、血管内皮生长因子受体2(vegfr2)、wilms肿瘤1(wt-1)、病原体特异性或病原体表达的抗原、或与通用标签相关的抗原、和/或生物素化分子、和/或由hiv、hcv、hbv或其他病原体表达的分子。在一些实施方案中，靶抗原选自ror1、b细胞成熟抗原(bcma)、碳酸酐酶9(caix)、tegfr、her2/neu(受体酪氨酸激酶erbb2)、l1-cam、cd19、cd20、cd22、间皮素、cea和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、egfr、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、epha2、erb-b2、erb-b3、erb-b4、erbb二聚体、egfrviii、叶酸结合蛋白(fbp)、fcrl5、fcrh5、胎儿乙酰胆碱受体、gd2、gd3、g蛋白偶联受体5d(gpcr5d)、hmw-maa、il-22r-α、il-13r-α2、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、路易斯y、l1细胞粘附分子(l1-cam)、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、存活蛋白、tag72、b7-h6、il-13受体α2(il-13ra2)、ca9、gd3、hmw-maa、cd171、g250/caix、hla-a1、magea1、hla-a2、ny-eso-1、psca、叶酸受体-a、cd44v6、cd44v7/8、avb6整合素、8h9、ncam、vegf受体、5t4、胎儿achr、nkg2d配体、cd44v6、双重抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素、鼠cmv、粘蛋白1(muc1)、muc16、psca、nkg2d、ny-eso-1、mart-1、gp100、癌胚胎抗原、ror1、tag72、vegf-r2、癌胚抗原(cea)、her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白b2、cd123、c-met、gd-2、o-乙酰化gd2(ogd2)、ce7、wilms肿瘤1(wt-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、ccl-1、cd138、病原体特异性抗原和与通用标签相关的抗原。

在一些实施方案中，重组受体是或包括功能性非tcr抗原受体或tcr或其抗原结合片段。在一些实施方案中，重组受体是嵌合抗原受体(car)。

在一些实施方案中，重组受体包括含有抗原结合结构域的细胞外结构域。在一些实施方案中，抗原结合结构域是或包括抗体或其抗体片段，所述抗体片段任选地是单链片段。在一些实施方案中，所述片段包括通过柔性接头连接的抗体可变区。在一些实施方案中，所述片段包括scfv。

在一些实施方案中，重组受体还包括间隔子和/或铰链区。

在一些实施方案中，重组受体包括细胞内信号传导区域。在一些实施方案中，细胞内信号传导区域包括细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域是或包括初级信号传导结构域、能够在t细胞中诱导初级激活信号的信号传导结构域、t细胞受体(tcr)组分的信号传导结构域、和/或含有基于免疫受体酪氨酸的激活基序(itam)的信号传导结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域是或包括cd3链任选cd3-zeta(cd3ζ)链的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。

在一些实施方案中，重组受体还包括设置在细胞外结构域与细胞内信号传导区域之间的跨膜结构域。

在一些实施方案中，细胞内信号传导区域还包括共刺激信号传导区域。在一些实施方案中，共刺激信号传导区域包括t细胞共刺激分子的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。在一些实施方案中，共刺激信号传导区域包括cd28、4-1bb或icos的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。在一些实施方案中，共刺激信号传导区域位于跨膜结构域和细胞内信号传导区域之间。

在一些实施方案中，在细胞包含的一个或多个多核苷酸内包含编码psma或其修饰形式的核酸和编码重组受体的核酸。在一些实施方案中，所述一个或多个多核苷酸是一个多核苷酸，并且编码psma或其修饰形式的核酸和编码重组受体的核酸可操作地连接至相同的启动子，并任选地通过内部核糖体进入位点(ires)或编码自切割肽或导致核糖体跳跃的肽(其任选地是t2a、p2a、e2a或f2a)的核酸分开。

在一些实施方案中，在细胞包含的一个多核苷酸内包含编码psma或其修饰形式的核酸和编码car的核酸，所述多核苷酸按5'至3'的顺序包含：i)编码信号肽的核酸；ii)编码car的核酸，所述car包含scfv；间隔子；跨膜结构域；包含共刺激信号传导区域、和cd3-zeta(cd3ζ)链的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分的细胞内区域；iii)编码自切割肽或导致核糖体跳跃的肽(其任选地是t2a、p2a、e2a或f2a)的核酸序列；以及iv)编码psma或其修饰形式的核酸，所述psma或其修饰形式任选地包含seqidno:52所示的氨基酸序列或其片段；或展现与seqidno:52或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且包含所述一个或多个n末端氨基酸残基的缺失的氨基酸序列。

在一些实施方案中，编码psma或其修饰形式的核酸和编码重组受体的核酸可操作地连接至两个不同的启动子。

在一些实施方案中，编码重组受体的核酸存在于编码psma或其修饰形式的核酸的下游。

在一些实施方案中，所述一个或多个多核苷酸包括两个不同的多核苷酸，编码psma或其修饰形式的核酸和编码重组受体的核酸可操作地连接至两个不同的启动子，和/或编码psma或其修饰形式的核酸和编码重组受体的核酸存在于或插入细胞基因组内的不同位置。

在一些实施方案中，所述细胞是免疫细胞；所述细胞是t细胞，任选地选自cd4+t细胞及其亚型和cd8+t细胞及其亚型；所述细胞是nk细胞；和/或所述细胞源自多潜能或多能细胞，其任选地是ipsc。

在一些实施方案中，所述细胞是选自以下的t细胞：中枢记忆t细胞、效应记忆t细胞、幼稚t细胞、干细胞中枢记忆t细胞、效应t细胞和调节性t细胞；和/或所述细胞包括多种细胞，所述多种细胞含有至少50％的如下细胞的群体，所述细胞选自：cd4+t细胞、cd8+t细胞、中枢记忆t细胞、效应记忆t细胞、幼稚t细胞、干细胞中枢记忆t细胞、效应t细胞和调节性t细胞。在一些实施方案中，所述细胞是调节性t细胞。

在一些实施方案中，本文提供的工程化细胞还包括重组foxp3或其变体。

还提供了多核苷酸，所述多核苷酸含有编码前列腺特异性膜抗原(psma)或其修饰形式的第一核酸和编码重组受体的第二核酸。在一些任何所提供的实施方案中，重组受体是嵌合受体和/或重组抗原受体，如嵌合抗原受体(car)。在一些实施方案中，编码psma或其修饰形式的核酸和编码重组受体的核酸与相同的启动子可操作地连接，并且任选地通过内部核糖体进入位点(ires)或编码自切割肽或导致核糖体跳跃的肽(其任选地是t2a、p2a、e2a或f2a)的核酸分开。

在一些实施方案中，编码psma或其修饰形式的核酸和编码重组受体的核酸可操作地连接至两个不同的启动子。

在一些实施方案中，编码重组受体的核酸存在于编码psma或其修饰形式的核酸的下游。

还提供了多核苷酸组，所述多核苷酸组包括含有编码前列腺特异性膜抗原(psma)或其修饰形式的核酸的第一多核苷酸和含有编码重组受体的核酸的第二多核苷酸。还提供了包括这种多核苷酸组的组合物。在一些任何所提供的实施方案中，重组受体是嵌合受体和/或重组抗原受体，如嵌合抗原受体(car)。

在多核苷酸、多核苷酸组或包括本文提供的多核苷酸组的组合物的一些实施方案中，编码psma或其修饰形式的核酸和编码重组受体的核酸各自独立地可操作地连接至启动子。

在一些实施方案中，编码的psma或其修饰形式能够在细胞表面上表达。在一些实施方案中，编码的psma或其修饰形式包括细胞外部分和跨膜结构域。

在一些实施方案中，psma或其修饰形式，任选地细胞外部分，能够由psma靶向分子或其部分识别。

在一些实施方案中，psma靶向分子或其部分：能够结合psma和/或其修饰形式，和/或能够结合psma的活性位点和/或psma的修饰形式的活性位点，和/或能够被psma和/或被psma的修饰形式切割；和/或是psma和/或其修饰形式的拮抗剂、选择性拮抗剂、反向激动剂、选择性反向激动剂、激动剂、选择性激动剂、抑制剂和/或选择性抑制剂。

在一些实施方案中，编码的psma或其修饰形式包含n-乙酰化α-连接的酸性二肽酶(naaladase)结构域，和/或包含一个或多个活性位点残基和/或参与psma底物结合和/或psma催化活性的残基，其参考seqidno:23所示的氨基酸序列中的位置任选地是在位置210、257、269、272、377、387、387、424、424、425、433、436、453、517、518、519、552、553、534、535、536、552、553、628、666、689、699和/或700处的残基。

在一些实施方案中，编码的psma或其修饰形式是人psma或其修饰形式。在一些实施方案中，编码的psma或其修饰形式是野生型psma，任选地野生型人psma。在一些实施方案中，编码的psma或其修饰形式包括seqidno:23所示的氨基酸序列或其细胞外和/或跨膜结构域，或展现与seqidno:23或其细胞外和/或跨膜结构域至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，编码的psma或其修饰形式是经修饰的psma，所述经修饰的psma与野生型或未经修饰的psma相比含有一个或多个氨基酸修饰。在一些实施方案中，野生型或未经修饰的psma是人psma和/或包括seqidno:23所示的氨基酸序列或展现与其至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，所述一个或多个氨基酸修饰包括一个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入。在一些实施方案中，与野生型或未经修饰的psma相比，编码的经修饰的psma(i)展现出降低的内源性信号传导；(ii)展现出增加的细胞表面表达；和/或(iii)展现出降低的细胞内化。

在一些实施方案中，参考seqidno:23所示的氨基酸序列中的位置，编码的经修饰的psma包括与w2g对应的至少一个氨基酸取代或者不包含w2或者不包含在位置2处的任何残基。在一些实施方案中，编码的经修饰的psma包括seqidno:24所示的氨基酸序列或其片段，或展现与seqidno:24或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且包括所述至少一个氨基酸取代的氨基酸序列。

在一些实施方案中，与野生型或未经修饰的psma相比，编码的经修饰的psma包括细胞内部分中的一个或多个n末端氨基酸残基的缺失。在一些实施方案中，与野生型或未经修饰的psma相比，编码的经修饰的psma包括至多2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个或18个n末端氨基酸残基的缺失。在一些实施方案中，参考seqidno:23所示的氨基酸序列中的位置，编码的经修饰的psma包含在从位置2、3、4或5的残基开始并且直至位置6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19的n末端处的连续氨基酸序列的缺失。在一些实施方案中，参考seqidno:23所示的氨基酸序列中的位置，编码的经修饰的psma包含在位置2-19、2-18、2-17、2-16、2-15、2-14、2-13、2-12、2-11、2-10、2-9、2-8、2-7、2-6、2-5、2-4或2-3处的残基的缺失。

在一些实施方案中，编码的psma或其修饰形式包括seqidno:52所示的氨基酸序列或其片段；或展现与seqidno:52或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且包括所述一个或多个n末端氨基酸残基的缺失并且任选地含有甲硫氨酸作为第一密码子或甲硫氨酸起始密码子的氨基酸序列。

在一些实施方案中，编码的psma或其修饰形式包括seqidno:25所示的氨基酸序列或其片段；或展现与seqidno:25或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且包括所述一个或多个n末端氨基酸残基的缺失的氨基酸序列。

在一些实施方案中，psma或其修饰形式由以下编码：seqidno:26或53所示的核酸序列或其片段；或展现与seqidno:26或53或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且任选地含有编码甲硫氨酸作为第一残基或甲硫氨酸起始密码子的核酸的核酸序列。

在一些实施方案中，psma或其修饰形式由被修饰为无cpg和/或经密码子优化的核酸序列编码。在一些实施方案中，psma或其修饰形式由以下编码：seqidno:27所示的核酸序列或其片段；或展现与seqidno:27或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且任选地含有编码甲硫氨酸作为第一残基或甲硫氨酸起始密码子的核酸的核酸序列。

在一些实施方案中，编码的经修饰的psma包括野生型或未经修饰的psma的跨膜结构域的全部或基本上全部；或者编码的经修饰的psma包括具有与野生型或未经修饰的psma的跨膜结构域相同或至少相同数量的氨基酸的跨膜结构域。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括小分子、配体、抗体或其抗原结合片段、适体、肽或其缀合物。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括小分子。在一些实施方案中，小分子选自2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)、(氨基苯乙烯基)吡啶鎓(asp)染料、2-(3-[1-羧基-5-[(5-碘-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基]-脲基)-戊二酸(yc-vi-11)、2-[3-[1-羧基-5-(4-碘-苯甲酰氨基)-戊基]-脲基]-戊二酸(dcibzl或yc-7)、1-(3-羧基-4-(3-羟基-6-氧代-6h-呫吨-9-基)苯基氨基)-9,16,24-三氧代-1-硫氧代-2,8,17,23,25-五氮杂二十八烷-7,22,26,28-四甲酸(yc-36)、glu-nh-co-nh-lys(ahx)-hbed-cc(psma-hbed-cc)、9-(4-氟-3-[羟基甲基]丁基)鸟嘌呤(fhbg)、glu-脲-lys-(ahx)-[(hbed-cc)](psma-11)、psma-617、2-(膦酰基甲基)戊二酸、2-pmpa、氟苯甲酰氨基磷酸酯、(2s,4s)-2-氟-4-(膦酰基甲基)戊二酸(bay1075553)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-s-甲基-l-半胱氨酸(-dcmc)、euk-subkff-dotaga、2-[3-(1,3-二羧基丙基)脲基]戊二酸(dupa)、psman、n'-双[2-羟基-5-(羧基乙基)苄基]乙二胺-n,n'-二乙酸、mip-1072、mip-1095、mip-1404、mip-1405和n-[[[(1s)-1-羧基-3-甲基丁基]氨基]羰基]-l-谷氨酸(zj43)、(s)-2-(4-碘苄基膦酰基甲基)-戊二酸(gpi-18431)、2-[(3-{4-[(2-氨基-4-羟基-蝶啶-6-基甲基)-氨基]-苯甲酰氨基}-3-羧基-丙基)-羟基-磷酰基甲基]-戊二酸(mpe)、(2s,3's)-{[(3'-氨基-3'-羧基-丙基)-羟基磷酰基]甲基}-戊二酸(epe)和(2s)-2-{[(2-羧基-乙基)-羟基-磷酰基]甲基}-戊二酸(spe)。在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)或n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段任选地具有与psma特异性结合的结合位点。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段选自j591、dfo-j591、cyt-356、j415、3/a12、3/f11、3/e7、d2b、107-1a4、ypsma-1、ypsma-2、3e6、2g7、24.4e6、gcp-02、gcp-04、gcp-05、j533、e99、1g9、3c6、4.40、026、d7-fc、d7-ch3、4d4、a5、及其抗原结合片段和衍生物，或包括cdr3、vh和/或vl，和/或竞争与psma结合或结合与任何前述相同的psma表位。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括适体或其缀合物。在一些实施方案中，适体包括a9、a10、a10g、a10-3.2或szt101或其缀合物。

在一些实施方案中，编码的重组受体是或包括嵌合受体和/或重组抗原受体。

在一些实施方案中，编码的重组受体能够结合靶抗原，所述靶抗原与疾病或障碍的细胞或组织相关、对疾病、障碍或病症的细胞或组织是特异的和/或在疾病或障碍的细胞或组织上表达。在一些实施方案中，所述疾病、障碍或病症是感染性疾病或障碍、自身免疫性疾病、炎性疾病、或肿瘤或癌症。在一些实施方案中，靶抗原是肿瘤抗原。

在一些实施方案中，靶抗原选自αvβ6整合素(avb6整合素)、b细胞成熟抗原(bcma)、b7-h3、b7-h6、碳酸酐酶9(ca9，也称为caix或g250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1b(ctag，也称为ny-eso-1和lage-2)、癌胚抗原(cea)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、cc基序趋化因子配体1(ccl-1)、cd19、cd20、cd22、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、cd44v6、cd44v7/8、cd123、cd133、cd138、cd171、硫酸软骨素蛋白聚糖4(cspg4)、表皮生长因子蛋白(egfr)、截短的表皮生长因子蛋白(tegfr)、iii型表皮生长因子受体突变(egfrviii)、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、肝配蛋白b2、肝配蛋白受体a2(epha2)、雌激素受体、fc受体样蛋白5(fcrl5；也称为fc受体同源物5或fcrh5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿achr)、叶酸结合蛋白(fbp)、叶酸受体α、神经节苷脂gd2、o-乙酰化gd2(ogd2)、神经节苷脂gd3、糖蛋白100(gp100)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖(gpc3)、g蛋白偶联受体5d(gpcr5d)、her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-b2)、her3(erb-b3)、her4(erb-b4)、erbb二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(hmw-maa)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原a1(hla-a1)、人白细胞抗原a2(hla-a2)、il-22受体α(il-22rα)、il-13受体α2(il-13rα2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、l1细胞粘附分子(l1-cam)、l1-cam的ce7表位、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员a(lrrc8a)、路易斯y、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、mage-a10、间皮素(msln)、c-met、鼠类巨细胞病毒(cmv)、粘蛋白1(muc1)、muc16、自然杀伤细胞2族成员d(nkg2d)配体、黑色素a(mart-1)、神经细胞粘附分子(ncam)、癌胚胎抗原、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(psca)、前列腺特异性膜抗原(psma)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ror1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(tpbg，也称为5t4)、肿瘤相关糖蛋白72(tag72)、酪氨酸酶相关蛋白1(trp1，也称为tyrp1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(trp2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ异构酶或dct)、血管内皮生长因子受体(vegfr)、血管内皮生长因子受体2(vegfr2)、wilms肿瘤1(wt-1)、病原体特异性或病原体表达的抗原、或与通用标签相关的抗原、和/或生物素化分子、和/或由hiv、hcv、hbv或其他病原体表达的分子。在一些实施方案中，靶抗原选自ror1、b细胞成熟抗原(bcma)、碳酸酐酶9(caix)、tegfr、her2/neu(受体酪氨酸激酶erbb2)、l1-cam、cd19、cd20、cd22、间皮素、cea和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、egfr、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、epha2、erb-b2、erb-b3、erb-b4、erbb二聚体、egfrviii、叶酸结合蛋白(fbp)、fcrl5、fcrh5、胎儿乙酰胆碱受体、gd2、gd3、g蛋白偶联受体5d(gpcr5d)、hmw-maa、il-22r-α、il-13r-α2、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、路易斯y、l1细胞粘附分子(l1-cam)、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、存活蛋白、tag72、b7-h6、il-13受体α2(il-13ra2)、ca9、gd3、hmw-maa、cd171、g250/caix、hla-a1、magea1、hla-a2、ny-eso-1、psca、叶酸受体-a、cd44v6、cd44v7/8、avb6整合素、8h9、ncam、vegf受体、5t4、胎儿achr、nkg2d配体、cd44v6、双重抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素、鼠cmv、粘蛋白1(muc1)、muc16、psca、nkg2d、ny-eso-1、mart-1、gp100、癌胚胎抗原、ror1、tag72、vegf-r2、癌胚抗原(cea)、her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白b2、cd123、c-met、gd-2、o-乙酰化gd2(ogd2)、ce7、wilms肿瘤1(wt-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、ccl-1、cd138、病原体特异性抗原和与通用标签相关的抗原。

在一些实施方案中，编码的重组受体是或包括功能性非tcr抗原受体或tcr或其抗原结合片段。在一些实施方案中，编码的重组受体是嵌合抗原受体(car)。

在一些实施方案中，编码的重组受体包括含有抗原结合结构域的细胞外结构域。

在一些实施方案中，抗原结合结构域是或包括抗体或其抗体片段，所述抗体片段任选地是单链片段。在一些实施方案中，所述片段包括通过柔性接头连接的抗体可变区。在一些实施方案中，所述片段包括scfv。

在一些实施方案中，编码的重组受体还包括间隔子和/或铰链区。

在一些实施方案中，编码的重组受体包括细胞内信号传导区域。在一些实施方案中，细胞内信号传导区域包括细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域是或包括初级信号传导结构域、能够在t细胞中诱导初级激活信号的信号传导结构域、t细胞受体(tcr)组分的信号传导结构域、和/或含有基于免疫受体酪氨酸的激活基序(itam)的信号传导结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域是或包括cd3链任选cd3-zeta(cd3ζ)链的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。

在一些实施方案中，重组受体还包括设置在细胞外结构域与细胞内信号传导区域之间的跨膜结构域。

在一些实施方案中，细胞内信号传导区域还包括共刺激信号传导区域。在一些实施方案中，共刺激信号传导区域包括t细胞共刺激分子的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。在一些实施方案中，共刺激信号传导区域包括cd28、4-1bb或icos的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。

在一些实施方案中，共刺激信号传导区域位于跨膜结构域和细胞内信号传导区域之间。

在一些实施方案中，多核苷酸按5'至3'的顺序包含：i)编码信号肽的核酸；ii)编码car的核酸，所述car包含scfv；间隔子；跨膜结构域；包含共刺激信号传导区域、和cd3-zeta(cd3ζ)链的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分的细胞内区域；iii)编码自切割肽或导致核糖体跳跃的肽(其任选地是t2a、p2a、e2a或f2a)的核酸序列；以及iv)编码psma或其修饰形式的核酸，所述psma或其修饰形式任选地包含seqidno:52所示的氨基酸序列或其片段；或展现与seqidno:52或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且包含所述一个或多个n末端氨基酸残基的缺失的氨基酸序列。

还提供了载体，如含有本文所述的任何多核苷酸的载体。在一些实施方案中，所述载体是病毒载体。在一些实施方案中，所述载体是逆转录病毒载体。在一些实施方案中，所述载体是慢病毒载体或γ逆转录病毒载体。

还提供了载体组，所述载体组包括第一载体和第二载体。在一些实施方案中，所述第一载体包括本文所述的任何第一多核苷酸，并且所述第二载体包括本文所述的第二多核苷酸。还提供了包括这种载体组的组合物。

还提供了生产工程化细胞的方法。在一些实施方案中，所述方法包括将所述多核苷酸、所述组中的多核苷酸或含有本文所述的多核苷酸组的组合物中的任一者、所述载体或所述组的载体或含有本文所述的载体组的组合物中的任一者引入细胞中。还提供了使用这种生产方法产生的工程化细胞。

还提供了工程化细胞，所述工程化细胞含有所述多核苷酸、所述组中的多核苷酸、含有本文所述的多核苷酸组的组合物中的任一者，所述载体或所述组的载体或含有本文所述的载体组的组合物中的任一者。

还提供了含有本文所述的任何工程化细胞的组合物。在一些实施方案中，所述组合物还含有药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，所述组合物还含有psma靶向分子，如本文所述的任何psma结合分子。

还提供了治疗方法。在一些实施方案中，治疗方法涉及向受试者给予本文所述的任何工程化细胞或组合物。在一些实施方案中，所述方法还涉及向受试者给予psma靶向分子或含有psma靶向分子的组合物。在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括治疗剂，或还包括治疗剂。

还提供了涉及向受试者给予以下的治疗方法：本文所述的任何工程化细胞或组合物，以及是或包括或还包括治疗剂的psma靶向分子、或含有是或包括或也包括治疗剂的psma靶向分子的组合物。

还提供了涉及向已经被给予过本文所述的任何工程化细胞或组合物的受试者给予以下的治疗方法：psma靶向分子，所述psma靶向分子是或包括或还包括治疗剂；或含有是或包括或也包括治疗剂的psma靶向分子的组合物。在一些任何所提供的实施方案中，重组受体是嵌合受体和/或重组抗原受体，如嵌合抗原受体(car)。

在一些实施方案中，psma靶向分子或含有psma靶向分子的组合物的给予与工程化细胞或含有工程化细胞的组合物的给予同时或按任何顺序依次进行。在一些实施方案中，任选地在相同或不同组合物中，psma靶向分子或含有psma靶向分子的组合物的给予与工程化细胞或含有工程化细胞的组合物的给予同时进行。在一些实施方案中，psma靶向分子或含有psma靶向分子的组合物的给予与工程化细胞或含有工程化细胞的组合物的给予按任何顺序依次进行。

在一些实施方案中，psma靶向分子或其部分：能够结合psma和/或其修饰形式，和/或能够结合psma的活性位点和/或psma的修饰形式的活性位点，和/或能够被psma和/或被psma的修饰形式切割；和/或是psma和/或其修饰形式的拮抗剂、选择性拮抗剂、反向激动剂、选择性反向激动剂、激动剂、选择性激动剂、抑制剂和/或选择性抑制剂。

在一些实施方案中，psma或其修饰形式在一种或多种工程化细胞上表达。

在一些实施方案中，受试者患有疾病、障碍或病症，任选地癌症，肿瘤，自身免疫性疾病、障碍或病症，或感染性疾病。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括小分子、配体、抗体或其抗原结合片段、适体、肽或其缀合物。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括小分子。在一些实施方案中，小分子选自2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)、(氨基苯乙烯基)吡啶鎓(asp)染料、2-(3-[1-羧基-5-[(5-碘-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基]-脲基)-戊二酸(yc-vi-11)、2-[3-[1-羧基-5-(4-碘-苯甲酰氨基)-戊基]-脲基]-戊二酸(dcibzl或yc-7)、1-(3-羧基-4-(3-羟基-6-氧代-6h-呫吨-9-基)苯基氨基)-9,16,24-三氧代-1-硫氧代-2,8,17,23,25-五氮杂二十八烷-7,22,26,28-四甲酸(yc-36)、glu-nh-co-nh-lys(ahx)-hbed-cc(psma-hbed-cc)、9-(4-氟-3-[羟基甲基]丁基)鸟嘌呤(fhbg)、glu-脲-lys-(ahx)-[(hbed-cc)](psma-11)、psma-617、2-(膦酰基甲基)戊二酸、2-pmpa、氟苯甲酰氨基磷酸酯、(2s,4s)-2-氟-4-(膦酰基甲基)戊二酸(bay1075553)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-s-甲基-l-半胱氨酸(-dcmc)、euk-subkff-dotaga、2-[3-(1,3-二羧基丙基)脲基]戊二酸(dupa)、psman、n'-双[2-羟基-5-(羧基乙基)苄基]乙二胺-n,n'-二乙酸、mip-1072、mip-1095、mip-1404、mip-1405和n-[[[(1s)-1-羧基-3-甲基丁基]氨基]羰基]-l-谷氨酸(zj43)、(s)-2-(4-碘苄基膦酰基甲基)-戊二酸(gpi-18431)、2-[(3-{4-[(2-氨基-4-羟基-蝶啶-6-基甲基)-氨基]-苯甲酰氨基}-3-羧基-丙基)-羟基-磷酰基甲基]-戊二酸(mpe)、(2s,3's)-{[(3'-氨基-3'-羧基-丙基)-羟基磷酰基]甲基}-戊二酸(epe)和(2s)-2-{[(2-羧基-乙基)-羟基-磷酰基]甲基}-戊二酸(spe)。在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)或n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段任选地具有与psma特异性结合的结合位点。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段选自j591、dfo-j591、cyt-356、j415、3/a12、3/f11、3/e7、d2b、107-1a4、ypsma-1、ypsma-2、3e6、2g7、24.4e6、gcp-02、gcp-04、gcp-05、j533、e99、1g9、3c6、4.40、026、d7-fc、d7-ch3、4d4、a5、及其抗原结合片段和衍生物，或包括cdr3、vh和/或vl，和/或竞争与psma结合或结合与任何前述相同的psma表位。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括适体或其缀合物。在一些实施方案中，适体包括a9、a10、a10g、a10-3.2或szt101或其缀合物。

在一些实施方案中，治疗剂能够调节肿瘤微环境(tme)或对肿瘤具有细胞毒性。

在一些实施方案中，治疗剂是免疫调节剂、细胞毒性剂、抗癌剂或放射性治疗剂。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括前药，所述前药是或包括治疗剂或能够转化成或暴露治疗剂，和/或psma靶向分子在与psma或其修饰形式结合后能够被切割，其中切割产生包含治疗剂的至少一种切割产物。在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括米沙伽近(mipsagargin，g-202(8-o-(12-氨基十二烷酰)-8-o-去丁酰基毒胡萝卜素)-asp-γ-glu-γ-glu-γ-glugluoh)。

在一些实施方案中，psma靶向分子是抗体-药物缀合物(adc)。

在一些实施方案中，psma靶向分子还包括治疗剂，并且所述治疗剂直接地或间接地(任选地经由接头)连接至psma靶向分子的能够与psma或其修饰形式结合的一部分。

在一些实施方案中，接头是肽或多肽，或者是化学接头。在一些实施方案中，接头是可释放的接头或可切割的接头。在一些实施方案中，接头能够在psma或其修饰形式被psma靶向分子结合后被切割，其中切割产生包含治疗剂的至少一种切割产物。在一些实施方案中，可释放的接头或可切割的接头在肿瘤微环境(tme)中存在的一种或多种条件或因子的存在下被释放或切割，其中切割产生包含治疗剂的至少一种切割产物。在一些实施方案中，存在于肿瘤微环境(tme)中的一种或多种条件或因子包括基质金属蛋白酶(mmp)、低氧条件或酸性条件。

在一些实施方案中，psma靶向分子诱导一种或多种工程化细胞和/或由重组受体特异性识别的受试者中存在的细胞或组织的杀伤或破坏。

在一些实施方案中，治疗剂包括细胞毒性剂。在一些实施方案中，细胞毒性剂是或包括毒素。在一些实施方案中，所述毒素是肽毒素、蓖麻毒素a链毒素、相思豆毒素a链、白喉毒素(dt)a链、假单胞菌外毒素、志贺毒素a链、白树毒素、苦瓜毒蛋白(momordin)、美洲商陆抗病毒蛋白、皂草素、天花粉蛋白、气单胞菌溶素原(proaerolysin)或大麦毒素。

在一些实施方案中，治疗剂包括光敏剂。在一些实施方案中，光敏剂包括焦脱镁叶绿酸-a(ppa)或yc-9。

在一些实施方案中，psma靶向分子的给予不会或基本上不会诱导健康组织或健康细胞、不含工程化细胞和/或不表达所述抗原的细胞或组织的杀伤或破坏。

在一些实施方案中，治疗剂是免疫调节剂。在一些实施方案中，免疫调节剂是免疫检查点抑制剂或调节剂或细胞因子。

在一些实施方案中，免疫调节剂是免疫检查点抑制剂，所述免疫检查点抑制剂能够抑制或阻断免疫检查点分子的功能或涉及免疫检查点分子的信号传导途径。在一些实施方案中，免疫检查点分子选自pd-1、pd-l1、pd-l2、ctla-4、lag-3、tim3、vista、腺苷受体或细胞外腺苷，任选地腺苷2a受体(a2ar)或腺苷2b受体(a2br)、或涉及上述任何一种的腺苷或途径。

在一些实施方案中，所述方法还包括检测表达psma或其修饰形式的细胞，和/或检测psma靶向分子与psma或其修饰形式的结合和/或psma靶向分子的存在。在一些实施方案中，所述检测是在体内进行的和/或所述检测是经由体内成像进行的。

还提供了检测工程化细胞的方法。在一些实施方案中，所述方法包括使本文提供的任何工程化细胞或组合物与psma靶向分子接触；并且检测所述psma靶向分子对或与psma或其修饰形式和/或工程化细胞的结合和/或所述psma靶向分子的存在。在一些实施方案中，所述接触包括向已经被给予过工程化细胞的受试者给予psma靶向分子。

还提供了检测在受试者中表达嵌合受体和/或重组抗原受体和psma或其修饰形式的在受试者中的工程化细胞的存在或不存在的方法，所述受试者先前已经被给予过任何提供的工程化细胞或任何提供的组合物，所述方法包括：(a)向受试者给予psma靶向分子，所述受试者先前已经被给予过本文提供的任何工程化细胞或本文提供的任何组合物，其中所述工程化细胞在受试者中表达嵌合受体和/或重组抗原受体以及psma或其修饰形式；并且(b)检测受试者中psma靶向分子与psma或其修饰形式和/或与工程化细胞的结合和/或psma靶向分子的存在。

还提供了检测在先前已经被给予过本文提供的任何工程化细胞或组合物的受试者中表达重组受体和psma或其修饰形式的工程化细胞的存在或不存在的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向受试者给予psma靶向分子；并且检测受试者中psma靶向分子与psma或其修饰形式和/或与工程化细胞的结合和/或psma靶向分子的存在。在一些实施方案中，检测是经由体内成像进行的。在一些任何所提供的实施方案中，重组受体是嵌合受体和/或重组抗原受体，如嵌合抗原受体(car)。

在一些实施方案中，psma靶向分子或其部分：能够结合psma和/或其修饰形式，和/或能够结合psma的活性位点和/或psma的修饰形式的活性位点，和/或能够被psma和/或被psma的修饰形式切割；和/或是psma和/或其修饰形式的拮抗剂、选择性拮抗剂、反向激动剂、选择性反向激动剂、激动剂、选择性激动剂、抑制剂和/或选择性抑制剂。在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括小分子、配体、抗体或其抗原结合片段、适体、肽或其缀合物。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括小分子。在一些实施方案中，小分子选自2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)、(氨基苯乙烯基)吡啶鎓(asp)染料、2-(3-[1-羧基-5-[(5-碘-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基]-脲基)-戊二酸(yc-vi-11)、2-[3-[1-羧基-5-(4-碘-苯甲酰氨基)-戊基]-脲基]-戊二酸(dcibzl或yc-7)、1-(3-羧基-4-(3-羟基-6-氧代-6h-呫吨-9-基)苯基氨基)-9,16,24-三氧代-1-硫氧代-2,8,17,23,25-五氮杂二十八烷-7,22,26,28-四甲酸(yc-36)、glu-nh-co-nh-lys(ahx)-hbed-cc(psma-hbed-cc)、9-(4-氟-3-[羟基甲基]丁基)鸟嘌呤(fhbg)、glu-脲-lys-(ahx)-[(hbed-cc)](psma-11)、psma-617、2-(膦酰基甲基)戊二酸、2-pmpa、氟苯甲酰氨基磷酸酯、(2s,4s)-2-氟-4-(膦酰基甲基)戊二酸(bay1075553)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-s-甲基-l-半胱氨酸(-dcmc)、euk-subkff-dotaga、2-[3-(1,3-二羧基丙基)脲基]戊二酸(dupa)、psman、n'-双[2-羟基-5-(羧基乙基)苄基]乙二胺-n,n'-二乙酸、mip-1072、mip-1095、mip-1404、mip-1405和n-[[[(1s)-1-羧基-3-甲基丁基]氨基]羰基]-l-谷氨酸(zj43)、(s)-2-(4-碘苄基膦酰基甲基)-戊二酸(gpi-18431)、2-[(3-{4-[(2-氨基-4-羟基-蝶啶-6-基甲基)-氨基]-苯甲酰氨基}-3-羧基-丙基)-羟基-磷酰基甲基]-戊二酸(mpe)、(2s,3's)-{[(3'-氨基-3'-羧基-丙基)-羟基磷酰基]甲基}-戊二酸(epe)和(2s)-2-{[(2-羧基-乙基)-羟基-磷酰基]甲基}-戊二酸(spe)。在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)或n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段任选地具有与psma特异性结合的结合位点。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段选自j591、dfo-j591、cyt-356、j415、3/a12、3/f11、3/e7、d2b、107-1a4、ypsma-1、ypsma-2、3e6、2g7、24.4e6、gcp-02、gcp-04、gcp-05、j533、e99、1g9、3c6、4.40、026、d7-fc、d7-ch3、4d4、a5、及其抗原结合片段和衍生物，或包括cdr3、vh和/或vl，和/或竞争与psma结合或结合与任何前述相同的psma表位。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括适体或其缀合物。在一些实施方案中，适体包括a9、a10、a10g、a10-3.2或szt101或其缀合物。

在一些实施方案中，psma靶向分子提供信号或诱导可检测的信号或能够与提供信号或诱导可检测的信号的部分结合；和/或psma靶向分子是或包括提供信号或诱导可检测的信号的部分。在一些实施方案中，其中所述检测包括鉴定受试者中的信号或来自受试者的样品的信号，其中：所述psma靶向分子提供所述信号或诱导所述可检测的信号或能够与提供所述信号或诱导所述可检测的信号的部分结合；和/或所述psma靶向分子是或包含提供所述信号或诱导所述可检测的信号的部分。

在一些实施方案中，所述部分包括放射性同位素、生物发光化合物、化学发光化合物、荧光化合物、发色化合物、量子点、纳米粒子、金属螯合物或酶。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括成像探针或检测试剂，所述成像探针或检测试剂任选地是放射性配体。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括所述部分，和/或psma靶向分子能够在结合psma或其修饰形式后被切割，其中切割产生包含所述部分的至少一种切割产物和/或是发荧光的和/或放射性的。

在一些实施方案中，psma靶向分子还包括提供信号或诱导可检测的信号的部分，并且所述部分直接地或间接地(任选地经由接头)连接至psma靶向分子的能够与psma或其修饰形式结合的一部分。

在一些实施方案中，接头是可释放的接头或可切割的接头。在一些实施方案中，接头能够在结合psma或其修饰形式后被切割，其中切割产生包含所述部分的至少一种切割产物和/或是发荧光的和/或放射性的。在一些实施方案中，可释放的接头或可切割的接头在肿瘤微环境(tme)中存在的一种或多种条件或因子的存在下被释放或切割，其中切割产生包含所述部分的至少一种切割产物和/或是发荧光的和/或放射性的。在一些实施方案中，存在于肿瘤微环境(tme)中的一种或多种条件或因子包括基质金属蛋白酶(mmp)、低氧条件或酸性条件。

在一些实施方案中，放射性治疗剂、放射性同位素、放射性配体或放射性切割产物包括¹¹c、¹⁸f、⁶⁴cu、⁶⁸ga、⁶⁸ge、⁸⁶y、⁸⁹zr、⁹⁰y、^99mtc、¹¹¹in、¹²³i、¹²⁵i、¹⁷⁷lu和/或²¹³bi。

在一些实施方案中，psma靶向分子是2-(3-{1-羧基-5-[(6-[¹⁸f]氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(¹⁸f-dcfpyl)或n-[n-[(s)-l,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-[¹⁸f]氟苄基-l-半胱氨酸(¹⁸f-dcfbc)。

在一些实施方案中，所述接触和/或所述检测是在体内进行的和/或所述检测是经由体内成像进行的。

在一些实施方案中，体内成像选自磁共振成像(mri)、单光子发射计算机断层扫描(spect)、计算机断层扫描(ct)、计算机轴向断层扫描(cat)、电子束计算机断层扫描(ebct)、高分辨率计算机断层扫描(hrct)、内摆线断层扫描、正电子发射断层扫描(pet)、闪烁扫描、γ照相机、β+检测器、γ检测器、荧光成像、低光成像、x射线、生物发光成像和近红外(nir)光学断层扫描。在一些实施方案中，体内成像是正电子发射断层扫描(pet)，任选地与计算机断层扫描(ct)偶联。

在一些实施方案中，所述方法能够检测低至或少至、或低至或少至大约4,000个、5,000个、6,000个、7,000个、8,000个、9,000个或10,000个细胞，或在指定体积中存在的低至或少至大约4,000个、5,000个、6,000个、7,000个、8,000个、9,000个或10,000个细胞。在一些实施方案中，所述指定体积是液体的、样品的和/或器官或组织的体积和/或在或在约10μl与约100μl之间。

在一些实施方案中，所述接触和/或所述检测在体外或离体进行。在一些实施方案中，所述接触和/或所述检测包括免疫组织化学(ihc)、免疫细胞化学或流式细胞术。在一些实施方案中，所述方法能够检测低至或少至、或低至或少至大约2,000个、3,000个、4,000个、5,000个、6,000个、7,000个、8,000个、9,000个或10,000个细胞，或在指定体积中存在的低至或少至大约2,000个、3,000个、4,000个、5,000个、6,000个、7,000个、8,000个、9,000个或10,000个细胞。在一些实施方案中，所述指定体积是液体的、样品的和/或器官或组织的体积和/或在或在约10μl与约100μl之间。

在一些实施方案中，所述方法还包括确定受试者中所给予的工程化细胞的数量或浓度。在一些实施方案中，确定包括将信号与标准曲线进行比较。在一些实施方案中，标准曲线是通过从含有限定数量的表达psma或其修饰形式的细胞的多个对照样品中检测信号而产生的，所述多个对照样品已经与psma靶向分子接触。

在一些实施方案中，体内成像是正电子发射断层扫描(pet)，任选地与计算机断层扫描(ct)偶联，并且psma靶向分子是2-(3-{1-羧基-5-[(6-[18f]氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(18f-dcfpyl)。

本文还提供了选择、分离或分开表达psma或其修饰形式的细胞的方法。在一些实施方案中，所述方法包括使含有本文所述的任何工程化细胞的多种细胞与psma靶向分子接触；并且选择、分离或分开由psma靶向分子识别或结合的细胞。在一些任何所提供的实施方案中，重组受体是嵌合受体和/或重组抗原受体，如嵌合抗原受体(car)。

本文还提供了选择、分离或分开表达psma或其修饰形式的细胞的方法。在一些实施方案中，所述方法包括从含有已经与psma靶向分子接触的本文的任何工程化细胞的多种细胞中选择、分离或分开由psma靶向分子识别或结合的细胞。在一些任何所提供的实施方案中，重组受体是嵌合受体和/或重组抗原受体，如嵌合抗原受体(car)。

在一些实施方案中，psma靶向分子或其部分：能够结合psma和/或其修饰形式，和/或能够结合psma的活性位点和/或psma的修饰形式的活性位点，和/或能够被psma和/或被psma的修饰形式切割；和/或是psma和/或其修饰形式的拮抗剂、选择性拮抗剂、反向激动剂、选择性反向激动剂、激动剂、选择性激动剂、抑制剂和/或选择性抑制剂。

在一些实施方案中，所述多种细胞包括工程化细胞，所述工程化细胞含有多核苷酸、多核苷酸组或含有本文所述的多核苷酸组的组合物、或载体、载体组或含有本文所述的载体组的组合物中的任一者。

在一些实施方案中，含有工程化细胞的多种细胞包含来自受试者的外周血白细胞，所述受试者已经被给予过本文所述的任何工程化细胞或组合物。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括小分子、配体、抗体或其抗原结合片段、适体、肽或其缀合物。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括小分子。在一些实施方案中，小分子选自2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)、(氨基苯乙烯基)吡啶鎓(asp)染料、2-(3-[1-羧基-5-[(5-碘-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基]-脲基)-戊二酸(yc-vi-11)、2-[3-[1-羧基-5-(4-碘-苯甲酰氨基)-戊基]-脲基]-戊二酸(dcibzl或yc-7)、1-(3-羧基-4-(3-羟基-6-氧代-6h-呫吨-9-基)苯基氨基)-9,16,24-三氧代-1-硫氧代-2,8,17,23,25-五氮杂二十八烷-7,22,26,28-四甲酸(yc-36)、glu-nh-co-nh-lys(ahx)-hbed-cc(psma-hbed-cc)、9-(4-氟-3-[羟基甲基]丁基)鸟嘌呤(fhbg)、glu-脲-lys-(ahx)-[(hbed-cc)](psma-11)、psma-617、2-(膦酰基甲基)戊二酸、2-pmpa、氟苯甲酰氨基磷酸酯、(2s,4s)-2-氟-4-(膦酰基甲基)戊二酸(bay1075553)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-s-甲基-l-半胱氨酸(-dcmc)、euk-subkff-dotaga、2-[3-(1,3-二羧基丙基)脲基]戊二酸(dupa)、psman、n'-双[2-羟基-5-(羧基乙基)苄基]乙二胺-n,n'-二乙酸、mip-1072、mip-1095、mip-1404、mip-1405和n-[[[(1s)-1-羧基-3-甲基丁基]氨基]羰基]-l-谷氨酸(zj43)、(s)-2-(4-碘苄基膦酰基甲基)-戊二酸(gpi-18431)、2-[(3-{4-[(2-氨基-4-羟基-蝶啶-6-基甲基)-氨基]-苯甲酰氨基}-3-羧基-丙基)-羟基-磷酰基甲基]-戊二酸(mpe)、(2s,3's)-{[(3'-氨基-3'-羧基-丙基)-羟基磷酰基]甲基}-戊二酸(epe)和(2s)-2-{[(2-羧基-乙基)-羟基-磷酰基]甲基}-戊二酸(spe)。在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)或n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段任选地具有与psma特异性结合的结合位点。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段选自j591、dfo-j591、cyt-356、j415、3/a12、3/f11、3/e7、d2b、107-1a4、ypsma-1、ypsma-2、3e6、2g7、24.4e6、gcp-02、gcp-04、gcp-05、j533、e99、1g9、3c6、4.40、026、d7-fc、d7-ch3、4d4、a5、及其抗原结合片段和衍生物，或包括cdr3、vh和/或vl，和/或竞争与psma结合或结合与任何前述相同的psma表位。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括适体或其缀合物。在一些实施方案中，适体包括a9、a10、a10g、a10-3.2或szt101或其缀合物。

在一些实施方案中，psma靶向分子被包含在基质中或固定在固体支持物上。在一些实施方案中，固体支持物包括磁性粒子。

本文还提供了试剂盒。在一些实施方案中，试剂盒包含含有治疗有效量的本文提供的任何工程化细胞的组合物；以及含有psma靶向分子的组合物。在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括或还包括治疗剂和/或psma靶向分子提供信号或诱导可检测的信号或能够与提供信号或诱导可检测的信号的部分结合。在一些任何所提供的实施方案中，重组受体是嵌合受体和/或重组抗原受体，如嵌合抗原受体(car)。在一些实施方案中，其中所述检测包括鉴定受试者中的信号或来自受试者的样品的信号，其中：所述psma靶向分子提供所述信号或诱导所述可检测的信号或能够与提供所述信号或诱导所述可检测的信号的部分结合；和/或所述psma靶向分子是或包含提供所述信号或诱导所述可检测的信号的部分。

在一些实施方案中，试剂盒还包括用于向治疗疾病或病症的受试者以组合疗法给予工程化细胞和psma靶向分子以治疗疾病或病症的说明书。在一些实施方案中，试剂盒还包括用于向接受或已经被给予过工程化细胞的受试者给予psma靶向分子以检测所述工程化细胞的说明书。

本文还提供了试剂盒，所述试剂盒包含含有治疗有效量的本文提供的任何工程化细胞的组合物；以及用于向接受或已经被给予过工程化细胞的受试者给予psma靶向分子以检测所述工程化细胞的说明书。

本文还提供了试剂盒，所述试剂盒包含含有psma靶向分子的组合物；以及用于向接受或已经被给予过治疗有效量的本文提供的任何工程化细胞的受试者给予psma靶向分子以检测所述工程化细胞的说明书。在一些任何所提供的实施方案中，重组受体是嵌合受体和/或重组抗原受体，如嵌合抗原受体(car)。

在一些实施方案中，说明书还指定了确定受试者中所给予的工程化细胞的数量或浓度。在一些实施方案中，指定了所述确定的说明书包含将信号与标准曲线进行比较。在一些实施方案中，说明书还指定了标准曲线是通过从含有限定数量的表达psma或其修饰形式的细胞的多个对照样品中检测信号而产生的，所述多个对照样品已经与psma靶向分子接触。在一些实施方案中，说明书指定检测经由正电子发射断层扫描(pet)(任选地与计算机断层扫描(ct)偶联)进行，并且psma靶向分子是2-(3-{1-羧基-5-[(6-[¹⁸f]氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(¹⁸f-dcfpyl)。

本文还提供了试剂盒，所述试剂盒包含含有治疗有效量的本文提供的任何工程化细胞的组合物；以及用于向治疗疾病或病症的受试者以与psma靶向分子的组合疗法给予工程化细胞的说明书，所述psma靶向分子是或包括或还包括用于治疗疾病或病症的治疗剂。在一些任何所提供的实施方案中，重组受体是嵌合受体和/或重组抗原受体，如嵌合抗原受体(car)。

在一些实施方案中，psma靶向分子或治疗剂能够调节肿瘤微环境(tme)或对肿瘤具有细胞毒性。在一些实施方案中，治疗剂是免疫调节剂、细胞毒性剂、抗癌剂或放射性治疗剂。

本文还提供了试剂盒，所述试剂盒包含含有psma靶向分子的组合物；以及用于向治疗疾病或病症的受试者以与治疗有效量的本文提供的任何工程化细胞的组合疗法给予psma靶向分子以治疗所述疾病或病症的说明书。在一些任何所提供的实施方案中，重组受体是嵌合受体和/或重组抗原受体，如嵌合抗原受体(car)。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括小分子、配体、抗体或其抗原结合片段、适体、肽或其缀合物。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括小分子。在一些实施方案中，小分子选自2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)、(氨基苯乙烯基)吡啶鎓(asp)染料、2-(3-[1-羧基-5-[(5-碘-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基]-脲基)-戊二酸(yc-vi-11)、2-[3-[1-羧基-5-(4-碘-苯甲酰氨基)-戊基]-脲基]-戊二酸(dcibzl或yc-7)、1-(3-羧基-4-(3-羟基-6-氧代-6h-呫吨-9-基)苯基氨基)-9,16,24-三氧代-1-硫氧代-2,8,17,23,25-五氮杂二十八烷-7,22,26,28-四甲酸(yc-36)、glu-nh-co-nh-lys(ahx)-hbed-cc(psma-hbed-cc)、9-(4-氟-3-[羟基甲基]丁基)鸟嘌呤(fhbg)、glu-脲-lys-(ahx)-[(hbed-cc)](psma-11)、psma-617、2-(膦酰基甲基)戊二酸、2-pmpa、氟苯甲酰氨基磷酸酯、(2s,4s)-2-氟-4-(膦酰基甲基)戊二酸(bay1075553)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-s-甲基-l-半胱氨酸(-dcmc)、euk-subkff-dotaga、2-[3-(1,3-二羧基丙基)脲基]戊二酸(dupa)、psman、n'-双[2-羟基-5-(羧基乙基)苄基]乙二胺-n,n'-二乙酸、mip-1072、mip-1095、mip-1404、mip-1405和n-[[[(1s)-1-羧基-3-甲基丁基]氨基]羰基]-l-谷氨酸(zj43)、(s)-2-(4-碘苄基膦酰基甲基)-戊二酸(gpi-18431)、2-[(3-{4-[(2-氨基-4-羟基-蝶啶-6-基甲基)-氨基]-苯甲酰氨基}-3-羧基-丙基)-羟基-磷酰基甲基]-戊二酸(mpe)、(2s,3's)-{[(3'-氨基-3'-羧基-丙基)-羟基磷酰基]甲基}-戊二酸(epe)和(2s)-2-{[(2-羧基-乙基)-羟基-磷酰基]甲基}-戊二酸(spe)。在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)或n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段任选地具有与psma特异性结合的结合位点。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段选自j591、dfo-j591、cyt-356、j415、3/a12、3/f11、3/e7、d2b、107-1a4、ypsma-1、ypsma-2、3e6、2g7、24.4e6、gcp-02、gcp-04、gcp-05、j533、e99、1g9、3c6、4.40、026、d7-fc、d7-ch3、4d4、a5、及其抗原结合片段和衍生物，或包括cdr3、vh和/或vl，和/或竞争与psma结合或结合与任何前述相同的psma表位。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括适体或其缀合物。在一些实施方案中，适体包括a9、a10、a10g、a10-3.2或szt101或其缀合物。

本文还提供了psma靶向分子。在一些实施方案中，psma靶向分子包括能够与psma或其修饰形式结合的部分，其中所述psma靶向分子是或还包括免疫调节剂。在一些实施方案中，免疫调节剂能够调节、任选地增加免疫细胞的活性或免疫应答和/或能够调节肿瘤微环境(tme)。在一些任何所提供的实施方案中，重组受体是嵌合受体和/或重组抗原受体，如嵌合抗原受体(car)。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括前药，所述前药是或包括免疫调节剂或能够转化成或暴露免疫调节剂，和/或psma靶向分子在与psma或其修饰形式结合后能够被切割，其中切割产生包含免疫调节剂的至少一种切割产物。

在一些实施方案中，免疫调节剂直接地或间接地(任选地经由接头)连接至psma靶向分子的能够与psma或其修饰形式结合的一部分。在一些实施方案中，接头是肽或多肽，或者是化学接头。在一些实施方案中，接头是可释放的接头或可切割的接头。在一些实施方案中，接头能够在psma或其修饰形式被结合分子结合后被切割，其中切割产生包含免疫调节剂的至少一种切割产物。在一些实施方案中，可释放的接头或可切割的接头在肿瘤微环境(tme)中存在的一种或多种条件或因子的存在下被释放或切割，其中切割产生包含免疫调节剂的至少一种切割产物。在一些实施方案中，存在于肿瘤微环境(tme)中的一种或多种条件或因子包括基质金属蛋白酶(mmp)、低氧条件或酸性条件。

在一些实施方案中，免疫调节剂是免疫检查点抑制剂或调节剂或细胞因子。在一些实施方案中，免疫调节剂是免疫检查点抑制剂，所述免疫检查点抑制剂能够抑制或阻断免疫检查点分子的功能或涉及免疫检查点分子的信号传导途径。在一些实施方案中，免疫检查点分子选自pd-1、pd-l1、pd-l2、ctla-4、lag-3、tim3、vista、腺苷受体或细胞外腺苷，任选地腺苷2a受体(a2ar)或腺苷2b受体(a2br)、或涉及上述任何一种的腺苷或途径。

本文还提供了psma靶向分子。在一些实施方案中，psma靶向分子包括能够与psma或其修饰形式结合的部分，其中所述psma靶向分子是或还包括能够调节肿瘤微环境(tme)的治疗剂，其中所述治疗剂通过对tme中存在的一种或多种条件或因子有响应的可释放或可切割的接头连接至psma靶向分子的所述部分。在一些实施方案中，存在于肿瘤微环境(tme)中的一种或多种条件或因子包括基质金属蛋白酶(mmp)、低氧条件或酸性条件。在一些实施方案中，治疗剂是免疫调节剂、细胞毒性剂、抗癌剂或放射性治疗剂。在一些任何所提供的实施方案中，重组受体是嵌合受体和/或重组抗原受体，如嵌合抗原受体(car)。

在一些实施方案中，psma靶向分子属于抗体-药物缀合物(adc)。

在一些实施方案中，psma靶向分子或其部分：能够结合psma和/或其修饰形式，和/或能够结合psma的活性位点和/或psma的修饰形式的活性位点，和/或能够被psma和/或被psma的修饰形式切割；和/或是psma和/或其修饰形式的拮抗剂、选择性拮抗剂、反向激动剂、选择性反向激动剂、激动剂、选择性激动剂、抑制剂和/或选择性抑制剂。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括小分子、配体、抗体或其抗原结合片段、适体、肽或其缀合物。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括小分子。在一些实施方案中，小分子选自2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)、(氨基苯乙烯基)吡啶鎓(asp)染料、2-(3-[1-羧基-5-[(5-碘-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基]-脲基)-戊二酸(yc-vi-11)、2-[3-[1-羧基-5-(4-碘-苯甲酰氨基)-戊基]-脲基]-戊二酸(dcibzl或yc-7)、1-(3-羧基-4-(3-羟基-6-氧代-6h-呫吨-9-基)苯基氨基)-9,16,24-三氧代-1-硫氧代-2,8,17,23,25-五氮杂二十八烷-7,22,26,28-四甲酸(yc-36)、glu-nh-co-nh-lys(ahx)-hbed-cc(psma-hbed-cc)、9-(4-氟-3-[羟基甲基]丁基)鸟嘌呤(fhbg)、glu-脲-lys-(ahx)-[(hbed-cc)](psma-11)、psma-617、2-(膦酰基甲基)戊二酸、2-pmpa、氟苯甲酰氨基磷酸酯、(2s,4s)-2-氟-4-(膦酰基甲基)戊二酸(bay1075553)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-s-甲基-l-半胱氨酸(-dcmc)、euk-subkff-dotaga、2-[3-(1,3-二羧基丙基)脲基]戊二酸(dupa)、psman、n'-双[2-羟基-5-(羧基乙基)苄基]乙二胺-n,n'-二乙酸、mip-1072、mip-1095、mip-1404、mip-1405和n-[[[(1s)-1-羧基-3-甲基丁基]氨基]羰基]-l-谷氨酸(zj43)、(s)-2-(4-碘苄基膦酰基甲基)-戊二酸(gpi-18431)、2-[(3-{4-[(2-氨基-4-羟基-蝶啶-6-基甲基)-氨基]-苯甲酰氨基}-3-羧基-丙基)-羟基-磷酰基甲基]-戊二酸(mpe)、(2s,3's)-{[(3'-氨基-3'-羧基-丙基)-羟基磷酰基]甲基}-戊二酸(epe)和(2s)-2-{[(2-羧基-乙基)-羟基-磷酰基]甲基}-戊二酸(spe)。在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)或n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段任选地具有与psma特异性结合的结合位点。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段选自j591、dfo-j591、cyt-356、j415、3/a12、3/f11、3/e7、d2b、107-1a4、ypsma-1、ypsma-2、3e6、2g7、24.4e6、gcp-02、gcp-04、gcp-05、j533、e99、1g9、3c6、4.40、026、d7-fc、d7-ch3、4d4、a5、及其抗原结合片段和衍生物，或包括cdr3、vh和/或vl，和/或竞争与psma结合或结合与任何前述相同的psma表位。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包括适体或其缀合物。在一些实施方案中，适体包括a9、a10、a10g、a10-3.2或szt101或其缀合物。

本文还提供了包括向受试者给予本文所述的任何psma靶向分子的治疗方法。在一些任何所提供的实施方案中，重组受体是嵌合受体和/或重组抗原受体，如嵌合抗原受体(car)。

本文还提供了制品。在一些实施方案中，制品包括本文提供的工程化细胞、组合物、多核苷酸、多核苷酸组、含有多核苷酸组的组合物、载体、载体组、含有载体组的组合物、试剂盒或psma靶向分子中的任一者。在一些任何所提供的实施方案中，重组受体是嵌合受体和/或重组抗原受体，如嵌合抗原受体(car)。

附图说明

图1a-1b描绘了示例性facs图，其示出了在富含car+t细胞的样品中抗psma抗体(psma(mab))和cd4的结合的检测水平。细胞被工程化以表达抗cd19car和全长野生型psma(wtpsma)、携带位置2处的氨基酸置换(psma^(w2g))或9个氨基酸的n末端缺失(psma^(n9del))的经n末端修饰的psma变体，或者作为对照，用不编码car和/或不编码psma的载体转导细胞(模拟物)。图1c示出了针对cd4+和cd8+t细胞，通过抗psma抗体的结合确定的psma(或n末端修饰变体)表达的几何平均荧光强度(gmfi)。图1d示出了在转导以表达各自的psma或变体之一的cd4+或cd8+细胞中与在表达截短egfr(egfrt)或进行模拟转导的t细胞上的psma(或n末端修饰变体)表达的gmfi。图1e-1f描绘了示例性facs图，其示出了在表达抗cd19car和psma(或n末端修饰变体)的富含car+t细胞的样品中yc-36-fitc(dcfpyl的fitc缀合类似物)和cd8的结合的检测水平。图1g描绘了示例性facs图，其示出了经修饰的psma^(n9del)在表达car的细胞表面上的共表达，如通过对car的结合结构域特异的抗独特型抗体确定的。图1h-1l描绘了示例性facs图，其示出了已经用wtpsma或修饰变体(psma^(w2g)和psma^(n9del))转导的cd4+或cd8+细胞中psma和抗cd19car的表达。图1m示出了在共表达截短psma变体的抗cd19car表达细胞中(cd19-tpsma；psma^(n9del))或表达截短的受体作为对照替代标记的细胞中(cd19-t受体)通过流式细胞术得出的car表面表达的gmfi。

图2a示出了如通过在4:1的效应细胞与靶细胞比率下测量存活的nlr标记的表达cd19的靶细胞(nlr+细胞)的损失评估的，表达psma(或n末端修饰变体)的car+细胞或表达替代性egfrt标记的car+细胞的细胞溶解活性。图2b示出了对在e:t比率(4:1、2:1、1:1和1:2)下不同杀伤指数的结果的比较。图2c示出了在4:1的e:t比率下在结合psma的催化结构域的试剂2-(3-{l-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)的存在下，表达抗cd19car/psma^(n9del)的t细胞的细胞溶解活性。图2d示出了在4:1或1:1的e:t比率下在2-(3-{l-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)的存在下，表达抗cd19car/psma^(n9del)的t细胞的杀伤指数。

图3a(ifn-γ)、图3b(tnf-α)和图3c(il-2)描绘了表达抗cd19car/wtpsma、抗cd19car/psma^(w2g)、抗cd19car/psma^(n9del)的t细胞或模拟物转导细胞(模拟物)，响应于与表达cd19的靶细胞一起孵育，对应细胞因子产生的量。图3d示出了在共表达截短的psma变体的抗cd19car表达细胞中(cd19-tpsma；psma^(n9del))或表达截短的受体作为对照替代标记的细胞中(cd19-t受体)的ifn-γ产生。图3e描绘了在4:1和1:1的e:t比率下在不同浓度的dcfpyl的存在下培养的表达抗cd19car/psma^(n9del)的t-细胞和k562-cd19靶细胞的共培养物中产生的ifn-γ的量。

图4a示出了在接受一定剂量表达抗cd19car/psma^(n9del)、抗cd19car/egfrt的工程化t细胞或模拟物转导细胞(模拟物)的具有肿瘤的小鼠中肿瘤随时间的生长。通过具有表达生物发光蛋白的肿瘤的小鼠模型的生物发光成像确定的平均辐射度(p/s/cm²/sr)来确定肿瘤随时间的生长。图4b示出了每组中小鼠的存活曲线。

图5a示出了用含有50％car+细胞和50％非car+t细胞的t细胞注射的小鼠(使得小鼠被注射了500(0.5k)、2,500(2.5k)、5,000(5k)、25,000(25k)、50,000(50k)、250,000(250k)、500,000(0.5m)或2,500,000(2.5m)个表达抗cd19car/psma^(ndel)的工程化细胞)的示例性正电子发射断层扫描-计算机断层扫描(pet/ct)的扫描图。还用400μci的2-(3-{l-羧基-5-[(6-[¹⁸f]氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸([¹⁸f]dcfpyl)注射小鼠。示出了已接受表达抗cd19car/psma^(n9del)和400μci[¹⁸f]dcfpyl的2.5m个工程化细胞的示例性动物的横断面图。图5b示出了来自另一项研究(其中在nod/scid/gc-/-(nsg)小鼠的肩部中(白色箭头指示注射细胞的位置)注射了在50μl中的2,000(2k)、4,000(4k)、20,000(20k)、40,000(40k)、200,000(200k)、400,000(400k)或2,000,000(2m)个表达psma-n9del的抗cd19car+t细胞)的示例性正电子发射断层扫描-计算机断层扫描(pet/ct)。pet结果以每立方厘米成像组织的注射剂量的百分比(％id/cc)表示。

图6示出了具有散布性肿瘤的小鼠的生物发光成像和pet/ct扫描，所述小鼠已接受一定剂量的表达抗cd19car/psma^(n9del)、抗cd19car/egfrt的工程化t细胞、模拟物转导细胞(模拟物)或没有接受t细胞。顶图示出了在每个测试组的示例性小鼠中发生的肿瘤和自发性转移瘤的生物发光成像。底图示出了使用psma靶向剂在顶图的相应部分示出的每只小鼠中检测表达经修饰的psma的car+细胞的对应pet/ct扫描。

图7示出了使用psma靶向的放射性标记剂([¹⁸f]dcfpyl)和pet成像在体外检测不同数量的工程化抗cd19car/psma^(n9del)表达t细胞。左图描绘了在20μlpbs中的car+/psma^(n9del)表达t细胞数量；右图描绘了pet成像结果。

图8示出了存活曲线，其呈现具有散布性肿瘤的异种移植模型的小鼠随时间的存活，所述小鼠已经接受一定剂量的表达抗cd19car/psma^(n9del)的工程化t细胞或模拟物转导细胞(模拟物)，或没有接受治疗(无治疗)。

图9a-9d描绘了在接受一定剂量的表达抗cd19car/psma^(n9del)的工程化t细胞的具有散布性肿瘤的小鼠中，在car+t细胞注射之后第0天和第11天的示例性生物发光成像结果以及在car+t细胞注射之后第5天和第12天的pet/ct成像结果。第一幅和第三幅成像图分别示出了在第0天和第11天的生物发光成像结果，并且第二幅和第四幅成像图分别示出了在第5天和第12天使用psma靶向剂检测表达经修饰的psma的car+细胞的pet/ct扫描结果。图9e描绘了在未经治疗的小鼠(未经治疗)和模拟物研究组(经模拟物治疗)中在第0天的生物发光成像结果以及在第9天的pet/ct成像结果。箭头指示肿瘤的位置。

图10描绘了确定在已接受一定剂量的表达抗cd19car/psma^(n9del)的工程化t细胞的具有散布性肿瘤的小鼠中肿瘤细胞和psma表达car+细胞的存在的免疫组织化学结果。使用检测nalm6-gfp-ffluc肿瘤细胞的抗gfp抗体或检测抗cd19car/psma^(n9del)t细胞的抗psma抗体对肿瘤组织切片进行染色。

图11a示出了使用psma特异性pet配体[¹⁸f]dcfpyl通过pet/ct成像确定psma表达细胞数量的标准曲线。通过将来自体外幻影成像实验的pet图像(n＝8)的总的体素(三维空间中的图形信息单元)对相应细胞数量绘图来确定标准曲线。所得的线性回归方程式为y＝5×10^-6x+0.0122(r²＝0.9989)。误差棒显示标准偏差。图11b和11c示出了已经在第0天初始bli之后的第4天、第5天、第6天、第7天、第8天、第9天、第10天、第11天和第12天被给予抗cd19car/psma^(n9del)表达细胞的肿瘤模型小鼠的示例性生物发光成像结果和pet/ct成像结果。基于标准曲线外推肿瘤中car+细胞的总数量，并列于表1中。

图12示出了通过对用抗psma抗体染色的psma+细胞的数量计数确定的在给予后第6天与第13天之间在从已经被给予抗cd19car/psma^(n9del)表达细胞的肿瘤模型小鼠获得的肿瘤活检样品中存在的所给予的car+t细胞的密度，以及在给予car+t细胞之后人肿瘤活检样品中的car+t细胞的密度。

图13a-13b描绘了确定在已经在第4-11天接受了表达抗cd19car/psma^(n9del)的工程化t细胞的具有散布性肿瘤的小鼠中肿瘤细胞和psma表达car+细胞的存在的免疫组织化学的示例性结果。使用检测nalm6-gfp-ffluc肿瘤细胞的抗gfp抗体或检测抗cd19car/psma^(n9del)t细胞的抗psma抗体对肿瘤组织切片进行染色。

图14a-14b示出了已经在第0天初始bli之后的第10天、第11天和第12天被给予抗cd19car/psma^(n9del)表达细胞的肿瘤模型小鼠的示例性生物发光成像结果和pet/ct成像结果。图14c-14d绘制了基于标准曲线外推的肿瘤中car+细胞的总数相对于在图14a-14b中描绘的每只小鼠中通过用抗psma抗体染色使用流式细胞术测定的在外周血(ppb)样品中或在骨髓(bm)样品内活细胞中的car+t细胞百分比的图。

具体实施方式

本文提供了工程化细胞，所述工程化细胞表达前列腺特异性膜抗原(psma)或其修饰形式(例如，变体psma)和重组分子(如重组受体，例如，嵌合抗原受体(car))。还提供了包括治疗方法和组合物的相关方法和组合物。在一些实施方案中，工程化细胞还表达重组受体，例如重组抗原受体和/或嵌合受体。在一些实施方案中，工程化细胞共表达psma(通常经修饰的psma)和重组受体(例如car)。还提供了涉及使用psma靶向剂或psma靶向分子检测和/或靶向此类细胞的方法。所述方法包括检测和成像方法以及用于例如工程化细胞和一种或多种另外的治疗剂的组合疗法的方法。

所提供的方法包括其中可以利用细胞表达的psma或经修饰的psma例如用于治疗性、诊断性、监测和/或调节性结果或方法的那些方法。在一些实施方案中，将psma或经修饰的psma用于在被或已经被给予过细胞的受试者中例如在体内检测(例如，成像)细胞。在一些实施方案中，将psma或经修饰的psma用于将治疗剂靶向或递送至例如由细胞或重组受体识别的抗原、细胞或组织。在一些实施方案中，将psma或经修饰的psma靶向用于治疗疾病或病症和/或用于检测、成像、鉴定、选择、分离、分开、工程化细胞，加工细胞和/或去除细胞；包括结合基因工程化细胞，例如用重组受体(例如car)工程化的细胞。在一些实施方案中，psma或其修饰形式用作标记，例如用于确认细胞的工程化(例如细胞的转导)和/或用于确认工程化细胞的存在或数量。还提供了编码psma和/或重组受体的多核苷酸和载体，用于工程化此类细胞的方法，以及利用此类工程化细胞的方法，包括用于治疗、检测、选择、分离或分开此类细胞的方法。还提供了psma靶向分子，所述psma靶向分子可以靶向或结合psma，例如在工程化细胞表面上表达的psma或其修饰形式。在一些实施方案中，psma靶向分子包括治疗剂和/或部分，例如提供信号或诱导可检测的信号的部分。在一些实施方案中，psma靶向分子可以结合工程化细胞用于本文提供的方法中。

多种策略可用于产生和给予工程化细胞用于过继疗法。通常，通过引入一种或多种基因工程化核酸或其产物来将细胞工程化。核酸及其产物包括基因工程化抗原受体，包括工程化t细胞受体(tcr)和功能性非tcr抗原受体(如嵌合抗原受体(car)，包括激活的、刺激的和共刺激的car)、及其组合。例如，策略可用于将表达嵌合受体(如car)的细胞(如t细胞)工程化，以及向受试者给予含有此类工程化细胞的组合物。

在生产工程化细胞的整个过程中，能够鉴定、检测、定位和/或选择转导的细胞和/或表达所希望的重组分子(如重组受体)的细胞可能是有益的。同样，在给予用于过继疗法的工程化细胞之后或基本上同时，也可能需要或希望检测、监测、观察、定位或鉴定过继转移细胞。例如，可能希望确定或评估过继转移细胞的扩增、持久性、免疫原性的存在或不存在或程度，或确定过继转移细胞的生物分布和/或药代动力学，和/或提供耗尽或减少受试者体内过继转移细胞的数量的机制。

在一些情况下，用于确定所给予的细胞(例如过继转移细胞)的生物分布和/或药代动力学的某些可用方法可能并不完全令人满意。例如，可能难以确定过继转移细胞的全身空间分布，难以确定细胞例如在疾病或障碍(例如肿瘤)的部位或位置内或周围的特定位置，细胞在体内的持久性和/或不良反应(例如毒性)的发生。

用于确定过继转移细胞的药代动力学的方法可以包括从已经被给予工程化细胞的受试者中抽取外周血，并确定外周血中工程化细胞的数量或比率。用于选择和/或分离细胞的途径可以包括使用嵌合抗原受体(car)特异性抗体(例如，brentjens等人,sci.transl.med.2013年三月；5(177):177ra38)、蛋白质l(zheng等人,j.transl.med.2012年二月；10:29)、直接引入car中的特异性位点中(由此strep-标签的结合试剂用于直接评估car)的表位标签如strep-标签序列(liu等人(2016)naturebiotechnology,34:430；国际专利申请公开号wo2015095895)以及与car多肽特异性结合的单克隆抗体(参见国际专利申请公开号wo2014190273)。在一些情况下，外在标记基因可以结合工程化细胞疗法用于允许检测或选择细胞，并且在一些情况下还可以用于促进细胞自杀。在一些情况下，截短的表皮生长因子受体(egfrt)可以与转导细胞中感兴趣的转基因(例如，编码car或tcr)共表达(参见例如美国专利号8,802,374)。egfrt可含有由抗体西妥昔单抗或其他治疗性抗egfr抗体或结合分子识别的表位，其可以用于鉴定或选择已经用egfrt构建体和另一个重组受体(例如嵌合抗原受体(car))工程化的细胞，和/或用于消除或分离表达受体的细胞。参见美国专利号8,802,374以及liu等人,naturebiotech.2016年四月；34(4):430-434)。

在一些实施方案中，所提供的组合物和方法的优势在于它们允许以高度的敏感性检测或成像过继转移细胞，这在一些方面可以提供输注后在体内直接评估循环的工程化细胞(例如，cart细胞)的能力。在一些方面，所提供的实施方案的优势在于它们用于体内用途的适用性，例如，通过以靶向、结合和/或检测所给予细胞(如cart细胞)的方式提供用试剂(如psma靶向分子)检测细胞，而不影响工程化细胞的一种或多种功能和/或在细胞生产期间的检测或分离的能力。在一些方面，所提供的实施方案的优势还在于它们允许体内检测而不改变工程化重组受体的序列或功能。在一些实施方案中，所提供的实施方案基于以下观察结果：在不改变工程化细胞的功能的情况下，前列腺特异性膜抗原(psma)或其修饰形式在工程化细胞的细胞表面上有效表达以进行检测，例如，如通过评估体外细胞毒性和/或体内抗肿瘤活性所示。在一些实施方案中，所提供的实施方案还可以用于检测被工程化以在体内原发性和转移性肿瘤部位表达重组受体的所给予细胞的存在、生物分布和运输。

在一些实施方案中，所提供的药剂、组合物、制品、组合和方法在确定所给予细胞组合物的生物分布和/或药代动力学方面是有用的和/或有利的。在一些方面，所述方法的优势在于提供安全、高度敏感、微创、实时、相对非免疫原性和/或不影响工程化细胞的功能。在一些方面，所提供的实施方案包括细胞表面标记，其可以帮助涉及转导细胞产物的生产、监测和/或给予后阶段。例如，在一些方面，提供了用于有效选择和分离呈转基因阳性的细胞和用于在体内和离体监测转基因表达细胞的方法。在一些实施方案中，与结合工程化细胞的现有标记或选择策略相比，所提供的工程化细胞、核酸、载体、组合物、psma靶向分子和方法提供了一个或多个优势。

在一些实施方案中，被工程化以在本文提供的工程化细胞上表达的前列腺特异性膜抗原(psma)或其修饰形式是人psma。在一些实施方案中，通常通过引入一个或多个基因工程化核酸或其产物(例如编码重组受体和/或psma或经修饰的psma的那些)将细胞工程化。将细胞工程化以表达psma或其修饰形式(特别是人psma，以将工程化细胞给予至人受试者)是有利的，因为psma不具有免疫原性。psma是以高度组织特异性的方式在人体中表达的抗原。因此，psma或其修饰形式的表达因此允许使用特异性结合和/或靶向psma的psma靶向分子检测和靶向特定细胞，而不引起免疫应答或具有免疫原性特性。

在一些实施方案中，可以将表达psma或其修饰形式的工程化细胞用于靶向psma靶向分子，所述psma靶向分子可以包括能够结合psma的部分和可检测的部分或药剂。在一些方面，可以将psma靶向分子与本文提供的工程化细胞结合使用，以允许递送或靶向治疗剂；检测、鉴定或成像细胞；选择、分离或分开细胞；并且以促进细胞自杀或细胞去除。可以特异性靶向psma的各种已知试剂可以与实施方案结合用于治疗和/或检测目的。

在一些方面，靶向psma或其修饰形式可以促进可检测部分或药剂的检测，可以允许在已经被给予过工程化细胞的受试者中检测工程化细胞。特别地，在一些实施方案中，可以将psma靶向分子和系统用于表达psma的细胞的体内成像。将psma靶向分子用于体内成像在一些方面允许对工程化细胞的生物分布进行微创、实时、准确和/或快速确定、评估和/或确认或监测。

在一些实施方案中，psma或其修饰形式作为标记使得工程化细胞对使用微创、快速、准确和/或敏感的方法进行的检测兼容。例如，所提供的psma或其修饰形式能够由配体、抗体或其抗原结合片段或其他psma靶向分子识别和/或特异性地结合，所述配体、抗体或其抗原结合片段或其他psma靶向分子用于细胞的实时或体内成像，例如使用放射性核素标记的配体的正电子发射断层扫描(pet)、计算机断层扫描(ct)和单光子发射计算机断层扫描(spect)。pet是用于检测体内特定细胞的微创、快速、准确和敏感的方法，并且提供全身空间分辨率。在一些方面，所提供的实施方案提供了准确且快速地提供所给予细胞的定量评估(例如，所给予细胞的生物分布和/或药代动力学)而无需使用侵入性方法的优势。在一些方面，所提供的实施方案提供了优于评估生物分布或药代动力学的现有方法的优势，所述现有方法是例如外周血抽取，其不提供肿瘤部位的任何空间信息或特定信息；或活组织检查，其是侵入性的且仅提供肿瘤部位的信息。因此，在一些方面，将细胞工程化以表达psma或其修饰形式(例如可以由psma靶向分子识别或靶向或结合的一种)可以提供某些优势。此外，所提供的工程化细胞、核酸、载体、组合物、psma靶向分子和方法提供了细胞表面分子靶标和试剂，以促进细胞的加工、生产和/或功能，和/或以促进细胞的选择、分离、杀伤和/或去除。

在一些实施方案中，可以将表达psma或其修饰形式和psma靶向分子的工程化细胞用于将治疗剂(包括免疫调节剂或细胞毒性剂)靶向特定部位、位置、微环境和/或靶向细胞的特定类型。例如，可以靶向psma或其修饰形式以将psma靶向分子(所述psma靶向分子可以包括能够结合psma或其修饰形式的部分和治疗剂)递送至含有工程化细胞的部位、位置和/或微环境，例如肿瘤微环境(tme)。

还提供了使用表达psma或其修饰形式的细胞的方法。提供了用于细胞分离和基因工程的方法。提供了编码psma或其修饰形式和/或编码psma或其修饰形式的核酸和/或蛋白质的核酸(如构建体，例如病毒载体)，以及例如通过转导将此类核酸引入细胞中的方法。还提供了psma靶向分子，所述psma靶向分子包含能够结合psma或其修饰形式的部分和免疫调节剂。还提供了含有工程化细胞的组合物，以及用于向受试者给予和监测细胞和组合物(如用于过继细胞疗法)的方法、试剂盒和制品。

本申请中提及的所有出版物(包括专利文献、科学文章和数据库)出于所有目的通过引用以其整体并入，在程度上如同每个单独的出版物通过引用单独并入。如果本文所述的定义与通过引用并入本文的专利、申请、公开的申请和其他出版物中所述的定义相反或在其他方面不一致，则本文所述的定义优先于通过引用并入本文的定义。

本文使用的章节标题仅用于组织目的，而不应解释为限制所描述的主题。

i.表达前列腺特异性膜抗原(psma)和重组受体的工程化细胞

本文提供了表达前列腺特异性膜抗原(psma)或其修饰形式(例如，psma的变体)的工程化细胞，以及相关的组合物、制品、组合、方法和用途，包括涉及给予细胞以及采用psma靶向剂或分子检测、结合或靶向细胞的那些。工程化细胞通常还表达重组分子，如重组受体，例如嵌合抗原受体(car)。在一些实施方案中，方法、组合物和用途与所提供的工程化细胞有关。

a.前列腺特异性膜抗原(psma)

在一些实施方案中，前列腺特异性膜抗原(psma；也称为谷氨酸羧肽酶2或叶酸水解酶1)或其修饰形式在工程化细胞中表达，所述工程化细胞是例如原代细胞，如免疫细胞，例如t细胞，包括还工程化为具有重组受体(例如car)的细胞。在一些实施方案中，psma是人psma。

psma是ii型跨膜蛋白，其含有短的细胞质氨基末端、单个跨膜结构域和大的细胞外结构域。psma含有与包括共催化金属肽酶在内的肽酶家族m28蛋白展现相似度的氨基酸序列。野生型全长人psma是750个氨基酸的蛋白质，其包括19个氨基酸残基的细胞内部分、24个氨基酸残基的跨膜部分和707个氨基酸残基的细胞外部分。在人中，psma由folh1基因(例如，描述于genbank登录号dd461260中(如seqidno:26中所示))及其亚型和变体编码。示例性的人psma氨基酸序列示于例如uniprot登录号q04609中(如seqidno:23所示)。

在一些方面，psma的细胞内(n末端)部分含有参与细胞内化(例如分子的网格蛋白依赖性内吞内化)的氨基酸残基。在一些方面，细胞内化由以下n末端氨基酸介导：例如在seqidno:23中所示的示例性人psma氨基酸序列的位置1-5处的氨基酸残基(参见例如rajasekaran等人(2003)mol.biol.cell.14:4835-4845)。

在一些情况下，psma的细胞外部分折叠成三个不同的结构和功能结构域：蛋白酶结构域(残基56-116和352-590)、顶端结构域(残基117-351)和c末端螺旋结构域(残基592-750)，所述位置是参考野生型人psma序列(例如在seqidno:23中所示的氨基酸序列)的位置(参见例如，davis等人,(2005)proc.natl.acad.sci.102(17):5981-5986；mesters等人,(2006)embojournal25:1375-1384)。psma通常含有双核锌位点并且可以充当谷氨酸羧肽酶或叶酸水解酶，催化从聚-γ-谷氨酸化叶酸中水解切割谷氨酸。psma还具有n-乙酰化α连接的酸性二肽酶(naaladase)活性和二肽基肽酶iv型活性。酶促位点含有两个锌离子，并且由两个口袋构成，即谷氨酸敏感口袋(s1'口袋)和非药效团口袋(s1口袋)。来自三个结构域的氨基酸残基通常参与底物识别、结合和/或催化活性。在一些情况下，参考野生型人psma序列(例如，seqidno:23所示的氨基酸序列)的位置，活性位点残基和/或在psma中参与底物结合和/或催化活性的残基包括在位置210、257、269、272、377、387、387、424、424、425、433、436、453、517、518、519、552、553、534、535、536、552、553、628、666、689、699和/或700处的氨基酸残基。在一些情况下，活性位点残基包括一个或多个残基来配位活性锌离子，如参考野生型人psma序列(例如在seqidno:23中所示的氨基酸序列)的位置与his377、asp387、glu425、asp453和/或his553对应的一个或多个残基。在一些实施方案中，psma的n-乙酰化α连接的酸性二肽酶(naaladase)结构域也可以被定义为包括氨基酸残基274-587，所述位置是参考野生型人psma序列(例如在seqidno:23中所示的氨基酸序列)的位置(speno等人,(1999)molecularpharmacology55:179-185)。

在一些实施方案中，与所提供的公开文本有关的任何psma或其修饰形式是重组psma。在一些实施方案中，与所提供的公开文本有关的任何psma或其修饰形式由异源、重组、外源和/或转基因核酸分子(即通常不存在于细胞或从细胞获得的样品中的核酸，如从另一种生物体或细胞获得的核酸，例如，其通常不在被工程化的细胞和/或衍生这种细胞的生物体中发现)表达。

在一些实施方案中，与所提供的公开文本有关的psma或其修饰形式(例如重组psma或其修饰形式)含有一个或多个活性位点残基和/或参与psma底物结合和/或psma催化活性的残基，例如与野生型人psma序列(例如，seqidno:23所示的氨基酸序列)的位置210、257、269、272、377、387、387、424、424、425、433、436、453、517、518、519、552、553、534、535、536、552、553、628、666、689、699和/或700处的氨基酸残基对应的一个或多个氨基酸残基。在一些实施方案中，与所提供的公开文本有关的psma或其修饰形式(例如，重组psma或其修饰形式)展现与如下相同或基本相同的底物识别：野生型人psma(例如seqidno:23所示的氨基酸序列)或其等位基因变体或其他变体、和/或展现与seqidno:23至少或约至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的序列。

在一些实施方案中，与所提供的公开文本有关的psma或其修饰形式(例如，重组psma或其修饰形式)不结合或不识别野生型人psma(例如，seqidno:23所示的氨基酸序列)的底物或配体，和/或展现对其降低的结合和/或识别，例如降低大于或大于约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。在一些实施方案中，例如通过氨基酸置换、插入或取代一个或多个残基将psma或其修饰形式(例如，重组psma或其修饰形式)进行修饰，所述一个或多个残基涉及活性位点残基和/或参与psma底物结合和/或psma催化活性，例如与野生型人psma序列(例如seqidno:23所示的氨基酸序列)或其等位基因变体或其他变体、和/或展现与seqidno:23至少或约至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的序列的位置210、257、269、272、377、387、387、424、424、425、433、436、453、517、518、519、552、553、534、535、536、552、553、628、666、689、699和/或700处的氨基酸残基对应的一个或多个氨基酸残基。

在一些实施方案中，与所提供的公开文本有关的psma或其修饰形式(例如，重组psma或其修饰形式)含有蛋白酶结构域或其部分，和/或展现出催化活性(如催化从聚-γ-谷氨酸叶酸中水解切割谷氨酸的活性)。在一些实施方案中，与所提供的公开文本有关的psma或其修饰形式(例如，重组psma或其修饰形式)含有一个或多个与锌结合相关的残基和/或用于催化活性的残基，如一个或多个残基his377、asp387、glu425、asp453和/或his553。在一些实施方案中，与所提供的公开文本有关的psma或其修饰形式(例如，重组psma或其修饰形式)含有naaladase结构域和/或包括氨基酸残基274-587、274-700或247-750，所述位置是参考以下中的位置：野生型人psma序列，例如seqidno:23所示的氨基酸序列，或其等位基因变体或其他变体和/或展现与seqidno:23至少或约至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的序列。

在一些实施方案中，psma或其修饰形式(例如，重组psma或其修饰形式)没有催化活性，或展现出降低的催化活性，例如降低了大于或大于约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多，例如不展现和/或展现降低的催化从聚-γ-谷氨酸叶酸中水解切割谷氨酸的催化活性。在一些实施方案中，例如通过氨基酸置换、插入或取代一个或多个残基将psma或其修饰形式(例如，重组psma或其修饰形式)进行修饰，所述一个或多个残基与锌结合和/或催化活性相关，例如一个或多个残基his377、asp387、glu425、asp453和/或his553，所述位置是参考野生型人psma序列(例如seqidno:23所示的氨基酸序列)或其等位基因变体或其他变体、和/或展现与seqidno:23至少或约至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的序列。

psma也作为单体存在于膜表面，但仅作为二聚体才具有酶促活性。c末端结构域参与形成与另一个psma单体的蛋白酶结构域和顶端结构域的二聚化界面(参见例如davis等人,(2005)proc.natl.acad.sci.102(17):5981-5986；mesters等人,(2006)embojournal25:1375-1384)。在一些实施方案中，与所提供的公开文本有关的psma或其修饰形式包括参与二聚化的一个或多个残基和/或能够形成二聚体。在一些实施方案中，psma或其修饰形式通过氨基酸置换、插入或取代在参与二聚化的一个或多个氨基酸残基中进行修饰和/或不能形成二聚体。

在一些情况下，与本公开文本有关的psma或其修饰形式能够由配体、抗体或其抗原结合片段或其他psma靶向分子识别和/或特异性地结合。在一些情况下，与本公开文本有关的psma或其修饰形式含有表位，例如能够由抗体或其抗原结合片段识别的表位。在一些方面，表位是线性表位。在其他方面，表位是构象表位。在一些实施方案中可以由psma靶向抗体或其抗原结合片段识别的示例性表位包括氨基酸残基57-134、91-108、100-104、118-135、271-288、469-486、638-657、640-657或716-723，所述位置是参考野生型人psma序列(例如，seqidno:23所示的氨基酸序列)的位置。

在一些实施方案中，所提供的工程化细胞含有或表达psma或其修饰形式。在一些实施方案中，psma是哺乳动物psma或其修饰形式。在一些实施方案中，psma是人psma或其修饰形式。在一些实施方案中，结合本公开文本所提供的psma是野生型psma(任选地野生型人psma)或其等位基因变体或其他变体，例如其替代性亚型或片段。编码人psma的示例性序列示于seqidno:26，其编码seqidno:23所示的人psma。在一些实施方案中，所述psma由经修饰的核酸序列(例如，被修饰为不含cpg和/或经密码子优化的核酸序列)编码。在一些实施方案中，经修饰的核酸序列经密码子优化以在人细胞中表达。在一些方面，密码子优化涉及平衡所选择的密码子的百分比与公开的人转移rna的丰度，使得没有任何一者超负荷或受限。在一些实施方案中，编码psma的不含cpg的核酸序列是或包括不含有cpg序列的经修饰的cdna序列。在一些方面，与野生型或未经修饰的psma相比，不含cpg的核酸和/或密码子优化的序列不会改变蛋白质序列。编码psma的示例性不含cpg的核酸序列如seqidno:27所示。在一些方面，由不含cpg的psma编码的psma与在seqidno:23中所示的蛋白质序列具有显著的百分比同一性。

在一些实施方案中，psma或其修饰形式(例如，重组psma或其修饰形式)由以下编码：seqidno:26或27所示的核酸序列，或展现与seqidno:26或27中任一个或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的核酸序列。在一些实施方案中，psma或其修饰形式(例如，重组psma或其修饰形式)由如下核酸序列编码，所述核酸序列编码片段，所述片段含有由seqidno:26或27、或展现与seqidno:26或27至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列编码的细胞外结构域和/或跨膜结构域。

在一些实施方案中，psma或其修饰形式(例如，重组psma或其修饰形式)由以下编码：seqidno:53所示的核酸序列，或展现与seqidno:53中任一个或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的核酸序列。在一些实施方案中，psma或其修饰形式(例如，重组psma或其修饰形式)由如下核酸序列编码，所述核酸序列编码片段，所述片段含有由seqidno:53或展现与seqidno:53至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列编码的细胞外结构域和/或跨膜结构域。

在一些实施方案中，野生型或未经修饰的psma是人psma，和/或包含seqidno:23所示的氨基酸序列、展现与其至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列或是前两者的片段。在一些实施方案中，所述片段含有以下项的细胞外结构域和/或跨膜结构域：seqidno:23所示的氨基酸序列或展现与seqidno:23至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，psma或其修饰形式(例如，重组psma或其修饰形式)包含seqidno:23所示的氨基酸序列或其片段或者所述seqidno:23的细胞外结构域和/或跨膜结构域，或展现与seqidno:23中任一者或其片段或者所述seqidno:23的细胞外结构域和/或跨膜结构域至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，psma或其修饰形式(例如，重组psma或其修饰形式)是全长psma。在一些实施方案中，psma是野生型psma或未经修饰的psma。在一些实施方案中，psma是野生型人psma。在一些实施方案中，psma包含seqidno:23所示的序列或基本上由其组成。

在一些实施方案中，经修饰的psma是重组经修饰的psma。在一些实施方案中，与所提供的公开文本有关的经修饰的psma由异源、重组、外源和/或转基因核酸分子(即通常不存在于细胞或从细胞获得的样品中的核酸，如从另一种生物体或细胞获得的核酸，例如，其通常不在被工程化的细胞和/或衍生这种细胞的生物体中发现)表达。

在一些实施方案中，psma或其修饰形式是经修饰的psma(例如，重组经修饰的psma)，其与野生型或未经修饰的psma相比包含一个或多个氨基酸修饰。在一些实施方案中，所述一个或多个氨基酸修饰包含一个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入。在一些实施方案中，所述一个或多个氨基酸修饰包含例如在、从或接近野生型或未经修饰的psma的n末端或c末端的一个或多个连续氨基酸残基的缺失或截短。在一些实施方案中，经修饰的psma展现改变的psma酶促活性和/或配体结合能力和/或细胞内化。在一些实施方案中，与野生型或未经修饰的psma相比，经修饰的psma(i)展现出降低的内源性信号传导；(ii)展现出增加的细胞表面表达；和/或(iii)展现出降低的细胞内化。

在一些实施方案中，psma或其修饰形式(例如，重组psma或其修饰形式)含有一个或多个氨基酸取代。在一些实施方案中，参考seqidno:23中所示的psma中的位置，经修饰的psma包含至少一个氨基酸取代，例如在第二氨基酸残基处，其中色氨酸被甘氨酸取代(对应于w2g)。在一些实施方案中，参考seqidno:23所示的氨基酸序列中的位置，经修饰的psma包含与w2g对应的至少一个氨基酸取代或者不包含w2或者不包含在位置2处的任何残基。例如，在一些实施方案中，经修饰的psma包含seqidno:24所示的氨基酸序列或其片段，或展现与seqidno:24或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且包含所述至少一个氨基酸取代的氨基酸序列。

在一些实施方案中，参考seqidno:23所示的psma序列中的位置，经修饰的psma包含在位置2、3、4、5、6、7、8、9、10或14处的一个或多个氨基酸残基处的氨基酸取代(变为丙氨酸)。

在一些实施方案中，与野生型或未经修饰的psma相比，psma是经修饰的psma，其包含细胞内部分中的一个或多个n末端氨基酸残基的缺失。在一些实施方案中，与野生型或未经修饰的psma相比，psma是经修饰的psma，其包含细胞内部分中的一个或多个连续氨基酸残基的缺失。野生型全长人psma是750个氨基酸的蛋白质，其包括19个氨基酸残基的细胞内部分、24个氨基酸残基的跨膜部分和707个氨基酸残基的细胞外部分。在一些实施方案中，经修饰的psma含有在n末端处或n末端附近(所述n末端对应于编码psma或其修饰形式的核酸序列中的编码序列的5'末端)的缺失，所示缺失在psma的细胞内部分中。在一些方面，在细胞内部分中含有一个或多个缺失(任选地连续氨基酸残基)的经修饰的psma也被称为psma的截短形式、截短的psma或tpsma。

在一些方面，截短的psma或tpsma含有在野生型或未经修饰的psma的n末端处或附近的一个或多个氨基酸残基(任选地连续的氨基酸残基)的缺失或截短。在一些方面，经修饰的psma含有在psma的细胞内部分或结构域内一个或多个氨基酸残基(例如，一个或多个连续的氨基酸残基)的缺失或截短。在一些实施方案中，含有n末端氨基酸的缺失的psma蛋白允许经n末端修饰的psma成功定位于细胞膜和中心体，和/或与野生型或未经修饰的psma相比(i)展现减少的内源信号传导；(ii)展现增加的细胞表面表达；和/或(iii)展现减少的细胞内化。在一些实施方案中，经修饰的psma展现降低的内源信号传导或降低的细胞内化，例如，降低了大于或大于约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。在一些实施方案中，经修饰的psma展现增加的细胞表面表达或增加的向细胞膜和中心体的定位，例如增加了大于或大于约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。在一些方面，可以使用细胞成像技术(如共聚焦显微镜)，使用特异性地结合psma或其变体的经标记的结合分子(例如，抗体)来评估细胞表面表达和/或细胞内化。

在一些实施方案中，经修饰的psma(例如tpsma)含有或保留甲硫氨酸作为第一残基，其在一些情况下是翻译所必需的。在一些实施方案中，与野生型或未经修饰的psma相比，psma是经修饰的psma，所述经修饰的psma包含细胞内部分中的一个或多个n末端氨基酸残基(任选地连续的氨基酸残基)的缺失，但不包括翻译所必需的初始甲硫氨酸的缺失。

在一些实施方案中，与野生型或未经修饰的psma相比，经修饰的psma(例如tpsma)含有至多2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个或12个n末端氨基酸残基的缺失。在一些实施方案中，与野生型或未经修饰的psma相比，经修饰的psma含有至多12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个或21个n末端氨基酸残基的缺失。在一些方面，与其中保留或未缺失第一个n末端甲硫氨酸的野生型或未经修饰的psma相比，经修饰的psma是含有至多2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个或21个n末端氨基酸残基的缺失的截短的psma(tpsma)。

在一些实施方案中，参考seqidno:23所示的psma序列中的位置，经修饰的psma含有在从残基2、3、4或5开始并且直至残基6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21的n末端处的连续氨基酸序列的缺失。在一些实施方案中，参考seqidno:23所示的psma序列中的位置，经修饰的psma含有残基2-22、2-21、2-20、2-19、2-18、2-17、2-16、2-15、2-14、2-13、2-12、2-11、2-10、2-9、2-8、2-7、2-6、2-5、2-4或2-3的缺失。

在一些情况下，经修饰的psma可以含有第一个n末端残基(例如甲硫氨酸)的缺失。在一些实施方案中，参考seqidno:23所示的psma序列中的位置，经修饰的psma含有残基1-22、1-21、1-20、1-19、1-18、1-17、1-16、1-15、1-14、1-13、1-12、1-11、1-10、1-9、1-8、1-7、1-6、1-5、1-4、1-3或1-2的缺失。

在一些方面，编码psma或其修饰形式的核酸序列包含在如下多核苷酸中，所述多核苷酸还含有例如在表达构建体中编码另一种蛋白质(如不同蛋白质)的核酸序列。在一些方面，编码psma或其修饰形式的核酸序列包含在其中核酸序列编码不同分子(例如重组受体)的单个开放阅读框内。在一些实施方案中，编码psma或其修饰形式的核酸序列通过编码自切割肽(例如2a序列)或蛋白酶识别位点(例如弗林蛋白酶)的序列与编码不同分子(例如重组受体)的核酸序列分开。因此，所述orf编码单个多肽，其在翻译期间(在2a的情况下)或之后被加工成单个蛋白质。在此类多核苷酸的一些实施方案中，编码psma的核酸可以编码初始甲硫氨酸或不需要编码初始甲硫氨酸。在一些方面，如果编码psma的序列相对于编码另一种蛋白质的序列位于更下游(例如，更靠近编码序列的3'末端)，例如，psma在另一种蛋白质之后被翻译，则可能不需要保留起始甲硫氨酸。在一些方面，如果编码psma的序列位于编码另一种蛋白质的序列的更上游(例如，更靠近编码序列的5'末端)或在编码另一种蛋白质的序列之前存在，例如psma首先被翻译，则可能需要保留初始甲硫氨酸。

在一些方面，与野生型或未经修饰的psma相比，经修饰的psma是截短的psma(tpsma)，其含有9个n末端氨基酸残基(不包括翻译所需的n末端甲硫氨酸)的缺失，例如，psma^(n9del)。在一些实施方案中，经修饰的psma是截短的psma(tpsma)，其含有以下中的残基2-10的缺失：seqidno:23所示的序列或其片段或展现与所述seqidno:23所示的序列或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，经修饰的psma包含seqidno:52所示的氨基酸序列或其片段或展现与所述seqidno:52所示的氨基酸序列或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。

在一些方面，与野生型或未经修饰的psma相比，经修饰的psma是截短的psma(tpsma)，其含有9个n末端氨基酸残基的缺失。在一些实施方案中，经修饰的psma是截短的psma(tpsma)，其含有以下中的残基1-9的缺失：seqidno:23所示的序列或其片段或展现与所述seqidno:23所示的序列或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，经修饰的psma包含seqidno:25所示的氨基酸序列或其片段或展现与所述seqidno:25所示的氨基酸序列或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，psma或其修饰形式包含seqidno:25或52所示的氨基酸序列或其片段，或展现与seqidno:25或52或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且包含一个或多个n末端氨基酸残基的缺失的氨基酸序列。

在一些实施方案中，经修饰的psma由以下编码：seqidno:53所示的核酸序列，或展现与seqidno:53至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的核酸序列，或是其片段，例如含有细胞外结构域和/或跨膜结构域的片段。在一些实施方案中，经修饰的psma由不包括翻译所需的甲硫氨酸起始密码子的缺失(例如编码含有初始甲硫氨酸的多肽)的核酸序列编码。在一些实施方案中，经修饰的psma由经修饰的核酸序列(例如，被修饰为不含cpg和/或经密码子优化的核酸序列)编码。

在一些实施方案中，经修饰的psma包含野生型或未经修饰的psma的跨膜结构域的全部或基本上全部；或者经修饰的psma包含具有与野生型或未经修饰的psma的跨膜结构域相同或至少相同数量的氨基酸的跨膜结构域。

在一些实施方案中，psma或其修饰形式包含被psma靶向分子(如抗体或其抗原结合片段)结合或由其识别的氨基酸序列。在一些实施方案中，psma或其修饰形式包含由抗体或其抗原结合片段识别的表位。在一些实施方案中，参考seqidno:23所示的氨基酸序列或展现与其至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列中的位置，psma或其修饰形式包含具有在残基57-134、91-108、100-104、118-135、271-288、469-486、638-657、640-657或716-723处的氨基酸的序列。

在一些实施方案中，psma或其修饰形式包含psma的至少一个或多个细胞外结构域或其部分。在一些实施方案中，psma或其修饰形式包含至少一个或多个细胞外结构域，参考野生型人psma序列(例如seqidno:23所示的氨基酸序列)的位置，所述至少一个或多个细胞外结构域选自蛋白酶结构域(残基56-116和352-590)、顶端结构域(残基117-351)和c末端螺旋结构域(残基592-750)。在一些实施方案中，经修饰的psma含有psma的至少两个细胞外结构域。

在一些实施方案中，psma或其修饰形式包含细胞外催化结构域或酶促活性结构域。在一些实施方案中，psma或其修饰形式包含n-乙酰化α-连接的酸性二肽酶(naaladase)结构域。在一些实施方案中，参考seqidno:23所示的氨基酸序列或展现与其至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列中的位置，psma或其修饰形式包含具有在残基274-587、247-700或247-750处的氨基酸的序列。在一些实施方案中，psma或其修饰形式包含活性位点残基和/或参与底物结合和/或催化活性的残基。在一些实施方案中，参考seqidno:23所示的氨基酸序列中的位置，psma或其修饰形式包含在位置210、257、269、272、377、387、387、424、424、425、433、436、453、517、518、519、552、553、534、535、536、552、553、628、666、689、699和/或700处的残基，例如保守残基。

在一些实施方案中，psma或其修饰形式是包含细胞外部分的结构域或区域的一个或多个缺失的经修饰的psma。例如，在一些实施方案中，参考seqidno:23所示的氨基酸序列中的位置，细胞外部分的结构域或区域缺失包含在位置44-273或588-750处的氨基酸序列的缺失。在一些实施方案中，经修饰的psma包含在细胞外部分中的一个或多个氨基酸残基(任选地一个或多个连续氨基酸残基)的缺失，所述细胞外部分不被psma靶向分子(例如，配体或抗体或其抗原结合片段)结合或不由其识别。在一些实施方案中，psma或其修饰形式包含一个或多个c末端氨基酸残基(任选地一个或多个连续氨基酸残基)的缺失。在一些实施方案中，参考seqidno:23所示的psma中的位置，psma或其修饰形式包含氨基酸残基103-750、626-750、721-747或736-750的缺失。在一些实施方案中，参考seqidno:23所示的psma中的位置，psma或其修饰形式包含15个c末端氨基酸残基的缺失。

在一些实施方案中，经修饰的psma包括在以下文献中描述的psma：例如，国际pct公开号wo2015143029，rajasekaran等人(2003)mol.biol.cell.14:4835-4845，rajasekaran等人(2008)molcancerther.(2008)7(7):2142-2151，barinka等人(2004)eur.j.biochem.271:2782-2790，以及davis等人(2005)proc.natl.acad.sci.102(17)-5981-5986。

在一些实施方案中，psma或其修饰形式，任选地细胞外部分，能够由psma靶向分子或其部分(如本文所述的任何psma靶向分子或其部分)识别。

b.重组受体

在一些实施方案中，提供了表达重组受体和psma或经修饰的psma的工程化细胞，如免疫细胞，如t细胞。受体包括抗原受体以及含有其一种或多种组分的受体。重组受体可以包括嵌合受体(如含有配体结合结构域或其结合片段和细胞内信号传导结构域的那些)、功能性非tcr抗原受体、嵌合抗原受体(car)、和t细胞受体(tcr)(如转基因tcr)、和任何前述的组分。在一些实施方案中，所提供的工程化细胞表达重组受体、和psma或其修饰形式(通常为重组psma或经修饰的psma)。嵌合受体(如car)通常包括(在一些方面经由接头和/或一个或多个跨膜结构域)与一种或多种细胞内信号传导组分连接的细胞外抗原(或配体)结合结构域。

1.嵌合抗原受体(car)

在一些实施方案中，提供了工程化细胞(如t细胞)，其表达对特定抗原(或标记或配体)具有特异性的car，所述特定抗原例如为在特定细胞类型的表面上表达的抗原。在一些实施方案中，抗原是多肽。在一些实施方案中，其是碳水化合物或其他分子。在一些实施方案中，与正常或非靶向细胞或组织相比，抗原在疾病或病症的细胞例如肿瘤细胞或致病细胞上选择性表达或过表达。在其他实施方案中，抗原在正常细胞上表达和/或在工程化细胞上表达。

在特定实施方案中，重组受体(如嵌合受体)含有细胞内信号传导区域，所述细胞内信号传导区域包括细胞质信号传导结构域(也可互换地称为细胞内信号传导结构域)，例如能够在t细胞中诱导初级激活信号的细胞质(细胞内)区域，例如，t细胞受体(tcr)组分的细胞质信号传导结构域(例如cd3-zeta(cd3ζ)链的ζ链的细胞质信号传导结构域或其功能变体或信号传导部分)；和/或所述细胞内信号传导区域包含基于免疫受体酪氨酸的激活基序(itam)。

在一些实施方案中，嵌合受体还含有特异性地结合至配体(例如抗原)抗原的细胞外配体结合结构域。在一些实施方案中，嵌合受体是car，其含有特异性地结合至抗原的细胞外抗原识别结构域。在一些实施方案中，配体(如抗原)是在细胞表面上表达的蛋白质。在一些实施方案中，car是tcr样car，并且抗原是加工过的肽抗原，如细胞内蛋白的肽抗原，其与tcr一样在主要组织相容性复合物(mhc)分子的背景下在细胞表面上被识别。

示例性抗原受体(包括car)以及将此类受体工程化并引入细胞的方法包括例如以下文献中所述的那些：国际专利申请公开号wo200014257、wo2013126726、wo2012/129514、wo2014031687、wo2013/166321、wo2013/071154、wo2013/123061、美国专利申请公开号us2002131960、us2013287748、us20130149337、美国专利号6,451,995、7,446,190、8,252,592、8,339,645、8,398,282、7,446,179、6,410,319、7,070,995、7,265,209、7,354,762、7,446,191、8,324,353和8,479,118，以及欧洲专利申请号ep2537416，和/或以下文献中所述的那些：sadelain等人，cancerdiscov.2013年4月；3(4):388-398；davila等人(2013)plosone8(4):e61338；turtle等人,curr.opin.immunol.,2012年10月；24(5):633-39；wu等人,cancer,2012年3月18(2):160-75。在一些方面，抗原受体包括如美国专利号7,446,190中所述的car，和国际专利申请公开号wo/2014055668a1中所述的那些。car的例子包括如在任何上述出版物中披露的car，所述出版物例如wo2014031687、us8,339,645、us7,446,179、us2013/0149337、美国专利号7,446,190、美国专利号8,389,282；kochenderfer等人,2013,naturereviewsclinicaloncology,10,267-276(2013)；wang等人(2012)j.immunother.35(9):689-701；以及brentjens等人,scitranslmed.20135(177)。还参见wo2014031687、us8,339,645、us7,446,179、us2013/0149337、美国专利号：7,446,190和美国专利号：8,389,282。

在一些实施方案中，car被构建为具有对特定抗原(或标记或配体)的特异性，所述特定抗原例如为在过继疗法靶向的特定细胞类型中表达的抗原(例如癌症标记)和/或旨在诱导衰减应答的抗原(例如在正常或未患病细胞类型上表达的抗原)。因此，car通常在其细胞外部分中包括一种或多种抗原结合分子，例如一种或多种抗原结合片段、结构域或部分，或一种或多种抗体可变结构域，和/或抗体分子。在一些实施方案中，car包括抗体分子的一个或多个抗原结合部分，如源自单克隆抗体(mab)的可变重链(vh)和可变轻链(vl)的单链抗体片段(scfv)。

在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分作为重组受体(例如抗原受体)的部分在细胞上表达。所述抗原受体包括功能性非tcr抗原受体，如嵌合抗原受体(car)。通常，含有针对肽-mhc复合物表现出tcr样特异性的抗体或抗原结合片段的car也可以称为tcr样car。在一些实施方案中，在一些方面，对tcr样car的mhc-肽复合物具有特异性的细胞外抗原结合结构域通过接头和/或一个或多个跨膜结构域与一个或多个细胞内信号传导组分连接。在一些实施方案中，此类分子通常可以通过天然抗原受体(如tcr)模拟或接近信号，并且任选地通过这种受体与共刺激受体组合模拟或接近信号。

在一些实施方案中，重组受体(例如嵌合受体，例如car)包括与抗原(或配体)结合(例如特异性结合)的配体结合结构域。嵌合受体靶向的抗原包括在通过过继细胞疗法靶向的疾病、病症或细胞类型的情况下表达的抗原。所述疾病和病症包括增殖性、肿瘤性和恶性疾病和障碍，包括癌症和肿瘤，包括血液癌、免疫系统癌症，如淋巴瘤、白血病和/或骨髓瘤，如b型白血病、t型白血病和骨髓性白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤。

在一些实施方案中，所述抗原(或配体)是多肽。在一些实施方案中，其是碳水化合物或其他分子。在一些实施方案中，如与正常或非靶向细胞或组织相比，抗原(或配体)在疾病或病症的细胞(例如肿瘤或致病细胞)上选择性表达或过表达。在其他实施方案中，抗原在正常细胞上表达和/或在工程化细胞上表达。

在一些实施方案中，car含有抗体或抗原结合片段(例如scfv)，其特异性识别在细胞表面上表达的抗原(如完整抗原)。

在一些实施方案中，抗原(或配体)是肿瘤抗原或癌症标记。在一些实施方案中，抗原(或配体)是或包括孤儿酪氨酸激酶受体ror1、b细胞成熟抗原(bcma)、碳酸酐酶9(caix)、tegfr、her2/neu(受体酪氨酸激酶erbb2)、l1-cam、cd19、cd20、cd22、间皮素、cea、乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、egfr、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、肝配蛋白受体a2(epha2)、her2/neu(受体酪氨酸激酶erbb2)、her3(erb-b3)、her4(erb-b4)、erbb二聚体、iii型表皮生长因子受体突变(egfrviii)、叶酸结合蛋白(fbp)、fcrl5、fc受体样蛋白5(fcrl5；也称为fc受体同源物5或fcrh5)、胎儿乙酰胆碱受体、神经节苷脂gd2、神经节苷脂gd3、g蛋白偶联受体5d(gpcr5d)、hmw-maa、il-22r-α、il-13r-α2、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员a(lrrc8a)、路易斯y、l1细胞粘附分子(l1-cam)、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、存活蛋白、tag72、b7-h6、il-13受体α2(il-13ra2)、ca9、gd3、hmw-maa、cd171、g250/caix、人白细胞抗原a(hla-a1)、magea1、hla-a2、ny-eso-1、psca、叶酸受体-a、cd44v6、cd44v7/8、αvβ6整合素(avb6整合素)、8h9、ncam、vegf受体、5t4、胎儿achr、自然杀伤细胞2族成员d(nkg2d)配体、cd44v6、双重抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素、鼠cmv、粘蛋白1(muc1)、muc16、前列腺干细胞抗原(psca)、nkg2d、癌症-睾丸抗原(癌症/睾丸抗原1b(ctag，也称为ny-eso-1和lage-2))、mart-1、糖蛋白100(gp100)、癌胚胎抗原、ror1、滋养层糖蛋白(tpbg也称为5t4)、tag72、vegf-r2、癌胚抗原(cea)、her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白b2、cd123、c-met、gd-2、o-乙酰化gd2(ogd2)、ce7、wilms肿瘤1(wt-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、c-c基序趋化因子配体1(ccl-1)、cd138、病原体特异性抗原和与通用标签相关的抗原、和/或生物素化分子、和/或由hiv、hcv、hbv或其他病原体表达的分子。

在一些实施方案中，抗原或配体是肿瘤抗原或癌症标记。在一些实施方案中，抗原或配体抗原是或包括αvβ6整合素(avb6整合素)、b细胞成熟抗原(bcma)、b7-h3、b7-h6、碳酸酐酶9(ca9，也称为caix或g250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1b(ctag，也称为ny-eso-1和lage-2)、癌胚抗原(cea)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、cc基序趋化因子配体1(ccl-1)、cd19、cd20、cd22、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、cd44v6、cd44v7/8、cd123、cd133、cd138、cd171、硫酸软骨素蛋白聚糖4(cspg4)、表皮生长因子蛋白(egfr)、截短的表皮生长因子蛋白(tegfr)、iii型表皮生长因子受体突变(egfrviii)、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、肝配蛋白b2、肝配蛋白受体a2(epha2)、雌激素受体、fc受体样蛋白5(fcrl5；也称为fc受体同源物5或fcrh5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿achr)、叶酸结合蛋白(fbp)、叶酸受体α、神经节苷脂gd2、o-乙酰化gd2(ogd2)、神经节苷脂gd3、糖蛋白100(gp100)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖(gpc3)、g蛋白偶联受体5d(gpcr5d)、her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-b2)、her3(erb-b3)、her4(erb-b4)、erbb二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(hmw-maa)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原a1(hla-a1)、人白细胞抗原a2(hla-a2)、il-22受体α(il-22rα)、il-13受体α2(il-13rα2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、l1细胞粘附分子(l1-cam)、l1-cam的ce7表位、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员a(lrrc8a)、路易斯y、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、mage-a10、间皮素(msln)、c-met、鼠类巨细胞病毒(cmv)、粘蛋白1(muc1)、muc16、自然杀伤细胞2族成员d(nkg2d)配体、黑色素a(mart-1)、神经细胞粘附分子(ncam)、癌胚胎抗原、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(psca)、前列腺特异性膜抗原(psma)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ror1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(tpbg，也称为5t4)、肿瘤相关糖蛋白72(tag72)、酪氨酸酶相关蛋白1(trp1，也称为tyrp1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(trp2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ异构酶或dct)、血管内皮生长因子受体(vegfr)、血管内皮生长因子受体2(vegfr2)、wilms肿瘤1(wt-1)、病原体特异性或病原体表达的抗原、或与通用标签相关的抗原、和/或生物素化分子、和/或由hiv、hcv、hbv或其他病原体表达的分子。

在一些实施方案中，受体靶向的抗原包括与b细胞恶性肿瘤相关的抗原，如许多已知b细胞标记中的任何一种。在一些实施方案中，受体靶向的抗原是cd20、cd19、cd22、ror1、cd45、cd21、cd5、cd33、igκ、igλ、cd79a、cd79b或cd30。

在一些实施方案中，所述抗原是病原体特异性抗原或病原体表达的抗原。在一些实施方案中，抗原是病毒抗原(例如来自hiv、hcv、hbv等的病毒抗原)、细菌抗原和/或寄生虫抗原。

在一些实施方案中，抗原是或包括病原体特异性或病原体表达的抗原，如病毒抗原(例如，来自hiv、hcv、hbv的病毒抗原)、细菌抗原和/或寄生虫抗原。

在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段(例如scfv或vh结构域)特异性地识别抗原，如cd19。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段源自特异性地结合cd19的抗体或抗原结合片段，或者是特异性地结合cd19的抗体或抗原结合片段的变体。

在一些实施方案中，scfv和/或vh结构域源自fmc63。fmc63通常是指针对表达人源cd19的nalm-1和-16细胞产生的小鼠单克隆igg1抗体(ling,n.r.,等人(1987).leucocytetypingiii.302)。在一些实施方案中，scfv和/或vh结构域源自sj25c1。sj25c1是指针对表达人源cd19的nalm-1和-16细胞产生的小鼠单克隆igg1抗体(ling,n.r.,等人(1987).leucocytetypingiii.302)。

在一些方面，car含有结合或识别(例如特异性地结合)通用标签或通用表位的配体-(例如，抗原-)结合结构域。在一些方面，结合结构域可以结合分子、标签、多肽和/或表位，所述分子、标签、多肽和/或表位可以被连接至识别与疾病或障碍相关的抗原的不同结合分子(例如，抗体或抗原结合片段)。示例性标签或表位包括染料(例如，荧光素异硫氰酸盐)或生物素。在一些方面，结合分子(例如，抗体或抗原结合片段)与标签连接，所述标签识别与具有表达对所述标签特异的car的工程化细胞的疾病或障碍相关的抗原(例如，肿瘤抗原)，以实现所述工程化细胞的细胞毒性或其他效应功能。在一些方面，car对与疾病或障碍相关的抗原的特异性由标记的结合分子(例如，抗体)提供，并且不同的标记的结合分子可以用于靶向不同的抗原。对通用标签或通用表位特异的示例性car包括例如在u.s.9,233,125、wo2016/030414，urbanska等人,(2012)cancerres72:1844-1852，以及tamada等人,(2012).clincancerres18:6436-6445中所描述的那些。

在一些实施方案中，car含有tcr样抗体，例如抗体或抗原结合片段(例如scfv)，其特异性识别作为mhc-肽复合物存在于细胞表面上的细胞内抗原(例如肿瘤相关抗原)。在一些实施方案中，识别mhc-肽复合物的抗体或其抗原结合部分可以作为重组受体的部分(例如抗原受体)在细胞上表达。所述抗原受体包括功能性非tcr抗原受体，如嵌合抗原受体(car)。通常，含有针对肽-mhc复合物表现出tcr样特异性的抗体或抗原结合片段的car也可以称为tcr样car。

提及“主要组织相容性复合物”(mhc)是指含有多态性肽结合位点或结合沟的蛋白质，通常是糖蛋白，在一些情况下，所述蛋白质可以与多肽的肽抗原(包括由细胞机构加工的肽抗原)复合。在一些情况下，mhc分子可以在细胞表面上展示或表达，包括作为与肽的复合物，即mhc-肽复合物，用于呈现具有t细胞上的抗原受体(例如tcr或tcr样抗体)可识别的构象的抗原。通常，mhci类分子是异二聚体，其具有跨越α链的膜，在一些情况下具有三个α结构域和非共价缔合的β2微球蛋白。通常，mhcii类分子由两种跨膜糖蛋白α和β组成，两者通常都跨越膜。mhc分子可以包括mhc的有效部分，其含有抗原结合位点或用于结合肽的位点以及由适当抗原受体识别所需的序列。在一些实施方案中，mhci类分子将源自胞质溶胶的肽递送至细胞表面，其中mhc-肽复合物由t细胞(例如通常cd8⁺t细胞，但在一些情况下是cd4+t细胞)识别。在一些实施方案中，mhcii类分子将源自囊泡系统的肽递送至细胞表面，其中所述肽通常由cd4⁺t细胞识别。通常，mhc分子由一组连锁基因座编码，其在小鼠中统称为h-2并且在人中统称为人白细胞抗原(hla)。因此，通常人mhc也以可称为人白细胞抗原(hla)。

术语“mhc-肽复合物”或“肽-mhc复合物”或其变体是指肽抗原与mhc分子的复合物或缔合物，例如通常通过所述肽在mhc分子的结合沟或裂缝中的非共价相互作用来形成。在一些实施方案中，mhc-肽复合物存在或展示于细胞表面上。在一些实施方案中，mhc-肽复合物可由抗原受体(例如tcr、tcr样car或其抗原结合部分)特异性地识别。

在一些实施方案中，多肽的肽(例如肽抗原或表位)可以与mhc分子缔合，例如用于由抗原受体识别。通常，所述肽源自或基于较长生物分子(例如多肽或蛋白质)的片段。在一些实施方案中，所述肽的长度通常为约8至约24个氨基酸。在一些实施方案中，肽的长度为或为约9至22个氨基酸，用于在mhcii类复合物中识别。在一些实施方案中，肽的长度为或为约8至13个氨基酸，用于在mhci类复合物中识别。在一些实施方案中，在识别mhc分子(例如mhc-肽复合物)背景中的肽后，抗原受体(例如tcr或tcr样car)产生或触发激活信号至t细胞，诱导t细胞应答，如t细胞增殖、细胞因子产生、细胞毒性t细胞应答或其他应答。

在一些实施方案中，tcr样抗体或抗原结合部分是已知的或可通过已知方法产生(参见例如美国公开申请号us2002/0150914；us2003/0223994；us2004/0191260；us2006/0034850；us2007/00992530；us20090226474；us20090304679；和国际pct公开号wo03/068201)。

在一些实施方案中，特异性地结合至mhc-肽复合物的抗体或其抗原结合部分可以通过用有效量的含有特定mhc-肽复合物的免疫原对宿主进行免疫来产生。在一些情况下，mhc-肽复合物的肽是能够结合至mhc的抗原的表位，例如肿瘤抗原，例如通用肿瘤抗原、骨髓瘤抗原或如下文所述的其他抗原。在一些实施方案中，然后向宿主给予有效量的免疫原以用于引发免疫应答，其中所述免疫原保持其三维形式持续一段足以引发针对所述肽在所述mhc分子的结合沟中的三维呈递的免疫应答的时间。然后测定从宿主收集的血清以确定是否产生了识别mhc分子结合沟中的肽的三维呈现的所需抗体。在一些实施方案中，可以评估所产生的抗体以确认所述抗体可以区分mhc-肽复合物与单独的mhc分子、单独的目标肽以及mhc与无关肽的复合物。然后可以分离所希望的抗体。

在一些实施方案中，特异性地结合至mhc-肽复合物的抗体或其抗原结合部分可以通过采用抗体文库展示方法(例如噬菌体抗体文库)来产生。在一些实施方案中，可以产生突变体fab、scfv或其他抗体形式的噬菌体展示文库，例如，其中所述文库的成员在一个或多个cdr的一个或多个残基处发生突变。参见例如美国公开申请号us20020150914、us2014/0294841；和cohencj.等人(2003)jmol.recogn.16:324-332。

本文中的术语“抗体”在最广泛的意义上使用，并且包括多克隆和单克隆抗体，包括完整抗体和功能性(抗原结合)抗体片段，包括片段抗原结合(fab)片段、f(ab')2片段、fab'片段、fv片段、重组igg(rigg)片段、能够特异性结合抗原的可变重链(vh)区、单链抗体片段(包括单链可变片段(scfv))以及单结构域抗体(例如，sdab、sdfv、纳米抗体)片段。所述术语涵盖免疫球蛋白的基因工程化的和/或以其他方式修饰的形式，如胞内抗体、肽体(peptibody)、嵌合抗体、全人抗体、人源化抗体和异缀合抗体(heteroconjugateantibody)、多特异性(例如，双特异性)抗体、双抗体、三抗体和四抗体、串联二-scfv、串联三-scfv。除非另有说明，否则术语“抗体”应理解为涵盖其功能性抗体片段。所述术语还涵盖完整或全长抗体，包括任何类别或亚类(包括igg及其亚类、igm、ige、iga和igd)的抗体。

在一些实施方案中，抗原结合蛋白、抗体及其抗原结合片段特异性地识别全长抗体的抗原。在一些实施方案中，抗体的重链和轻链可以是全长的或者可以是抗原结合部分(fab、f(ab’)2、fv或单链fv片段(scfv))。在其他实施方案中，所述抗体重链恒定区选自例如igg1、igg2、igg3、igg4、igm、iga1、iga2、igd和ige，特别是选自例如igg1、igg2、igg3和igg4，更特别是igg1(例如，人igg1)。在另一个实施方案中，抗体轻链恒定区选自例如κ或λ，特别是κ。

所提供的抗体包括抗体片段。“抗体片段”是指不同于完整抗体的分子，其包含完整抗体的结合完整抗体所结合的抗原的一部分。抗体片段的例子包括但不限于fv、fab、fab'、fab'-sh、f(ab')2；双抗体；线性抗体；可变重链(vh)区、单链抗体分子(如scfv)和单一结构域vh单一抗体；和由抗体片段形成的多特异性抗体。在特定实施方案中，所述抗体是包含可变重链区和/或可变轻链区的单链抗体片段，如scfv。

术语“可变区”或“可变结构域”是指抗体重链或轻链的参与抗体与抗原的结合的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别为vh和vl)通常具有相似的结构，每个结构域包含四个保守的框架区(fr)和三个cdr。(参见例如，kindt等人kubyimmunology,第6版,w.h.freemanandco.,第91页(2007))。单个vh或vl结构域可以足以赋予抗原结合特异性。此外，可以使用来自结合抗原的抗体的vh或vl结构域分离结合所述特定抗原的抗体，以分别筛选互补的vl或vh结构域的文库。参见例如，portolano等人,j.immunol.150:880-887(1993)；clarkson等人,nature352:624-628(1991)。

单结构域抗体是包含抗体的全部或部分重链可变结构域或者全部或部分轻链可变结构域的抗体片段。在某些实施方案中，单结构域抗体是人单结构域抗体。在一些实施方案中，car包含特异性地结合抗原的抗体重链结构域，所述抗原例如癌症标记或待靶向的细胞或疾病(例如肿瘤细胞或癌细胞)的细胞表面抗原，例如本文所述或已知的任何靶抗原。

抗体片段可以通过各种技术制备，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及通过重组宿主细胞产生。在一些实施方案中，所述抗体是重组产生的片段，如包含天然不存在的排列的片段(如具有通过合成接头(例如，肽接头)连接的两个或更多个抗体区或链的那些)，和/或可不通过酶消化天然存在的完整抗体产生的片段。在一些实施方案中，抗体片段是scfv。

“人源化”抗体是这样的抗体，其中所有或基本上所有cdr氨基酸残基源自非人cdr并且所有或基本上所有fr氨基酸残基源自人fr。人源化抗体任选地可以包括源自人抗体的抗体恒定区的至少一部分。非人抗体的“人源化形式”是指所述非人抗体的变体，其经历人源化以通常降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。在一些实施方案中，人源化抗体中的一些fr残基被来自非人抗体(例如，衍生出cdr残基的抗体)的相应残基取代，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。

因此，在一些实施方案中，嵌合抗原受体(包括tcr样car)包括含有抗体或抗体片段的细胞外部分。在一些实施方案中，所述抗体或片段包括scfv。在一些方面，嵌合抗原受体包括含有抗体或片段的细胞外部分和细胞内信号传导区域。在一些实施方案中，细胞内信号传导区域包含细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域是或包含初级信号传导结构域、能够在t细胞中诱导初级激活信号的信号传导结构域、t细胞受体(tcr)组分的信号传导结构域和/或包含基于免疫受体酪氨酸的激活基序(itam)的信号传导结构域。

在一些实施方案中，重组受体(例如car，如其抗体部分)还包括间隔子，所述间隔子可以是或包括免疫球蛋白恒定区的至少一部分或其变体或经修饰形式，例如铰链区(例如，igg4铰链区)和/或ch1/cl和/或fc区。在一些实施方案中，重组受体还包含间隔子和/或铰链区。在一些实施方案中，恒定区或部分是人igg如igg4或igg1的。在一些方面，恒定区的部分用作抗原识别组分(例如，scfv)与跨膜结构域之间的间隔子区。与不存在间隔子的情况下相比，间隔子的长度可以提供抗原结合后增强的细胞反应性。在一些例子中，间隔子的长度为或约12个氨基酸或者长度不超过12个氨基酸。示例性间隔子包括具有至少约10至229个氨基酸、约10至200个氨基酸、约10至175个氨基酸、约10至150个氨基酸、约10至125个氨基酸、约10至100个氨基酸、约10至75个氨基酸、约10至50个氨基酸，约10至40个氨基酸、约10至30个氨基酸、约10至20个氨基酸或约10至15个氨基酸(并且包括任何列出的范围的端点之间的任何整数)的那些。在一些实施方案中，间隔子区具有约12个或更少的氨基酸、约119个或更少的氨基酸或约229个或更少的氨基酸。示例性间隔子包括单独的igg4铰链、与ch2和ch3结构域连接的igg4铰链或与ch3结构域连接的igg4铰链。示例性间隔子包括但不限于在hudecek等人(2013)clin.cancerres.,19:3153，hudecek等人(2015)cancerimmunolres.3(2):125-135；或国际专利申请公开号wo2014031687中描述的那些。在一些实施方案中，间隔子具有seqidno:1中所示的序列，并且由seqidno:2中所示的序列编码。在一些实施方案中，间隔子具有seqidno:3所示的序列。在一些实施方案中，间隔子具有seqidno:4所示的序列。

在一些实施方案中，恒定区或部分是igd的。在一些实施方案中，间隔子具有seqidno:5所示的序列。在一些实施方案中，间隔子具有展现与seqidno:1、3、4和5中的任一序列至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。

在一些方面，间隔子是多肽间隔子，如选自以下的一种或多种：(a)包含免疫球蛋白铰链或其修饰形式的全部或部分或由其组成或包含约15个氨基酸或更少，并且不包含cd28细胞外区域或cd8细胞外区域，(b)包含免疫球蛋白铰链(任选地igg4铰链)或其修饰形式的全部或部分或由其组成和/或包含约15个氨基酸或更少，并且不包含cd28细胞外区域或cd8细胞外区域，或(c)是或是约12个氨基酸的长度和/或包含免疫球蛋白铰链(任选地igg4铰链)或其修饰形式的全部或部分或由其组成；或(d)包括或包含seqidno:1、3-5所示的氨基酸序列或与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的任何前述的变体，或(e)包含式x1ppx2p(seqidno:66)(其中x1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸并且x2是半胱氨酸或苏氨酸)或由其组成。在一些实施方案中，间隔子包含来自免疫球蛋白的序列。在一些实施方案中，间隔子包含免疫球蛋白铰链(任选地igg4铰链和/或igg1铰链)的全部或部分，或由其组成。在一些实施方案中，间隔子包含免疫球蛋白重链恒定区(任选地ch2和/或ch3区)的一部分。

抗原识别结构域通常与一种或多种细胞内信号传导组分(如通过抗原受体复合物(如tcr复合物)(在car的情况下)模拟激活和/或经由另一种细胞表面受体模拟信号的信号传导组分)连接。因此，在一些实施方案中，抗原结合组分(例如，抗体)被连接至一个或多个跨膜和细胞内信号传导区域。在一些实施方案中，跨膜结构域与细胞外结构域融合。在一个实施方案中，使用天然与所述受体(例如，car)中的一个结构域缔合的跨膜结构域。在一些情形中，通过氨基酸取代选择或修饰所述跨膜结构域以避免此类结构域与相同或不同表面膜蛋白的跨膜结构域结合，以最小化与所述受体复合物的其他成员的相互作用。

在一些实施方案中，跨膜结构域源自天然或合成来源。当来源是天然的时，在一些方面，所述结构域可以源自任何膜结合蛋白或跨膜蛋白。跨膜区包括源自以下项的那些跨膜区(即，包括以下项的至少一个或多个跨膜区)：t细胞受体的α、β或ζ链，cd28，cd3ε，cd45，cd4，cd5，cd8，cd9，cd16，cd22，cd33，cd37，cd64，cd80，cd86，cd134，cd137，cd154。可替代地，在一些实施方案中，跨膜结构域是合成的。在一些方面，合成跨膜结构域主要包含疏水性残基，例如亮氨酸和缬氨酸。在一些方面，将在合成跨膜结构域的每个末端发现苯丙氨酸、色氨酸和缬氨酸的三联体。在一些实施方案中，连接是通过接头、间隔子和/或一个或多个跨膜结构域。

细胞内信号传导区域包括通过天然抗原受体模拟或接近信号、通过这种受体与共刺激受体组合模拟或接近信号和/或仅通过共刺激受体模拟或接近信号的那些。在一些实施方案中，短的寡肽或多肽接头(例如，长度在2与10个之间的氨基酸的接头，如含有甘氨酸和丝氨酸的接头，例如甘氨酸-丝氨酸双联体)存在并形成car的跨膜结构域与细胞质信号传导结构域之间的连接。

受体例如car通常包括至少一种细胞内信号传导组分或多种细胞内信号传导组分。在一些实施方案中，受体包括tcr复合物的细胞内组分，如介导t细胞激活和细胞毒性的tcrcd3链例如cd3ζ链。因此，在一些方面，抗原结合结构域连接至一个或多个细胞信号传导模块。在一些实施方案中，细胞信号传导模块包括cd3跨膜结构域、cd3细胞内信号传导结构域和/或其他cd跨膜结构域。在一些实施方案中，受体(例如car)还包括一种或多种另外的分子(例如fc受体γ、cd8、cd4、cd25或cd16)的一部分。例如，在一些方面，car包括cd3-zeta(cd3-ζ)或fc受体γ与cd8、cd4、cd25或cd16之间的嵌合分子。

在一些实施方案中，在连接所述car后，所述car的胞质结构域或细胞内信号传导区域激活免疫细胞(例如，工程化以表达所述car的t细胞)的正常效应子功能或应答中的至少一种。例如，在一些情境下，car诱导t细胞的功能，例如细胞溶解活性或t辅助活性，例如细胞因子或其他因子的分泌。在一些实施方案中，使用抗原受体组分或共刺激分子的细胞内信号传导区域的截短部分(例如如果其转导效应子功能信号的话)代替完整的免疫刺激链。在一些实施方案中，细胞内信号传导区域(例如包含一个或多个细胞内信号传导结构域)包括t细胞受体(tcr)的胞质序列，并且在一些方面还包括共受体(其在天然背景下与这种受体并行起作用以在抗原受体接合后启动信号转导)和/或此类分子的任何衍生物或变体的那些，和/或具有相同功能能力的任何合成序列。

在天然tcr的情况下，完全激活通常不仅需要通过tcr进行信号传导，还需要共刺激信号。因此，在一些实施方案中，为了促进完全激活，用于生成次级或共刺激信号的组分也被包括在所述car中。在其他实施方案中，car不包括用于生成共刺激信号的组分。在一些方面，另外的car在同一细胞中表达，并且提供用于生成次级或共刺激信号的组分。

在一些方面，将t细胞激活描述为由两个类别的细胞质信号传导序列来介导：通过tcr启动抗原依赖性初级激活的那些序列(初级细胞质信号传导序列)以及以非抗原依赖性方式作用以提供刺激或共刺激信号的那些序列(次级细胞质信号传导序列)。在一些方面，car包括此类信号传导组分中的一种或两种。

在一些方面，car包括调节所述tcr复合物的初级激活的初级胞质信号传导序列。以刺激方式起作用的初级胞质信号传导序列可以含有信号传导基序(其被称为基于免疫受体酪氨酸的激活基序或itam)。含有初级细胞质信号传导序列的itam的例子包括源自于tcr或cd3ζ、fcrγ或fcrβ的那些。在一些实施方案中，car中的胞质信号传导分子含有源自cd3ζ的胞质信号传导结构域、其部分或序列。

在一些实施方案中，car包括共刺激受体如cd28、4-1bb、ox40、dap10和icos的信号传导区域和/或跨膜部分。在一些方面，相同的car包括信号传导区域和共刺激组分。

在一些实施方案中，信号传导区域包括于一个car内，而共刺激组分是由识别另一种抗原的另一种car提供。在一些实施方案中，car包括在同一细胞上表达的激活或刺激car和共刺激car(参见wo2014/055668)。

在某些实施方案中，细胞内信号传导区域包含连接至cd3(例如，cd3-ζ)细胞内结构域的cd28跨膜和信号传导结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导区域包含连接至cd3ζ细胞内结构域的嵌合cd28和cd137(4-1bb，tnfrsf9)共刺激结构域。

在一些实施方案中，car在细胞质部分中包含一个或多个，例如两个或更多个共刺激结构域和激活结构域，例如初级激活结构域。示例性car包括cd3-ζ、cd28和4-1bb的细胞内组分。

在一些情况下，car被称为第一代、第二代和/或第三代car。在一些方面，第一代car是在抗原结合后仅提供cd3链诱导的信号的car；在一些方面，第二代car是提供这种信号和共刺激信号的car，例如包括来自共刺激受体(如cd28或cd137)的细胞内信号传导结构域的car；在一些方面，第三代car在一些方面是包括不同共刺激受体的多个共刺激结构域的car。

在一些实施方案中，嵌合抗原受体包括含有本文描述的抗体或抗体片段的细胞外部分。在一些方面，嵌合抗原受体包括含有本文所述的抗体或片段的细胞外部分和细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，抗体或片段包括scfv或单一结构域vh抗体，并且细胞内结构域含有itam。在一些方面，细胞内信号传导结构域包括cd3-zeta(cd3ζ)链的ζ链的信号传导结构域。在一些实施方案中，嵌合抗原受体包括设置在细胞外结构域与细胞内信号传导区域之间的跨膜结构域。

在一些方面，跨膜结构域含有cd28的跨膜部分。细胞外结构域和跨膜可以直接或间接连接。在一些实施方案中，细胞外结构域和跨膜通过间隔子(如本文所述的任何间隔子)连接。在一些实施方案中，嵌合抗原受体含有t细胞共刺激分子的细胞内结构域，如在跨膜结构域与细胞内信号传导结构域之间。在一些方面，所述t细胞共刺激分子是cd28或4-1bb。

在一些实施方案中，car含有抗体(例如抗体片段)，跨膜结构域(其是或含有cd28的跨膜部分或其功能变体)，以及含有cd28的信号传导部分或其功能变体和cd3ζ的信号传导部分或其功能变体的细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，car含有抗体例如抗体片段，跨膜结构域(其是或含有cd28的跨膜部分或其功能变体)，以及含有4-1bb的信号传导部分或其功能变体和cd3ζ的信号传导部分或其功能变体的细胞内信号传导结构域。在一些此类实施方案中，受体还包括含有ig分子(如人ig分子，如ig铰链，例如igg4铰链)的一部分的间隔子如仅含铰链的间隔子。

在一些实施方案中，受体(例如car)的跨膜结构域是人cd28的跨膜结构域或其变体，例如人cd28(登录号：p10747.1)的27个氨基酸的跨膜结构域，或者是包含seqidno:8中所示氨基酸序列或展现与seqidno:8至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列的跨膜结构域；在一些实施方案中，含有重组受体的部分的跨膜结构域包含seqidno:9中所示的氨基酸序列或与seqidno:9具有至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，嵌合抗原受体含有t细胞共刺激分子的细胞内结构域。在一些方面，所述t细胞共刺激分子是cd28或4-1bb。

在一些实施方案中，细胞内信号传导区域包含人cd28的细胞内共刺激信号传导结构域或其功能变体或部分，例如其41个氨基酸的结构域，和/或在天然cd28蛋白质的位置186-187处具有ll至gg取代的这种结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导区域和/或结构域可以包含seqidno:10或11中所示的氨基酸序列，或展现与seqidno:10或11至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，细胞内区域包含4-1bb的细胞内共刺激信号传导结构域或其功能变体或部分，例如人4-1bb(登录号q07011.1)的42个氨基酸的细胞质结构域或其功能变体或部分，例如seqidno:12所示的氨基酸序列或展现与seqidno:12至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，细胞内区域包含人4-1bb的细胞内共刺激信号传导结构域或其功能变体或部分。

在一些实施方案中，细胞内信号传导区域包含人cd3链、任选地cd3ζ刺激性信号传导结构域或其功能变体，例如人cd3ζ(登录号：p20963.2)的亚型3的112个aa的细胞质结构域或如美国专利号7,446,190或美国专利号8,911,993中所述的cd3ζ信号传导结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导区域包含seqidno:13、14或15中所示的氨基酸序列或展现与seqidno:13、14或15至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。

在一些方面，间隔子仅含有igg的铰链区，如仅igg4或igg1的铰链，如seqidno:1所示的仅铰链间隔子。在其他实施方案中，间隔子是与ch2和/或ch3结构域连接的ig铰链，例如，igg4铰链。在一些实施方案中，间隔子是与ch2和ch3结构域连接的ig铰链，例如igg4铰链，如seqidno:3所示。在一些实施方案中，间隔子是仅与ch3结构域连接的ig铰链，例如igg4铰链，如seqidno:4所示。在一些实施方案中，间隔子是或包含富甘氨酸-丝氨酸的序列或其他柔性接头，如已知的柔性接头。

在一些实施方案中，car包含：

(i)按顺序，对抗原具有特异性的scfv、跨膜结构域、任选地为或任选地包含4-1bb的源自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及源自含有初级信号传导itam的分子的细胞质信号传导结构域(其任选地为或包含cd3ζ信号传导结构域并且任选地还包含在跨膜结构域与scfv之间的间隔子)；

(ii)按顺序，对抗原具有特异性的scfv、跨膜结构域、任选地为或任选地包含4-1bb信号传导结构域的源自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及源自含有初级信号传导itam的分子的细胞质信号传导结构域(其任选地为cd3ζ信号传导结构域)；或

(iii)按顺序，对抗原具有特异性的scfv、间隔子、跨膜结构域、任选地为4-1bb信号传导结构域的源自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及源自含有初级信号传导itam的分子的细胞质信号传导结构域(其任选地为或任选地包含cd3ζ信号传导结构域)；并且：

所述间隔子任选地是多肽间隔子，所述多肽间隔子(a)包含全部或部分免疫球蛋白铰链或其修饰形式或由其组成，或包含约15个氨基酸或更少，并且不包含cd28胞外区或cd8胞外区，(b)包含全部或部分免疫球蛋白铰链(任选地igg4)或其修饰形式或由其组成，和/或包含约15个氨基酸或更少，并且不包含cd28胞外区或cd8胞外区，或(c)长度为12个氨基酸或为约12个氨基酸和/或包含全部或部分免疫球蛋白铰链(任选地igg4)或其修饰形式或由其组成；或(d)具有seqidno:1的序列或由其组成，所述序列是由以下各项所编码的一个序列：seqidno:2、seqidno:55、seqidno:56、seqidno:57、seqidno:58或前述任何一项的变体，所述变体与前述任何一项具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性，或(e)包含式x1ppx2p(seqidno:66)或由其组成，其中x1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸并且x2是半胱氨酸或苏氨酸；和/或

所述共刺激结构域包含seqidno:12或其变体，所述变体与seqidno:12具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性；和/或

所述初级信号传导结构域包含与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的seqidno:13或14或15；和/或

所述scfv包含rasqdiskyln的cdrll序列(seqidno:59)、srlhsgv的cdrl2序列(seqidno:60)和/或gntlpytfg的cdrl3序列(seqidno:61)和/或dygvs的cdrh1序列(seqidno:62)、viwgsettyynsalks的cdrh2序列(seqidno:63)和/或yamdywg的cdrh3序列(seqidno:64)，或者其中所述scfv包含fmc63的可变重链区和fmc63的可变轻链区和/或fmc63的cdrl1序列、fmc63的cdrl2序列、fmc63的cdrl3序列、fmc63的cdrh1序列、fmc63的cdrh2序列和fmc63的cdrh3序列，或结合与前述任何一者相同的表位或竞争与前述任何一者的结合，并且任选地其中所述scfv包含按顺序vh、任选地包含seqidno:65的接头和vl，和/或所述scfv包含柔性接头和/或包含seqidno:65所示的氨基酸序列。

2.t细胞受体(tcr)

在一些实施方案中，提供了工程化细胞(如t细胞)，其表达识别靶多肽(如肿瘤、病毒或自身免疫蛋白的抗原)的肽表位或t细胞表位的t细胞受体(tcr)或其抗原结合部分。

在一些实施方案中，“t细胞受体”或“tcr”是含有可变α和β链(也分别称为tcrα和tcrβ)或可变γ和δ链(也分别称为tcrα和tcrβ)的分子或其抗原结合部分，并且其能够特异性结合至与mhc分子结合的肽。在一些实施方案中，tcr呈αβ形式。通常，以αβ和γδ形式存在的tcr一般在结构上相似，但是表达它们的t细胞可以具有不同的解剖位置或功能。tcr可以在细胞的表面上发现或以可溶形式发现。通常，发现tcr在t细胞(或t淋巴细胞)的表面上，在此处它通常负责识别与主要组织相容性复合物(mhc)分子结合的抗原。

除非另有说明，否则术语“tcr”应理解为涵盖完整的tcr以及其抗原结合部分或其抗原结合片段。在一些实施方案中，tcr是完整或全长tcr，包括呈αβ形式或γδ形式的tcr。在一些实施方案中，tcr是这样的抗原结合部分，其少于全长tcr但与在mhc分子中结合的特定肽结合(如与mhc-肽复合物结合)。在一些情况下，tcr的抗原结合部分或片段可以仅含有全长或完整tcr的结构性结构域的一部分，但是仍能够结合与完整tcr结合的肽表位(如mhc-肽复合物)。在一些情况下，抗原结合部分含有tcr的可变结构域(如tcr的可变α链和可变β链)，足以形成用于与特定mhc-肽复合物结合的结合位点。通常，tcr的可变链含有参与肽、mhc和/或mhc-肽复合物的识别的互补决定区。

在一些实施方案中，tcr的可变结构域含有超变环或互补决定区(cdr)，其通常是抗原识别和结合能力和特异性的主要贡献者。在一些实施方案中，tcr的cdr或其组合形成给定tcr分子的全部或基本上全部的抗原结合位点。tcr链的可变区内的各个cdr通常由框架区(fr)隔开，与cdr相比，所述框架区通常在tcr分子之间展示较低可变性(参见例如，jores等人,proc.nat’lacad.sci.u.s.a.87:9138,1990；chothia等人,emboj.7:3745,1988；还参见lefranc等人,dev.comp.immunol.27:55,2003)。在一些实施方案中，cdr3是负责抗原结合或特异性的主要cdr，或者是在给定tcr可变区的用于所述肽-mhc复合物的加工肽部分的抗原识别和/或用于与其相互作用的三个cdr中最重要的cdr。在一些情境下，所述α链的cdr1可以与某些抗原肽的n末端部分相互作用。在一些情境下，所述β链的cdr1可以与所述肽的c末端部分相互作用。在一些情境下，cdr2对与mhc-肽复合物的mhc部分的相互作用或识别具有最强的作用或者是主要的负责cdr。在一些实施方案中，所述β链的可变区可以含有另外的高变区(cdr4或hvr4)，其通常参与超抗原结合而非抗原识别(kotb(1995)clinicalmicrobiologyreviews,8:411-426)。

在一些实施方案中，tcr还可以含有恒定结构域、跨膜结构域和/或短细胞质尾(参见例如，janeway等人,immunobiology:theimmunesysteminhealthanddisease,第3版,currentbiologypublications,p.4:33,1997)。在一些方面，tcr的每条链可以具有一个n末端免疫球蛋白可变结构域、一个免疫球蛋白恒定结构域、跨膜区和位于c末端的短细胞质尾。在一些实施方案中，tcr与参与介导信号转导的cd3复合物的不变蛋白质缔合。

在一些实施方案中，tcr链含有一个或多个恒定结构域。例如，给定tcr链的细胞外部分(例如，α链或β链)可以含有与细胞膜相邻的两个免疫球蛋白样结构域，例如可变结构域(例如，vα或vβ；通常基于kabat编号的氨基酸1至116，kabat等人,“sequencesofproteinsofimmunologicalinterest”,usdept.healthandhumanservices,publichealthservicenationalinstitutesofhealth,1991,第5版)和恒定结构域(例如，α链恒定域或cα，通常基于kabat编号的位置117至259，或β链恒定结构域或cβ，通常基于kabat的链的位置117至295)。例如，在一些情况下，由两条链形成的tcr的细胞外部分含有两个膜近端恒定结构域和两个膜远端可变结构域，其中可变结构域各自含有cdr。tcr的恒定结构域可含有短连接序列，其中半胱氨酸残基形成二硫键，由此连接tcr的两条链。在一些实施方案中，tcr可在每条α和β链中具有另外的半胱氨酸残基，使得tcr在恒定结构域中含有两个二硫键。

在一些实施方案中，tcr链含有跨膜结构域。在一些实施方案中，跨膜结构域带正电荷。在一些情况下，tcr链含有胞质尾。在一些情况下，结构允许tcr与其他分子(如cd3和其亚基)缔合。例如，含有恒定结构域与跨膜区的tcr可以将所述蛋白质锚定在细胞膜中并与所述cd3信号传导装置或复合物的不变亚基缔合。cd3信号传导亚基(例如，cd3γ、cd3δ、cd3ε和cd3ζ链)的细胞内尾含有tcr复合物的信号传导能力中所涉及的一个或多个基于免疫受体酪氨酸的激活基序或itam。

在一些实施方案中，tcr可以是两条链α和β(或者任选地γ和δ)的异二聚体，或者其可以是单链tcr构建体。在一些实施方案中，tcr是含有两条单独链(α和β链或γ和δ链)的异二聚体，所述链是通过例如一个或多个二硫键连接。

在一些实施方案中，tcr可以从一个或多个已知的tcr序列(如vα,β链的序列)产生，所述一个或多个已知的tcr序列的基本上全长的编码序列是易于获得的。用于从细胞来源获得全长tcr序列(包括v链序列)的方法是熟知的。在一些实施方案中，编码tcr的核酸可以从多种来源获得，如通过一种或多种给定细胞内的或从所述一种或多种给定细胞分离的编码tcr的核酸的聚合酶链式反应(pcr)扩增获得，或者通过公众可获得的tcrdna序列的合成获得。

在一些实施方案中，tcr是从生物来源获得，如来自细胞(如来自t细胞，例如细胞毒性t细胞)、t细胞杂交瘤或其他公众可获得的来源。在一些实施方案中，t细胞可以从体内分离的细胞获得。在一些实施方案中，tcr是胸腺选择的tcr。在一些实施方案中，tcr是新表位限制性tcr。在一些实施方案中，t细胞可以是培养的t细胞杂交瘤或克隆。在一些实施方案中，tcr或其抗原结合部分或其抗原结合片段可以根据对tcr序列的了解以合成方式产生。

在一些实施方案中，tcr是从通过针对靶多肽抗原或其靶t细胞表位筛选候选tcr文库而鉴定或选择的tcr产生的。tcr文库可以通过扩增来自t细胞的vα和vβ库来产生，所述t细胞是从受试者分离，包括存在于pbmc、脾或其他淋巴器官中的细胞。在一些情况下，t细胞可以从肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增。在一些实施方案中，可以从cd4+或cd8+细胞产生tcr文库。在一些实施方案中，tcr可以从正常或健康受试者的t细胞来源扩增，即正常tcr文库。在一些实施方案中，tcr可以从患病受试者的t细胞来源扩增，即患病tcr文库。在一些实施方案中，使用简并引物扩增vα和vβ的基因库，如通过在从人获得的样品(如t细胞)中进行rt-pcr。在一些实施方案中，sctv文库可以从原初vα和vβ文库组装，其中扩增的产物被克隆或组装以通过接头分开。取决于受试者和细胞的来源，所述文库可以是hla等位基因特异性的。可替代地，在一些实施方案中，tcr文库可以通过亲本或支架tcr分子的诱变或多样化产生。在一些方面，tcr经受定向进化，如通过诱变例如所述α或β链。在一些方面，tcr的cdr内的特定残基被改变。在一些实施方案中，可以通过亲和力成熟来修饰选择的tcr。在一些实施方案中，可以选择抗原特异性t细胞，如通过筛选以评估针对所述肽的ctl活性。在一些方面，可以选择例如存在于抗原特异性t细胞上的tcr，如通过结合活性，例如对所述抗原的特定亲和力或亲合力。

在一些实施方案中，基因工程化的抗原受体包括从天然存在的t细胞克隆的重组t细胞受体(tcr)和/或tcr。在一些实施方案中，从患者鉴定、分离靶抗原(例如，癌抗原)的高亲和力t细胞克隆，并将其引入细胞中。在一些实施方案中，已经在用人免疫系统基因(例如，人白细胞抗原系统或hla)工程化的转基因小鼠中产生针对靶抗原的tcr克隆。参见例如，肿瘤抗原(参见例如，parkhurst等人(2009)clincancerres.15:169-180以及cohen等人(2005)jimmunol.175:5799-5808。在一些实施方案中，使用噬菌体展示来分离针对靶抗原的tcr(参见例如，varela-rohena等人(2008)natmed.14:1390-1395以及li(2005)natbiotechnol.23:349-354。

在一些实施方案中，tcr或其抗原结合部分是已经修饰或工程化的。在一些实施方案中，使用定向进化方法来产生具有改变的特性如具有较高的对特定mhc-肽复合物的亲和力的tcr。在一些实施方案中，通过展示方法来实现定向进化，所述展示方法包括但不限于酵母展示(holler等人，(2003)natimmunol,4,55-62；holler等人(2000)procnatlacadsciusa,97,5387-92)、噬菌体展示(li等人(2005)natbiotechnol,23,349-54)、或t细胞展示(chervin等人(2008)jimmunolmethods,339,175-84)。在一些实施方案中，展示途径涉及工程化或修饰已知的亲本或参考tcr。例如，在一些情况下，野生型tcr可以用作模板以用于产生诱变的tcr，其中cdr的一个或多个残基被突变，并且选择具有所需改变的特性(如对所需靶抗原具有更高的亲和力)的突变体。

在一些实施方案中，用于产生或生成目标tcr的靶多肽的肽是已知的或可以由熟练技术人员容易地鉴定。在一些实施方案中，适用于产生tcr或抗原结合部分的肽可以基于目标靶多肽(如下文所述的靶多肽)中hla限制性基序的存在来确定。在一些实施方案中，使用可用的计算机预测模型来鉴定肽。在一些实施方案中，对于预测mhci类结合位点，此类模型包括但不限于propred1(singh和raghava(2001)bioinformatics17(12):1236-1237)和syfpeithi(参见schuler等人(2007)immunoinformaticsmethodsinmolecularbiology,409(1):75-932007)。在一些实施方案中，mhc限制性表位是hla-a0201，其在所有高加索人的约39％-46％中表达，并因此代表用于制备tcr或其他mhc-肽结合分子的mhc抗原的合适选择。

已知使用计算机预测模型的hla-a0201结合基序和蛋白酶体和免疫蛋白酶体的切割位点。用于预测mhci类结合位点的此类模型包括但不限于propred1(更详细地描述于singh和raghava,propred:predictionofhla-drbindingsites.bioinformatics17(12):1236-12372001)和syfpeithi(参见schuler等人syfpeithi,databaseforsearchingandt-cellepitopeprediction.，immunoinformaticsmethodsinmolecularbiology,第409(1)卷:75-932007)中。

在一些实施方案中，tcr或其抗原结合部分可以是重组产生的天然蛋白质或其突变形式(其中一种或多种特性(如结合特征)已经被改变)。在一些实施方案中，tcr可以来源于各种动物物种之一，如人、小鼠、大鼠或其他哺乳动物。tcr可以是细胞结合的或呈可溶形式。在一些实施方案中，出于所提供的方法的目的，所述tcr呈在细胞的表面上表达的细胞结合形式。

在一些实施方案中，tcr是全长tcr。在一些实施方案中，tcr是抗原结合部分。在一些实施方案中，tcr是二聚体tcr(dtcr)。在一些实施方案中，tcr是单链tcr(sc-tcr)。在一些实施方案中，dtcr或sctcr具有如wo03/020763、wo04/033685、wo2011/044186中所述的结构。

在一些实施方案中，tcr含有对应于跨膜序列的序列。在一些实施方案中，tcr确实含有对应于胞质序列的序列。在一些实施方案中，tcr能够与cd3形成tcr复合物。在一些实施方案中，任何tcr(包括dtcr或sctcr)可以与在t细胞的表面上产生活性tcr的信号传导结构域连接。在一些实施方案中，tcr在细胞的表面上表达。

在一些实施方案中，dtcr含有第一多肽(其中对应于tcrα链可变区序列的序列与对应于tcrα链恒定区细胞外序列的序列的n末端融合)和第二多肽(其中对应于tcrβ链可变区序列的序列与对应于tcrβ链恒定区细胞外序列的序列的n末端融合)，所述第一多肽和所述第二多肽通过二硫键连接。在一些实施方案中，所述键可以对应于天然二聚αβtcr中存在的天然链间二硫键。在一些实施方案中，所述链间二硫键不存在于天然tcr中。例如，在一些实施方案中，可以将一个或多个半胱氨酸掺入dtcr多肽对的恒定区细胞外序列中。在一些情况下，可能需要天然和非天然二硫键。在一些实施方案中，tcr含有跨膜序列以锚定至膜。

在一些实施方案中，dtcr含有tcrα链(含有可变α结构域、恒定α结构域和附接至恒定α结构域c末端的第一二聚化基序)和tcrβ链(包含可变β结构域、恒定β结构域和附接至恒定β结构域c末端的第一二聚化基序)，其中所述第一和第二二聚化基序易于相互作用以在第一二聚化基序的氨基酸与第二二聚化基序的氨基酸之间形成共价键，从而将tcrα链与tcrβ链连接在一起。

在一些实施方案中，tcr是sctcr。通常，可以使用已知的方法产生sctcr，参见例如soohoo,w.f.等人pnas(usa)89,4759(1992)；wülfing,c.和plückthun,a.,j.mol.biol.242,655(1994)；kurucz,i.等人pnas(usa)903830(1993)；国际公开pct号wo96/13593、wo96/18105、wo99/60120、wo99/18129、wo03/020763、wo2011/044186；和schlueter,c.j.等人j.mol.biol.256,859(1996)。在一些实施方案中，sctcr含有引入的非天然链间二硫键以促进tcr链的缔合(参见例如，国际公开pct号wo03/020763)。在一些实施方案中，sctcr是非二硫键连接的截短的tcr，其中与其c末端融合的异源亮氨酸拉链促进链缔合(参见例如，国际公开的pct号wo99/60120)。在一些实施方案中，sctcr含有经由肽接头与tcrβ可变结构域共价连接的tcrα可变结构域(参见例如，国际公开的pct号wo99/18129)。

在一些实施方案中，sctcr含有由对应于tcrα链可变区的氨基酸序列构成的第一区段、由对应于tcrβ链可变区序列的氨基酸序列构成的第二区段(融合至对应于tcrβ链恒定结构域细胞外序列的氨基酸序列的n末端)和将第一区段的c末端连接至第二区段的n末端的接头序列。

在一些实施方案中，sctcr含有第一区段(其由与α链细胞外恒定结构域序列的n末端融合的α链可变区序列构成)和第二区段(其由与序列β链细胞外恒定和跨膜序列的n末端融合的β链可变区序列构成)以及任选地接头序列(其将所述第一区段的c末端连接至所述第二区段的n末端)。

在一些实施方案中，sctcr含有第一区段(其由与β链细胞外恒定结构域序列的n末端融合的tcrβ链可变区序列构成)和第二区段(其由与序列α链细胞外恒定和跨膜序列的n末端融合的α链可变区序列构成)以及任选地接头序列(其将所述第一区段的c末端连接至所述第二区段的n末端)。

在一些实施方案中，sctcr的连接所述第一和第二tcr区段的接头可以是能够形成单多肽链同时保留tcr结合特异性的任何接头。在一些实施方案中，接头序列可例如具有式-p-aa-p-，其中p是脯氨酸并且aa代表氨基酸序列，其中所述氨基酸是甘氨酸和丝氨酸。在一些实施方案中，所述第一区段和所述第二区段配对，使得其可变区序列定向用于这种结合。因此，在一些情况下，所述接头具有足够的长度以跨越所述第一区段的c末端与所述第二区段的n末端之间的距离，或反之亦然，但是不能太长以阻断或减少所述sctcr与所述靶配体的结合。在一些实施方案中，所述接头可以含有从或从约10个至45个氨基酸，如10至30个氨基酸或26个至41个氨基酸残基，例如29个、30个、31个或32个氨基酸。在一些实施方案中，接头具有式-pggg-(sgggg)5-p-，其中p是脯氨酸，g是甘氨酸并且s是丝氨酸(seqidno:28)。在一些实施方案中，所述接头具有序列gsaddakkdaakkdgks(seqidno:29)

在一些实施方案中，sctcr含有共价二硫键，其将α链的恒定结构域的免疫球蛋白区域的残基连接至β链的恒定结构域的免疫球蛋白区域的残基。在一些实施方案中，天然tcr中不存在链间二硫键。例如，在一些实施方案中，可以将一个或多个半胱氨酸掺入sctcr多肽的第一和第二区段的恒定区细胞外序列中。在一些情况下，可能需要天然和非天然二硫键。

在含有引入的链间二硫键的dtcr或sctcr的一些实施方案中，不存在天然二硫键。在一些实施方案中，用形成天然链间二硫键的一个或多个天然半胱氨酸取代另一残基，如取代丝氨酸或丙氨酸。在一些实施方案中，可以通过使第一和第二区段上的非半胱氨酸残基突变为半胱氨酸来形成引入的二硫键。tcr的示例性非天然二硫键描述于已公开的国际pct号wo2006/000830中。

在一些实施方案中，tcr或其抗原结合片段对靶抗原以平衡结合常数展现出亲和力，所述平衡结合常数是在或在约10-5与10-12m之间以及其中的所有单独值和范围。在一些实施方案中，靶抗原是mhc-肽复合物或配体。

在一些实施方案中，编码tcr(如α和β链)的一种或多种核酸可以通过pcr、克隆或其他合适的方法扩增，并且克隆到合适的表达载体中。表达载体可以是任何合适的重组表达载体，并且可以用于转化或转染任何合适的宿主。合适的载体包括设计用于繁殖和扩增或用于表达或用于两者的那些，如质粒和病毒。

在一些实施方案中，载体可以是以下系列的载体：puc系列(fermentaslifesciences)、pbluescript系列(stratagene，加利福尼亚州拉霍亚)、pet系列(novagen，威斯康星州麦迪逊)、pgex系列(pharmaciabiotech，瑞典乌普萨拉)或pex系列(clontech，加利福尼亚州帕罗奥图)。在一些情况下，也可以使用噬菌体载体，如λg10、λgt11、λzapii(stratagene)、λembl4和λnm1149。在一些实施方案中，可以使用植物表达载体，并且包括pbi01、pbi101.2、pbi101.3、pbi121和pbin19(clontech)。在一些实施方案中，动物表达载体包括peuk-cl、pmam和pmamneo(clontech)。在一些实施方案中，使用病毒载体，如逆转录病毒载体。

在一些实施方案中，可以使用标准重组dna技术来制备重组表达载体。在一些实施方案中，载体可以含有调节序列，如转录和翻译起始和终止密码子，其对引入载体的宿主(例如，细菌、真菌，植物或动物)的类型具特异性，酌情并考虑所述载体是基于dna还是基于rna。在一些实施方案中，载体可以含有非天然启动子，其可操作地连接至编码tcr或抗原结合部分(或其他mhc-肽结合分子)的核苷酸序列。在一些实施方案中，启动子可以是非病毒启动子或病毒启动子，如巨细胞病毒(cmv)启动子、sv40启动子、rsv启动子和在鼠干细胞病毒的长末端重复序列中发现的启动子。还设想其他已知的启动子。

在一些实施方案中，在获得t细胞克隆后，将tcrα和β链分离并克隆到基因表达载体中。在一些实施方案中，tcrα和β基因通过小核糖核酸病毒2a核糖体跳跃肽连接，使得两条链共表达。在一些实施方案中，tcr的遗传转移是通过逆转录病毒或慢病毒载体或通过转座子完成(参见例如baum等人(2006)moleculartherapy:thejournaloftheamericansocietyofgenetherapy.13:1050-1063；frecha等人(2010)moleculartherapy:thejournaloftheamericansocietyofgenetherapy.18:1748-1757；和hackett等人(2010)moleculartherapy:thejournaloftheamericansocietyofgenetherapy.18:674-683。

在一些实施方案中，为了产生编码tcr的载体，将α和β链从表达目标tcr的t细胞克隆分离的总cdna进行pcr扩增，并将其克隆到表达载体中。在一些实施方案中，将所述α和β链克隆到同一载体中。在一些实施方案中，将所述α和β链克隆到不同的载体中。在一些实施方案中，将所产生的α和β链掺入逆转录病毒(例如慢病毒)载体中。

3.嵌合自身抗体受体(caar)

在一些实施方案中，重组受体是嵌合自身抗体受体(caar)。在一些实施方案中，caar对自身抗体具有特异性。在一些实施方案中，表达caar的细胞(例如工程化以表达caar的t细胞)可以用于特异性地结合至并杀伤表达自身抗体的细胞，而不是表达正常抗体的细胞。在一些实施方案中，表达caar的细胞可以用于治疗与自身抗原的表达相关的自身免疫性疾病，例如自身免疫性疾病。在一些实施方案中，表达caar的细胞可以靶向最终产生自身抗体并在其细胞表面上展示所述自身抗体的b细胞，将这些b细胞标记为治疗干预的疾病特异性靶标。在一些实施方案中，caar表达细胞可以用于通过使用抗原特异性嵌合自身抗体受体靶向引起疾病的b细胞，有效靶向和杀伤自身免疫性疾病中的致病性b细胞。在一些实施方案中，重组受体是caar，例如美国专利申请公开号us2017/0051035中所述的任何一种。

在一些实施方案中，caar包含自身抗体结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导区域。在一些实施方案中，细胞内信号传导区域包含细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域是或包含初级信号传导结构域、能够在t细胞中诱导初级激活信号的信号传导结构域、t细胞受体(tcr)组分的信号传导结构域和/或包含基于免疫受体酪氨酸的激活基序(itam)的信号传导结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导区域包含次级或共刺激信号传导区域(次级细胞内信号传导区域)。

在一些实施方案中，自身抗体结合结构域包含自身抗原或其片段。自身抗原的选择可以取决于所靶向的自身抗体的类型。例如，所述自身抗原的选择可能是由于其识别与特定疾病状态(例如自身免疫性疾病，例如自身抗体介导的自身免疫性疾病)相关的靶细胞(例如b细胞)上的自身抗体。在一些实施方案中，自身免疫性疾病包括寻常型天疱疮(pv)。示例性自身抗原包括桥粒芯糖蛋白1(dsg1)和dsg3。

4.多靶向

在一些实施方案中，细胞和方法包括多靶向策略，例如在细胞上表达两种或更多种基因工程化受体，每种受体识别相同或不同的抗原，并且通常各自包括不同的细胞内信号传导组分。此类多靶向策略描述于例如以下文献中：国际专利申请公开号wo2014055668a1(描述激活和共刺激car的组合，例如，靶向单独存在于脱靶(例如正常细胞)上，但仅一起存在于待治疗疾病或病症的细胞上的两种不同抗原)和fedorov等人，sci.transl.medicine，5(215)(2013年12月)(描述表达激活和抑制性car的细胞，例如其中激活car结合至同时在正常或非患病细胞和待治疗疾病或病症的细胞上表达的一种抗原，并且抑制性car结合至仅在正常细胞或不希望治疗的细胞上表达的另一种抗原的那些细胞)。

例如，在一些实施方案中，细胞包括表达第一基因工程化抗原受体(例如，car或tcr)的受体，其通常在特异性结合至由第一受体识别的抗原(例如第一抗原)后，能够诱导激活或刺激信号至所述细胞。在一些实施方案中，细胞还包括第二基因工程化抗原受体(例如，car或tcr)，例如嵌合共刺激受体，所述受体通常在特异性结合至由第二受体识别的第二抗原后，能够将共刺激信号诱导至免疫细胞。在一些实施方案中，第一抗原与第二抗原是相同的。在一些实施方案中，第一抗原与第二抗原是不同的。

在一些实施方案中，第一和/或第二基因工程化抗原受体(例如car或tcr)能够诱导激活或刺激信号至所述细胞。在一些实施方案中，受体包括含有itam或itam样基序的细胞内信号传导组分。在一些实施方案中，由第一受体诱导的激活涉及信号转导或细胞中蛋白质表达的变化，导致启动免疫应答(例如itam磷酸化)和/或启动itam介导的信号转导级联、形成免疫突触和/或所结合受体(例如cd4或cd8等)附近的分子的聚簇、激活一种或多种转录因子(例如nf-κb和/或ap-1)、和/或诱导因子(例如细胞因子)的基因表达、增殖和/或存活。

在一些实施方案中，第一受体和/或第二受体包括共刺激受体的细胞内信号传导结构域或区域，所述共刺激受体例如cd28、cd137(4-1bb)、ox40和/或icos。在一些实施方案中，第一受体和第二受体包括不同的共刺激受体的细胞内信号传导结构域。在一个实施方案中，第一受体含有cd28共刺激信号传导区域，并且第二受体含有4-1bb共刺激信号传导区域，或反之亦然。

在一些实施方案中，第一受体和/或第二受体包括含有itam或itam样基序的细胞内信号传导结构域和共刺激受体的细胞内信号传导结构域。

在一些实施方案中，第一受体含有包含itam或itam样基序的细胞内信号传导结构域，并且第二受体含有共刺激受体的细胞内信号传导结构域。与在相同细胞中诱导的激活或刺激信号组合的共刺激信号是导致免疫应答的共刺激信号，所述免疫应答例如为稳健且持续的免疫应答，例如增加的基因表达，细胞因子和其他因子的分泌，以及t细胞介导的效应子功能(如细胞杀伤)。

在一些实施方案中，单独的第一受体的连接和单独的第二受体的连接都不会诱导稳健的免疫应答。在一些方面，如果仅连接一个受体，则细胞变得耐受抗原或对抗原无反应，或被抑制，和/或不被诱导增殖或分泌因子或实现效应子功能。然而，在一些此类实施方案中，在连接多个受体时，如在遇到表达第一和第二抗原的细胞时，实现所需应答，如完全免疫激活或刺激，例如如通过一种或多种细胞因子的分泌、增殖、持久性和/或执行免疫效应子功能(如靶细胞的细胞毒性杀伤)所指示的。

在一些实施方案中，两种受体分别将激活和抑制信号诱导至细胞，使得一种受体与其抗原的结合激活细胞或诱导反应，但是第二抑制性受体与其抗原的结合诱导了抑制或减弱所述反应的信号。例子是激活car与抑制性car或icar的组合。例如，可以使用这种策略，其中激活car结合在疾病或病症中表达但也在正常细胞上表达的抗原，并且抑制性受体结合在正常细胞上表达但不在疾病或病症的细胞上表达的单独抗原。

在一些实施方案中，多靶向策略用于以下情况：其中与特定疾病或病症相关的抗原在未患病细胞上表达和/或在工程化细胞本身上表达，所述表达为瞬时表达(例如，在与基因工程化相关的刺激后)或永久表达。在此类情况下，通过需要连接两个分开的和单独特异性抗原受体，可以改善特异性、选择性和/或功效。

在一些实施方案中，多种抗原(例如第一和第二抗原)在所靶向的细胞、组织或疾病或病症上(例如在癌细胞上)表达。在一些方面，细胞、组织、疾病或病症是多发性骨髓瘤或多发性骨髓瘤细胞。在一些实施方案中，多种抗原中的一种或多种通常也在不需要用细胞疗法靶向的细胞(例如正常或未患病细胞或组织，和/或工程化细胞本身)上表达。在此类实施方案中，通过需要连接多个受体以实现细胞的反应，实现特异性和/或功效。

c.核酸和载体

还提供了编码psma或其修饰形式和/或重组受体的一种或多种多核苷酸(例如核酸分子)、用于将细胞基因工程化以表达这种psma或其修饰形式和受体的载体、以及用于生产工程化细胞的方法。

在一些实施方案中，提供了编码本文所述的任何psma或其修饰形式的多核苷酸。在一些方面，多核苷酸含有单一编码序列，例如仅编码psma或其修饰形式的编码序列。在其他情形中，所述多核苷酸含有至少两种不同的编码序列，如编码psma或其修饰形式的第一核酸序列和编码重组受体的第二核酸序列。在一些方面，重组受体是或含有嵌合抗原受体(car)。在一些方面，重组受体是或含有t细胞受体(tcr)，例如转基因tcr。在一些实施方案中，多核苷酸和载体用于在细胞中共表达psma或其修饰形式和重组受体。

还提供了多核苷酸的组或组合。在一些实施方案中，所述组或组合包含第一多核苷酸以及第二多核苷酸，所述第一多核苷酸包含编码前列腺特异性膜抗原(psma)或其修饰形式的核酸，所述第二多核苷酸包含编码重组受体的核酸。还提供了含有多核苷酸的这种组或组合的组合物。在一些实施方案中，多核苷酸的所述组或组合一起用于细胞的工程化。在一些实施方案中，将所述组中的第一多核苷酸和第二多核苷酸同时或按任何顺序依次引入用于工程化的细胞中。

在一些实施方案中，含有编码psma或其修饰形式的核酸的所提供的多核苷酸包括seqidno:26、27或53所示的核酸序列，或展现与seqidno:26、27或53中任一个或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的核酸序列。

在一些情况下，编码psma或其修饰形式的核酸序列含有编码信号肽的信号序列。在一些方面，信号序列可以编码源自天然多肽的信号肽。在其他方面，信号序列可以编码异源或非天然信号肽，例如seqidno:31所示并且由seqidno:30所示的核苷酸序列编码的gmcsfrα链的示例性信号肽。在一些情况下，编码重组受体(例如嵌合抗原受体(car))的核酸序列含有编码信号肽的信号序列。信号肽的非限制性示例性例子包括例如seqidno:31所示并且由seqidno:30所示的核苷酸序列编码的gmcsfrα链信号肽，或seqidno:32所示的cd8α信号肽。

在一些实施方案中，编码psma或其修饰形式和/或重组受体的多核苷酸含有至少一个启动子，所述启动子可操作地连接以控制psma或其修饰形式和/或重组受体的表达。在一些例子中，多核苷酸含有两个、三个或更多个启动子，所述启动子可操作地连接以控制psma或其修饰形式和/或重组受体的表达。

在其中核酸分子编码两条或更多条不同多肽链的某些情况下，多肽链中的每一条可以由单独的核酸分子编码。例如，提供了两个单独的核酸，并且每一个可以单独转移到或引入细胞中以在细胞中表达。

在一些实施方案中，编码重组受体的核酸和编码psma或其修饰形式的核酸与相同的启动子可操作地连接，并且任选地通过内部核糖体进入位点(ires)或编码自切割肽或导致核糖体跳跃的肽(其任选地是t2a、p2a、e2a或f2a)的核酸分开。在一些实施方案中，编码psma或其修饰形式的核酸和编码重组受体的核酸可操作地连接至两个不同的启动子。在一些实施方案中，编码psma或其修饰形式的核酸和编码重组受体的核酸存在或插入于细胞基因组内的不同位置。在一些实施方案中，例如通过逆转录病毒转导、转染或转化将编码重组受体的多核苷酸引入含有培养细胞的组合物中。

在一些实施方案中，例如在多核苷酸含有第一和第二核酸序列的那些实施方案中，编码每种不同多肽链的编码序列可以与启动子可操作地连接，所述启动子可以是相同的或不同的。在一些实施方案中，所述核酸分子可以含有驱动两条或更多条不同多肽链表达的启动子。在一些实施方案中，此类核酸分子可以是多顺反子的(双顺反子的或三顺反子的，参见例如，美国专利号6,060,273)。在一些实施方案中，可以将转录单位工程化为含有ires(内部核糖体进入位点)的双顺反子单元，其允许通过来自单一启动子的信息共表达基因产物(例如编码psma或其修饰形式和编码重组受体)。可替代地，在一些情况下，单一启动子可引导rna的表达，所述rna在单一开放阅读框(orf)中含有两个或三个基因(例如编码psma或其修饰形式和编码重组受体)，所述基因通过编码自切割肽(例如，2a序列)的序列或蛋白酶识别位点(例如，弗林蛋白酶)彼此分开。因此，所述orf编码单个多肽，其在翻译期间(在2a的情况下)或之后被加工成单个蛋白质。在一些情况下，肽(如t2a)可引起核糖体跳过2a元件c末端处肽键的合成(核糖体跳跃)，导致在2a序列末端与相邻下游肽之间分开(参见例如，defelipe,geneticvaccinesandther.2:13(2004)和defelipe等人traffic5:616-626(2004))。各种2a元件是已知的。可以用于本文所公开的方法和系统中的2a序列的例子包括但不限于来自以下病毒的2a序列：口蹄疫病毒(f2a，例如，seqidno:22)、马鼻炎a病毒(e2a，例如，seqidno:21)、明脉扁刺蛾β四体病毒(t2a，例如，seqidno:6或17)和猪捷申病毒-1(p2a，例如，seqidno:19或20)，如美国专利公开号20070116690中所述。

在一些实施方案中，编码psma或其修饰形式的核酸和编码重组受体的核酸与相同的启动子可操作地连接，并且任选地通过内部核糖体进入位点(ires)或编码自切割肽或导致核糖体跳跃的肽(其任选地是t2a、p2a、e2a或f2a)的核酸分开。在一些实施方案中，编码psma或其修饰形式的核酸和编码重组受体的核酸可操作地连接至两个不同的启动子。在一些实施方案中，编码psma或其修饰形式的核酸和编码重组受体的核酸存在或插入于细胞基因组内的不同位置。

在一些实施方案中，还提供了多核苷酸，所述多核苷酸含有编码任何psma或其修饰形式的核酸序列和编码任何嵌合受体和/或重组抗原受体(例如本文提供的car)的核酸序列。在一些方面，编码psma或其修饰形式的核酸和编码car的核酸被包含在一个多核苷酸内。在一些实施方案中，所提供的多核苷酸按5'至3'的顺序包含：i)编码信号肽的核酸；ii)编码car的核酸，所述car包含scfv；间隔子；跨膜结构域；包含共刺激信号传导区域、和cd3-zeta(cd3ζ)链的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分的细胞内区域；iii)编码自切割肽或导致核糖体跳跃的肽(其任选地是t2a、p2a、e2a或f2a)的核酸序列；以及iv)编码psma或其修饰形式的核酸，所述psma或其修饰形式任选地包含seqidno:52所示的氨基酸序列或其片段；或展现与seqidno:52或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且包含所述一个或多个n末端氨基酸残基的缺失的氨基酸序列。

在一些实施方案中，编码的car包含：

(i)按顺序，对抗原具有特异性的scfv、跨膜结构域、任选地为或任选地包含4-1bb的源自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及源自含有初级信号传导itam的分子的细胞质信号传导结构域(其任选地为或包含cd3ζ信号传导结构域并且任选地还包含在跨膜结构域与scfv之间的间隔子)；

(ii)按顺序，对抗原具有特异性的scfv、跨膜结构域、任选地为或任选地包含4-1bb信号传导结构域的源自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及源自含有初级信号传导itam的分子的细胞质信号传导结构域(其任选地为cd3ζ信号传导结构域)；或

(iii)按顺序，对抗原具有特异性的scfv、间隔子、跨膜结构域、任选地为4-1bb信号传导结构域的源自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及源自含有初级信号传导itam的分子的细胞质信号传导结构域(其任选地为或任选地包含cd3ζ信号传导结构域)；并且：

所述间隔子任选地是多肽间隔子，所述多肽间隔子(a)包含全部或部分免疫球蛋白铰链或其修饰形式或由其组成，或包含约15个氨基酸或更少，并且不包含cd28胞外区或cd8胞外区，(b)包含全部或部分免疫球蛋白铰链(任选地igg4)或其修饰形式或由其组成，和/或包含约15个氨基酸或更少，并且不包含cd28胞外区或cd8胞外区，或(c)长度为12个氨基酸或为约12个氨基酸和/或包含全部或部分免疫球蛋白铰链(任选地igg4)或其修饰形式或由其组成；或(d)具有seqidno:1的序列或由其组成，所述序列是由以下各项所编码的一个序列：seqidno:2、seqidno:55、seqidno:56、seqidno:57、seqidno:58或前述任何一项的变体，所述变体与前述任何一项具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性，或(e)包含式x1ppx2p(seqidno:66)或由其组成，其中x1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸并且x2是半胱氨酸或苏氨酸；和/或

所述共刺激结构域包含seqidno:12或其变体，所述变体与seqidno:12具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性；和/或

所述初级信号传导结构域包含与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的seqidno:13或14或15；和/或

所述scfv包含rasqdiskyln的cdrll序列(seqidno:59)、srlhsgv的cdrl2序列(seqidno:60)和/或gntlpytfg的cdrl3序列(seqidno:61)和/或dygvs的cdrh1序列(seqidno:62)、viwgsettyynsalks的cdrh2序列(seqidno:63)和/或yamdywg的cdrh3序列(seqidno:64)，或者其中所述scfv包含fmc63的可变重链区和fmc63的可变轻链区和/或fmc63的cdrl1序列、fmc63的cdrl2序列、fmc63的cdrl3序列、fmc63的cdrh1序列、fmc63的cdrh2序列和fmc63的cdrh3序列，或结合与前述任何一者相同的表位或竞争与前述任何一者的结合，并且任选地其中所述scfv包含按顺序vh、任选地包含seqidno:65的接头和vl，和/或所述scfv包含柔性接头和/或包含seqidno:65所示的氨基酸序列。

在一些实施方案中，例如通过逆转录病毒转导、转染或转化将编码psma或其修饰形式和/或重组受体的多核苷酸引入含有培养细胞的组合物中。

还提供了含有此类核酸和/或多核苷酸的载体或构建体。在一些实施方案中，载体或构建体含有一个或多个启动子，所述一个或多个启动子与编码psma或其修饰形式和/或重组受体的核酸可操作地连接以驱动其表达。在一些实施方案中，所述启动子可操作地连接至一个或多于一个核酸分子或多核苷酸。因此，还提供了载体，如含有本文所提供的任何多核苷酸的那些。在一些实施方案中，载体包括编码psma或其修饰形式的第一多核苷酸和编码重组受体(例如car)的第二多核苷酸。

在一些情况下，所述载体是病毒载体，如逆转录病毒载体，例如慢病毒载体或γ逆转录病毒载体。还提供了载体的组或组合。在一些实施方案中，载体的所述组或组合包含第一载体和第二载体，其中所述第一载体包含第一多核苷酸(例如编码psma或其修饰形式的第一多核苷酸)，并且所述第二载体包含编码重组受体(例如car)的第二多核苷酸。还提供了含有载体的这种组或组合的组合物。在一些实施方案中，将载体的组或组合一起用于细胞的工程化。在一些实施方案中，将组中的第一载体和第二载体同时或按任何顺序依次引入用于工程化的细胞中。

在一些实施方案中，载体包括病毒载体，例如逆转录病毒或慢病毒、非病毒载体或转座子，例如睡美人(sleepingbeauty)转座子系统；源自于猿猴病毒40(sv40)、腺病毒、腺相关病毒(aav)的载体；慢病毒载体或逆转录病毒载体，如γ-逆转录病毒载体，源自于莫洛尼(moloney)鼠白血病病毒(momlv)、骨髓增生性肉瘤病毒(mpsv)、鼠胚胎干细胞病毒(mesv)、鼠干细胞病毒(mscv)、脾病灶形成病毒(sffv)或腺相关病毒(aav)的逆转录病毒载体。

本文所述的任何psma或其修饰形式和/或重组受体可以由呈任何组合或排列的含有编码psma或其修饰形式和/或重组受体的一种或多种核酸序列的多核苷酸编码。例如，一种、两种、三种或更多种多核苷酸可以编码一种、两种、三种或更多种不同的多肽，例如psma或其修饰形式和/或重组受体。在一些实施方案中，一个载体或构建体含有编码psma或其修饰形式的核酸序列，并且一个单独的载体或构建体含有编码重组受体(例如car)的核酸序列。在一些实施方案中，编码psma或其修饰形式的核酸和编码重组受体的核酸可操作地连接至两个不同的启动子。在一些实施方案中，编码重组受体的核酸存在于编码psma或其修饰形式的核酸的下游。

d.用于工程化的细胞和细胞的制备

本文提供了细胞，如含有psma或其修饰形式和/或重组受体的工程化细胞。还提供了此类细胞的群体、含有此类细胞和/或富含此类细胞的组合物，例如其中表达psma或其修饰形式和/或重组受体(例如嵌合受体)的细胞构成组合物中总细胞的或某种类型的细胞(如t细胞或cd8+或cd4+细胞)的至少50％、60％、70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高百分比。组合物包括用于给予(如用于过继细胞疗法)的药物组合物和配制品。还提供了用于工程化、生产或产生此类细胞的方法，用于将细胞和组合物给予至受试者(例如患者)的治疗方法，以及用于检测、选择、分离或分开此类细胞的方法。

因此，提供了表达psma或其修饰形式和/或重组受体(例如car)的基因工程化细胞。细胞通常是真核细胞(如哺乳动物细胞)，并且通常是人细胞。在一些实施方案中，所述细胞源自血液、骨髓、淋巴或淋巴器官，是免疫系统的细胞，如先天免疫或适应性免疫的细胞，例如骨髓或淋巴细胞，包括淋巴细胞，通常为t细胞和/或nk细胞。其他示例性细胞包括干细胞，如多潜能干细胞和多能干细胞，包括诱导多能干细胞(ipsc)。细胞通常是原代细胞，如直接从受试者分离和/或从受试者分离并冷冻的那些。在一些实施方案中，细胞包括t细胞或其他细胞类型的一个或多个亚组，如整个t细胞群、cd4+细胞、cd8+细胞及其亚群，如由以下各项所定义的那些亚群：功能、激活状态、成熟度、分化的可能性、扩增、再循环、定位和/或持久能力、抗原特异性、抗原受体类型、在特定器官或区室中的存在、标记或细胞因子分泌特征和/或分化程度。关于待治疗的受试者，细胞可以是同种异体的和/或自体的。所述方法包括现成的方法。在一些方面，如对于现有技术，细胞是多能和/或多潜能的，如干细胞，如诱导多能干细胞(ipsc)。在一些实施方案中，所述方法包括从受试者中分离细胞，如本文所述制备、加工、培养和/或工程化它们，并且在冷冻保存之前或之后将它们重新引入同一患者体内。在一些实施方案中，工程化细胞不是通常或正常表达psma的细胞。在一些实施方案中，工程化细胞不是在疾病状态期间psma表达增加的细胞。在一些实施方案中，细胞不是前列腺细胞。在一些实施方案中，在通过引入编码psma或其变体的重组或异源核酸序列进行工程化之前，细胞不表达psma。

在t细胞和/或cd4+和/或cd8+t细胞的亚型和亚群中，有幼稚t(tn)细胞、效应t细胞(teff)、记忆t细胞及其亚型(如干细胞记忆t(tscm)、中枢记忆t(tcm)，效应记忆t(tem)或终末分化效应记忆t细胞)、肿瘤浸润淋巴细胞(til)、未成熟t细胞、成熟t细胞、辅助t细胞、细胞毒性t细胞、粘膜相关不变t(mait)细胞、天然存在和适应性调节t(treg)细胞、辅助t细胞(如th1细胞、th2细胞、th3细胞、th17细胞、th9细胞、th22细胞、滤泡辅助细胞t细胞)、α/βt细胞和δ/γt细胞。在一些实施方案中，细胞是调节性t细胞(treg)。在一些实施方案中，细胞还包含重组foxp3或其变体。

在一些实施方案中，细胞是天然杀伤(nk)细胞。在一些实施方案中，细胞是单核细胞或粒细胞，例如骨髓细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞和/或嗜碱性粒细胞。

在一些实施方案中，细胞包括经由基因工程化引入的一个或多个核酸，从而表达此类核酸的重组或基因工程化产物。在一些实施方案中，核酸是异源的，即通常不存在于细胞或从细胞获得的样品中，如从另一种生物或细胞获得的核酸，例如，所述核酸通常不在被工程化的细胞和/或衍生这种细胞的生物中发现。在一些实施方案中，核酸不是天然存在的如自然界中未发现的核酸，包括包含编码来自多种不同细胞类型的各种结构域的核酸的嵌合组合的核酸。

在一些实施方案中，工程化细胞的制备包括一个或多个培养和/或制备步骤。用于工程化的细胞可以从样品(如生物样品，例如获自或源自受试者的一种)中分离。在一些实施方案中，分离出细胞的受试者是患有疾病或病症或需要细胞疗法或将对其给予细胞疗法的受试者。在一些实施方案中，受试者是需要特定治疗性干预(如过继细胞疗法，其中细胞被分离、加工和/或工程化)的人。

因此，在一些实施方案中，细胞是原代细胞，例如原代人细胞。样品包括直接取自受试者的组织、流体和其他样品，以及来自一个或多个加工步骤(如分离、离心、基因工程化(例如用病毒载体转导)、洗涤和/或孵育)的样品。生物样品可以是直接从生物来源获得的样品或经过加工的样品。生物样品包括但不限于体液(如血液、血浆、血清、脑脊液、滑液、尿液和汗液)、组织和器官样品，包括由其衍生的加工样品。

在一些方面，细胞从其中衍生或分离的样品是血液或血液衍生的样品，或者是或源自单采术或白细胞分离术产物。示例性样品包括全血、外周血单核细胞(pbmc)、白细胞、骨髓、胸腺、组织活检、肿瘤、白血病、淋巴瘤、淋巴结、肠相关淋巴组织、粘膜相关淋巴组织、脾、其他淋巴组织、肝、肺、胃、肠、结肠、肾、胰腺、乳房、骨、前列腺、子宫颈、睾丸、卵巢、扁桃体或其他器官和/或由其衍生的细胞。在细胞疗法(例如过继细胞疗法)的背景下，样品包括来自自体和同种异体来源的样品。

在一些实施方案中，细胞源自细胞系，例如t细胞系。在一些实施方案中，细胞获自异种来源，例如获自小鼠、大鼠、非人灵长类动物或猪。

在一些实施方案中，细胞的分离包括一个或多个制备和/或基于非亲和力的细胞分离步骤。在一些例子中，将细胞在一种或多种试剂的存在下洗涤、离心和/或孵育，例如以去除不需要的组分、针对所需组分进行富集、裂解或去除对特定试剂敏感的细胞。在一些例子中，基于一种或多种特性(如密度、粘附特性、尺寸、对特定组分的敏感性和/或抗性)分离细胞。

在一些例子中，来自受试者的循环血液的细胞例如通过单采术或白细胞分离术获得。在一些方面，样品含有淋巴细胞，包括t细胞、单核细胞、粒细胞、b细胞、其他有核白细胞、红细胞和/或血小板，并且在一些方面含有除红细胞和血小板之外的细胞。

在一些实施方案中，洗涤从受试者收集的血细胞，例如以去除血浆级分并将细胞置于适当的缓冲液或介质中以用于随后的加工步骤。在一些实施方案中，用磷酸盐缓冲盐水(pbs)洗涤细胞。在一些实施方案中，洗涤溶液缺乏钙和/或镁和/或许多或所有二价阳离子。在一些方面，根据制造商的说明书，通过半自动“流通”离心机(例如，cobe2991细胞加工器，baxter)完成洗涤步骤。在一些方面，根据制造商的说明书，通过切向流过滤(tff)完成洗涤步骤。在一些实施方案中，洗涤后将细胞重悬于多种生物相容性缓冲液(例如像不含ca⁺⁺/mg⁺⁺的pbs)中。在某些实施方案中，去除血细胞样品的组分并将细胞直接重悬于培养基中。

在一些实施方案中，所述方法包括基于密度的细胞分离方法，如通过裂解红细胞并通过percoll或ficoll梯度离心而从外周血制备白细胞。

在一些实施方案中，分离方法包括基于细胞中一种或多种特定分子(如表面标记，例如表面蛋白、细胞内标记或核酸)的表达或存在来分离不同细胞类型。在一些实施方案中，可以使用任何已知的基于此类标记的用于分离的方法。在一些实施方案中，分离是基于亲和力或免疫亲和力的分离。例如，在一些方面，分离包括基于细胞的一种或多种标记(通常为细胞表面标记)的表达或表达水平来分离细胞和细胞群，例如通过和与此类标记特异性结合的抗体或结合配偶体一起孵育，然后通常是洗涤步骤和从那些未与所述抗体或结合配偶体结合的细胞中分离已结合所述抗体或结合配偶体的细胞。

此类分离步骤可以基于阳性选择(其中保留已经结合试剂的细胞以供进一步使用)和/或阴性选择(其中保留未与抗体或结合配偶体结合的细胞)。在一些例子中，保留两种级分以供进一步使用。在一些方面，在没有可用于特异性鉴定异质群体中的细胞类型的抗体的情况下，阴性选择可能特别有用，使得最好基于由除所需群体之外的细胞表达的标记进行分离。

分离不需要导致100％富集或去除特定细胞群体或表达特定标记的细胞。例如，针对特定类型的细胞(如表达标记的那些)的阳性选择或富集是指增加此类细胞的数量或百分比，但不需要导致不表达所述标记的细胞的完全不存在。同样地，特定类型的细胞(如表达标记的那些)的阴性选择、去除或耗尽是指减少此类细胞的数量或百分比，但不需要导致所有此类细胞的完全去除。

在一些例子中，进行多轮分离步骤，其中来自一个步骤的阳性或阴性选择的级分经受另一个分离步骤，如随后的阳性或阴性选择。在一些例子中，单个分离步骤可以同时耗尽表达多种标记的细胞，如通过将细胞与多种抗体或结合配偶体(每种抗体或结合配偶体对被靶向用于阴性选择的标记具特异性)一起孵育。同样地，通过将细胞与在各种细胞类型上表达的多种抗体或结合配偶体一起孵育，可以同时阳性选择多种细胞类型。

例如，在一些方面，t细胞的特定亚群，如对一种或多种表面标记呈阳性或高水平表达的细胞(例如cd28⁺、cd62l⁺、ccr7⁺、cd27⁺、cd127⁺、cd4⁺、cd8⁺、cd45ra⁺和/或cd45ro⁺t细胞)通过阳性或阴性选择技术来分离。

例如，可以使用抗cd3/抗cd28缀合的磁珠(例如，m-450cd3/cd28tcellexpander)阳性选择cd3⁺,cd28⁺t细胞。

在一些实施方案中，通过阳性选择针对特定细胞群富集或者通过阴性选择针对特定细胞群耗尽来进行分离。在一些实施方案中，通过将细胞与一种或多种抗体或其他结合剂一起孵育来完成阳性或阴性选择，所述一种或多种抗体或其他结合剂与分别在阳性或阴性选择的细胞上表达(标记⁺)或以相对较高水平表达(标记^高)的一种或多种表面标记特异性地结合。

在一些实施方案中，通过阴性选择在非t细胞(如b细胞、单核细胞或其他白细胞，如cd14)上表达的标记，将t细胞与pbmc样品分离。在一些方面，cd4⁺或cd8⁺选择步骤用于分离cd4⁺辅助t细胞和cd8⁺细胞毒性t细胞。通过对在一种或多种幼稚、记忆和/或效应t细胞亚群上表达或以相对较高程度表达的标记的阳性或阴性选择，可以将此类cd4⁺和cd8⁺群体进一步分类成亚群。

在一些实施方案中，如通过基于与相应子群体相关的表面抗原进行阳性或阴性选择，将cd8⁺细胞针对幼稚、中枢记忆、效应子记忆和/或中枢记忆干细胞进一步富集或耗尽。在一些实施方案中，针对中枢记忆t(tcm)细胞进行富集以增加功效，如以改善给予后的长期存活、扩增和/或移植，这在一些方面在此类亚群中特别稳健。参见terakura等人(2012)blood.1:72-82；wang等人(2012)jimmunother.35(9):689-701。在一些实施方案中，组合富含tcm的cd8⁺t细胞与cd4⁺t细胞进一步增强功效。

在实施方案中，记忆t细胞存在于cd8⁺外周血淋巴细胞的cd62l⁺和cd62l^-两个亚组中。可以例如使用抗cd8和抗cd62l抗体将pbmc针对cd62l^-cd8⁺和/或cd62l⁺cd8⁺级分进行富集或耗尽。

在一些实施方案中，中枢记忆t(tcm)细胞的富集是基于cd45ro、cd62l、ccr7、cd28、cd3和/或cd127的阳性或高表面表达；在一些方面，它是基于对表达或高度表达cd45ra和/或颗粒酶b的细胞的阴性选择。在一些方面，通过表达cd4、cd14、cd45ra的细胞的耗尽和表达cd62l的细胞的阳性选择或富集来进行富含tcm细胞的cd8⁺群体的分离。在一个方面，中枢记忆t(tcm)细胞的富集从基于cd4表达所选择的阴性细胞级分开始进行，所述阴性细胞级分基于cd14和cd45ra的表达进行阴性选择且基于cd62l进行阳性选择。在一些方面这种选择是同时进行的，而在其他方面以任何顺序依次进行。在一些方面，用于制备cd8⁺细胞群或亚群的相同的基于cd4表达的选择步骤也用于生成cd4⁺细胞群或亚群，使得来自基于cd4的分离的阳性和阴性级分被保留并用于所述方法的后续步骤中，任选地在一个或多个其他阳性或阴性选择步骤之后。

在特定例子中，pbmc样品或其他白细胞样品进行cd4+细胞的选择，其中保留了阴性和阳性级分。然后所述阴性级分基于cd14和cd45ra或cd19的表达进行阴性选择，并基于中枢记忆t细胞(如cd62l或ccr7)的标记特征进行阳性选择，其中以任何顺序进行所述阳性和阴性选择。

通过鉴定具有细胞表面抗原的细胞群，将cd4+t辅助细胞分类为幼稚、中枢记忆和效应细胞。cd4⁺淋巴细胞可以通过标准方法获得。在一些实施方案中，幼稚cd4⁺t淋巴细胞是cd45ro-、cd45ra⁺、cd62l⁺、cd4⁺t细胞。在一些实施方案中，中枢记忆cd4⁺细胞是cd62l⁺且cd45ro⁺。在一些实施方案中，效应cd4⁺细胞是cd62l^-且cd45ro^-。

在一个例子中，为了通过阴性选择富集cd4⁺细胞，单克隆抗体混合剂通常包括针对cd14、cd20、cd11b、cd16、hla-dr和cd8的抗体。在一些实施方案中，抗体或结合配偶体与固体支持物或基质(如磁珠或顺磁珠)结合，以允许细胞分离以用于阳性和/或阴性选择。例如，在一些实施方案中，使用免疫磁性(或亲和磁性)分开技术来分开或分离细胞和细胞群(综述于methodsinmolecularmedicine,第58卷:metastasisresearchprotocols,第2卷:cellbehaviorinvitroandinvivo,第17-25页s.a.brooks和u.schumacher编辑humanapressinc.,新泽西州托托瓦)。

在一些方面，将待分离的细胞的样品或组合物与小的可磁化或磁响应材料(如磁响应粒子或微粒，如顺磁珠(例如像dynalbeads或macs珠))一起孵育。磁响应材料(例如，粒子)通常直接或间接地附着于结合配偶体(例如，抗体)，所述结合配偶体与希望分离(例如，希望阴性地或阳性地选择)的一个细胞、多个细胞或细胞群上存在的分子(例如，表面标记)特异性结合。

在一些实施方案中，磁性粒子或珠包含与特异性结合成员(如抗体或其他结合配偶体)结合的磁响应材料。有许多在磁分离方法中使用的熟知的磁响应材料。合适的磁性粒子包括在molday,美国专利号4,452,773和在欧洲专利说明书ep452342b(将其通过引用特此并入)中描述的那些。胶体大小的粒子，如在owen美国专利号4,795,698以及liberti等人,美国专利号5,200,084中描述的那些是其他例子。

孵育通常在这样的条件下进行，由此抗体或结合配偶体或者与附着于磁性粒子或珠的此类抗体或结合配偶体特异性结合的分子(如二抗或其他试剂)与细胞表面分子(如果存在于所述样品内的细胞上的话)特异性结合。

在一些方面，将样品置于磁场中，并且具有附着于其上的磁响应或可磁化粒子的那些细胞将被吸引到磁体并与未标记的细胞分离。对于阳性选择，保留被磁铁吸引的细胞；对于阴性选择，保留未被吸引的细胞(未标记的细胞)。在一些方面，在同一选择步骤期间进行阳性和阴性选择的组合，其中保留阳性和阴性级分并进一步加工或经受另外的分离步骤。

在某些实施方案中，磁响应粒子被包被在一抗或其他结合伴侣、二抗、凝集素、酶或链霉亲和素中。在某些实施方案中，磁性粒子通过对一种或多种标记具特异性的一抗的包被而附着于细胞。在某些实施方案中，用一抗或结合配偶体标记所述细胞而不是珠，并且然后添加细胞类型特异性二抗或其他结合配偶体(例如链霉亲和素)包被的磁性粒子。在某些实施方案中，将链霉亲和素包被的磁性粒子与生物素化的一抗或二抗结合使用。

在一些实施方案中，磁响应粒子保持附着于所述细胞，所述细胞随后被孵育、培养和/或工程化；在一些方面，所述粒子保持附着于所述细胞以用于给予患者。在一些实施方案中，从所述细胞中去除可磁化或磁响应粒子。用于从细胞中去除可磁化粒子的方法是已知的，并且包括例如使用竞争性非标记抗体、可磁化粒子或与可切割接头缀合的抗体等。在一些实施方案中，可磁化粒子是可生物降解的。

在一些实施方案中，基于亲和力的选择是经由磁激活细胞分选(macs)(miltenyibiotec，加利福尼亚州奥本)。磁激活细胞分选(macs)系统能够高纯度选择附着有磁化粒子的细胞。在某些实施方案中，macs以这样的模式操作，其中在施加外部磁场之后依次洗脱非靶标和靶标种类。也就是说，附着于磁化粒子的细胞保持在适当的位置，而未附着的种类被洗脱。然后，在完成第一次洗脱步骤之后，以某种方式释放被捕获在磁场中并被阻止洗脱的种类，使得它们可以被洗脱和回收。在某些方面，所述非靶细胞被标记并从异质细胞群中耗尽。

在某些实施方案中，使用这样的系统、装置或设备进行分离或分开，所述系统、装置或设备进行所述方法的分离、细胞制备、分开、加工、孵育、培养和/或制备步骤中的一种或多种。在一些方面，所述系统用于在封闭或无菌环境中进行这些步骤中的每一个，例如以最小化错误、用户操作和/或污染。在一个例子中，所述系统是如pct公开号wo2009/072003或us20110003380a1中所述的系统。

在一些实施方案中，所述系统或设备在集成或独立系统中和/或以自动或可编程方式进行分离、加工、工程化和配制步骤中的一个或多个(例如，全部)。在一些方面，所述系统或设备包括与所述系统或设备通信的计算机和/或计算机程序，其允许用户对加工、分离、工程化和配制步骤的各个方面进行编程、控制、评估其结果和/或调整。

在一些方面，使用clinimacs系统(miltenyibiotec)进行所述分离和/或其他步骤，例如以用于在封闭和无菌系统中在临床规模水平上自动分离细胞。部件可以包括集成微计算机、磁分离单元、蠕动泵和各种夹管阀。在一些方面，集成计算机控制所述仪器的所有部件并指示所述系统以标准化顺序执行重复程序。在一些方面，磁分离单元包括可移动的永磁体和用于选择柱的支架。蠕动泵控制整个管组的流速，并与夹管阀一起确保缓冲液通过所述系统的受控流动和细胞的连续悬浮。

在一些方面，clinimacs系统使用抗体偶联的可磁化粒子，其在无菌无热原的溶液中提供。在一些实施方案中，在用磁性粒子标记细胞后，洗涤所述细胞以去除过量的粒子。然后将细胞制备袋连接到管组，所述管组又连接到含有缓冲液的袋和细胞收集袋。所述管组由预装配的无菌管(包括预柱和分离柱)组成，并且仅供一次性使用。在启动分离程序后，所述系统自动将细胞样品施加到分离柱。标记的细胞保留在柱内，而未标记的细胞通过一系列洗涤步骤去除。在一些实施方案中，用于与本文所述的方法一起使用的细胞群是未标记的并且不保留在柱中。在一些实施方案中，用于与本文所述的方法一起使用的细胞群被标记并保留在柱中。在一些实施方案中，用于与本文所述的方法一起使用的细胞群在去除磁场后从柱中洗脱，并且收集在细胞收集袋内。

在某些实施方案中，使用clinimacsprodigy系统(miltenyibiotec)进行分离和/或其他步骤。在一些方面，clinimacsprodigy系统配备有细胞加工联合体，其允许通过离心自动化洗涤和分级分离细胞。clinimacsprodigy系统还可以包括机载相机和图像识别软件，其通过辨别源细胞产物的宏观层来确定最佳的细胞分级分离终点。例如，可以将外周血自动分离成红细胞、白细胞和血浆层。clinimacsprodigy系统还可以包括集成细胞培育室，其实现细胞培养方案例如细胞分化和扩增、抗原加载和长期细胞培养。输入端口可以允许无菌移除和补充培养基，并且可以使用集成显微镜监测细胞。参见例如，klebanoff等人(2012)jimmunother.35(9):651-660，terakura等人(2012)blood.1:72-82，以及wang等人(2012)jimmunother.35(9):689-701。

在一些实施方案中，通过流式细胞术收集和富集(或耗尽)本文所述的细胞群，其中针对多种细胞表面标记染色的细胞在流体流中载携。在一些实施方案中，通过制备规模(facs)分类收集和富集(或耗尽)本文所述的细胞群。在某些实施方案中，通过使用微机电系统(mems)芯片结合基于facs的检测系统来收集和富集(或耗尽)本文所述的细胞群(参见例如，wo2010/033140，cho等人(2010)labchip10:1567-1573；和godin等人(2008)jbiophoton.1(5):355-376)。在两种情况下，细胞可以用多种标记来标记，允许以高纯度分离明确定义的t细胞亚组。

在一些实施方案中，用一种或多种可检测标记来标记抗体或结合配偶体，以促进分离供阳性和/或阴性选择。例如，分离可以基于与荧光标记的抗体的结合。在一些例子中，基于对一种或多种细胞表面标记具特异性的抗体或其他结合配偶体的结合来分离细胞在流体流中载携，如通过荧光激活细胞分选(facs)，包括制备规模(facs)和/或微机电系统(mems)芯片，例如与流式细胞检测系统组合。此类方法允许基于多种标记同时进行阳性和阴性选择。

在一些实施方案中，制备方法包括在分离、孵育和/或工程化之前或之后冷冻(例如，冷冻保存)细胞的步骤。在一些实施方案中，冷冻和后续解冻步骤去除所述细胞群中的粒细胞，并且在一定程度上去除单核细胞。在一些实施方案中，例如在洗涤步骤之后将细胞悬浮在冷冻溶液中以去除血浆和血小板。在一些方面，可以使用多种已知的冷冻溶液和参数中的任何一种。一个例子涉及使用含有20％dmso和8％人血清白蛋白(hsa)的pbs，或其他合适的细胞冷冻培养基。然后将其用培养基1:1稀释，使得dmso和hsa的最终浓度分别为10％和4％。然后将所述细胞以1°/分钟的速率冷冻至-80℃并储存在液氮储罐的气相中。

在一些实施方案中，所提供的方法包括培育、孵育、培养和/或基因工程步骤。例如，在一些实施方案中，提供了用于孵育耗尽的细胞群和培养起始组合物和/或将它们工程化的方法。

因此，在一些实施方案中，在培养起始组合物中孵育细胞群。孵育和/或工程化可以在培养容器中进行，所述培养容器是如单元、室、孔、柱、管、管组、阀、小瓶、培养皿、袋或其他用于培养或培育细胞的容器。

在一些实施方案中，在基因工程化之前或与其相连地孵育和/或培养细胞。孵育步骤可以包括培养、培育、刺激、激活和/或繁殖。在一些实施方案中，在存在刺激条件或刺激剂的情况下孵育所述组合物或细胞。这些条件包括针对以下而设计的那些条件：用于诱导群体中细胞的增殖、扩增、激活和/或存活的条件，用于模拟抗原暴露和/或用于引发细胞进行基因工程化，如以引入psma或其修饰形式和重组受体(例如car)。

条件可以包括以下中的一种或多种：特定培养基、温度、氧含量、二氧化碳含量、时间、药剂(例如，营养素、氨基酸、抗生素、离子和/或刺激因子(如细胞因子、趋化因子、抗原、结合配偶体、融合蛋白、重组可溶性受体和任何其他旨在激活细胞的药剂))。

在一些实施方案中，刺激条件或药剂包括一种或多种药剂(例如配体)，其能够激活tcr复合物的细胞内信号传导区域。在一些方面，所述药剂在t细胞中开启或启动tcr/cd3细胞内信号传导级联。此类药剂可包括抗体如对于tcr具有特异性的抗体，例如抗cd3。在一些实施方案中，刺激条件包括能够刺激共刺激受体(例如抗cd28)的一种或多种药剂(例如配体)。在一些实施方案中，这种药剂和/或配体可结合至固体支持物如珠和/或一种或多种细胞因子。任选地，扩增方法还可以包括向培养基中添加抗cd3和/或抗cd28抗体(例如，以至少约0.5ng/ml的浓度)的步骤。在一些实施方案中，刺激剂包括il-2、il-15和/或il-7。在一些方面，il-2浓度为至少约10单位/ml。

在一些方面，孵育是根据多种技术来进行，例如以下文献中所述的那些技术：授予riddell等人的美国专利号6,040,177；klebanoff等人(2012)jimmunother.35(9):651-660,terakura等人(2012)blood.1:72-82；和/或wang等人(2012)jimmunother.35(9):689-701。

在一些实施方案中，通过以下方法扩增t细胞：向培养起始组合物中加入饲养细胞(如非分裂外周血单核细胞(pbmc))(例如，使得所得细胞群含有至少约5、10、20或40种或更多种pbmc饲养细胞，以使初始群体中的每种t淋巴细胞进行扩增)；以及孵育培养物(例如，持续足以扩增t细胞数量的时间)。在一些方面，所述非分裂饲养细胞可以包含γ照射的pbmc饲养细胞。在一些实施方案中，用在约3000至3600拉德范围内的γ射线来照射所述pbmc以防止细胞分裂。在一些方面，在添加所述t细胞群之前将所述饲养细胞添加到培养基中。

在一些实施方案中，刺激条件包括适合于人t淋巴细胞生长的温度，例如至少约25摄氏度，通常为至少约30摄氏度，并且通常在或约在37摄氏度。任选地，孵育可以还包括添加非分裂的ebv变换的类淋巴母细胞(lcl)作为饲养细胞。可以用约6000至10,000拉德范围内的γ射线照射lcl。在一些方面，所述lcl饲养细胞以任何合适的量(如lcl饲养细胞与初始t淋巴细胞的比率为至少约10:1)提供。

在一些实施方案中，通过用抗原刺激幼稚或抗原特异性t淋巴细胞获得抗原特异性t细胞如抗原特异性cd4+和/或cd8+t细胞。例如，可以通过从被感染的受试者分离t细胞并在体外用相同抗原刺激所述细胞，针对巨细胞病毒抗原来产生抗原特异性t细胞系或克隆。

e.用于基因工程化的方法

用于引入基因工程化组分例如psma或其修饰形式和重组受体(例如car或tcr)的各种方法是熟知的，并且可以与所提供的方法和组合物一起使用。示例性方法包括用于转移编码多肽或受体的核酸的那些方法，包括经由病毒载体，例如逆转录病毒或慢病毒、非病毒载体或转座子(例如睡美人(sleepingbeauty)转座子系统)。基因转移的方法可以包括转导、电穿孔或导致基因转移到细胞中的其他方法。

在一些实施方案中，通过以下方式完成基因转移：首先刺激所述细胞，如通过将其与诱导应答(如增殖、存活和/或激活，例如如通过细胞因子或激活标记的表达所测量的)的刺激进行组合，然后转导激活的细胞，并且在培养物中扩增至足以用于临床应用的数量。

在一些情境下，可能需要防止刺激因子(例如，淋巴因子或细胞因子)的过表达可能潜在地导致受试者中不希望的结果或较低的疗效(如受试者中与毒性相关的因素)的可能性。因此，在一些情境下，工程化细胞包括导致细胞在体内(如在过继免疫疗法中给予时)对阴性选择易感的基因区段。例如，在一些方面，将细胞工程化，使得它们可以由于给予它们的患者的体内状况的改变而被消除。阴性选择性表型可以由赋予对所给予的药剂(例如，化合物)的敏感性的基因的插入而产生。阴性选择性基因包括单纯疱疹病毒i型胸苷激酶(hsv-itk)基因(wigler等人,cell11:223,1977)，其赋予更昔洛韦敏感性；细胞次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶(hprt)基因；细胞腺嘌呤磷酸核糖基转移酶(aprt)基因；细菌胞嘧啶脱氨酶(mullen等人,proc.natl.acad.sci.usa.89:33(1992))。

在一些实施方案中，使用重组感染性病毒粒子(例如像源自猿猴病毒40(sv40)、腺病毒、腺相关病毒(aav)的载体)将重组核酸转移至细胞中。在一些实施方案中，使用重组慢病毒载体或逆转录病毒载体(如γ-逆转录病毒载体)将重组核酸转移到t细胞中(参见例如，koste等人(2014)genetherapy2014年4月3日.doi:10.1038/gt.2014.25；carlens等人(2000)exphematol28(10):1137-46；alonso-camino等人(2013)molthernuclacids2,e93；park等人,trendsbiotechnol.2011年11月29(11):550-557。

在一些实施方案中，逆转录病毒载体具有长末端重复序列(ltr)，例如源自莫洛尼鼠白血病病毒(momlv)、骨髓增生性肉瘤病毒(mpsv)、鼠胚胎干细胞病毒(mesv)、鼠干细胞病毒(mscv)、脾病灶形成病毒(sffv)或腺相关病毒(aav)的逆转录病毒载体。大多数逆转录病毒载体源自鼠逆转录病毒。在一些实施方案中，逆转录病毒包括源自于任何禽类或哺乳动物细胞来源的那些。逆转录病毒通常是双嗜性的，这意味着它们能够感染包括人在内的若干种物种的宿主细胞。在一个实施方案中，待表达的基因替代逆转录病毒gag、pol和/或env序列。已经描述了许多说明性逆转录病毒系统(例如，美国专利号5,219,740；6,207,453；5,219,740；miller和rosman(1989)biotechniques7:980-990；miller,a.d.(1990)humangenetherapy1:5-14；scarpa等人(1991)virology180:849-852；burns等人(1993)proc.natl.acad.sci.usa90:8033-8037；以及boris-lawrie和temin(1993)cur.opin.genet.develop.3:102-109)。

慢病毒转导的方法是已知的。示例性方法描述于例如wang等人(2012)j.immunother.35(9):689-701；cooper等人(2003)blood.101:1637-1644；verhoeyen等人(2009)methodsmolbiol.506:97-114；以及cavalieri等人(2003)blood.102(2):497-505中。

在一些实施方案中，经由电穿孔将重组核酸转移到t细胞中(参见例如，chicaybam等人,(2013)plosone8(3):e60298和vantedeloo等人(2000)genetherapy7(16):1431-1437)。在一些实施方案中，通过转座将重组核酸转移到t细胞中(参见例如，manuri等人(2010)humgenether21(4):427-437；sharma等人(2013)molecthernuclacids2,e74；以及huang等人(2009)methodsmolbiol506:115-126)。在免疫细胞中引入和表达遗传物质的其他方法包括磷酸钙转染(例如，如在currentprotocolsinmolecularbiology,johnwiley&sons,newyork.n.y.中所述)、原生质体融合、阳离子脂质体介导的转染；钨粒子促进的微粒轰击(johnston,nature,346:776-777(1990))；以及磷酸锶dna共沉淀(brash等人,mol.cellbiol.,7:2031-2034(1987))。

用于转移编码重组产物的核酸的其他方法和载体是例如在国际专利申请公开号wo2014055668和美国专利号7,446,190中所述的那些。

在一些实施方案中，可以将细胞(例如t细胞)在扩增期间或之后例如用编码psma或其修饰形式和/或重组受体(例如t细胞受体(tcr)或嵌合抗原受体(car))的核酸进行转染。例如，用于引入所需多肽或受体的基因的这种转染可以用任何合适的逆转录病毒载体进行。然后可以使基因修饰的细胞群摆脱初始刺激物(例如cd3/cd28刺激物)，并随后用第二种类型的刺激物例如经由从头引入的受体进行刺激。所述第二种类型的刺激物可以包括肽/mhc分子形式的抗原刺激物、遗传引入的受体的同源(交联)配体(例如car的天然配体)或在新受体的框架内直接结合(例如通过识别受体内的恒定区)的任何配体(如抗体)。参见例如，cheadle等人,“chimericantigenreceptorsfort-cellbasedtherapy”methodsmolbiol.2012；907:645-66或barrett等人,chimericantigenreceptortherapyforcancerannualreviewofmedicine第65卷:333-347(2014)。

另外的核酸(例如，用于引入的基因)包括用于改善治疗功效的那些，如通过促进转移细胞的活力和/或功能；用于提供选择和/或评估细胞的遗传标记的基因，如以评估体内存活或定位；改善安全性的基因，例如通过使细胞在体内对阴性选择易感，如luptons.d.等人,mol.andcellbiol.,11:6(1991)和riddell等人,humangenetherapy3:319-338(1992)所述；还参见lupton等人的pct/us91/08442和pct/us94/05601的出版物，其描述了使用由将显性阳性选择性标记与阴性选择性标记融合而得到的双功能选择性融合基因。参见例如，riddell等人,美国专利号6,040,177,第14-17栏。

如上所述，在一些实施方案中，在基因工程化之前或与其相连地孵育和/或培养细胞。孵育步骤可以包括培养、培育、刺激、激活、繁殖和/或冷冻以保存(例如冷冻保存)。

ii.psma靶向分子

在一些实施方案中，psma靶向分子与本文提供的工程化细胞(例如表达psma或其修饰形式和/或重组受体(例如car)的工程化细胞)结合使用，和/或用于本文提供的方法中。在一些实施方案中，psma靶向分子能够结合psma或其修饰形式，或包含能够结合psma或其修饰形式的部分。在一些实施方案中，psma靶向分子是或还包含一种或多种治疗剂和/或一种或多种提供信号或诱导可检测的信号的部分(例如可检测的部分)。在一些实施方案中，psma靶向分子包含能够结合psma或其修饰形式的部分和治疗剂和/或提供信号或诱导可检测的信号的部分(例如可检测的部分)。

在一些实施方案中，psma靶向分子或其部分能够结合psma和/或其修饰形式，和/或能够结合psma的活性位点和/或psma的修饰形式的活性位点，和/或能够被psma和/或被psma的修饰形式切割；和/或是psma和/或其修饰形式的拮抗剂、选择性拮抗剂、反向激动剂、选择性反向激动剂、激动剂、选择性激动剂、抑制剂和/或选择性抑制剂。

在一些实施方案中，psma靶向分子能够结合提供信号或诱导可检测的信号的部分。在一些实施方案中，psma靶向分子含有治疗部分，所述治疗部分在与psma或其修饰形式结合后被激活、切割和/或释放，或在特定条件(例如，接近疾病或障碍的部位、位置或微环境的条件)的存在下，例如在肿瘤微环境(tme)中被激活、切割和/或释放。

在一些实施方案中，psma靶向分子包含能够结合psma或其修饰形式的部分。在一些实施方案中，能够结合psma或其修饰形式的部分是或包含小分子、配体、抗体或其抗原结合片段、适体、肽、纳米粒子或其缀合物。在一些实施方案中，psma靶向分子是或还包含提供信号或诱导可检测的信号的治疗剂和/或部分。在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含能够结合与治疗剂和/或部分(例如可检测部分)连接或缀合的psma或其修饰形式的部分。

在一些实施方案中，psma靶向分子是已知的并且可用于检测和/或结合psma(例如人psma)的试剂。基于低背景表达和组织特异性表达、在较晚期前列腺癌中表达增加、大的细胞外结构域靶标、人类生物相容性、可用的探针多样性、和经验证的临床实用性和内在化以及内体再循环，psma已被用作用于前列腺癌成像的靶标。已经开发了几种psma结合配体来递送前列腺癌的成像和治疗剂，这些psma结合配体包括低分子量原子核、荧光和多模式成像探针(chen等人,biochem.biophys.res.comm.2009,390(3):624-629；banerjee等人,oncotarget2011；2(12):1244-1253；还参见maurer等人(2016)naturereviewsurology13:226-235；rowe等人(2016)prostatecancerprostaticdis.19(3):223-230；mease等人,(2013)currtopmedchem.13(8):951-962)。示例性其他psma靶向分子如下所述。

在一些实施方案中，psma靶向分子提供信号或诱导可检测的信号或能够与提供信号或诱导可检测的信号的部分结合；和/或psma靶向分子是或包含提供信号或诱导可检测的信号的部分。在一些实施方案中，psma靶向分子包括已知的或可获得的与psma结合的那些，如用于治疗和/或诊断前列腺癌的那些。

在一些实施方案中，还提供了psma靶向分子，所述psma靶向分子包含能够结合psma或其修饰形式的部分和免疫调节剂。在一些实施方案中，免疫调节剂能够调节、任选地增加免疫细胞的活性或免疫应答和/或能够调节肿瘤微环境(tme)。

a.psma结合部分

1.小分子

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含配体和/或小分子。在一些实施方案中，psma靶向分子包含能够结合psma或其修饰形式的部分，其是或包含配体和/或小分子。在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含能够结合psma的活性位点或底物结合位点的小分子。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含psma和/或其修饰形式的拮抗剂、选择性拮抗剂、反向激动剂、选择性反向激动剂、激动剂、选择性激动剂、抑制剂和/或选择性抑制剂。在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含psma的抑制剂。在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含小分子、和/或低分子量分子和/或低分子量抑制剂。在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含能够结合psma或其修饰形式的部分，所述部分是小分子、治疗剂和/或可检测部分。

如上所述，psma在其细胞外结构域中拥有酶促位点，所述酶促位点切割内源性底物如n-乙酰天冬氨酰谷氨酸酯(naag)、三-α-谷氨酸肽和聚-γ-谷氨酰叶酸，并且所述酶促位点含有两个锌离子并且由如下两个口袋构成，即谷氨酸敏感口袋(s1'口袋)和非药效团口袋(s1口袋)。一些psma抑制剂含有锌结合部分和谷氨酸或谷氨酸等排物，其中所述谷氨酸或谷氨酸等排物位于s1'口袋中。非药效团口袋含有富精氨酸区域，并且可以容纳中等大小的亲脂部分。

在一些情况下，小分子psma抑制剂通常是与谷氨酸或谷氨酸等排物附接的锌结合化合物，并且分成三类支架：(1)膦酸酯-、磷酸酯-和氨基磷酸酯；(2)硫醇；和(3)脲。在一些实施方案中，支架是异羟肟酸酯。在一些实施方案中，小分子支架享有共同特征，包括：a)适合在psma活性位点的s1'结合口袋内作为谷氨酸模拟物的戊二酸；和b)在psma活性位点与催化锌原子相互作用的锌结合基团。由于其高的结合亲和力和合成简便性，已开发出基于脲的小分子(例如，基于脲的psma抑制剂)用于生物成像，例如，使用放射性核素的正电子发射断层扫描(pet)和单光子发射计算机断层扫描(spect)。

在一些实施方案中，psma靶向分子或其部分包括在例如以下文献中描述的任何一种：wo2015143029；wo2016/065142；us201013257499；us2012/0067162；us201213566849；us201214008715；us201214126296；us201313826079；us2014/0060461；us201414152864；us201414277367；us201414335055；us2015/0021233；us2015/0029504；us2015/0054937；us2015/0056914；us201514937169；us2016/0022309；us2016/0046981；us23913608；us74498208；us89753907；au2008/269094；au2009/276423；au2015/203742；ep03703745；ep2015001929；ep2015069356；ep2016069730；dobrenkov等人(2008)jnuclmed.49:1162-1170；chen等人,biochem.biophys.res.comm.2009,390(3):624-629；banerjee等人,oncotarget2011；2(12):1244-1253；banerjee等人(2011)angewchemintedengl.50(39):9167-9170；maurer等人(2016)naturereviewsurology13:226-235；rowe等人(2016)prostatecancerprostaticdis.19(3):223-230；mease等人,(2013)currtopmedchem.13(8):951-962；osborne等人,(2013)uroloncol.31(2):144-154；或barinka等人,(2008)jmolbiol.2008年3月7日；376(5):1438-1450；philippwolf(2011),prostatespecificmembraneantigenasbiomarkerandtherapeutictargetforprostatecancer,prostatecancer-diagnosticandtherapeuticadvances,philippee.spiess(编辑),intech,第81-100页。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含膦酸酯、磷酸酯、氨基磷酸酯、次膦酸酯、异羟肟酸酯、硫醇衍生物、脲、戊二酸或其衍生物中的一种或多种。

在一些实施方案中，小分子选自2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)、(氨基苯乙烯基)吡啶鎓(asp)染料、2-(3-[1-羧基-5-[(5-碘-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基]-脲基)-戊二酸(yc-vi-11)、2-[3-[1-羧基-5-(4-碘-苯甲酰氨基)-戊基]-脲基]-戊二酸(dcibzl或yc-7)、1-(3-羧基-4-(3-羟基-6-氧代-6h-呫吨-9-基)苯基氨基)-9,16,24-三氧代-1-硫氧代-2,8,17,23,25-五氮杂二十八烷-7,22,26,28-四甲酸(yc-36)、glu-nh-co-nh-lys(ahx)-hbed-cc(psma-hbed-cc)、9-(4-氟-3-[羟基甲基]丁基)鸟嘌呤(fhbg)、glu-脲-lys-(ahx)-[(hbed-cc)](psma-11)、psma-617、2-(膦酰基甲基)戊二酸、2-pmpa、氟苯甲酰氨基磷酸酯、(2s,4s)-2-氟-4-(膦酰基甲基)戊二酸(bay1075553)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-s-甲基-l-半胱氨酸(-dcmc)、euk-subkff-dotaga、2-[3-(1,3-二羧基丙基)脲基]戊二酸(dupa)、psman、n'-双[2-羟基-5-(羧基乙基)苄基]乙二胺-n,n'-二乙酸、mip-1072、mip-1095、mip-1404、mip-1405、n-[[[(1s)-1-羧基-3-甲基丁基]氨基]羰基]-l-谷氨酸(zj43)、(s)-2-(4-碘苄基膦酰基甲基)-戊二酸(gpi-18431)、2-[(3-{4-[(2-氨基-4-羟基-蝶啶-6-基甲基)-氨基]-苯甲酰氨基}-3-羧基-丙基)-羟基-磷酰基甲基]-戊二酸(mpe)、(2s,3's)-{[(3'-氨基-3'-羧基-丙基)-羟基磷酰基]甲基}-戊二酸(epe)和(2s)-2-{[(2-羧基-乙基)-羟基-磷酰基]甲基}-戊二酸(spe)。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)或n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)。在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)(一种高亲和力正电子发射配体)。

2.抗体

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，psma靶向分子包含能够结合psma或其修饰形式的部分，其是或包含抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，psma靶向分子或其部分是或包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段能够结合psma的细胞外部分的一部分。在一些实施方案中，psma靶向分子或其部分是或包含抗体或其抗原结合片段、以及治疗剂和/或可检测部分。在一些实施方案中，psma靶向分子是抗体-药物缀合物和/或放射性标记的抗体。

在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段选自j591、dfo-j591、cyt-356、j415、3/a12、3/f11、3/e7、d2b、107-1a4、ypsma-1、ypsma-2、3e6、2g7、24.4e6、gcp-02、gcp-04、gcp-05、j533、e99、1g9、3c6、4.40、026、d7-fc、d7-ch3、4d4、a5、及其抗原结合片段和衍生物，或包含cdr3、vh和/或vl，和/或竞争与psma结合或结合与任何前述相同的psma表位。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是多特异性抗体或其抗原结合片段，例如双特异性抗体，其中所述抗体的靶标之一是psma或其修饰形式。

在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包括在例如以下文献中描述的那些、或其片段、其缀合物或其衍生物：us2002/0049712；us2002/0147312；us2003/0082187；us2004/0136998；us2005/0202020；us2006/0088539；us2007/0071759；us2010/0297653；us2011/0020273；us2013/0225541；us2013/0315830；us2014/0099257；us2014/0227180；us2015/0168413；us2016/0303253；us2017/0051074；us6572856；us7476513；us8470330；us8986655；wo2006/078892；wo2010/135431；wo2014/198223；wo2015/177360；wo2016/057917；wo2016/130819；wo2016/145139；wo2016/201300；wo2017/004144；wo2017/023761；au2002/356844；au2006/204913；au2006/235421；au2006/262231；au2006/315500；au2010/325969；au2013/328619；au2015/205574；ca2353267；ep1390069；ep1520588；ep1581794；ep1599228；ep1610818；ep2906250；banerjee等人(2011)angewchemintedengl.50(39):9167-9170；maurer等人(2016)naturereviewsurology13:226-235；rowe等人(2016)prostatecancerprostaticdis.19(3):223-230；mease等人,(2013)currtopmedchem.13(8):951-962；osborne等人,(2013)uroloncol.31(2):144-154；philippwolf(2011),prostatespecificmembraneantigenasbiomarkerandtherapeutictargetforprostatecancer,prostatecancer-diagnosticandtherapeuticadvances,dr.philippee.spiess(编辑),intech,第81-100页；ruggiero等人,(2011)jnuclmed.52(10):1608-1615；liu等人,(1997)cancerresearch57:3629-3634；regino等人,(2009)currradiopharm.january；2(1):9-17；kampmeier等人(2014)ejnmmiresearch4:13；wolf等人,(2010)theprostate70:562-569；tykvart等人(2014)theprostate74:1674-1690；jin等人,(2016)emjurol.4(1):62-69以及tino等人(2000)hybridoma19(3):24957。

在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段是选自以下的放射性标记的抗体或其抗原结合片段：¹¹¹in-j591、^99mtc-j591、⁸⁹zr-j591、¹⁷⁷lu-j591、⁹⁰y-j591、⁶⁴cu-j591、⁶⁴cu-3/a12f(ab’)2、⁶⁴cu-3/a12fab、¹¹¹in-cyt356、⁹⁰y-cyt356和⁸⁹zr-dfo-j591、或其衍生物。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含选自j591-一甲基澳瑞他汀e(mmae)和a5-假单胞菌外毒素a(pe40)的抗体-药物缀合物(adc)。

3.适体

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含适体。在一些实施方案中，psma靶向分子包含能够结合psma或其修饰形式的部分，其是或包含适体。在一些实施方案中，psma靶向分子或其部分是或包含适体，所述适体能够结合psma的细胞外部分的一部分。在一些实施方案中，psma靶向分子或其部分是或包含适体以及治疗剂和/或可检测部分。在一些实施方案中，psma靶向分子是抗体-药物缀合物和/或放射性标记的抗体。

在一些实施方案中，psma靶向分子或其部分是或包含适体或其缀合物。适体是8-15kda的寡核苷酸或从组合文库分离的肽，其可以通过亲和成熟来选择以与靶分子(例如psma)特异性地结合。适体通过折叠成与靶标表面互补的独特的三维构象来实现对靶标的高亲和力和特异性。

可以结合psma或其修饰形式的示例性适体包括a9、a10、a10g、a10-3.2或szt101或其缀合物。在一些实施方案中，适体还包含纳米粒子、量子点或放射性同位素。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含与治疗剂或部分(例如可检测部分)连接或缀合的适体。例如，在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含适体-纳米粒子、适体-量子点、适体-多柔比星、适体-顺铂、a10-多柔比星、a10-shrna、a10-纳米粒子、适体-聚酰胺胺聚乙二醇(pamam-peg)、⁶⁴cu-标记的dota-、nota-和3,6,9,15-四氮杂双环[9.3.1]十五烷-1(15),11,13-三烯-s-4-(4-硝基苄基-3,6,9-三乙酸(pcta)-a10、或用生物相容性和可生物降解的聚(d,l-乳酸-共-乙醇酸)-嵌段-聚(乙二醇)共聚物(plga-b-peg)-a10配制的多西他赛胶囊化的纳米粒子。在一些实施方案中，psma靶向分子或其部分包括在例如以下文献中描述的任何一种：maurer等人(2016)naturereviewsurology13:226-235；rowe等人(2016)prostatecancerprostaticdis.19(3):223-230；mease等人,(2013)currtopmedchem.13(8):951-962；osborne等人,(2013)uroloncol.31(2):144-154；philippwolf(2011),prostatespecificmembraneantigenasbiomarkerandtherapeutictargetforprostatecancer,prostatecancer-diagnosticandtherapeuticadvances,dr.philippee.spiess(编辑),intech,第81-100页。

4.肽

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含肽。在一些实施方案中，psma靶向分子包含能够结合psma或其修饰形式的部分，其是或包含肽。在一些实施方案中，psma靶向分子或其部分是或包含肽，所述肽能够结合psma的细胞外部分的一部分。在一些实施方案中，psma靶向分子或其部分是或包含肽以及治疗剂和/或可检测部分。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含肽，例如能够结合psma的肽。能够与psma结合的示例性肽包括wqpdtahhwatl(seqidno:35)；hnaywhwppsmt(seqidno:36)；ghliplrqpsh(seqidno:37)；ytsphhsttghl(seqidno:38)；wthhhsyprpl(seqidno:39)；nsfplmlmhhhp(seqidno:40)；khmhwhppaln(seqidno:41)；sldsmspqwhad(seqidno:42)；sefihhwtppps(seqidno:43)；ngfshhaplmry(seqidno:44)；hhewthhwppp(seqidno:45)；awpenpsrrpf(seqidno:46)；agfqhhpsfyrf(seqidno:47)；kslsrhdhihhh(seqidno:48)；yrhwpidyppp(seqidno:49)；mihtnhwwaqd(seqidno:50)和qrspmmsrirlp(seqidno:51)(参见例如，us8258256)。

b.治疗剂

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含一种或多种治疗剂。在一些实施方案中，治疗剂是与疾病、障碍或病症例如肿瘤的治疗结合使用的一种治疗剂。在一些实施方案中，治疗剂可以加强或增强用过继细胞疗法(例如给予表达psma或其修饰形式的工程化细胞)的治疗效果。在一些实施方案中，psma靶向分子或其能够结合psma或其修饰形式的部分可以将治疗剂引导或靶向疾病或障碍或病症例如肿瘤的部位。在一些实施方案中，治疗剂是免疫调节剂、细胞毒性剂、抗癌剂、放射性治疗剂和/或光敏剂。

在一些实施方案中，psma靶向分子或其部分：能够结合psma和/或其修饰形式，和/或能够结合psma的活性位点和/或psma的修饰形式的活性位点，和/或能够被psma和/或被psma的修饰形式切割。在一些实施方案中，所述切割产生包含治疗剂的至少一种切割产物。

在一些实施方案中，治疗剂是或包含蛋白质、肽、核酸、小分子剂、细胞、毒素、脂质、碳水化合物或其组合，或任何其他类型的治疗剂，例如放射性治疗剂，或其任何缀合物或组合。在一些实施方案中，治疗剂是小分子、抗体或其抗原结合片段、抑制性核酸(例如sirna或shrna)、或其任何缀合物或组合。

在一些实施方案中，包含治疗剂的psma靶向分子可以通过将细胞毒性剂靶向肿瘤而用于去除或杀死靶细胞，例如肿瘤细胞。在一些实施方案中，包含治疗剂的psma靶向分子可以用于从受试者的样品或身体中去除或杀死过继转移细胞(例如表达psma或其修饰形式的工程化细胞)，例如，将细胞毒性剂靶向过继转移细胞。

1.免疫调节剂

在一些实施方案中，治疗剂是免疫调节剂(immunomodulatoryagent)(在本文中也称为“免疫调节剂(immunomodulator)”)。在一些方面，免疫调节剂是直接或间接抑制或激活人体免疫应答的物质。例如，刺激对肿瘤和/或病原体的免疫应答的免疫调节剂可以与工程化细胞结合使用。

在一些实施方案中，包含能够结合psma或其修饰形式的药剂的psma靶向分子可以含有一种或多种免疫调节剂。在一些实施方案中，所述一种或多种免疫调节剂是相同的或不同的。在一些实施方案中，psma靶向分子可以含有两种或更多种不同的免疫调节剂。

在一些实施方案中，治疗剂可以是任何免疫调节剂，所述免疫调节剂可以刺激、扩增和/或另外增强抗肿瘤免疫应答，例如通过抑制免疫抑制信号传导或增强免疫刺激信号传导。在一些实施方案中，免疫调节剂是肽、蛋白质或是小分子。在一些实施方案中，蛋白质可以是融合蛋白或重组蛋白。在一些实施方案中，免疫调节剂结合免疫靶标，例如在免疫细胞(如t细胞、b细胞或抗原呈递细胞)上表达的细胞表面受体。例如，在一些实施方案中，免疫调节剂是抗体或抗原结合抗体片段、融合蛋白、小分子或多肽。

在一些实施方案中，免疫调节剂抑制或调节免疫检查点途径。免疫系统具有参与维持自身耐受性和用于调节免疫应答的多种抑制途径。已知肿瘤可以使用某些免疫检查点途径作为免疫抗性的主要机制，特别是针对对于肿瘤抗原具有特异性的t细胞(pardoll,2012,naturereviewscancer12:252-264)。因为许多此类免疫检查点是通过配体-受体相互作用开始的，所以它们可以容易地被针对配体和/或其受体的抗体阻断。

因此，用阻断免疫检查点途径的拮抗性分子(如小分子、核酸抑制剂(例如rnai)或抗体分子)的疗法正在成为针对癌症和其他疾病的免疫疗法的有前途的途径。与大多数抗癌剂相反，检查点抑制剂不一定直接靶向肿瘤细胞，而是靶向淋巴细胞受体或其配体，以增强免疫系统的内源性抗肿瘤活性。(pardoll,2012,naturereviewscancer12:252-264)。

如本文所用，术语“免疫检查点抑制剂”是指完全或部分降低、抑制、干扰或调节一种或多种检查点蛋白的分子。检查点蛋白调节t细胞激活或功能。这些蛋白质负责t细胞应答的共刺激或抑制性相互作用。免疫检查点蛋白调节和维持自身耐受性和生理免疫应答的持续时间和幅度。

免疫检查点抑制剂包括以统计学上显著的方式阻断或抑制免疫系统的抑制途径的任何药剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂能够抑制或阻断免疫检查点分子的功能或涉及免疫检查点分子的信号传导途径。此类抑制剂可包括小分子抑制剂或可包括抗体或其抗原结合片段，其结合至并阻断或抑制免疫检查点受体配体。可能靶向阻断或抑制的例示性免疫检查点分子包括但不限于cd25、pd-1(cd279)、pd-l1(cd274、b7-h1)、pd-l2(cd273、b7-dc)、ctla-4、lag3(cd223)、tim3、4-1bb(cd137)、4-1bbl(cd137l)、gitr(tnfrsf18、aitr)、cd40、cd40l、icos、icos-l、ox40(cd134、tnfrsf4)、ox40l、cxcr2、肿瘤相关抗原(taa)、b7-h3、b7-h4、btla、hvem、gal9、b7h3、b7h4、cd28、vista、cd27、cd30、sting、a2a腺苷受体、kir、2b4(属于分子的cd2家族，并在所有nk、γδ和记忆cd8+(αβ)t细胞上表达)、cd160(也称为by55)、cgen-15049。免疫检查点抑制剂包括抗体或其抗原结合片段或其他结合蛋白，所述抗体或其抗原结合片段或其他结合蛋白结合并阻断或抑制以下中的一种或多种的活性：cd25、pd-1、pd-l1、pd-l2、ctla-4、lag3、tim3、4-1bb、4-1bbl、gitr、cd40、cd40l、icos、icos-l、ox40、ox40l、cxcr2、taa、b7-h3、b7-h4、btla、hvem、gal9、cd28、vista、cd27、cd30、sting、a2a腺苷受体、kir、2b4、cd160和cgen-15049。例示性免疫检查点抑制剂包括曲美木单抗(ctla-4阻断抗体)、抗ox40、pd-l1单克隆抗体(抗b7-h1；medi4736)、mk-3475(pd-1阻断剂)、纳武单抗(抗pd-1抗体)、ct-011(抗pd-1抗体)、by55单克隆抗体、amp224(抗pd-l1抗体)、bms-936559(抗pd-l1抗体)、mpldl3280a(抗pd-l1抗体)、msb0010718c(抗pd-l1抗体)和yervoy/伊匹单抗(抗ctla-4抗体检查点抑制剂)。在一些实施方案中，免疫检查点分子选自pd-1、pd-l1、pd-l2、ctla-4、lag-3、tim3、vista、腺苷受体或细胞外腺苷，任选地腺苷2a受体(a2ar)或腺苷2b受体(a2br)、或涉及上述任何一种的腺苷或途径。

在一些实施方案中，免疫调节剂是抗体或其抗原结合抗体片段。此类抗体的示例包括但不限于达珠单抗(daclizumab)(zenapax)、贝伐单抗(bevacizumab)巴利昔单抗(basiliximab)、伊匹单抗(ipilimumab)、纳武单抗、派姆单抗(pembrolizumab)、mpdl3280a、匹利珠单抗(pidilizumab)(ct-011)、mk-3475、bms-936559、mpdl3280a(阿替珠单抗(atezolizumab))、曲美木单抗、imp321、bms-986016、lag525、乌瑞鲁单抗(urelumab)、pf-05082566、trx518、mk-4166、达西珠单抗(dacetuzumab)(sgn-40)、鲁卡木单抗(lucatumumab)(hcd122)、sea-cd40、cp-870、cp-893、medi6469、medi6383、moxr0916、amp-224、msb0010718c(阿维鲁单抗(avelumab))、medi4736、pdr001、rhigm12b7、乌鲁库单抗(ulocuplumab)、bkt140、伐立鲁单抗(varlilumab)(cdx-1127)、argx-110、mga271、利瑞鲁单抗(lirilumab)(bms-986015、iph2101)、iph2201、argx-115、艾马珠单抗(emactuzumab)、cc-90002和mnrp1685a或其抗体结合片段。

在一些实施方案中，免疫调节剂是细胞因子。在一些实施方案中，免疫调节剂是细胞因子或者是诱导肿瘤微环境中的细胞因子表达增加的药剂。“细胞因子”意指由一个细胞群释放的作为细胞间介体作用于另一种细胞的蛋白质的通用术语。此类细胞因子的例子是淋巴因子、单核因子和传统的多肽激素。细胞因子包括生长激素，如人生长激素、n-甲硫氨酰基人生长激素和牛生长激素；甲状旁腺激素；甲状腺素；胰岛素；胰岛素原；松弛素；松弛素原；糖蛋白激素，如卵泡刺激素(fsh)、甲状腺刺激素(tsh)和黄体化激素(lh)；肝生长因子；成纤维细胞生长因子；泌乳素；胎盘催乳素；肿瘤坏死因子-α和-β；缪勒抑制物质；小鼠促性腺激素相关肽；抑制素；激活素；血管内皮生长因子；整合素；血小板生成素(tpo)；神经生长因子，如ngf-β；血小板生长因子；转化生长因子(tgf)，如tgf-α和tgf-β；胰岛素样生长因子-i和-ii；促红细胞生成素(epo)；骨诱导因子；干扰素，如干扰素-α、-β和-γ；集落刺激因子(csf)，如巨噬细胞-csf(m-csf)；粒细胞-巨噬细胞-csf(gm-csf)；和粒细胞-csf(g-csf)；白细胞介素(il)，如il-1、il-1α、il-2、il-3、il-4、il-5、il-6、il-7、il-8、il-9、il-10、il-11、il-12、il-15；肿瘤坏死因子，如tnf-α或tnf-β；以及其他多肽因子，包括lif和试剂盒配体(kl)。如本文所用，术语细胞因子包括来自天然来源或来自重组细胞培养物的蛋白质，以及天然序列细胞因子的生物活性等同物。例如，免疫调节剂是细胞因子，并且细胞因子是il-4、tnf-α、gm-csf或il-2。在一些实施方案中，细胞因子包括pdgf、tgf-β、vegf、肿瘤坏死因子-α(tnf-α)、内皮素-1或il-10。在一些实施方案中，细胞因子是il-12或il-2。在一些实施方案中，免疫调节剂可以含有一种或多种白细胞介素或其他细胞因子。例如，白细胞介素可以包括白细胞白细胞介素注射剂(multikine)，其是天然细胞因子的组合。

在一些实施方案中，免疫调节剂可以是增强肿瘤细胞免疫原性的一种物质，例如帕土匹龙(埃博霉素b)、靶向表皮生长因子受体(egfr)的单克隆抗体7a7.27、组蛋白脱乙酰化酶抑制剂(例如伏立诺他、罗米地辛、帕比司他、贝利司他(belinostat)和恩替司他(entinostat))、n3-多不饱和脂肪酸二十二碳六烯酸、蛋白酶体抑制剂(例如硼替佐米)、紫草素(紫草(lithospermumerythrorhizon)根的主要组分)和溶瘤病毒(如tvec(talimogenelaherparepvec))。在一些实施方案中，免疫调节剂激活癌症或肿瘤的免疫原性细胞死亡、例如蒽环霉素(多柔比星、米托蒽醌)、bk通道激动剂、硼替佐米、硼替佐米加丝裂霉素c加htert-ad、强心苷加非icd诱导物、环磷酰胺、gadd34/pp1抑制剂加丝裂霉素、lv-tsmac和奥沙利铂。在一些实施方案中，免疫调节剂可以是表观遗传疗法，如dna甲基转移酶抑制剂(例如，地西他滨、5-氮杂-2'-脱氧胞苷)。

例如，在一些实施方案中，免疫调节剂可以是dna甲基转移酶抑制剂，其可以调节肿瘤相关抗原(taa)的表达。taa是在肿瘤细胞中产生的抗原物质，其触发免疫应答。taa通常被肿瘤中的dna甲基化下调，以逃避免疫系统。dna甲基化的逆转恢复taa表达，从而增加肿瘤细胞的免疫原性。例如，脱甲基化剂如地西他滨(5-氮杂-2'-脱氧胞苷)可以上调肿瘤细胞中的taa表达，并增加癌细胞的免疫识别。

示例性免疫调节剂可以包括但不限于贝伐单抗、西妥昔单抗、帕尼单抗、扎鲁木单抗、尼妥珠单抗、托西莫单抗利妥昔单抗(rituxan、mabthera)、替伊莫单抗(ibritumomabtiuxetan)(zevalin)、达珠单抗(daclizumab)(zenapax)、吉妥珠单抗(gemtuzumab)(mylotarg)、阿仑单抗、cea扫描fab片段、oc125单克隆抗体、ab75705、b72.3、贝伐单抗和巴利昔单抗、纳武单抗、派姆单抗、匹利珠单抗(pidilizumab)、mk-3475、bms-936559、mpdl3280a、伊匹单抗、曲美木单抗、imp321、bms-986016、lag525、urelumab、pf-05082566、trx518、mk-4166、达西珠单抗(dacetuzumab)、鲁卡木单抗(lucatumumab)、sea-cd40、cp-870、cp-893、med16469、medi6383、medi4736、moxr0916、amp-224、pdr001、msb0010718c、rhigm12b7、乌鲁库单抗(ulocuplumab)、bkt140、伐立鲁单抗(varlilumab)(cdx-1127)、argx-110、mga271、利瑞鲁单抗(lirilumab)(bms-986015、iph2101)、iph2201、agx-115、艾马珠单抗(emactuzumab)、cc-90002和mnrp1685a，或是其抗体结合片段。

在一些实施方案中，治疗剂是调节腺苷水平和/或调节腺苷途径组分的活性或量的药剂。腺苷可以在体内起免疫调节剂的功能。例如，腺苷和一些非选择性激活腺苷受体亚型的腺苷类似物减少炎症氧化产物的嗜中性粒细胞产生(cronstein等人,ann.n.y.acad.sci.451:291,1985；roberts等人,biochem.j.,227:669,1985；schrier等人,j.immunol.137:3284,1986；cronstein等人,clinicalimmunol.immunopath.42:76,1987)。在一些情况下，细胞外腺苷或腺苷类似物的浓度可以在特定环境(例如肿瘤微环境(tme))中增加。在一些情况下，腺苷或腺苷类似物信号传导取决于缺氧或在缺氧或其调节中所涉及的因子，例如缺氧诱导型因子(hif)。在一些实施方案中，腺苷信号传导的增加可以增加细胞内camp和camp依赖性蛋白激酶，其导致抑制促炎性细胞因子产生，并且可以导致免疫抑制分子的合成和treg的发展(sitkovsky等人,cancerimmunolres(2014)2(7):598-605)。在一些实施方案中，治疗剂可以降低或逆转腺苷、腺苷类似物和/或腺苷信号传导的免疫抑制效应。在一些实施方案中，治疗剂可以降低或逆转缺氧驱动的a2-腺苷酸能t细胞免疫抑制。在一些实施方案中，治疗剂选自腺苷受体的拮抗剂、细胞外腺苷降解剂、cd39/cd73胞外酶产生腺苷的抑制剂和缺氧-hif-1α信号传导的抑制剂。在一些实施方案中，治疗剂是腺苷受体拮抗剂或激动剂。

在一些实施方案中，治疗剂可以通过细胞外腺苷的抑制剂(例如防止细胞外腺苷形成、降解细胞外腺苷、使细胞外腺苷失活和/或减少细胞外腺苷的药剂)和/或腺苷受体抑制剂(例如腺苷受体拮抗剂)抑制或降低细胞外腺苷或腺苷受体，可以增强免疫应答，如巨噬细胞、嗜中性粒细胞、粒细胞、树突细胞，t细胞和/或b细胞介导的应答。此外，gs蛋白介导的camp依赖性细胞内途径的抑制剂和腺苷受体触发的gi蛋白介导的细胞内途径的抑制剂也可以增加急性和慢性炎症。

在一些实施方案中，治疗剂是a2受体(a2r)拮抗剂。示例性a2r拮抗剂包括但不限于示例性a2r拮抗剂包括kw6002(伊曲茶碱(istradefyline))、sch58261、咖啡因、副黄嘌呤、3,7-二甲基-1-炔丙基黄嘌呤(dmpx)、8-(间氯苯乙烯基)咖啡因(csc)、msx-2、msx-3、msx-4、cgs-15943、zm-241385、sch-442416、瑞德南特(preladenant)、韦帕南特(vipadenant)(bii014)、v2006、st-1535、syn-115、psb-1115、zm241365、fsptp和靶向a2r表达的抑制性核酸(例如，sirna或shrna)或靶向a2r的任何抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，治疗剂是描述于例如以下文献中的a2r拮抗剂：ohta等人,procnatlacadsciusa(2006)103:13132-13137；jin等人,cancerres.(2010)70(6):2245-2255；leone等人,computationalandstructuralbiotechnologyjournal(2015)13:265-272；beavis等人,procnatlacadsciusa(2013)110:14711-14716；和pinna,a.,expertopininvestigdrugs(2009)18:1619-1631；sitkovsky等人,cancerimmunolres(2014)2(7):598-605；us8,080,554；us8,716,301；us20140056922；wo2008/147482；us8,883,500；us20140377240；wo02/055083；us7,141,575；us7,405,219；us8,883,500；us8,450,329和us8,987,279。

在某些实施方案中，治疗剂是向受试者给予的腺苷脱氨酶(ada)或其修饰形式，例如重组ada和/或聚乙二醇修饰的ada(ada-peg)。腺苷脱氨酶可以抑制细胞外腺苷的局部组织积累。ada-peg已用于治疗患有adascid的患者(hershfield(1995)hummutat.5:107)。在一些实施方案中，向受试者给予抑制细胞外腺苷的药剂，其包括防止或降低细胞外腺苷形成，和/或防止或降低细胞外腺苷的积累的药剂，从而消除或显著降低腺苷的免疫抑制作用。在一些实施方案中，向受试者给予这样的药剂，其特异性地抑制参与调节促炎分子的合成和/或分泌的酶和蛋白质，包括核转录因子的调节剂。抑制腺苷受体表达或gs蛋白或gi蛋白依赖性细胞内途径或camp依赖性细胞内途径的表达可以导致免疫应答的增加/增强。

在一些实施方案中，治疗剂是靶向生成或产生细胞外腺苷的胞外酶的药剂。在一些实施方案中，药剂靶向cd39和cd73胞外酶，它们共同用于生成细胞外腺苷。cd39(也称为外核苷三磷酸二磷酸水解酶)将细胞外atp(或adp)转化为5'amp。随后，cd73(也称为5’核苷酸酶)将5'amp转化为腺苷。cd39的活性可通过ndp激酶和腺苷酸激酶的作用逆转，而cd73的活性是不可逆的。cd39和cd73在肿瘤基质细胞(包括内皮细胞和treg)上表达，并且也在许多癌细胞上表达。例如，在肿瘤微环境的低氧条件下，cd39和cd73在内皮细胞上的表达增加。肿瘤缺氧可能源于血液供应不足和肿瘤血管杂乱，从而影响氧气的输送(carrollandashcroft(2005),expert.rev.mol.med.7(6):1-16)。缺氧也抑制将腺苷转化为amp的腺苷酸激酶(ak)，从而导致非常高的细胞外腺苷浓度。因此，腺苷响应于缺氧以高浓度释放，缺氧是在实体瘤中或实体瘤周围肿瘤微环境(tme)经常出现的条件。在一些实施方案中，治疗剂是抗cd39抗体或其抗原结合片段、抗cd73抗体或其抗原结合片段(例如medi9447或ty/23)、α-β-亚甲基-腺苷二磷酸(adp)、arl67156、pom-3、iph52中的一种或多种(参见例如allard等人clincancerres(2013)19(20):5626-5635；hausler等人,amjtranslres(2014)6(2):129-139；zhang,b.,cancerres.(2010)70(16):6407-6411)。

2.细胞毒性剂

在一些实施方案中，治疗剂是细胞毒性剂。在一些实施方案中，治疗剂可以杀伤特定细胞，例如被psma靶向分子靶向的细胞或在微环境中被工程化细胞和/或psma靶向分子靶向的细胞。在一些实施方案中，psma靶向分子诱导一种或多种工程化细胞和/或由重组受体特异性识别的受试者中存在的细胞或组织(例如肿瘤细胞或癌症细胞)的杀伤或破坏。

在一些实施方案中，包含作为细胞毒性剂的治疗剂的psma靶向分子可以与本文提供的工程化细胞结合使用，以例如在向受试者给予工程化细胞之后触发所述工程化细胞的自杀来去除或破坏所述工程化细胞。在一些实施方案中，psma靶向分子包含与细胞毒性剂连接或缀合的能够结合psma或其修饰形式的部分。

在一些实施方案中，可以给予包含作为细胞毒性剂的治疗剂的psma靶向分子以将所述细胞毒性剂靶向至在微环境中被工程化细胞和/或psma靶向分子靶向的受试者中存在的细胞，例如在受试者中存在的被重组受体特异性识别的细胞或组织。例如，在一些实施方案中，细胞毒性剂可以被靶向至肿瘤微环境(tme)。

在一些实施方案中，包含作为细胞毒性剂的治疗剂的psma靶向分子的给予不会或基本上不会诱导健康组织或健康细胞、不含工程化细胞和/或不表达所述抗原的细胞或组织的杀伤或破坏。

在一些情况下，细胞毒性剂可以是毒素或放射性金属。其他细胞毒性剂包括但不限于细胞毒性组分(例如，化学治疗药物如抗有丝分裂剂(例如长春地辛)、抗叶酸剂、烷化剂(例如替莫唑胺))、细菌毒素、蓖麻毒素、抗病毒剂、放射性同位素、放射性金属)。例如，当不需要重组受体的活性时，包含细胞毒性剂的这种psma靶向分子可以用于特异性杀伤工程化细胞或使工程化细胞失能。在其他实施方案中，包含细胞毒性剂的psma靶向分子可以用于靶向参与疾病或障碍或病症的细胞，例如肿瘤或癌症细胞。

在一些实施方案中，细胞毒性试剂是细菌毒素，所述细菌毒素属于细菌毒素的主要类别(称为ab毒素)，其使用将酶(a单元)活跃地转移到细胞中的转运蛋白(b或结合单元)。ab毒素的例子包括肉毒杆菌神经毒素、炭疽毒素、白喉毒素、志贺毒素、志贺样毒素、外毒素a和霍乱毒素。由于所有这些毒素之间的类似作用机制，所有这些毒素都被认为在本发明的各个方面中起作用。这些和各种其他毒素的a和b组分是熟知的。

细菌毒素通常具有两个功能不同的部分，称为a和b。“a”组分通常是“活性”部分，并且“b”组分通常是“结合”部分。因此，a部分或组分含有催化活性，而b部分或组分拥有将a部分细胞质递送到靶细胞中所需的决定簇。这些递送决定簇包括受体结合活性，并且通常但不总是包括膜穿透活性。许多细菌毒素如白喉毒素在单一多肽内含有两个部分。相比之下，炭疽毒素是所谓的二元毒素的成员，这是a和b功能位于不同的蛋白质中的一种类别。虽然是不同的，但是具有a和b功能的蛋白质在细胞中毒期间相互作用。炭疽毒素使用单一b部分(保护性抗原(pa；83kda))来将两个替代性a部分(水肿因子(ef；89kda)和致死因子(lf；89kda))递送到细胞质中(关于细菌毒素的例子，参见国际专利申请公开号wo2012096926)。

在一些方面，所述毒素是肽毒素、蓖麻毒素a链毒素、相思豆毒素a链、白喉毒素(dt)a链、假单胞菌外毒素、志贺毒素a链、白树毒素、苦瓜毒蛋白(momordin)、美洲商陆抗病毒蛋白、皂草素、天花粉蛋白、气单胞菌溶素原(proaerolysin)或大麦毒素。在一些实施方案中，所述肽毒素包含seqidno:34所示的氨基酸序列。

在一些实施方案中，示例性细胞毒性剂包括例如cpx-351(celatorpharmaceuticals)、阿糖胞苷、道诺霉素、vosaroxin(sunesispharmaceuticals)、沙帕他滨(cyclacelpharmaceuticals)、伊达比星或米托蒽醌。在一些实施方案中，细胞毒性剂是低甲基化剂，例如dna甲基转移酶抑制剂，例如阿扎胞苷或地西他滨。

3.抗癌剂

在一些实施方案中，治疗剂是抗癌剂。在一些实施方案中，抗癌剂可以包括其用途可以减少、阻止或预防受试者中的癌症的任何药剂。在一些实施方案中，抗癌剂包括单独或与其他化合物组合使用的任何药剂，所述药剂可以减轻、减少、改善、预防与肿瘤和癌症相关的临床症状或诊断标记、或置于或维持在与肿瘤和癌症相关的临床症状或诊断标记的缓解状态，并且可以用于本文提供的组合和组合物中。在一些实施方案中，抗癌剂是这样一种抗癌剂：其治疗效果通常与抗癌剂向肿瘤微环境或肿瘤空间中的渗透或递送相关。

在一些实施方案中，抗癌剂是烷化剂、铂药物、抗代谢药、抗肿瘤抗生素、拓扑异构酶抑制剂、有丝分裂抑制剂、皮质类固醇、蛋白酶体抑制剂、激酶抑制剂、组蛋白-脱乙酰化酶抑制剂、抗肿瘤剂、或抗体或其抗原结合抗体片段、或其组合。在一些实施方案中，抗癌剂是肽、蛋白质或小分子药物。

在一些实施方案中，抗癌剂是5-氟尿嘧啶/甲酰四氢叶酸、奥沙利铂、伊立替康、瑞格非尼、ziv-afibercept、卡培他滨、顺铂、紫杉醇、拓扑替康、卡铂、吉西他滨、多西他赛、5-fu、异环磷酰胺、丝裂霉素、培美曲塞、长春瑞滨、卡莫司汀(carmustinewager)、替莫唑胺、甲氨蝶呤、卡培他滨(capacitabine)、拉帕替尼、依托泊苷、达拉菲尼、维莫非尼、脂质体阿糖胞苷、阿糖胞苷、干扰素α、埃罗替尼、长春新碱、环磷酰胺、lomusine、甲基苄肼、舒尼替尼、生长抑素(somastostatin)、多柔比星、peg化脂质体胶囊化多柔比星、表柔比星、艾瑞布林、结合白蛋白的紫杉醇、伊沙匹隆、复方新诺明(cotrimoxazole)、紫杉烷、长春碱、替西罗莫司(temsirolimus)、替莫唑胺、苯达莫司汀、口服依托泊苷、依维莫司、奥曲肽、兰瑞肽(lanredtide)、达卡巴嗪、美司钠、帕唑帕尼、艾瑞布林、伊马替尼、瑞格非尼、索拉非尼、尼罗替尼、达沙替尼(dasantinib)、塞来昔布、他莫昔芬、托瑞米芬、更生霉素、西罗莫司、克唑替尼、色瑞替尼(certinib)、恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、米托蒽醌、卡巴他赛、氟嘧啶、奥沙利铂、亚叶酸(leucovorin)、阿法替尼、赛立替尼(ceritinib)、吉非替尼、卡博替尼、oxoliplatin或极光嘧啶(auroropyrimidine)。

在一些实施方案中，抗癌剂是抗体或抗原结合抗体片段。在一些实施方案中，抗癌剂可以是以下中的任何一种或多种：贝伐单抗、西妥昔单抗、帕尼单抗、雷莫芦单抗、伊匹单抗、利妥昔单抗、曲妥珠单抗、曲妥珠单抗-美坦偶联物(ado-trastuzumabemtansine)、帕妥珠单抗、纳武单抗、拉帕替尼、达拉菲尼、维莫非尼、埃罗替尼、舒尼替尼、帕唑帕尼、伊马替尼、瑞格非尼、索拉非尼、尼罗替尼、达沙替尼(dasantinib)、塞来昔布、克唑替尼、色瑞替尼(certinib)、阿法替尼、阿西替尼、贝伐单抗、博舒替尼、卡博替尼、阿法替尼、吉非替尼、替西罗莫司、依维莫司、西罗莫司、依鲁替尼、伊马替尼、乐伐替尼、奥拉帕尼、帕博西尼、鲁索替尼、曲美替尼、凡德他尼或vismodegib、或其抗原结合抗体片段。

在一些实施方案中，抗癌剂是烷化剂。烷化剂是通过与核酸形成共价键并抑制dna合成而直接破坏dna的化合物。示例性烷化剂包括但不限于氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安和噻替派、以及亚硝基脲烷化剂如卡莫司汀和洛莫司汀。

在一些实施方案中，抗癌剂是铂药物。铂药物与dna结合并引起dna交联，这最终触发细胞凋亡。示例性铂药物包括但不限于顺铂、卡铂、奥沙利铂、沙铂(satraplatin)、吡铂、奈达铂、三铂(triplatin)和脂铂(lipoplatin)。

在一些实施方案中，抗癌剂是抗代谢药。抗代谢药通过取代正常的rna和dna结构单元来干扰dna和rna生长。当细胞的染色体被复制时，这些药剂在s期损害细胞。在一些情况下，抗代谢药可以用于治疗白血病、乳腺癌、卵巢癌和肠道癌、以及其他类型的癌症。示例性抗代谢药包括但不限于5-氟尿嘧啶(5-fu)、6-巯基嘌呤(6-mp)、卡培他滨阿糖胞苷氟尿苷、氟达拉滨、吉西他滨羟基脲、甲氨蝶呤和培美曲塞

在一些实施方案中，抗癌剂是抗肿瘤抗生素。抗肿瘤抗生素通过改变癌细胞内部的dna起作用以阻止所述细胞生长和繁殖。蒽环类药物是干扰参与dna复制的酶的抗肿瘤抗生素。这些药物通常在细胞周期的所有阶段起作用。它们可以广泛用于各种癌症。示例性蒽环类药物包括但不限于道诺霉素、多柔比星、表柔比星和伊达比星。其他抗肿瘤抗生素包括更生霉素、博来霉素、丝裂霉素c和米托蒽醌。

在一些实施方案中，抗癌剂是拓扑异构酶抑制剂。这些药物干扰称为拓扑异构酶的酶，所述酶帮助分离dna链，因此它们可以在s期中复制。拓扑异构酶抑制剂可以用于治疗某些白血病、以及肺癌、卵巢癌、胃肠癌和其他癌症。示例性拓扑异构酶抑制剂包括但不限于多柔比星、拓扑替康、伊立替康(cpt-11)、依托泊苷(vp-16)、替尼泊苷和米托蒽醌。

在一些实施方案中，抗癌剂是有丝分裂抑制剂。有丝分裂抑制剂通常是植物生物碱和源自天然植物产品的其他化合物。它们通过停止细胞周期的m期中的有丝分裂起作用，但是在一些情况下，可以通过阻止酶产生细胞繁殖所需的蛋白质在所有阶段损害细胞。示例性有丝分裂抑制剂包括但不限于紫杉醇多西他赛伊沙匹隆长春碱长春新碱长春瑞滨和雌莫司汀

在一些实施方案中，抗癌剂是皮质类固醇。皮质类固醇(通常简称为类固醇)是天然激素和激素样药物，可用于治疗多种类型的癌症。皮质类固醇也可以在化学疗法之前用于帮助预防变应性反应，以及在化学疗法期间和之后用于帮助预防恶心和呕吐。示例性皮质类固醇包括但不限于泼尼松、甲基强的松龙和地塞米松

在一些实施方案中，抗癌剂是另一种类型的化学疗法药物，如蛋白体抑制剂、激酶抑制剂或组蛋白-脱乙酰化酶抑制剂。在一些实施方案中，治疗剂包括蒽环类药物(例如多柔比星，如脂质体多柔比星)；长春花生物碱(例如长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨)；烷化剂(例如环磷酰胺、达卡巴嗪(decarbazine)、美法仑、异环磷酰胺、替莫唑胺)；免疫细胞抗体(例如阿仑单抗、吉妥珠单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗)；抗代谢药(包括例如叶酸拮抗剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物和腺苷脱氨酶抑制剂如氟达拉滨)；tnfr糖皮质激素诱导的tnfr相关蛋白(gitr)激动剂；蛋白酶体抑制剂(例如阿克拉霉素a、胶霉毒素或硼替佐米)；或免疫调节剂，如沙利度胺或沙利度胺衍生物(例如来那度胺)。

4.放射性治疗剂

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含放射性治疗剂。在一些实施方案中，治疗剂是放射性治疗剂和/或含有放射性同位素、放射性金属和/或放射性核素。在一些实施方案中，含有放射性同位素、放射性金属和/或放射性核素的治疗剂也可以用于诊断以及放射性疗法。示例性放射性同位素、放射性金属和/或放射性核素包括¹⁰³pd、¹⁰⁵rh、¹⁰⁸ag、¹¹¹in、^117msn、¹¹c、¹²³i、¹²⁴i、¹²⁵i、¹³¹i、¹³¹cs、¹³³xe、¹³⁷cs、¹⁴⁹pm、¹⁵³sm、¹⁶⁵dy、¹⁶⁶ho、¹⁶⁹er、¹⁶⁹yb、¹⁷⁷lu、¹⁷⁷yb、¹⁸⁶re、¹⁸⁸re、¹⁸f、¹⁹²ir、²⁰¹t1、²¹⁰po、²¹¹at、²¹²bi、²¹²pb、²¹³bi、²²³ra、⁴⁷sc、⁵¹cr、⁵⁵co、⁶⁰co、⁶⁰cu、⁶¹cu、⁶²cu、⁶⁴cu、⁶⁶ga、⁶⁷cu、⁶⁷ga、⁶⁸ga、⁶⁸ge、⁷⁵se、⁸²rb、⁸⁶y、⁸⁷y、⁸⁹sr、⁸⁹zr、⁹⁰y和^99mtc。

在一些实施方案中，放射性治疗剂包括为强β发射体的放射性同位素、放射性金属和/或放射性核素。在一些实施方案中，放射性治疗剂包含¹⁷⁷lu(其是还通过单光子发射而衰减并且可以用伽玛相机进行成像的一种发射β粒子的放射性核素)或⁶⁸ga。在一些实施方案中，psma靶向分子包含¹⁷⁷lu和/或⁶⁸ga。

在一些实施方案中，psma靶向分子是放射性标记的抗体(例如¹⁷⁷lu-j591)、或放射性配体(例如¹⁷⁷lu-dkfz-617)。可以包含在psma靶向分子中的其他示例性放射性治疗剂包括在例如以下文献中描述的那些：maurer等人(2016)naturereviewsurology13:226-235；rowe等人(2016)prostatecancerprostaticdis.19(3):223-230；mease等人,(2013)currtopmedchem.13(8):951-962。

5.光敏剂

在一些实施方案中，治疗剂包含光敏剂。光敏剂包括可以被特定波长的光激发的化学化合物。在一些实施方案中，借助于包含为光敏剂的治疗剂的psma靶向分子的结合，光敏剂和光动力疗法(pdt)的作用可以定向或靶向至特定的细胞、部位、位置或微环境。在一些实施方案中，光敏剂包含焦脱镁叶绿酸-a(ppa)或yc-9(参见例如，chen等人(2016)jphotochemphotobiolb167:111-116；liu等人(2010)cancerlett,296(1):106-112；liu等人(2009)theprostate69(6):585-594；liu等人(2010)intjoncol、36(4):777-784)。

c.可检测的部分

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含提供信号或诱导可检测的信号的一个或多个部分。例如，在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含可检测的部分。在一些实施方案中，psma靶向分子能够结合提供信号或诱导可检测的信号的一个或多个部分，例如可检测的部分。在一些实施方案中，psma靶向分子与可检测的部分连接，或能够产生可检测的信号。在一些实施方案中，包含部分的psma靶向分子能够在结合psma或其修饰形式后被切割，或在肿瘤微环境(tme)中存在的一种或多种条件或因子的存在下被切割，其中切割导致包含所述部分的至少一种切割产物和/或是发荧光的和/或放射性的。

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含成像探针、检测试剂、成像模式或可检测标记。在一些实施方案中，检测试剂包含放射性配体。在一些实施方案中，成像探针、检测试剂、成像模式或可检测标记包含放射性同位素、生物发光化合物、化学发光化合物、荧光化合物、发色化合物、量子点、纳米粒子、金属螯合物、酶、氧化铁纳米粒子或用于通过x射线、ct扫描、mri扫描、pet扫描、超声、流式细胞仪、近红外成像系统或其他成像模式检测的其他已知成像剂(参见例如，yu等人,theranostics(2012)2:3)。

在一些实施方案中，所述部分(例如可检测的部分)包含放射性同位素、生物发光化合物、化学发光化合物、荧光化合物、发色化合物、量子点、纳米粒子、金属螯合物或酶。在一些实施方案中，psma靶向分子包含成像探针或检测试剂，所述成像探针或检测试剂任选地是放射性配体。在一些情形中，可检测的部分含有荧光蛋白或荧光标记或荧光团。在一些实施方案中，结合分子与成像模式缀合。

在一些实施方案中，可检测的部分包含选自以下的荧光团：alexa488或相关荧光团；alexa647或相关荧光团；alexa680或700或相关荧光团；amcyan或bdhorizonv500或相关荧光团；apc或alexa647或相关荧光团；apc或相关荧光团；apc-cy7或apc-h7或相关荧光团；bdhorizonpe-cf594或相关荧光团；bdhorizonv450或相关荧光团；brilliantviolet41或相关荧光团；fitc或相关荧光团；pe或相关荧光团；pe-cy7或相关荧光团；percp-cy5.5或相关荧光团；pe-texas或相关荧光团。

示例性标记包括放射性核素(例如¹²⁵i、¹³¹i、³⁵s、³h、或³²p和/或铬(⁵¹cr)、钴(⁵⁷co)、氟(¹⁸f)、钆(¹⁵³gd、¹⁵⁹gd)、锗(⁶⁸ge)、钬(¹⁶⁶ho)、铟(¹¹⁵in、¹¹³in、¹¹²in、¹¹¹in)、碘(¹²⁵i、¹²³i、¹²¹i)、镧(¹⁴⁰la)、镥(¹⁷⁷lu)、锰(⁵⁴mn)、钼(⁹⁹mo)、钯(¹⁰³pd)、磷(³²p)、镨(¹⁴²pr)、钷(¹⁴⁹pm)、铼(186re、188re)、铑(105rh)、钌(97ru)、钐(¹⁵³sm)、钪(⁴⁷sc)、硒(⁷⁵se)、(⁸⁵sr)、硫(³⁵s)、锝(⁹⁹tc)、铊(²⁰¹ti)、锡(¹¹³sn、¹¹⁷sn)、氚(3h)、氙(¹³³xe)、镱(¹⁶⁹yb、¹⁷⁵yb)、钇(⁹⁰y)。在一些实施方案中，psma靶向分子包含放射性同位素、放射性金属和/或放射性核素，其任选地选自¹⁰³pd、¹⁰⁵rh、¹⁰⁸ag、¹¹¹in、^117msn、¹¹c、¹²³i、¹²⁴i、¹²⁵i、¹³¹i、¹³¹cs、¹³³xe、¹³⁷cs、¹⁴⁹pm、¹⁵³sm、¹⁶⁵dy、¹⁶⁶ho、¹⁶⁹er、¹⁶⁹yb、¹⁷⁷lu、¹⁷⁷yb、¹⁸⁶re、¹⁸⁸re、¹⁸f、¹⁹²ir、²⁰¹t1、²¹⁰po、²¹¹at、²¹²bi、²¹²pb、²¹³bi、²²³ra、⁴⁷sc、⁵¹cr、⁵⁵co、⁶⁰co、⁶⁰cu、⁶¹cu、⁶²cu、⁶⁴cu、⁶⁶ga、⁶⁷cu、⁶⁷ga、⁶⁸ga、⁶⁸ge、⁷⁵se、⁸²rb、⁸⁶y、⁸⁷y、⁸⁹sr、⁸⁹zr、⁹⁰y和^99mtc。

在一些实施方案中，示例性可检测的部分或标记包括各种酶、辅基、荧光材料、发光材料、生物发光材料和放射性材料。合适的酶的例子包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、萤光素酶或乙酰胆碱酯酶。合适的辅基复合物的例子包括链霉亲和素/生物素和抗生物素蛋白/生物素。合适的荧光材料的例子包括伞形酮、荧光素、荧光素异硫氰酸盐、罗丹明、二氯三嗪基氨基荧光素、丹磺酰氯、藻红蛋白、gfp或bfp。发光材料的例子包括鲁米诺和量子点(qdot^tm纳米粒子，由quantumdotcorporation,paloalto,calif.供应)。生物发光材料的例子包括萤光素酶、萤光素和水母发光蛋白。在一些实施方案中，示例性可检测的部分或标记包括发光蛋白或生物发光蛋白，所述发光蛋白或生物发光蛋白可以是可检测的并且可以在视觉上或通过使用分光光度计、发光计、荧光计或其他相关方法监测。在一些实施方案中，报告子是可检测的部分，例如产生生物发光的酶，例如可以转化发射光的底物的酶，例如萤光素酶或其变体。产生生物发光的发光蛋白或酶的非限制性例子包括例如，萤光素酶、荧光蛋白(如红色、蓝色和绿色荧光蛋白)(参见例如，美国专利号6,232,107，其提供了来自海肾(renilla)物种和其他物种的gfp)、来自大肠杆菌(e.coli)的lacz基因、碱性磷酸酶、分泌的胚胎碱性磷酸酶(seap)、氯霉素乙酰基转移酶(cat)。示例性发光报告基因包括萤光素酶(luc)、β-半乳糖苷酶、氯霉素乙酰转移酶(cat)、β-葡萄糖醛酸酶(gus)、和荧光蛋白及其变体，例如绿色荧光蛋白(gfp)、增强型绿色荧光蛋白(egfp)(例如超折叠gfp(sfgfp))、红色荧光蛋白(rfp)(例如tdtomato、mcherry、mstrawberry、asred2、dsred或dsred2)、青色荧光蛋白(cfp)、蓝绿色荧光蛋白(bfp)、增强型蓝色荧光蛋白(ebfp)和黄色荧光蛋白(yfp)及其变体，包括荧光蛋白的物种变体、单体变体以及密码子优化型和/或增强型变体。萤光素酶及其变体可以包括来自以下物种的萤光素酶及其变体(包括密码子优化的和/或增强的变体)：萤火虫(firefly或photinuspyralis)、海肾(动物海肾(renillareniformis))、发光杆菌属物种(费氏弧菌(vibriofischeri)、哈维弧菌(vibriohaweyi)和哈氏弧菌(vibrioharveyi))、鞭毛藻类、海洋桡足类(细长长腹水蚤(metridialonga))、深海虾(刺虾属(oplophorus))和鬼火蘑菇(jack-o-lanternmushroom)(奥尔类脐菇(omphalotusolearius))。在一些实施方案中，报告子分子是红色荧光蛋白(rfp)，任选地tdtomato。

d.组分的连接

在一些实施方案中，psma靶向分子包含能够结合psma或其修饰形式的部分和治疗剂和/或提供信号或诱导可检测的信号的部分(例如可检测的部分)。在一些实施方案中，psma靶向分子还包含治疗剂，并且所述治疗剂任选地经由接头直接或间接地连接至能够结合psma或其修饰形式的psma靶向分子或其部分。在一些实施方案中，psma靶向分子还包含提供信号或诱导可检测的信号的部分，并且所述部分任选地经由接头直接或间接地连接至能够结合psma或其修饰形式的psma靶向分子或其部分。

在一些实施方案中，psma靶向分子能够例如在与psma或其修饰形式结合后和/或在特定条件的存在下被切割。在一些实施方案中，psma靶向分子的组分(例如其一部分)能够与psma结合，并且所述治疗剂和/或提供信号或诱导可检测的信号的所述部分被连接，并且所述连接能够例如在与psma或其修饰形式结合后和/或在特定条件的存在下被切割。在一些实施方案中，组分经由接头被间接地连接，并且所述接头能够例如在与psma或其修饰形式结合后和/或在特定条件的存在下被切割。

在一些实施方案中，psma靶向分子或其部分：能够结合psma和/或其修饰形式，和/或能够结合psma的活性位点和/或psma的修饰形式的活性位点，和/或能够被psma和/或被psma的修饰形式切割。

在一些实施方案中，能够结合psma或其修饰形式的部分与治疗剂和/或部分(例如可检测的部分)之间的连接可以在特定条件下被切割或释放。在一些实施方案中，psma靶向分子能够在结合psma或其修饰形式后被切割，或在肿瘤微环境(tme)中存在的一种或多种条件或因子的存在下被切割，从而产生包含治疗剂和/或部分(例如可检测的部分)的至少一种切割产物。在一些实施方案中，切割激活治疗剂和/或从能够结合psma或其修饰形式的部分释放治疗剂，从而允许将药剂靶向和/或递送至部位、位置或微环境。在一些实施方案中，包含部分的psma靶向分子能够在结合psma或其修饰形式后被切割，或在肿瘤微环境(tme)中存在的一种或多种条件或因子的存在下被切割，其中切割导致包含所述部分的至少一种切割产物和/或是发荧光的和/或放射性的。

在一些实施方案中，接头是肽或多肽，或者是化学接头。在一些实施方案中，接头是可释放的接头或可切割的接头。

在一些实施方案中，接头能够在psma或其修饰形式被psma靶向分子结合后被切割，其中切割产生包含治疗剂和/或部分(例如可检测的部分)的至少一种切割产物。在一些实施方案中，可释放的接头或可切割的接头在肿瘤微环境(tme)中存在的一种或多种条件或因子的存在下被释放或切割，其中切割产生包含治疗剂和/或部分的至少一种切割产物和/或是发荧光的和/或放射性的。

在一些实施方案中，本文提供的psma靶向分子的组分，其任选地可以是或包含任选地经由接头直接或间接地连接的治疗剂或部分(例如可检测的部分)。在一些实施方案中，连接是共价的或非共价的。

在一些实施方案中，连接或附接包括间接连接，例如通过接头、结合部分或结构域或反应性基团。在一些实施方案中，连接包括直接相互作用的psma靶向分子和/或治疗剂和/或可检测的部分。在其他实施方案中，将psma靶向分子的一个或两个或全部组分连接至一个或多个接头，并且例如在附接至一个分子的接头与另一个分子之间、或在两个接头(每个接头附接至psma靶向分子和/或治疗剂和/或可检测部分)之间的相互作用是间接的。在一些实施方案中，靶向分子、psma靶向分子和/或治疗剂和/或可检测的部分与其他组分非共价地连接或缔合。在一些例子中，非共价相互作用包括例如，静电相互作用、范德华力、疏水性相互作用、π效应、离子相互作用、氢键、卤键和/或其组合、或取决于一个或多个力的任何相互作用。在一些实施方案中，靶向分子、psma靶向分子和/或治疗剂和/或可检测的部分使用非共价分子相互作用或使用模仿非共价分子相互作用的相互作用来连接，所述非共价分子相互作用例如为配体-受体相互作用、抗体-抗原相互作用、抗生物素蛋白-生物素相互作用、链霉亲和素-生物素相互作用、组氨酸-二价金属离子相互作用(例如，ni、co、cu、fe)、多聚化(例如二聚化)结构域之间的相互作用、谷胱甘肽s-转移酶(gst)-谷胱甘肽相互作用和/或其任何组合。

在一些实施方案中，psma靶向分子和/或治疗剂和/或可检测的部分经由接头间接地连接。例如，接头可以是肽、多肽或化学接头。在一些方面，各种肽接头、多肽接头和化学接头可以用于psma靶向分子中。例如，接头可以是肽接头或可切割的肽接头。在一些实施方案中，接头是共价接头，其中所述共价连接是直链的或支链的、环状的或杂环的、饱和的或不饱和的，具有例如选自c、n、p、o和s的1-60个原子。在一些实施方案中，所述连接(例如化学连接)可以含有醚、硫醚、胺、酯、氨基甲酸酯、脲、硫脲、氧基或酰胺键的任何组合。在一些实施方案中，所述连接(例如化学连接)可以包括单、双、三或芳香族碳-碳键；磷-氧、磷-硫、氮-氮、氮-氧、氮-铂键；或芳香族或杂芳香族键。例如，在一些实施方案中，接头可以是具有反应性或可激活基团的接头，所述接头能够在所述接头与要连接的组分之间形成键。在一些实施方案中，接头含有反应性基团。

在一些实施方案中，psma靶向分子经由可释放或可切割的接头连接至治疗剂和/或可检测的部分。在一些实施方案中，接头是不可切割的。在一些实施方案中，接头的释放或切割允许治疗剂从psma靶向分子释放。因此，借助于psma靶向分子结合例如在工程化细胞上、在疾病、障碍或病症的微环境中的表面表达的psma或其修饰形式，可以将治疗剂直接靶向或递送至涉及疾病或病症的细胞和/或释放到疾病、障碍或病症的微环境中。

在一些实施方案中，接头能够在psma或其修饰形式被psma靶向分子结合后被切割，其中切割产生包含治疗剂的至少一种切割产物。如上所述，psma展现谷氨酸羧肽酶活性和叶酸水解酶活性。可以利用psma的酶促活性来切割接头，例如连接psma靶向分子和/或治疗剂和/或可检测的部分的接头。在一些实施方案中，psma对接头的切割可以产生一种或多种切割产物，其中所述切割产物可以包含治疗剂或可检测的部分如荧光或放射性部分(参见例如，wo2015143029)。例如，在一些实施方案中，接头可以含有α-连接的或γ-连接的谷氨酸或天冬氨酸，并且可以在与psma结合后被切割。

如本文所用，术语“可释放的接头”或“可切割的接头”是指包括在生理条件下可以被破坏的至少一个键(例如，ph不稳定、酸不稳定、氧化不稳定或酶不稳定的键)的接头。导致化学键的破坏的生理条件可以包括标准的化学水解反应，所述化学水解反应在例如生理ph下发生，或者由于特定的微环境(例如，病变的微环境，如肿瘤微环境(tme))中存在的特定条件而发生。

在一些实施方案中，可释放的接头或可切割的接头在疾病、障碍或病症的微环境中被释放或切割。在一些实施方案中，所述疾病、障碍或病症与特定的微环境或生理条件相关。例如，在一些实施方案中，所述疾病、障碍或病症是肿瘤，并且可释放的接头或可切割的接头例如在酸性或低氧条件下在肿瘤微环境(tme)中被释放或切割。在一些实施方案中，在肿瘤微环境(tme)中存在的一种或多种条件或因子的存在下，其中切割产生包含治疗剂的至少一种切割产物。在一些实施方案中，存在于肿瘤微环境(tme)中的一种或多种条件或因子包含基质金属蛋白酶(mmp)、低氧条件或酸性条件。

可以与本文提供的细胞、组合物和方法结合使用的多种示例性接头包括在wo2004-010957、美国公开号20060074008、20050238649和20060024317中描述的那些。

在一些实施方案中，可释放的接头或可切割的接头在低氧条件或酸性条件下被释放或切割。在一些实施方案中，tme中的条件是酸性的或低氧的。在一些实施方案中，接头在缺氧条件下是酸不稳定的或可切割的。在一些实施方案中，所述可切割的接头在酸性条件下是可切割的，并且所述可切割的接头包含一个或多个腙、半卡巴腙、胺苯硫脲、顺式-乌头酰胺、原酸酯、乙缩醛、缩酮、4-(4′-乙酰苯氧基)丁酸或硫醚连接。在一些实施方案中，可切割的接头在缺氧条件下是可切割的，并且所述接头包含一个或多个二硫化物连接。

在一些实施方案中，接头可被在病变的微环境中存在的切割剂切割。接头可以是例如被肽酶或蛋白酶切割的肽基接头。例如，可释放的接头或可切割的接头被存在于tme中的基质金属蛋白酶(mmp)释放或切割。在一些实施方案中，可切割的接头包含氨基酸pro-leu-gly-leu-trp-ala的序列(如seqidno:18所示)。在一些实施方案中，接头可被在病变的微环境中过表达的切割剂切割。在一些实施方案中，示例性接头包括至少两个氨基酸长或至少三个氨基酸长的肽基接头。示例性接头包括phe-leu接头、gly-phe-leu-gly接头(seqidno:33)、val-cit接头或phe-lys接头(参见例如，美国专利6,214,345)。此类接头的其他例子在例如美国专利号6,214,345和lu等人(2016)int.j.mol.sci.17(4):561中有描述。在一些实施方案中，接头是可被在肿瘤间质中过表达的酶(如β-葡萄糖醛酸酶)切割的接头。在一些实施方案中，接头是β-葡糖苷酸接头。

在其他实施方案中，可切割的接头是ph敏感的，即，在某些ph值下对水解敏感。通常，ph敏感的接头在酸性条件(例如病变的微环境)下可水解。例如，可以使用在酸性环境中可水解的酸不稳定接头，例如腙、半卡巴腙、胺苯硫脲、顺式-乌头酰胺、原酸酯、乙缩醛或缩酮连接。在一些实施方案中，示例性接头包括在例如以下文献中描述的那些：美国专利号5,122,368；5,824,805；5,622,929；dubowchik和walker,1999,pharm.therapeutics83:67-123；neville等人,1989,biol.chem.264:14653-14661。此类接头在中性ph条件(如在血液中的那些)下相对稳定，但是在酸性条件下不稳定。

在某些实施方案中，可水解的接头是硫醚接头(例如，经由酰基腙键附接至治疗剂的硫醚)(参见例如，美国专利号5,622,929)。

在又其他实施方案中，接头在还原条件下是可切割的(例如二硫化物接头)。已知多种二硫化物接头，包括例如可以使用以下物质形成的那些：sata(n-琥珀酰亚胺基-s-乙酰基硫代乙酸酯)、spdp(n-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯)、spdb(n-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丁酸酯)和smpt(n-琥珀酰亚胺基-氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基-二硫代)甲苯)、spdb和smpt(参见例如thorpe等人,1987,cancerres.47:5924-5931；wawrzynczak等人,于immunoconjugates:antibodyconjugatesinradioimageryandtherapyofcancer中(c.w.vogel编辑,oxfordu.press,1987)。还参见美国专利号4,880,935。

一些实施方案中，接头是丙二酸酯接头(johnson等人,1995,anticancerres.15:1387-93)、马来酰亚胺基苯甲酰基接头(lau等人,1995,bioorg-med-chem.3(10):1299-1304)、或3’-n-酰胺类似物(lau等人,1995,bioorg-med-chem.3(10):1305-12)。

e.前药

在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含前药。在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含治疗剂或能够转化成或暴露治疗剂，和/或psma靶向分子在与psma或其修饰形式结合后能够被切割，其中切割产生包含治疗剂的至少一种切割产物。在一些实施方案中，所述切割产生包含治疗剂的至少一种切割产物。

在一些实施方案中，psma靶向分子是在疾病、障碍或病症的微环境中被激活的前药。在一些实施方案中，所述疾病、障碍或病症与特定的微环境或生理条件相关。例如，在一些实施方案中，所述疾病、障碍或病症是肿瘤，并且前药在肿瘤微环境(tme)中例如在酸性或低氧条件下被激活。

在一些实施方案中，如本文所用，术语“前药”是指母体“药物”分子的药理学上无活性的衍生物，其需要在靶标生理系统内进行生物转化(例如，自发地或酶促地)以将“前药”释放或转化(例如，酶促地、机械地、电磁地等)为活性“药物”。“前药”被设计成克服与稳定性、毒性、缺乏特异性或生物利用度受限相关的问题。示例性“前药”包含活性“药物”分子本身和化学掩蔽基团(例如，可逆地抑制“药物”活性的基团)。一些优选的“前药”是具有在代谢条件下可切割的基团的化合物的变体或衍生物。当示例性“前药”在生理条件下经历溶剂分解或经历酶促降解或其他生化转化(例如，磷酸化、氢化、脱氢、糖基化等)时，它们在体内或在体外变成具有药学活性。前药可以在哺乳动物生物体中提供溶解度、组织相容性或延迟释放的优势。作为前药的示例性psma靶向分子包含被psma切割的肽和治疗剂。

在作为前药的psma靶向分子与psma或其修饰形式结合后，psma的谷氨酸羧基肽酶活性可以将前药激活为治疗活性剂。在一些实施方案中，前药包含甲氨蝶呤、毒胡萝卜素或多柔比星类似物。在一些实施方案中，类似物含有α-连接的或γ-连接的谷氨酸或天冬氨酸。在一些实施方案中，作为前药的psma靶向分子包括在例如以下文献中描述的那些：mhaka等人(2006)cancerbiology&therapy3(6):551-558；mahalingam等人(2016)britishjournalofcancer114:986-994；us8258256。例如，在一些实施方案中，psma靶向分子是米沙伽近(g-202(8-o-(12-氨基十二烷酰)-8-o-去丁酰基毒胡萝卜素)-asp-γ-glu-γ-glu-γ-glugluoh)。在一些实施方案中，前药是毒素的衍生物。

f.抗体-药物缀合物(adc)

在一些实施方案中，psma靶向分子是抗体-药物缀合物(adc)。在一些实施方案中，作为抗体或其抗原结合片段的psma靶向分子直接或间接地缀合或连接至治疗剂或药物。在一些实施方案中，adc中的治疗剂包含细胞毒性剂、毒素或抗癌剂。在一些实施方案中，治疗剂是免疫调节剂。在一些实施方案中，adc的治疗剂是细胞毒性剂、毒素或抗癌剂，例如一甲基澳瑞他汀e、美登木素生物碱dm1、假单胞菌外毒素a(pe40)或α-鹅膏蕈碱。

作为adc的示例性psma靶向分子包括j591-一甲基澳瑞他汀e(mmae)、a5-假单胞菌外毒素a(pe40)、抗psma-α-鹅膏蕈碱、mln2704、progenicspsmaadc、以及在例如以下文献中描述的那些：us2011/0165081；us2011/0250216；us2015/0110814；wo2006/110745；wo2007/002222；wo2007/038658；和wo2015/057250。

在一些实施方案中，adc的抗体或其抗原结合片段和治疗剂直接或间接地连接或缀合。在一些实施方案中，adc的抗体或其抗原结合片段和治疗剂间接地连接，任选地经由接头，例如可切割的或可释放的接头。在一些实施方案中，可切割或可释放的接头能够在与psma或其修饰形式结合后或在疾病、障碍或病症的微环境中的条件下被切割。在一些实施方案中，所述疾病、障碍或病症与特定的微环境或生理条件相关。例如，在一些实施方案中，所述疾病、障碍或病症是肿瘤，并且前药在肿瘤微环境(tme)中例如在酸性或低氧条件下被激活。

iii.组合物和配制品

提供了用于给予的组合物，所述组合物包括细胞，如含有psma或其修饰形式和重组受体(例如car)的工程化细胞。所提供的实施方案还包括涉及含有psma靶向分子的组合物的那些，例如本文所述的那些，例如，其与给予如本文提供的工程化细胞结合的方法和用途，以及此类组合物和细胞疗法的组合。在一些方面，药物组合物和配制品作为单位剂型组合物提供，所述单位剂型组合物包括用于以给定剂量或其部分给予的细胞数量。在一些方面，药物组合物和配制品作为单位剂型组合物提供，所述单位剂型组合物包括用于以给定剂量或其部分给予的psma靶向分子剂量。在一些实施方案中，所提供的组合物可以与本文所述的任何方法结合使用，所述方法例如为治疗方法、检测方法和/或选择方法。药物组合物和配制品通常包括一种或多种任选的药学上可接受的载体或赋形剂。在一些实施方案中，组合物包括至少一种另外的治疗剂。

术语“药物配制品”是指这样的制剂，其处于使得其中所含活性成分的生物活性有效的形式，并且不含对给予配制品的受试者具有不可接受的毒性的另外的组分。

“药学上可接受的载体”是指药物配制品中除了活性成分以外的对受试者无毒的成分。药学上可接受的载体包括但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。

在一些方面，载体的选择部分取决于特定细胞和/或给予方法。因此，存在多种合适的配制品。例如，药物组合物可以含有防腐剂。合适的防腐剂可以包括例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠和苯扎氯铵。在一些方面，使用两种或更多种防腐剂的混合物。防腐剂或其混合物通常以按总组合物的重量计约0.0001％至约2％的量存在。载体描述于例如remington’spharmaceuticalsciences第16版,osol,a.编辑(1980)。药学上可接受的载体在所用的剂量和浓度下通常对接受者无毒，并且包括但不限于：缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲氯铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；烷基对羟基苯甲酸酯，如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如edta；糖类，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，如钠；金属络合物(例如锌-蛋白质络合物)；和/或非离子表面活性剂，如聚乙二醇(peg)。

在一些方面，在所述组合物中包括缓冲剂。合适的缓冲剂包括例如柠檬酸、柠檬酸钠、磷酸、磷酸钾和各种其他酸和盐。在一些方面，使用两种或更多种缓冲剂的混合物。缓冲剂或其混合物通常以总组合物重量的约0.001％至约4％的量存在。制备可给予的药物组合物的方法是已知的。示例性方法更详细地描述于例如remington:thescienceandpracticeofpharmacy,lippincottwilliams&wilkins；21sted.(2005年5月1日)中。

配制品或组合物还可以含有可用于用细胞治疗的特定适应症、疾病或病症的多于一种活性成分，优选具有与所述细胞互补的活性的那些成分，其中各自的活性不会相互产生不利影响。此类活性成分以有效用于既定目的的量以合适的方式组合存在。因此，在一些实施方案中，药物组合物还包含其他药物活性剂或药物如化学治疗剂，例如天冬酰胺酶、白消安、卡铂、顺铂、道诺霉素、多柔比星、氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、甲氨蝶呤、紫杉醇、利妥昔单抗、长春碱、长春新碱等。在一些实施方案中，所述细胞或抗体以盐(例如药学上可接受的盐)的形式给予。合适的药学上可接受的酸加成盐包括源自无机酸(如盐酸、氢溴酸、磷酸、偏磷酸，硝酸和硫酸)和有机酸(如酒石酸、乙酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸、苯甲酸、乙醇酸、葡萄糖酸、琥珀酸和芳基磺酸，例如对甲苯磺酸)的那些盐。

可以将活性成分包埋在微胶囊、胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米粒子和纳米胶囊)或粗乳液中。在某些实施方案中，将药物组合物配制为包合物(如环糊精包合物)或配制成脂质体。脂质体可以用于将所述宿主细胞(例如，t细胞或nk细胞)靶向特定组织。许多方法可用于制备脂质体，例如在例如szoka等人,ann.rev.biophys.bioeng.,9:467(1980)，以及美国专利4,235,871、4,501,728、4,837,028和5,019,369中描述的那些。

在一些实施方案中，药物组合物(如含有psma靶向分子的配制品或组合物)在一些方面可以采用定时释放、延迟释放和持续释放的递送系统，使得所述组合物的递送发生在待治疗部位致敏之前并且有足够的时间引起待治疗部位致敏。许多类型的释放递送系统是可用的并且是已知的。此类系统可以避免重复给予所述组合物，从而增加对受试者和医师的便利性。

在一些实施方案中，药物组合物包含有效治疗或预防疾病或病症的量(例如治疗有效量或预防有效量)的工程化细胞。在一些实施方案中，通过定期评估所治疗的受试者来监测治疗或预防功效。对于数天或更长时间的重复给予，取决于病症，重复所述治疗直至出现所需疾病症状的抑制。然而，其他剂量方案可能是有用的并且可以被确定。所需剂量可以通过单次推注给予所述组合物、通过多次推注给予所述组合物或通过连续输注给予所述组合物来递送。

药物组合物，例如含有工程化细胞的那些药物组合物，可以使用标准给予技术、配制品和/或设备进行给予。提供了用于储存和给予所述组合物的配制品和装置(如注射器和小瓶)。所述工程化细胞的给予可以是自体的或异源的。例如，免疫应答细胞或祖细胞可以获得自一名受试者，并且给予至同一受试者或不同的相容受试者。外周血源免疫应答细胞或其后代(例如，体内、离体或体外衍生的)可以通过局部注射给予，包括导管给予、全身注射、局部注射、静脉内注射或肠胃外给予。当给予治疗组合物(例如，含有遗传修饰的免疫应答细胞的药物组合物)时，通常将其配制成单位剂量可注射形式(溶液、悬浮液、乳液)。

配制品包括用于口服、静脉内、腹膜内、皮下、经肺、透皮、肌内、鼻内、经颊、舌下或栓剂给予的那些。在一些实施方案中，肠胃外给予所述细胞群。如本文所用的术语“肠胃外”包括静脉内、肌内、皮下、直肠、阴道和腹膜内给予。在一些实施方案中，使用通过静脉内、腹膜内或皮下注射的外周全身递送将所述细胞群给予受试者。

在一些实施方案中，组合物作为无菌液体制剂(例如，等渗水溶液、悬浮液、乳液、分散体或粘性组合物，其在一些方面可以缓冲至所选ph)提供。液体制剂一般比凝胶、其他粘性组合物和固体组合物制备起来更容易。另外地，液体组合物稍微更方便给予，特别是通过注射。在另一方面，粘性组合物可以配制在适当的粘度范围内，以提供与特定组织的更长的接触时间。液体或粘性组合物可以包含载体，其可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液体聚乙二醇)及其合适的混合物。

无菌可注射溶液可以通过将细胞掺入溶剂中来制备，例如与合适的载体、稀释剂或赋形剂(如无菌水、生理盐水、葡萄糖、右旋糖等)混合。在一些方面，也可以将组合物(如含有psma靶向分子的组合物)冻干。组合物可以含有辅助物质，如润湿剂、分散剂或乳化剂(例如，甲基纤维素)、ph缓冲剂、胶凝或粘度增强添加剂、防腐剂、调味剂、颜料等，这取决于给予途径和所需的制剂。在一些方面，可以参考标准文本来制备合适的制剂。

可以添加各种增强所述组合物的稳定性和无菌性的添加剂，包括抗微生物防腐剂、抗氧化剂、螯合剂和缓冲剂。防止微生物的作用可以通过不同的抗细菌和抗真菌剂(例如，对羟基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、抗坏血酸等)来确保。通过使用延迟吸收的药剂(例如单硬脂酸铝和明胶)可以实现可注射药物形式的延长吸收。

可以制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适实子包括含有所述抗体的固体疏水聚合物的半透性基质，所述基质呈成型制品(例如薄膜或微胶囊)的形式。

用于体内给予的配制品通常是无菌的。可以例如通过经无菌滤膜过滤容易地实现无菌。

iv.给予、治疗和检测的方法

还提供了在治疗疾病、病症和障碍(其中表达由重组受体(例如car)识别的抗原)中使用所述细胞和组合物(例如含有工程化细胞的那些)的方法，以及所述细胞和组合物(例如含有工程化细胞的那些)在治疗疾病、病症和障碍(其中表达由重组受体(例如car)识别的抗原)中的用途。在一些实施方案中，治疗方法涉及表达psma或其修饰形式的工程化细胞的给予。在一些实施方案中，所给予的细胞还表达重组受体，例如car。在一些实施方案中，治疗方法涉及向受试者给予本文提供的任何工程化细胞或本文提供的任何组合物。在一些实施方案中，所述方法还涉及向受试者给予本文所述的任何psma靶向分子。在一些实施方案中，psma靶向分子能够结合psma或其修饰形式，并且因此可以用于靶向特定细胞或微环境以进行治疗，或用于将治疗剂递送至特定细胞或微环境。在一些实施方案中，此类方法包括诊断和预后方法，以及在一些情况下，工程化细胞的自杀或去除方法。此类方法包括监测给予的工程化细胞的方法和调节工程化细胞的方法，例如结合过继细胞疗法。

在一些实施方案中，所述方法包含向受试者给予本文所述的任何工程化细胞和psma靶向分子，所述psma靶向分子是或还包含治疗剂。

在一些实施方案中，与所述方法结合使用的psma靶向分子能够与psma或其修饰形式结合，任选地与psma或其修饰形式的活性位点结合，被psma或其修饰形式切割和/或是psma或其修饰形式的拮抗剂或抑制剂。在一些实施方案中，psma靶向分子可以结合psma或其修饰形式的细胞外部分的一部分，例如，在psma或其修饰形式上表达的psma在本文所述的一种或多种工程化细胞上表达。因此，借助于与psma结合的psma靶向分子，可以将治疗剂靶向或递送至与psma或其修饰形式的表达相关的特定细胞或微环境。在一些实施方案中，所述方法包括向已经被给予本文提供的任何工程化细胞的受试者给予psma靶向分子，所述psma靶向分子是或还包含治疗剂。例如，在一些实施方案中，在本文提供的治疗方法中使用的psma靶向分子可以是在上文部分iii中描述的任何一种。

提供了给予工程化细胞和组合物的方法，以及此类工程化细胞和组合物用于治疗或预防疾病、病症和障碍(包括癌症)的用途。在一些实施方案中，将工程化细胞和组合物给予至受试者或患者，所述受试者或患者患有要例如经由过继细胞疗法(如过继t细胞疗法)治疗的特定疾病或病症。在一些实施方案中，将所提供的细胞或组合物给予至受试者，如患有或有风险患上所述疾病或病症的受试者。在一些方面，所述方法由此治疗疾病或病症(例如，改善其一种或多种症状)，例如通过减轻表达由工程化t细胞识别的抗原的癌症中的肿瘤负荷来治疗。

在一些方面，待治疗的疾病或病症可以是任何疾病或病症，其中抗原的表达与疾病、障碍或病症的细胞或组织相关、特异于和/或表达于疾病、障碍或病症的细胞或组织，和/或参与疾病、病症或障碍的病因，例如导致、加剧或以其他方式参与此类疾病、病症或障碍。示例性疾病和病症可以包括与恶性肿瘤或细胞转化(例如癌症)、自身免疫性疾病或炎性疾病或例如由细菌、病毒或其他病原体引起的感染性疾病相关的疾病或病症。上文描述了示例性抗原，其包括与可以治疗的各种疾病和病症相关的抗原。在特定实施方案中，免疫调节多肽和/或重组受体(例如嵌合抗原受体或tcr)特异性结合与所述疾病或病症相关的抗原。在一些实施方案中，受试者患有疾病、障碍或病症，任选地癌症，肿瘤，自身免疫性疾病、障碍或病症，或感染性疾病。

在一些实施方案中，所述疾病、障碍或病症包括与各种癌症相关的肿瘤。在一些实施方案中，癌症可以是位于受试者体内的任何癌症，例如但不限于位于头和颈、乳房、肝、结肠、卵巢、前列腺、胰腺、脑、子宫颈、骨、皮肤、眼睛、膀胱、胃、食管、腹膜或肺的癌症。例如，抗癌剂可以用于治疗结肠癌、宫颈癌、中枢神经系统癌、乳腺癌、膀胱癌、肛门癌、头颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、神经内分泌癌、软组织癌、阴茎癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、胆囊癌或食管癌。在一些情况下，癌症可以是血液癌。在一些实施方案中，疾病、障碍或病症是肿瘤，如实体瘤、淋巴瘤、白血病、血液肿瘤、转移性肿瘤或其他癌症或肿瘤类型。在一些实施方案中，疾病、障碍或病症选自结肠癌、肺癌、肝癌、乳腺癌、前列腺、卵巢癌、皮肤癌、黑色素瘤、骨癌、脑癌、卵巢癌、上皮癌、肾细胞癌、胰腺腺癌、宫颈癌、结直肠癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、尤因肉瘤、髓母细胞瘤、骨肉瘤、滑膜肉瘤和/或间皮瘤。

疾病、病症和障碍包括肿瘤，包括实体瘤、血液学恶性肿瘤和黑色素瘤，并且包括局部和转移性肿瘤；感染性疾病，如病毒或其他病原体的感染，例如hiv、hcv、hbv、cmv、hpv和寄生虫病；以及自身免疫和炎性疾病。在一些实施方案中，疾病、障碍或病症是肿瘤、癌症、恶性肿瘤、肿疡或其他增殖性疾病或障碍。此类疾病包括但不限于白血病、淋巴瘤，例如急性髓样(或髓性)白血病(aml)、慢性髓样(或髓性)白血病(cml)、急性淋巴细胞(或成淋巴细胞)白血病(all)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、毛细胞白血病(hcl)、小淋巴细胞淋巴瘤(sll)、套细胞淋巴瘤(mcl)、边缘区淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤(hl)、非霍奇金淋巴瘤(nhl)、间变性大细胞淋巴瘤(alcl)、滤泡性淋巴瘤、难治性滤泡性淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)和多发性骨髓瘤(mm)，b细胞恶性肿瘤选自急性成淋巴细胞白血病(all)、成人all、慢性成淋巴细胞白血病(cll)、非霍奇金淋巴瘤(nhl)和弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)。

在一些实施方案中，疾病或病症是感染性疾病或病症，例如但不限于病毒、逆转录病毒、细菌和原生动物感染、免疫缺陷、巨细胞病毒(cmv)、埃-巴二氏病毒(epstein-barrvirus，ebv)、腺病毒、bk多瘤病毒。在一些实施方案中，所述疾病或病症是自身免疫性或炎性疾病或病症，如关节炎(例如类风湿性关节炎(ra))、i型糖尿病、系统性红斑狼疮(sle)、炎性肠病、银屑病、硬皮病、自身免疫性甲状腺疾病、格雷夫斯病、克罗恩病、多发性硬化症、哮喘和/或与移植相关的疾病或病症。

在一些实施方案中，与疾病或障碍相关的抗原选自孤儿酪氨酸激酶受体ror1、b细胞成熟抗原(bcma)、碳酸酐酶9(caix)、tegfr、her2/neu(受体酪氨酸激酶erbb2)、l1-cam、cd19、cd20、cd22、间皮素、cea、乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、egfr、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、肝配蛋白受体a2(epha2)、her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-b2)、her3(erb-b3)、her4(erb-b4)、erbb二聚体、iii型表皮生长因子受体突变(egfrviii)、叶酸结合蛋白(fbp)、fcrl5、fc受体样蛋白5(fcrl5；也称为fc受体同源物5或fcrh5)、胎儿乙酰胆碱受体、神经节苷脂gd2、神经节苷脂gd3、g蛋白偶联受体5d(gpcr5d)、hmw-maa、il-22r-α、il-13r-α2、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员a(lrrc8a)、路易斯y、l1细胞粘附分子(l1-cam)、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、存活蛋白、tag72、b7-h6、il-13受体α2(il-13ra2)、ca9、gd3、hmw-maa、cd171、g250/caix、人白细胞抗原a(hla-a1)、magea1、hla-a2、ny-eso-1、psca、叶酸受体-a、cd44v6、cd44v7/8、αvβ6整合素(avb6整合素)、8h9、ncam、vegf受体、5t4、胎儿achr、自然杀伤细胞2族成员d(nkg2d)配体、cd44v6、双重抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素、鼠cmv、粘蛋白1(muc1)、muc16、前列腺干细胞抗原(psca)、nkg2d、癌症-睾丸抗原(癌症/睾丸抗原1b(ctag，也称为ny-eso-1和lage-2))、mart-1、糖蛋白100(gp100)、癌胚胎抗原、ror1、滋养层糖蛋白(tpbg也称为5t4)、tag72、vegf-r2、癌胚抗原(cea)、her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白b2、cd123、c-met、gd-2、o-乙酰化gd2(ogd2)、ce7、wilms肿瘤1(wt-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、c-c基序趋化因子配体1(ccl-1)、cd138、病原体特异性抗原和与通用标签相关的抗原、和/或生物素化分子、和/或由hiv、hcv、hbv或其他病原体表达的分子。

在一些实施方案中，抗原或配体是肿瘤抗原或癌症标记。在一些实施方案中，抗原或配体抗原是或包括αvβ6整合素(avb6整合素)、b细胞成熟抗原(bcma)、b7-h3、b7-h6、碳酸酐酶9(ca9，也称为caix或g250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1b(ctag，也称为ny-eso-1和lage-2)、癌胚抗原(cea)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、cc基序趋化因子配体1(ccl-1)、cd19、cd20、cd22、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、cd44v6、cd44v7/8、cd123、cd133、cd138、cd171、硫酸软骨素蛋白聚糖4(cspg4)、表皮生长因子蛋白(egfr)、截短的表皮生长因子蛋白(tegfr)、iii型表皮生长因子受体突变(egfrviii)、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、肝配蛋白b2、肝配蛋白受体a2(epha2)、雌激素受体、fc受体样蛋白5(fcrl5；也称为fc受体同源物5或fcrh5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿achr)、叶酸结合蛋白(fbp)、叶酸受体α、神经节苷脂gd2、o-乙酰化gd2(ogd2)、神经节苷脂gd3、糖蛋白100(gp100)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖(gpc3)、g蛋白偶联受体5d(gpcr5d)、her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-b2)、her3(erb-b3)、her4(erb-b4)、erbb二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(hmw-maa)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原a1(hla-a1)、人白细胞抗原a2(hla-a2)、il-22受体α(il-22rα)、il-13受体α2(il-13rα2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、l1细胞粘附分子(l1-cam)、l1-cam的ce7表位、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员a(lrrc8a)、路易斯y、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、mage-a10、间皮素(msln)、c-met、鼠类巨细胞病毒(cmv)、粘蛋白1(muc1)、muc16、自然杀伤细胞2族成员d(nkg2d)配体、黑色素a(mart-1)、神经细胞粘附分子(ncam)、癌胚胎抗原、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(psca)、前列腺特异性膜抗原(psma)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ror1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(tpbg，也称为5t4)、肿瘤相关糖蛋白72(tag72)、酪氨酸酶相关蛋白1(trp1，也称为tyrp1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(trp2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ异构酶或dct)、血管内皮生长因子受体(vegfr)、血管内皮生长因子受体2(vegfr2)、wilms肿瘤1(wt-1)、病原体特异性或病原体表达的抗原、或与通用标签相关的抗原、和/或生物素化分子、和/或由hiv、hcv、hbv或其他病原体表达的分子。

在一些实施方案中，受体靶向的抗原包括与b细胞恶性肿瘤相关的抗原，如许多已知b细胞标记中的任何一种。在一些实施方案中，受体靶向的抗原是cd20、cd19、cd22、ror1、cd45、cd21、cd5、cd33、igκ、igλ、cd79a、cd79b或cd30。

在一些实施方案中，所述抗原是病原体特异性抗原或病原体表达的抗原。在一些实施方案中，抗原是病毒抗原(例如来自hiv、hcv、hbv等的病毒抗原)、细菌抗原和/或寄生虫抗原。

用于过继细胞疗法的工程化细胞的给予方法是已知的，并且可以与所提供的方法和组合物结合使用。例如，过继t细胞治疗方法描述于例如gruenberg等人的美国专利申请公开号2003/0170238；rosenberg的美国专利号4,690,915；rosenberg(2011)natrevclinoncol.8(10):577-85)。参见例如themeli等人(2013)natbiotechnol.31(10):928-933；tsukahara等人(2013)biochembiophysrescommun438(1):84-9；davila等人(2013)plosone8(4):e61338。

如本文所用，“受试者”是哺乳动物，如人或其他动物，并且通常是人。在一些实施方案中，向其给予免疫调节多肽、工程化细胞或组合物的受试者(例如，患者)是哺乳动物，通常是灵长类动物，如人。在一些实施方案中，灵长类动物是猴或猿。受试者可以是雄性或雌性，并且可以处于任何合适的年龄，包括婴儿、幼年、青春期、成年和老年受试者。在一些实施方案中，受试者是非灵长类哺乳动物，如啮齿动物。

如本文所用，“治疗(treatment)”(及其语法变体如“治疗”(“treat”或“treating”))是指疾病或病症或障碍、或者与之相关的症状、不良效果或结果或表型的完全或部分改善或减轻。所希望的治疗效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、症状的缓和、疾病的任何直接或间接病理后果的减少、预防转移、降低疾病进展的速度、减轻或减缓疾病状态以及缓解或改善预后。所述术语并不暗示完全治愈疾病或完全消除任何症状或对所有症状或结果的影响。

如本文所用，“延迟疾病的发展”意指推迟、阻碍、减缓、延缓、稳定、抑制和/或延期疾病(例如癌症)的发展。此延迟可以具有不同的时间长度，这取决于病史和/或所治疗的个体。对于本领域技术人员显而易见的是，足够或显著的延迟实际上可以涵盖预防，因为个体不会患上疾病。例如，可能延迟晚期癌症，如转移的发展。

如本文所用，“预防”包括提供关于受试者的疾病的发生或复发的预防，所述受试者可能易患所述疾病但尚未被诊断患有所述疾病。在一些实施方案中，所提供的细胞和组合物用于延迟疾病的发展或延缓疾病的进展。

如本文所用的，“抑制”功能或活性是当与除了目标条件或参数之外在其他方面相同的条件相比时，或者可替代地，与另一种情况相比时，减少功能或活性。例如，与不存在所述细胞的情况下的肿瘤生长速率相比，抑制肿瘤生长的细胞降低了肿瘤的生长速率。

在给药的情况下，药剂(例如药物配制品、细胞或组合物)的“有效量”是指在必要的剂量/量下和必要的时间段内有效实现所需结果(例如治疗或预防结果)的量。

药剂(例如药物配制品或工程化细胞)的“治疗有效量”是指在必要的剂量下和必要的时间段内有效实现所需治疗结果(如针对治疗疾病、病症或障碍)和/或治疗的药代动力学或药效动力学作用的量。治疗有效量可根据诸如以下等因素而变化：疾病状态、受试者的年龄、性别和体重、以及所给予的免疫调节多肽或工程化细胞。在一些实施方案中，所提供的方法涉及给予有效量(例如治疗有效量)的免疫调节多肽、工程化细胞或组合物。

“预防有效量”是指在必要的剂量和持续必要的时间段的情况下能有效实现所需预防结果的量。通常但不是必须的，因为预防剂量是在疾病之前或早期在受试者体内使用的，所以预防有效量将小于治疗有效量。

所提供的方法和用途包括用于过继细胞疗法的方法和用途。在一些实施方案中，所述方法包括将所述工程化细胞或含有所述细胞的组合物给予至受试者、组织或细胞，如患有、有风险患上或怀疑患有所述疾病、病症或障碍的受试者、组织或细胞。在一些实施方案中，将所述细胞、群体和组合物给予至患有待治疗的特定疾病或病症的受试者，例如经由过继细胞疗法，如过继t细胞疗法。在一些实施方案中，将所述细胞或组合物给予至所述受试者，如患有或有风险患上所述疾病或病症的受试者，改善所述疾病或病症的一个或多个症状。

在一些实施方案中，细胞疗法(例如，过继t细胞疗法)通过自体转移进行，其中从接受细胞疗法的受试者或从来源于这种受试者的样品中分离和/或以其他方式制备细胞。因此，在一些方面，所述细胞来源于需要治疗的受试者(例如，患者)，并且在分离和加工后将所述细胞给予同一受试者。

在一些实施方案中，细胞疗法(例如，过继t细胞疗法)通过同种异体转移进行，其中从将要接受或最终接受细胞疗法的受试者以外的受试者(例如，第一受试者)分离和/或以其他方式制备细胞。在此类实施方案中，细胞随后被给予相同物种的不同受试者例如第二受试者。在一些实施方案中，所述第一和第二受试者在遗传上是相同的。在一些实施方案中，所述第一和第二受试者在遗传上是相似的。在一些实施方案中，所述第二受试者与所述第一受试者表达相同的hla类别或超类型。细胞可以通过任何合适的方式给予。给药和给予可以部分取决于给予是短暂的还是长期的。各种给药时间表包括但不限于在不同时间点的单次或多次给予、推注给予和脉冲输注。

在某些实施方案中，所述细胞或单独的细胞亚型群体以约100万至约1000亿个细胞和/或按每公斤体重所述细胞量的范围给予受试者，例如，100万至约500亿个细胞(例如，约500万个细胞、约2500万个细胞、约5亿个细胞、约10亿个细胞、约50亿个细胞、约200亿个细胞、约300亿个细胞、约400亿个细胞或由任两个前述值定义的范围)，如约1000万至约1000亿个细胞(例如，约2000万个细胞、约3000万个细胞、约4000万个细胞、约6000万个细胞、约7000万个细胞、约8000万个细胞、约9000万个细胞、约100亿个细胞、约250亿个细胞、约500亿个细胞、约750亿个细胞、约900亿个细胞或由任两个前述值定义的范围)，并且在一些情况下约1亿个细胞至约500亿个细胞(例如，约1.2亿个细胞、约2.5亿个细胞、约3.5亿个细胞、约4.5亿个细胞、约6.5亿个细胞、约8亿个细胞、约9亿个细胞、约30亿个细胞、约300亿个细胞、约450亿个细胞或在这些范围之间的任何值)和/或每公斤体重的范围。剂量可以根据疾病或障碍和/或患者和/或其他治疗特有的属性而变化。

例如，在一些实施方案中，如果受试者是人，那么剂量包括少于约5x10⁸个总重组受体(例如car)表达细胞、t细胞或外周血单核细胞(pbmc)，例如，在约1x10⁶到5x10⁸个此类细胞的范围内，例如2x10⁶、5x10⁶、1x10⁷、5x10⁷、1x10⁸或5x10⁸个或全部此类细胞，或任两个前述值之间的范围。

在一些实施方案中，基因工程化细胞的剂量包含从或从约1x10⁵至5x10⁸个表达car的总t细胞、1x10⁵至2.5x10⁸个表达car的总t细胞、1x10⁵至1x10⁸个表达car的总t细胞、1x10⁵至5x10⁷个表达car的总t细胞、1x10⁵至2.5x10⁷个表达car的总t细胞、1x10⁵至1x10⁷个表达car的总t细胞、1x10⁵至5x10⁶个表达car的总t细胞、1x10⁵至2.5x10⁶个表达car的总t细胞、1x10⁵至1x10⁶个表达car的总t细胞、1x10⁶至5x10⁸个表达car的总t细胞、1x10⁶至2.5x10⁸个表达car的总t细胞、1x10⁶至1x10⁸个表达car的总t细胞、1x10⁶至5x10⁷个表达car的总t细胞、1x10⁶至2.5x10⁷个表达car的总t细胞、1x10⁶至1x10⁷个表达car的总t细胞、1x10⁶至5x10⁶个表达car的总t细胞、1x10⁶至2.5x10⁶个表达car的总t细胞、2.5x10⁶至5x10⁸个表达car的总t细胞、2.5x10⁶至2.5x10⁸个表达car的总t细胞、2.5x10⁶至1x10⁸个表达car的总t细胞、2.5x10⁶至5x10⁷个表达car的总t细胞、2.5x10⁶至2.5x10⁷个表达car的总t细胞、2.5x10⁶至1x10⁷个表达car的总t细胞、2.5x10⁶至5x10⁶个表达car的总t细胞、5x10⁶至5x10⁸个表达car的总t细胞、5x10⁶至2.5x10⁸个表达car的总t细胞、5x10⁶至1x10⁸个表达car的总t细胞、5x10⁶至5x10⁷个表达car的总t细胞、5x10⁶至2.5x10⁷个表达car的总t细胞、5x10⁶至1x10⁷个表达car的总t细胞、1x10⁷至5x10⁸个表达car的总t细胞、1x10⁷至2.5x10⁸个表达car的总t细胞、1x10⁷至1x10⁸个表达car的总t细胞、1x10⁷至5x10⁷个表达car的总t细胞、1x10⁷至2.5x10⁷个表达car的总t细胞、2.5x10⁷至5x10⁸个表达car的总t细胞、2.5x10⁷至2.5x10⁸个表达car的总t细胞、2.5x10⁷至1x10⁸个表达car的总t细胞、2.5x10⁷至5x10⁷个表达car的总t细胞、5x10⁷至5x10⁸个表达car的总t细胞、5x10⁷至2.5x10⁸个表达car的总t细胞、5x10⁷至1x10⁸个表达car的总t细胞、1x10⁸至5x10⁸个表达car的总t细胞、1x10⁸至2.5x10⁸个表达car的总t细胞、或2.5x10⁸至5x10⁸个表达car的总t细胞。

在一些实施方案中，基因工程化细胞的剂量包含至少或至少约1x10⁵个表达car的细胞、至少或至少约2.5x10⁵个表达car的细胞、至少或至少约5x10⁵个表达car的细胞、至少或至少约1x10⁶个表达car的细胞、至少或至少约2.5x10⁶个表达car的细胞、至少或至少约5x10⁶个表达car的细胞、至少或至少约1x10⁷个表达car的细胞、至少或至少约2.5x10⁷个表达car的细胞、至少或至少约5x10⁷个表达car的细胞、至少或至少约1x10⁸个表达car的细胞、至少或至少约2.5x10⁸个表达car的细胞、或者至少或至少约5x10⁸个表达car的细胞。

在一些实施方案中，细胞疗法包含给予一定剂量，所述剂量包含以下细胞数量：为或为约1x10⁵至5x10⁸个总重组受体表达细胞、总t细胞或总外周血单核细胞(pbmc)，为或为约5x10⁵至1x10⁷个总重组受体表达细胞、总t细胞或总外周血单核细胞(pbmc)，或者为或为约1x10⁶至1x10⁷个总重组受体表达细胞、总t细胞或总外周血单核细胞(pbmc)，每个都包含端值。在一些实施方案中，细胞疗法包括给予一定剂量的细胞，所述剂量包含以下细胞数量：至少或约至少1x10⁵个总重组受体表达细胞、总t细胞或总外周血单核细胞(pbmc)，如至少或至少1x10⁶个、至少或约至少1x10⁷个、至少或约至少1x10⁸个此类细胞。在一些实施方案中，所述数量是关于cd3+或cd8+的总数，在一些情况下也是关于重组受体表达(例如car+)细胞。在一些实施方案中，细胞疗法包含给予一定剂量，所述剂量包含以下细胞数量：为或为约1x10⁵至5x10⁸个cd3+或cd8+总t细胞或cd3+或cd8+重组受体表达细胞、为或为约5x10⁵至1x10⁷个cd3+或cd8+总t细胞或cd3+或cd8+重组受体表达细胞、或者为或为约1x10⁶至1x10⁷个cd3+或cd8+总t细胞或cd3+或cd8+重组受体表达细胞，每个都包含端值。在一些实施方案中，细胞疗法包含给予一定剂量，所述剂量包含以下细胞数量：从或从约1x10⁵至5x10⁸个总cd3+/car+或cd8+/car+细胞、从或从约5x10⁵至1x10⁷个总cd3+/car+或cd8+/car+细胞、或从或从约1x10⁶至1x10⁷个总cd3+/car+或cd8+/car+细胞，每个都包含端值。

在一些实施方案中，剂量的t细胞包括cd4+t细胞、cd8+t细胞或cd4+和cd8+t细胞。

在一些实施方案中，例如，如果受试者是人，那么所述剂量的cd8+t细胞(包括在剂量中包括cd4+和cd8+t细胞)包括在约1x10⁶与5x10⁸个之间的总重组受体(例如car)表达cd8+细胞，例如，在约5x10⁶至1x10⁸个此类细胞的范围内，例如1x10⁷、2.5x10⁷、5x10⁷、7.5x10⁷、1x10⁸或5x10⁸个总此类细胞，或在任两个前述值之间的范围。在一些实施方案中，给予患者多个剂量，并且每个剂量或总剂量可以在任何前述值内。在一些实施方案中，细胞剂量包括给予从或从约1x10⁷至0.75x10⁸个表达重组受体的总cd8+t细胞、1x10⁷至2.5x10⁷个表达重组受体的总cd8+t细胞、从或从约1x10⁷至0.75x10⁸个表达重组受体的总cd8+t细胞(每个都包含端值)。在一些实施方案中，细胞的剂量包含给予或给予约1x10⁷、2.5x10⁷、5x10⁷、7.5x10⁷、1x10⁸或5x10⁸个总重组受体表达cd8+t细胞。

在一些实施方案中，细胞(例如，表达重组受体的t细胞)的剂量作为单一剂量给予受试者，或者在两周、一个月、三个月、六个月、1年或更长的时间段内仅给予一次。在一些方面，剂量的大小基于一个或多个标准来确定，如受试者对先前治疗(例如化学疗法)的反应、受试者的疾病负荷(如肿瘤负担、体积、尺寸或程度)、转移的程度或类型、分期和/或受试者发生毒性结果(例如，crs、巨噬细胞激活综合征、肿瘤溶解综合征、神经毒性和/或针对所给予的细胞和/或重组受体的宿主免疫应答)的可能性或发生率。

在一些方面，剂量的大小由受试者的疾病或病症的负荷决定。例如，在一些方面，在剂量中给予的细胞数量基于就在所述细胞剂量开始给予之前在受试者中存在的肿瘤负荷来确定。在一些实施方案中，第一剂量和/或随后剂量的大小与疾病负荷成反比。在一些方面，如在疾病负荷大的情况下，向受试者给予少量的细胞。在其他实施方案中，如在疾病负荷较低的情况下，向受试者给予大量的细胞。

在一些实施方案中，所述方法包括给予psma靶向分子。在一些实施方案中，将细胞与psma靶向分子(例如是或包含治疗剂和/或可检测的部分的psma靶向分子)同时或按任何顺序依次给予。

在一些实施方案中，将psma靶向分子与过继工程化细胞的细胞依次地、间歇地、或作为相同的组合物或在相同的组合物中同时给予。例如，psma靶向分子可以在工程化细胞的给予之前、期间、同时或之后给予。在一些实施方案中，将psma靶向分子与工程化细胞在相同的组合物中或在不同的组合物中同时给予。在一些实施方案中，在工程化细胞和psma靶向分子两者的给予之前，使psma靶向分子与工程化细胞(例如包含在相同组合物中)接触。在一些实施方案中，将工程化细胞和psma靶向分子单独给予或在不同的组合物中给予。

在一些实施方案中，所述方法涉及在给予工程化细胞之前给予psma靶向分子。在一些实施方案中，在开始工程化细胞之后不再给予psma靶向分子。在其他实施方案中，所述方法还涉及在给予工程化细胞之后给予psma靶向分子。在一些情况下，剂量时间表包括在开始工程化细胞之前和之后给予psma靶向分子。在一些实施方案中，psma靶向分子给予的开始是在开始给予工程化细胞之前的大于或大于约1小时、2小时、6小时、12小时、24小时、3天、6天、12天、15天、30天、60天或90天的时间点。在一些方面，psma靶向分子给予的开始是在给予工程化细胞之前大于4天。

在一些实施方案中，将psma靶向分子在开始给予工程化细胞之前每天给予、每隔一天给予、每周给予一次或仅给予一次。在一些方面，给予psma靶向分子直至观察到是或包含治疗剂的psma结合分子的治疗效果。在一些实施方案中，在开始给予工程化细胞之后将psma靶向分子给予持续至多2天、至多7天、至多14天、至多21天、至多28天、至多35天或至多42天的时间段。在一些实施方案中，将psma靶向分子在开始给予工程化细胞之后每天给予、每隔一天给予、每周给予一次或仅给予一次，持续所述时间段。在一些实施方案中，可以将psma靶向分子在给予工程化细胞后给予大于4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、18小时、24小时、36小时、2天、3天、4天、或5天或更长时间。在一些此类实施方案中，可以在给予工程化细胞后的不迟于5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、18小时、24小时、36小时、2天、3天、4天、或5天或更长时间给予抑制剂。

在一些实施方案中，以基于一个或多个标准确定的剂量单独给予psma靶向分子，所述一个或多个标准例如为psma靶向分子和/或治疗剂的类型和特征、受试者对先前治疗的反应、给予的工程化细胞的剂量、受试者的疾病负荷(如肿瘤的负担、体积、大小、或转移的程度、范围或类型、阶段)和/或受试者发生毒性结果的可能性或发生率。

在一些实施方案中，将psma靶向分子按以下剂量量单独给予：从或从约0.2mg/kg受试者体重(mg/kg)至200mg/kg、0.2mg/kg至100mg/kg、0.2mg/kg至50mg/kg、0.2mg/kg至10mg/kg、0.2mg/kg至1.0mg/kg、1.0mg/kg至200mg/kg、1.0mg/kg至100mg/kg、1.0mg/kg至50mg/kg、1.0mg/kg至10mg/kg、10mg/kg至200mg/kg、10mg/kg至100mg/kg、10mg/kg至50mg/kg、50mg/kg至200mg/kg、50mg/kg至100mg/kg或100mg/kg至200mg/kg；或者将psma靶向分子按以下剂量量给予或将psma靶向分子的每次给予按以下剂量量单独给予：从或从约25mg至2000mg、25mg至1000mg、25mg至500mg、25mg至200mg、25mg至100mg、25mg至50mg、50mg至2000mg、50mg至1000mg、50mg至500mg、50mg至200mg、50mg至100mg、100mg至2000mg、100mg至1000mg、100mg至500mg、100mg至200mg、200mg至2000mg、200mg至1000mg、200mg至500mg、500mg至2000mg、500mg至1000mg或1000mg至2000mg，每个都包含端值。在一些方面，将psma靶向分子按以下剂量量给予或将psma靶向分子的每次给予按以下剂量量单独给予：至少或至少约或约0.2mg/kg受试者体重(mg/kg)、1mg/kg、3mg/kg、6mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、50mg/kg、100mg/kg或200mg/kg；或者将psma靶向分子按以下剂量量给予或将psma靶向分子的每次给予按以下剂量量单独给予：至少或至少约25mg、50mg、100mg、200mg、400mg、500mg、600mg、800mg、1000mg、1200mg、1600mg或2000mg。将psma靶向分子按以下剂量量每天给予：至少或至少约25mg/天、50mg/天、100mg/天、200mg/天、400mg/天、500mg/天、600mg/天、800mg/天、1000mg/天、1200mg/天、1600mg/天或2000mg/天。

在一些实施方案中，所述细胞和/或psma靶向分子作为进一步组合治疗的一部分给予，如与另一种治疗性干预如抗体或工程化细胞或受体或药剂(如细胞毒性剂或治疗剂)同时给予或按任何顺序依次给予。例如，在一些实施方案中，可以将抗癌剂用于使用过继细胞疗法的组合疗法中，所述过继细胞疗法使用表达psma或其修饰形式的工程化细胞连同另外的免疫调节剂，和/或还有给予psma靶向分子(例如能够结合psma或其修饰形式并且是或包含治疗剂的psma靶向分子)。

将一些实施方案中的细胞结合另一种治疗干预(同时或按任何顺序依次)与一种或多种另外的药剂、psma靶向分子(例如，包含能够结合psma的部分和治疗剂和/或可检测的部分)、和/或另外的治疗剂或细胞毒性剂共同给予。在一些情境下，将细胞与psma靶向分子和/或时间上足够接近的另一种疗法共同给予，使得细胞群增强psma靶向分子和/或一种或多种另外的治疗剂的效果，或反之亦然。在一些实施方案中，在psma靶向分子和/或一种或多种另外的治疗剂之前给予细胞。在一些实施方案中，在psma靶向分子和/或一种或多种另外的治疗剂之后给予细胞。

在一些实施方案中，所述一种或多种另外的治疗剂包括细胞因子(如il-2)以例如增强持久性。在一些实施方案中，所述方法包括给予化学治疗剂。在一些实施方案中，所述一种或多种另外的治疗剂包括一种或多种淋巴细胞清除疗法，例如在开始给予工程化细胞之前或同时。在一些实施方案中，淋巴细胞清除疗法包括给予磷酰胺，如环磷酰胺。在一些实施方案中，淋巴细胞清除疗法可以包括给予氟达拉滨。在一些实施方案中，淋巴细胞清除疗法中不包括氟达拉滨。在一些实施方案中，不给予淋巴细胞清除疗法。

在一些实施方案中，在给予细胞后，例如通过许多已知方法中的任一种测量工程化细胞群的生物学活性。待评估的参数包括工程化或天然t细胞或其他免疫细胞与抗原的特异性结合，其在体内例如通过成像进行评估，或离体例如通过elisa或流式细胞术进行评估。在某些实施方案中，工程化细胞破坏靶细胞的能力可以使用任何合适的方法来测量，所述方法例如描述于例如以下文献中的细胞毒性测定：kochenderfer等人,j.immunotherapy,32(7):689-702(2009)，和herman等人j.immunologicalmethods,285(1):25-40(2004)。在一些实施方案中，通过测定一种或多种细胞因子(例如cd107a、ifnγ、il-2和tnf)的表达和/或分泌来测量细胞的生物学活性。在一些方面，通过评估临床结果(如肿瘤负荷或负担的减少)来测量生物活性。

在一些实施方案中，将工程化细胞以任何数量的方式进一步修饰，从而增加其治疗或预防功效。例如，可以将所述群体表达的工程化重组受体(如car或tcr)直接或通过接头间接缀合至靶向部分。将化合物(例如，car或tcr)与靶向部分缀合的实践在本领域是已知的。参见例如，wadwa等人,j.drugtargeting3:111(1995)和美国专利5,087,616。

在一些实施方案中，将细胞表面受体缀合物用于靶向工程化细胞以自杀杀伤工程化细胞或去除工程化细胞。在一些实施方案中，提供了可以用于例如经由抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)介导的或经由用细胞毒性剂特异性靶向细胞介导的在体内消融和/或耗尽工程化细胞的方法。在一些方面，杀伤工程化以表达psma或其修饰形式的细胞使用对psma或其修饰形式具有特异性的psma靶向分子。在其他方面，提供了通过使用如下分子靶向psma或其修饰形式的药剂来杀伤细胞的方法，所述分子包含对与细胞毒性剂(如毒素)连接的缀合物的药剂具有特异性的psma靶向分子。

在一些实施方案中，包含作为细胞毒性剂的治疗剂的psma靶向分子可以与本文提供的工程化细胞结合使用，以例如在向受试者给予工程化细胞之后触发所述工程化细胞的自杀来去除或破坏所述工程化细胞。在一些实施方案中，psma靶向分子包含与细胞毒性剂连接或缀合的能够结合psma或其修饰形式的部分。在一些实施方案中，当受试者已知或怀疑具有或可能具有或发生对给予的细胞的不良副作用(如与工程化细胞的毒性或免疫原性相关的)时，将包含细胞毒性剂的psma靶向分子给予至受试者。

在一些实施方案中，包含作为细胞毒性剂的治疗剂的psma靶向分子的给予不会或基本上不会诱导健康组织或健康细胞、不含工程化细胞和/或不表达所述抗原的细胞或组织的杀伤或破坏。

在一些实施方案中，可以将psma或其修饰形式用于诱导细胞自杀。例如，细胞表面分子可以经由抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)途径用作自杀基因。adcc是指细胞介导的反应，其中表达fc受体的非特异性细胞毒性细胞(如天然杀伤细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)识别靶细胞上的结合抗体并导致靶细胞的裂解。可以使用诸如在美国专利号5,821,337中所描述的那些方法来评估adcc活性。在一些实施方案中，adcc可以通过向受试者给予靶向psma或其修饰形式的任何抗体来介导。在一些方面，被工程化以在细胞表面上表达的psma或其修饰形式可以经由给予psma靶向分子(其是抗psma抗体，如本文所述的任何一种)用作自杀基因。

在一些实施方案中，表达psma或其修饰形式的细胞的自杀杀伤是通过使用psma靶向分子来实现的，所述psma靶向分子是或包含细胞毒性剂，例如毒素。在一些实施方案中，借助于含有细胞毒性剂的psma靶向分子与psma或其修饰形式的结合，可以将毒素特异性地靶向或递送至表达psma的细胞，例如本文所述的工程化细胞。在一些实施方案中，psma靶向分子与在工程化细胞的细胞表面上的psma或其修饰形式的结合可能导致受体和与其结合的分子的内化。因此，借助于与psma的结合和内化，可以将含有细胞毒性剂的psma结合分子特异性地靶向工程化细胞，以导致细胞自杀或去除。

v.检测方法

在一些实施方案中，提供了用于监测(例如检测或鉴定)给予至受试者的工程化细胞的方法，例如用于确定或评估受试者中此类细胞的存在、数量或位置。在一些实施方案中，在体内进行检测。在一些实施方案中，从来自受试者的样品在体外或离体进行检测。还提供了通过识别由工程化细胞表达的psma或其修饰形式来鉴定、检测或选择细胞和组合物(如含有工程化细胞的那些)的方法和用途。

在一些实施方案中，所述方法包括检测表达psma或其修饰形式的细胞，和/或检测psma靶向分子与psma或其修饰形式的结合和/或psma靶向分子的存在。在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含提供信号或诱导可检测的信号的一个或多个部分。例如，在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含可检测的部分。在一些实施方案中，与本文所述的检测方法结合使用的psma靶向分子可以是在上文部分iii中描述的任何一种。

在一些实施方案中，用于检测的方法包括使本文所述的任何工程化细胞与psma靶向分子接触；并且检测所述psma靶向分子对或与psma或其修饰形式和/或工程化细胞的结合和/或所述psma靶向分子的存在。在一些实施方案中，所述接触包括向已经被给予过工程化细胞的受试者给予psma靶向分子。

在一些实施方案中，提供了用于检测在受试者中表达重组受体和psma或其修饰形式的工程化细胞的存在或不存在的方法，所述受试者先前已经被给予本文所述的任何工程化细胞。在一些实施方案中，所述方法涉及向受试者给予psma靶向分子；并且检测受试者中psma靶向分子与psma或其修饰形式和/或与工程化细胞的结合和/或psma靶向分子的存在。

在一些情况下，任何所提供的实施方案中的检测限(lod)为，或者本文所提供的实施方案(如用于检测的方法或测定)允许、可用于、或正在或能够检测低至或少至或者低至或少至约500个、1,000个、2,000个、3,000个、4,000个、5,000个、6,000个、7,000个、8,000个、9,000个或10,000个细胞，例如表达psma或其修饰形式(如psma的截短形式)的工程化细胞。在此类实施方案的一些方面，检测限为，或者实施方案(如方法和测定)允许、可用于、正在或能够检测此类细胞，例如在特定体积或组织或样品中存在的这种数量的细胞或者至少或少至或低至这种数量的细胞。在一些方面，体积是在等于或约10μl与等于或约200μl之间、等于或约10μl与等于或约200μl之间、等于或约10μl与等于或约100μl之间、等于或约10μl与等于或约90μl之间、等于或约10μl与等于或约80μl之间、等于或约10μl与等于或约70μl之间、等于或约10μl与等于或约60μl之间、等于或约10μl与等于或约50μl之间、等于或约10μl与等于或约40μl之间、等于或约10μl与等于或约30μl之间、等于或约10μl与等于或约20μl之间、等于或约20μl与等于或约100μl之间、等于或约20μl与等于或约90μl之间、等于或约20μl与等于或约80μl之间、等于或约20μl与等于或约70μl之间、等于或约20μl与等于或约60μl之间、等于或约20μl与等于或约50μl之间、等于或约20μl与等于或约40μl之间、等于或约20μl与等于或约30μl之间、等于或约20μl与等于或约20μl之间、等于或约50μl与等于或约100μl之间、等于或约50μl与等于或约90μl之间、等于或约50μl与等于或约80μl之间、等于或约50μl与等于或约70μl之间、等于或约50μl与等于或约60μl之间，例如等于或约10μl、20μl、30μl、40μl、50μl、60μl、70μl、80μl、90μl或100μl。在一些方面，体积是液体、缓冲液、培养基的体积；样品(如生物样品或生物流体)的体积；和/或器官或组织(如肿瘤，如与所治疗的疾病或病症对应的肿瘤或其部分)的体积；和/或体外培养系统、培养基或缓冲液、和/或混合物或基质(例如基质胶)的体积。

在一些任何实施方案中，检测限或每体积的细胞数量为低至或少至或者低至或少至约10个、20个、30个、40个、50个、60个、70个、80个、90个、100个、150个、200个、250个、300个、400个、500个或1,000个细胞(如psma(例如tpsma)表达细胞或工程化细胞)/微升。在一些任何所提供的实施方案中，实施方案或方法可用于或允许或能够检测低至或少者、或者低至或少至约10个、20个、30个、40个、50个、60个、70个、80个、90个、100个、150个、200个、250个、300个、400个、500个或1,000个细胞/μl。在一些任何实施方案中，检测限或每体积的细胞数量为在20μl或50μl中低至或少至或者低至或少至约500个、1,000个、2,000个、4,000个、5,000个或10,000个细胞。在一些实施方案中，在任何所提供的实施方案中的检测限是，或者本文所述的检测方法或测定能够检测在20μl或50μl体积中的低至或少至、或者低至或少至约2,000个、4,000个、5,000个或10,000个细胞。

在一些实施方案中，检测限是或者所述方法和测定能够检测在特定体积中存在的细胞，所述体积例如为液体、缓冲液、培养基的体积；样品的体积；和/或器官或组织的体积；以及/或体外培养系统、培养基或缓冲液、和/或混合物或基质(例如基质胶)的体积。在一些实施方案中，检测限是体内成像中的检测限。在一些实施方案中，检测限是体外或离体成像中的检测限。

在一些实施方案中，与所述方法结合使用的psma靶向分子能够与psma或其修饰形式结合，任选地与psma或其修饰形式的活性位点结合，被psma或其修饰形式切割和/或是psma或其修饰形式的拮抗剂或抑制剂。

在一些实施方案中，检测方法涉及评估(如定量评估)t细胞(例如，针对基于t细胞的疗法而给予的t细胞)的暴露、数量、浓度、持久性和增殖。在一些实施方案中，在本文所提供的方法中，细胞(例如，出于免疫疗法(例如t细胞疗法)给予的细胞)的暴露、或延长的扩增和/或持久性，和/或所述细胞的细胞表型或功能活性的变化可以通过例如使用下文所述的任何检测方法在体内、在体外或离体评估t细胞的存在和/或特征来测量。在一些实施方案中，可以将此类测定用于确定或确认在给予所提供的细胞或组合物(例如表达psma或其修饰形式的工程化t细胞)之前或之后用于免疫疗法(例如t细胞疗法)的t细胞的存在、增殖、数量、浓度和/或功能。

在一些方面，暴露、数量、浓度、持久性和增殖与药代动力学参数有关。在一些实施方案中，药代动力学参数包括在身体的特定位置中(例如在特定器官或组织中、在肿瘤中或在血浆中)的细胞的数量或浓度。在一些实施方案中，药代动力学参数还包括评估细胞的数量或浓度随时间的变化或确定在某一时间段内对治疗剂(例如所给予的t细胞)的总暴露。在一些情况下，药代动力学还可以通过测量诸如以下等参数来评估：最大(峰值)浓度(cmax)、峰值时间(即出现最大浓度(cmax)的时间；tmax)、最小血浆浓度(即所给予细胞的(例如，表达psma或其变体的工程化t细胞)的剂量之间的最小浓度；cmin)、给予后的消除半衰期(t1/2)和曲线下面积(即通过标绘时间与所给予细胞(例如表达psma或其变体的car+t细胞)的血浆浓度产生的曲线下面积；auc)。特定的所给予细胞(例如表达psma或其变体的工程化t细胞)在给予后在血浆中的浓度可以使用用于检测psma或其变体的任何检测方法(例如，通过给予含有可检测的部分的psma靶向分子)进行测量。在一些实施方案中，可以使用放射性核素标记的配体，使用体内检测方法(例如，正电子发射断层扫描(pet)、计算机断层扫描(ct)和单光子发射计算机断层扫描(spect)来确定药代动力学参数。适合用于评估生物样品(例如血液)中所给予的细胞(例如表达psma或其变体的car+t细胞)的浓度的其他已知的体内、体外或离体方法，或本文所述的任何方法可以用于检测所给予的细胞，例如表达psma或其变体的car+t细胞。例如，可以使用基于核酸的方法(例如定量pcr(qpcr))或基于流式细胞术的方法或其他测定，例如免疫测定、elisa或基于色谱/质谱的测定。

在一些实施方案中，“暴露”可以是指在某一时间段内给予所给予细胞(例如表达psma或其变体的car+t细胞)之后，在身体的特定位置中，例如在特定器官或组织中、在肿瘤中、或在血浆(血液或血清)中，所给予的细胞(例如表达psma或其变体的工程化t细胞)的身体暴露。在一些实施方案中，暴露可以被陈述为所给予细胞(例如表达psma或其变体的car+t细胞)浓度-时间曲线(auc)下面积，如通过给予所给予细胞(例如表达psma或其变体的工程化t细胞)的剂量之后的药代动力学分析所确定。在一些情况下，对于细胞疗法中给予的细胞，auc是以细胞*天/μl或以其相应单位来表示。在一些实施方案中，auc被测量为患者群体(例如样品患者群体)中的平均auc，例如一个或多个患者的平均auc。在一些实施方案中，暴露是指在某一时间段内的曲线下面积(auc)，所述时间段例如为第0天到第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、21、28天或更长时间，或第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15周或更长时间，或第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18、24、48个月或更长时间。在一些实施方案中，auc被测量为给予所给予细胞(例如表达psma或其变体的工程化t细胞)后第0天到第28天的auc(auc0-28)，包括所有测量数据和从所测量的药代动力学(pk)参数外推的数据，例如来自患者群体(例如样品患者群体)的平均auc。在一些实施方案中，为了确定随时间的暴露，例如某一时间段的auc，例如auc0-28，使用随时间的多次测量或参数(例如，细胞浓度)评估(例如，每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、21或28天或更长时间进行的测量)产生所给予细胞浓度-时间曲线。

a.体内检测

在一些实施方案中，通过向受试者给予能够结合psma或其修饰形式并且包含提供信号或诱导可检测的信号的一个或多个部分的psma靶向分子，在体内进行检测、鉴定和/或监测的方法。在一些实施方案中，psma靶向分子提供信号或诱导可检测的信号或能够与提供信号或诱导可检测的信号的部分结合；和/或psma靶向分子是或包含提供信号或诱导可检测的信号的部分。在一些实施方案中，细胞(如表达psma或其修饰形式和/或重组受体的细胞)的成像，实时地揭示转导细胞在体内的位置。在一些实施方案中，检测方法可以用于监测工程化细胞、所给予的psma靶向分子的生物学分布，或者诊断或评估与工程化细胞的毒性或免疫原性相关的结果。

在一些方面，在体内使用psma靶向分子(如本文所述的任何一种)进行体内检测，所述psma靶向分子提供信号或诱导可检测的信号或能够结合提供信号或诱导可检测的信号的部分；和/或包含提供信号或诱导可检测的信号的部分。在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含成像探针、检测试剂、成像模式或可检测标记。在一些实施方案中，检测试剂包含放射性配体。在一些实施方案中，成像探针、检测试剂、成像模式或可检测标记包含放射性同位素、生物发光化合物、化学发光化合物、荧光化合物、发色化合物、量子点、纳米粒子、金属螯合物、酶、氧化铁纳米粒子或用于通过x射线、ct扫描、mri扫描、pet扫描、超声、流式细胞仪、近红外成像系统或其他成像模式检测的其他已知成像剂(参见例如，yu等人,theranostics(2012)2:3)。

在一些实施方案中，用于检测细胞的体内成像、检测或诊断方法可以是磁共振成像(mri)、单光子发射计算机断层扫描(spect)、计算机断层扫描(ct)、计算机轴向断层扫描(cat)、电子束计算机断层扫描(ebct)、高分辨率计算机断层扫描(hrct)、内摆线断层扫描、正电子发射断层扫描(pet)、闪烁扫描、γ照相机、β+检测器、γ检测器、荧光成像、低光成像、x射线、生物发光成像、近红外(nir)光学断层扫描和其他成像模式。

还提供了如下方法，所述方法涉及使用所提供的psma靶向分子(例如小分子、配体或抗体或其抗原结合片段)用于检测、预后、诊断、分期、确定特定治疗与一个或多个组织或细胞类型的结合，和/或通知受试者治疗决定，例如通过检测由psma靶向分子识别的其表位的存在。在一些实施方案中，所述方法是与疾病或病症相关的诊断和/或预后方法，所述疾病或病症与由重组受体特异性地识别的靶抗原的表达相关。在一些实施方案中，所述方法包括用抗体孵育和/或探查生物样品和/或将所述抗体给予至受试者。在某些实施方案中，生物样品包括细胞或组织或其部分，例如肿瘤或癌症组织或活检组织或其切片。

在一些实施方案中，可以用于检测或诊断目的的psma靶向分子或其部分包括在例如以下文献中描述的任何一种：wo2015143029；wo2016/065142；us201013257499；us2012/0067162；us201213566849；us201214008715；us201214126296；us201313826079；us2014/0060461；us201414152864；us201414277367；us201414335055；us2015/0021233；us2015/0029504；us2015/0054937；us2015/0056914；us201514937169；us2016/0022309；us2016/0046981；us23913608；us74498208；us89753907；au2008/269094；au2009/276423；au2015/203742；ep03703745；ep2015001929；ep2015069356；ep2016069730；dobrenkov等人(2008)jnuclmed.49:1162-1170；chen等人,biochem.biophys.res.comm.2009,390(3):624-629；banerjee等人,oncotarget2011；2(12):1244-1253；banerjee等人(2011)angewchemintedengl.50(39):9167-9170；maurer等人(2016)naturereviewsurology13:226-235；rowe等人(2016)prostatecancerprostaticdis.19(3):223-230；mease等人,(2013)currtopmedchem.13(8):951-962；osborne等人,(2013)uroloncol.31(2):144-154；或barinka等人,(2008)jmolbiol.2008年3月7日；376(5):1438-1450；philippwolf(2011),prostatespecificmembraneantigenasbiomarkerandtherapeutictargetforprostatecancer,prostatecancer-diagnosticandtherapeuticadvances,philippee.spiess(编辑),intech,第81-100页。

在一些实施方案中，psma靶向分子或其部分选自2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)、(氨基苯乙烯基)吡啶鎓(asp)染料、2-(3-[1-羧基-5-[(5-碘-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基]-脲基)-戊二酸(yc-vi-11)、2-[3-[1-羧基-5-(4-碘-苯甲酰氨基)-戊基]-脲基]-戊二酸(dcibzl或yc-7)、1-(3-羧基-4-(3-羟基-6-氧代-6h-呫吨-9-基)苯基氨基)-9,16,24-三氧代-1-硫氧代-2,8,17,23,25-五氮杂二十八烷-7,22,26,28-四甲酸(yc-36)、glu-nh-co-nh-lys(ahx)-hbed-cc(psma-hbed-cc)、9-(4-氟-3-[羟基甲基]丁基)鸟嘌呤(fhbg)、glu-脲-lys-(ahx)-[(hbed-cc)](psma-11)、psma-617、2-(膦酰基甲基)戊二酸、2-pmpa、氟苯甲酰氨基磷酸酯、(2s,4s)-2-氟-4-(膦酰基甲基)戊二酸(bay1075553)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-s-甲基-l-半胱氨酸(-dcmc)、euk-subkff-dotaga、2-[3-(1,3-二羧基丙基)脲基]戊二酸(dupa)、psman、n'-双[2-羟基-5-(羧基乙基)苄基]乙二胺-n,n'-二乙酸、mip-1072、mip-1095、mip-1404、mip-1405、n-[[[(1s)-1-羧基-3-甲基丁基]氨基]羰基]-l-谷氨酸(zj43)、(s)-2-(4-碘苄基膦酰基甲基)-戊二酸(gpi-18431)、2-[(3-{4-[(2-氨基-4-羟基-蝶啶-6-基甲基)-氨基]-苯甲酰氨基}-3-羧基-丙基)-羟基-磷酰基甲基]-戊二酸(mpe)、(2s,3's)-{[(3'-氨基-3'-羧基-丙基)-羟基磷酰基]甲基}-戊二酸(epe)和(2s)-2-{[(2-羧基-乙基)-羟基-磷酰基]甲基}-戊二酸(spe)。

在一些实施方案中，用于检测表达psma或其变体的工程化细胞的体内成像、检测或诊断的方法是正电子发射断层扫描(pet)/计算机断层扫描(ct)。在一些实施方案中，在向已经接受工程化细胞疗法的受试者给予可以用作pet/ct配体的psma靶向分子之后进行用于检测表达psma或其变体的工程化细胞的体内成像、检测或诊断的方法。在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含放射性标记的psma靶向分子，例如，2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)、如2-(3-{1-羧基-5-[(6-[¹⁸f]氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(¹⁸f-dcfpyl)(一种高亲和力正电子发射配体)。

在一些实施方案中，对于pet/ct，将2-(3-{1-羧基-5-[(6-[¹⁸f]氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(¹⁸f-dcfpyl)以基于放射性标记的剂量的剂量给予至受试者。在一些实施方案中，对于pet/ct，将¹⁸f-dcfpyl以对人安全或无害的剂量给予至受试者，所述剂量例如为符合用于在人受试者中使用放射性标记的化合物的法规要求(例如，由国际放射防护委员会(icrp)制定的指南或美国联邦法规第21条第361部分)的剂量。在一些实施方案中，用于给予的¹⁸f-dcfpyl的剂量是对于每给予的活性而言具有最高平均吸收剂量单元的器官，基于不同器官的吸收剂量，不超过关键器官剂量限制的剂量(参见例如，chen等人,clincancerres.2011年12月15日；17(24):7645-7653；shanl.2-(3-{1-carboxy-5-[(6-[18f]fluoro-pyridine-3-carbonyl)-amino]-pentyl}-ureido)-pentanedioicacid.2012年11月10日[2012年12月19日更新].于：molecularimagingandcontrastagentdatabase(micad)[internet].bethesda(md):nationalcenterforbiotechnologyinformation(us)；2004-2013。可获自：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/nbk114904/)。

在一些实施方案中，用于给予至小动物(例如小鼠)的¹⁸f-dcfpyl的示例性剂量包括在或在约50μci(1.85mbq)至约10mci(370mbq)之间，例如约50μci至约1mci、100μci至500μci、或200μci至400μci。在一些实施方案中，对于人受试者，使用基于小动物实验(例如小鼠实验)的人等效剂量。在一些实施方案中，可以基于小动物实验(例如小鼠实验)的生物分布结果外推人的剂量学值(参见例如，stabin等人,(2005)jnuclmed.46:1023-7)。在一些实施方案中，用于给予至人的¹⁸f-dcfpyl的示例性剂量为用于小动物(例如小鼠)的在或在约50μci(1.85mbq)至约5mci(185mbq)之间(例如约50μci至约1mci、100μci至500μci、或200μci至400μci)的等效剂量。在一些实施方案中，用于给予至人受试者的¹⁸f-dcfpyl的示例性剂量包括在或在约50μci(1.85mbq)至约100mci(3.7gbq)之间，例如约50μci至100mci、100μci至50mci、200μci至25mci、500μci至20mci、1mci至10mci，例如约50μci、100μci、200μci、400μci、500μci、750μci、1mci、2mci、3mci、4mci、5mci、6mci、7mci、8mci、9mci、10mci、15mci、20mci、25mci、或50mci。在一些实施方案中，用于给予至人受试者的¹⁸f-dcfpyl的剂量包括用于给予至人受试者的¹⁸f-dcfpyl或标记有¹⁸f的相关或类似化合物的适合已知剂量(参见例如，chen等人,clincancerres.2011年12月15日；17(24):7645-7653；shanl.2-(3-{1-carboxy-5-[(6-[18f]fluoro-pyridine-3-carbonyl)-amino]-pentyl}-ureido)-pentanedioicacid.2012年11月10日[2012年12月19日更新].于：molecularimagingandcontrastagentdatabase(micad)[internet].bethesda(md):nationalcenterforbiotechnologyinformation(us)；2004-2013。可获自：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/nbk114904/)。

在一些方面，所提供的实施方案可以用于获得关于所给予细胞的空间分布的信息。在一些方面，所提供的实施方案(包括检测方法)可以用于评估过继转移细胞的全身空间分布，用于确定细胞例如在疾病或障碍(例如肿瘤)的部位或位置内或周围的特定位置，或细胞在体内的持久性和/或不良反应(例如毒性)的发生。在一些方面，所提供的实施方案可以与用于体内成像、检测或诊断的方法结合使用以获得空间信息分布，所述方法例如为磁共振成像(mri)、单光子发射计算机断层扫描(spect)、计算机断层扫描(ct)、计算机轴向断层扫描(cat)、电子束计算机断层扫描(ebct)、高分辨率计算机断层扫描(hrct)、内摆线断层扫描、正电子发射断层扫描(pet)、闪烁扫描、γ照相机、β+检测器、γ检测器、荧光成像、低光成像、x射线、生物发光成像、近红外(nir)光学断层扫描和其他成像模式。

在一些实施方案中，所述方法还包括确定受试者中所给予的工程化细胞的数量或浓度。在一些实施方案中，确定所给予的工程化细胞的数量或浓度包括将检测受试者中或来自受试者的样品中的psma靶向分子的结合或存在的信号与标准曲线进行比较。在一些实施方案中，标准曲线是从检测含有定义数量的细胞的多个对照样品中psma靶向分子的结合或存在的信号产生的。

在一些方面，所提供的实施方案可以用于获得有关所给予细胞的定量信息，例如，用于估计遍布全身存在的和/或在特定器官或组织中存在的所给予细胞的数量。在一些方面，所提供的实施方案可以用于实时定量评估所给予细胞的存在、生物分布、运输和/或药代动力学。在一些实施方案中，检测方法包括评估t细胞(例如，出于基于t细胞的疗法给予的t细胞)的暴露、数量、浓度、持久性和增殖。在一些实施方案中，在本文所提供的方法中，细胞(例如，出于免疫疗法(例如t细胞疗法)给予的细胞)的暴露、或延长的扩增和/或持久性，和/或所述细胞的细胞表型或功能活性的变化可以通过使用体内方法评估所给予细胞来测量。在一些实施方案中，可以在给予本文所提供的细胞疗法之前或之后使用此类测定来确定或确认用于免疫疗法(例如t细胞疗法)的t细胞的功能。

在一些实施方案中，所提供的方法包括确定受试者中所给予的工程化细胞的数量或浓度。在一些实施方案中，确定所给予的工程化细胞的数量或浓度包括将检测受试者中或来自受试者的样品中的psma靶向分子的结合或存在的信号与标准曲线进行比较。在一些实施方案中，标准曲线是从检测含有定义数量的细胞的多个对照样品中psma靶向分子的结合或存在的信号产生的。

在一些方面，暴露、数量、浓度、持久性和增殖与药代动力学参数有关。在一些实施方案中，药代动力学参数包括在身体的特定位置中(例如在特定器官或组织中、在肿瘤中或在血浆中)的细胞的数量或浓度。在一些实施方案中，药代动力学参数还包括评估细胞的数量或浓度随时间的变化或确定在某一时间段内对治疗剂(例如所给予的t细胞)的总暴露。给予后所给予细胞(例如表达psma或其变体的car+t细胞)在血浆中的浓度可以使用用于检测psma或其变体的任何检测方法(例如，通过给予含有可检测的部分的psma靶向分子)进行测量。在一些实施方案中，可以使用放射性核素标记的配体，使用体内检测方法(例如，正电子发射断层扫描(pet)、计算机断层扫描(ct)和单光子发射计算机断层扫描(spect)来确定药代动力学参数。

在一些方面，可以使用正电子发射断层扫描(pet)/计算机断层扫描(ct)来确定表达psma或其修饰形式的所给予工程化细胞的暴露、数量、浓度、持久性和增殖或其他药代动力学参数。在一些实施方案中，在身体的特定位置中，例如在特定器官、组织或肿瘤中，和/或遍布全身的细胞的数量或浓度。在一些实施方案中，可以通过外推定量地确定在特定位置和/或遍布全身的细胞的数量或浓度，所述外推基于使用特定检测方法和已知细胞浓度确定的标准曲线。例如，在一些实施方案中，可以在暴露于对特定细胞(例如表达psma或其修饰形式的工程化细胞具有特异性的pet配体(如¹⁸f-dcfpyl)之后，基于(例如通过pet/ct)对若干种不同已知数量或浓度的细胞的成像来建立标准曲线。

在一些实施方案中，可以使用来自多个已知数量或浓度的细胞(例如细胞的连续稀释的)读数或结果(例如pet信号)来建立标准曲线。在一些实施方案中，可以使用超过方法检测限的或在方法的检测范围内的多个已知数量或浓度的细胞来建立标准曲线。例如，在一些实施方案中，在特定条件(例如特定体积)下，所述方法的检测限可以低至或少至约500个、1,000个、2,000个、3,000个、4,000个或5,000个细胞，并且标准曲线可以使用超过在特定条件下的检测限的已知细胞浓度来产生。在一些实施方案中，用于标准曲线的一系列细胞浓度可以包括在特定体积(例如，在等于或约10μl与等于或约200μl之间，例如等于或约10μl、20μl、30μl、40μl、50μl、60μl、70μl、80μl、90μl或100μl)中的任何一个或多个浓度，所述任何一个或多个浓度选自：1,000(1k)、5,000(5k)、10,000(10k)、50,000(50k)、100,000(0.1m)、500,000(0.5m)、1,000,000(1m)或5,000,000(5m)；500(0.5k)、2,500(2.5k)、5,000(5k)、25,000(25k)、50,000(50k)、250,000(250k)、500,000(0.5m)或2,500,000(2.5m)；或200(0.2k)、400(0.4k)、600(0.6k)、800(0.8k)、1000(1k)、2000(2k)、4000(4k)、6000(6k)、8000(8k)、10000(10k)、20000(20k)或40000(40k)。在一些实施方案中，标准曲线可以使用5,000(5k)、10,000(10k)、20,000(20k)和40,000(40k)来产生。在一些实施方案中，确定的读数或结果是pet信号，例如以体素(三维空间中图形信息的单元)或像素表示。在一些实施方案中，确定的读数或结果是pet信号，例如以总的体素表示。在一些实施方案中，标准曲线是通过从含有限定数量的表达psma或其修饰形式的细胞的多个对照样品中检测信号而产生的，所述多个对照样品已经与psma靶向分子接触。

在一些实施方案中，标准曲线可以使用与检测和定量所使用的条件和方法相同的条件和方法(例如，在给予对特定细胞(例如表达psma或其修饰形式的工程化细胞)具有特异性的pet配体(如¹⁸f-dcfpyl)之后使用pet/ct进行体内成像)来产生。在一些实施方案中，标准曲线可以在体外产生，但使用与检测和定量所使用的方法相同的方法，例如，在暴露于对特定细胞(例如表达psma或其修饰形式的工程化细胞)具有特异性的pet配体(如¹⁸f-dcfpyl)之后使用pet/ct。在一些实施方案中，标准曲线可以通过基于来自已知数量或浓度的数据点的回归方法(例如通过线性回归和/或逻辑回归)来产生。在一些实施方案中，标准曲线可以通过线性回归产生。在一些实施方案中，可以基于所确定的标准曲线确定在测试受试者或样品中所给予细胞的数量或浓度的定量。

b.体外或离体检测

在一些实施方案中，监测方法在体外或离体进行，并且包括通过使含有表达或可能表达psma或其修饰形式的细胞的组合物与能够识别或结合psma或其修饰形式的psma靶向分子接触来检测表达psma或其修饰形式的细胞。在一些方面，生物样品获自受试者，并且与psma靶向分子(如小分子、配体、抗体或其抗原结合片段，包括本文所述的任何一种)接触。生物样品包括但不限于体液(如血液、血浆、血清、脑脊液、滑液、尿液和汗液)、组织和器官样品，包括由其衍生的加工样品。

在一些实施方案中，可以使用如上所述的任何方法来检测或鉴定从受试者的样品获得的表达psma或其修饰形式的细胞。在某些实施方案中，表达缀合物的重组细胞可以通过使用psma靶向分子(如小分子、配体、抗体或其抗原结合片段(例如抗psma抗体))在体外或离体进行检测或追踪。

在一些实施方案中，在体外或离体进行的检测方法包括但不限于免疫组织化学(ihc)、免疫细胞化学、流式细胞术、免疫印迹和离体荧光成像。可以使用各种已知的检测特异性抗体-抗原结合的方法。可以使用的其他检测方法包括示例性免疫测定，例如荧光偏振免疫测定(fpia)、荧光免疫测定(fia)、酶免疫测定(eia)、浊度抑制免疫测定(nia)、酶联免疫吸附测定(elisa)和放射免疫测定(ria)。

可以使用的其他检测方法包括示例性基于核酸扩增的方法，例如定量pcr(qpcr)用于评估受试者的血液或血清或器官或组织样品(例如，疾病部位例如肿瘤样品)中表达重组受体的细胞(例如，出于基于t细胞的疗法给予的表达car的细胞)的量。在一些方面，持久性被定量为每微克的dna中编码受体(例如，car)的dna或质粒的拷贝，或者定量为每微升的样品(例如，血液或血清)中表达受体的(例如，表达car的)细胞的数量，或者每微升的样品中外周血单核细胞(pbmc)或白细胞或t细胞的总数量。在一些实施方案中，用于qpcr或其他基于核酸的方法的引物或探针对结合、识别和/或扩增编码所提供的psma或其修饰形式的核酸和/或编码重组受体的核酸和/或质粒和/或载体中的其他组分或元件具有特异性，所述其他组分或元件包括调节元件(例如启动子、转录和/或转录后调节元件)或应答元件。在一些实施方案中，用于检测核酸的引物或探针对编码所提供的psma或其修饰形式的核酸具有特异性。

在一些实施方案中，检测方法是通过基于流式细胞术的方法进行的。在一些实施方案中，基于流式细胞术的方法包括提供与缀合至可检测部分(例如荧光部分)的配体接触的细胞群以使用流式细胞仪进行分析的步骤。在流式细胞术中，被荧光标记试剂结合的细胞被携带到流体流中，基于荧光信号的大小和/或强度进行分离，并且随后使用facs软件程序(例如，flowjo软件)进行分析和计数。在一些实施方案中，细胞群内的细胞通过光源(例如激光束或光源，其提供一个或多个特定波长的光)以产生可检测的信号(例如荧光)。

其他示例性体外或离体检测方法，例如通过基于流式细胞术的方法或基于定量pcr的方法，使用已知方法外推出总细胞数。参见例如，brentjens等人,scitranslmed.20135(177)；park等人,moleculartherapy15(4):825-833(2007)；savoldo等人,jci121(5):1822-1826(2011)；davila等人,(2013)plosone8(4):e61338；davila等人,oncoimmunology1(9):1577-1583(2012)；lamers,blood2011117:72-82；jensen等人,biolbloodmarrowtransplant2010年9月；16(9):1245-1256；brentjens等人,blood2011118(18):4817-4828。

vi.选择方法

提供了选择、分离或分开表达psma或其修饰形式的细胞(如本文提供的任何工程化细胞)的方法。在所述方法的一些实施方案中，从多种细胞或细胞混合物中选择、分离和/或分开特定细胞，例如工程化以表达psma或其修饰形式和重组受体的细胞。在一些实施方案中，所述方法可以与制造(例如制备和加工)基因工程化细胞结合使用。在一些实施方案中，表达psma或其修饰形式的工程化细胞和psma靶向分子可以用于检测、选择或分离和/或鉴定用psma或其修饰形式转导的细胞。

在一些实施方案中，选择、分离或分开表达psma或其修饰形式的细胞的方法涉及使包含本文提供的任何工程化细胞的多种细胞与psma靶向分子接触；并且选择、分离或分开由psma靶向分子识别或结合的细胞。在一些实施方案中，所述多种细胞包含工程化细胞，所述工程化细胞包含如本文所述的编码psma或其修饰形式和/或重组受体的任何多核苷酸、多核苷酸组、载体和/或载体组。

在一些实施方案中，所述方法涉及从包含已经与psma靶向分子接触的本文提供的任何工程化细胞的多种细胞中选择、分离或分开由psma靶向分子识别或结合的细胞。

在一些实施方案中，与所述方法结合使用的psma靶向分子能够与psma或其修饰形式结合，任选地与psma或其修饰形式的活性位点结合，被psma或其修饰形式切割和/或是psma或其修饰形式的拮抗剂或抑制剂。例如，在一些实施方案中，与选择、分离或分开细胞的方法结合使用的psma靶向分子可以是在上文部分iii中描述的任何一种。

在一些方面，提供了在将细胞工程化的方法的基因转移、细胞加工、孵育、培养和/或配制步骤的一个或多个步骤之前、期间或之后(例如在如上所述的用于将细胞工程化的任何步骤期间)检测、选择或分离基因修饰的细胞的方法。在一些方面，在基因修饰的细胞(例如t细胞)的生产和进一步加工期间，仅明确选择并进一步加工呈转基因阳性的那些细胞是有意义的。在所提供的方法中，对基因修饰细胞的检测和选择是通过与psma靶向分子(如本文所述的任何一种)接触进行的。在一些方面，对psma或其修饰形式的检测是与psma或其修饰形式共同引入和/或共表达的重组受体的替代标记。

在一些方面，用于选择、分离、分开、鉴定和/或检测的多种细胞或细胞混合物包括由一个或多个加工步骤(例如分离、离心、基因工程化(例如用病毒载体转导)、洗涤和/或孵育)产生的样品。在一些实施方案中，将细胞或细胞的组合物与psma靶向分子接触，所述细胞或细胞的组合物在将细胞工程化的方法的基因转移(例如用病毒载体转导)、细胞加工、孵育、培养、洗涤和/或配制步骤中的一个或多个步骤(例如本文描述的任何步骤)之前、期间或之后获得。在某些实施方案中，接触是在允许psma靶向分子与组合物的细胞中存在的psma或其修饰形式结合的条件下进行的。在某些实施方案中，所述方法还包括检测在psma靶向分子与psma或其修饰形式之间是否形成复合物，和/或检测这种结合的存在或不存在或水平。

在一些实施方案中，所述方法可以与从含有多种细胞或细胞混合物的生物样品中选择、分离或分开细胞(例如工程化以表达psma或其修饰形式和重组受体的细胞)结合使用。生物样品包括但不限于体液(如血液、血浆、血清、脑脊液、滑液、尿液和汗液)、组织和器官样品，包括由其衍生的加工样品。在一些实施方案中，可以在向受试者给予工程化细胞之后获得生物样品。例如，在一些实施方案中，包含工程化细胞的多种细胞包含生物样品，例如来自受试者的外周血白细胞，所述受试者已经被给予本文所述的任何工程化细胞。

在一些实施方案中，用于与所述方法结合使用的psma靶向分子(例如小分子、配体和/或抗体)不与固体支持物结合，即它以可溶形式存在或是可溶的。在一些情况下，psma靶向分子是单个分子的寡聚物或聚合物、或构成单个分子的亚基的复合物的寡聚物或聚合物。在一些实施方案中，psma靶向分子可以与合成的载体(如聚乙二醇(peg)分子)共价偶联。在一些实施方案中，psma靶向分子可以与载体(如有机载体)连接、附接或与其反应。在一些方面，除了与多糖的反应之外，还可以使用生理学上或药学上可接受的蛋白质如血清白蛋白(例如人血清白蛋白(hsa)或牛血清白蛋白(bsa))作为载体蛋白。

在一些实施方案中，与本文提供的方法结合使用的psma靶向分子被包含在支持物(如固体支持物或表面，例如珠、或固定相(色谱基质))上。在一些此类实施方案中，psma靶向分子被可逆地固定在支持物上。在一些情况下，psma靶向分子经由共价键被固定在支持物上。在一些方面，psma靶向分子被非共价地可逆地固定在支持物上。

在一些实施方案中，支持物是固体支持物。在一些实施方案中，任何固体支持物(表面)均可以用于psma靶向分子的固定。其上可以固定psma靶向分子的固体支持物的说明性例子包括磁珠、聚合物珠、细胞培养板、微量滴定板、膜或中空纤维。在一些方面，中空纤维可以用作细胞扩增系统(可获自terumobctinc.(lakewood,co,usa))中的生物反应器。在一些实施方案中，psma靶向分子被共价地附接到固体支持物上。在其他实施方案中，非共价相互作用也可以用于固定，例如在塑料基底上。容易商购获得的其他说明性例子是固定化金属亲和色谱(imac)树脂，如树脂(westburg,leusden,thenetherlands)，其可以用于固定寡聚组氨酸标记的(his-标记的)蛋白质，例如用于结合诸如五组氨酸或六组氨酸标签等寡聚组氨酸标签。其他例子包括可获自gelifesciences的钙调蛋白琼脂糖凝胶，其可以用于结合其中药剂(亲和标签)是钙调蛋白结合肽的缀合物。另外的例子包括与谷胱甘肽偶联的琼脂糖凝胶，其可以用于结合其中药剂(亲和标签)是谷胱甘肽-s-转移酶的缀合物。

在一些实施方案中，本发明方法中使用的固体支持物可以包括磁性可吸引物质如一种或多种磁性可吸引粒子或铁磁流体。相应的磁性可吸引粒子可以包含具有能够结合靶细胞的结合位点的psma靶向分子。在一些情况下，磁性可吸引粒子可以含有反磁性、铁磁性、顺磁性或超顺磁性材料。通常，超顺磁性材料响应于具有感应磁场而不会产生永久磁化的磁场。基于氧化铁的磁性粒子例如可以以从dynalbiotech、以磁性microbeads从miltenyibiotec、以磁性多孔玻璃珠从cpginc.、以及从各种其他来源(如rocheappliedscience、bioclon、biosourceinternationalinc.、micromod、ambion、merck、bangslaboratories、polysciences、ornovageninc.，仅举几例)商购获得。例如hutten,a.等人(j.biotech.(2004),112,47-63)已经描述了基于超顺磁性co和feco的磁性纳米粒子，以及铁磁性co纳米晶体。在一些实施方案中，使用免疫磁性(或亲和磁性)分开技术来分开或分离细胞和细胞群(综述于methodsinmolecularmedicine,第58卷:metastasisresearchprotocols,第2卷:cellbehaviorinvitroandinvivo,第17-25页s.a.brooks和u.schumacher编辑humanapressinc.,新泽西州托托瓦)。

在一些实施方案中，支持物含有固定相。因此，在一些实施方案中，psma靶向分子被包含在固定相(也称为色谱基质)上。在一些此类实施方案中，psma靶向分子被可逆地固定在固定相上。在一些情况下，psma靶向分子经由共价键被可逆地固定在固定相上。在一些方面，psma靶向分子被非共价地可逆地固定在固定相上。

在一些方面，任何材料都可以用作色谱基质。通常，合适的色谱材料是基本上无害的，即对细胞活力无害，例如当在所希望的条件下用于填充色谱柱时。在一些实施方案中，固定相保持在预定位置，例如预定方向，然而样品的位置是改变的。因此，在一些实施方案中，固定相是流动相流过(通过流过或以分批模式流动)并且出现在液相中包含的组分在各相之间分布(溶解或分散)的色谱系统的一部分。

在一些实施方案中，色谱基质具有固体相或半固体相的形式，然而含有待分离/分开的靶细胞的样品是流体相。色谱基质可以是粒子材料(具有任何合适的大小和形状)或单片色谱材料，包括纸基底或膜，例如任何已知的和使用的。在一个实施方案中，色谱基质/固定相是非磁性材料或不可磁化材料。在其他实施方案中，本发明方法中使用的色谱基质没有任何磁性可吸引物质。在一些实施方案中，适合于本发明方法的非磁性或不可磁化色谱固定相包括衍生化二氧化硅或交联凝胶，例如基于天然聚合物或合成聚合物的交联凝胶。示例性色谱基质/固定相是已知的，并且可以与本文提供的方法结合使用。

在一些实施方案中，可以通过使所述固体支持物(例如基质)与含有待富集或选择的细胞(例如，如所描述的表达psma或其修饰形式的细胞)的样品(例如生物样品)和/或多种细胞或细胞混合物接触而将固体支持物(如珠或色谱基质)用于如本文所述的富集和选择方法中。在一些实施方案中，通过破坏psma靶向分子与psma或其修饰形式的相互作用，从固体支持物(例如基质)中洗脱或释放所选择的细胞。在一些实施方案中，psma靶向分子与psma或其修饰形式的结合是可逆的。

在一些实施方案中，实施所述方法以基于通过psma靶向分子的检测来选择、分离、分开或富集表达psma或其修饰形式的细胞。在一些方面，选择的、分离的、分开的或富集的细胞代表已经用编码psma或其修饰形式以及任选地共表达的重组受体(如car)的一种或多种核酸分子和/或一种或多种载体进行基因工程化(例如通过转导)的细胞。在一些实施方案中，所提供的方法产生或导致含有如下细胞的细胞组合物，所述细胞富集表达psma或其修饰形式的细胞，并且因此还富集表达重组受体的细胞。

在一些实施方案中，在富集的组合物中的表达psma或其修饰形式的细胞的产量，即与起始样品中相同细胞群的数量相比在群体中富集细胞的数量，是10％至100％，如20％至80％、20％至60％、20％至40％、40％至80％、40％至60％、或60％至80％。

在一些实施方案中，在富集或分离的组合物中的表达psma或其修饰形式的细胞的百分比，即呈所选psma或其修饰形式阳性的细胞占富集或分离细胞群体中的总细胞的百分比，是至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％，并且通常是至少95％、96％、97％、98％、99％或更高。

vii.试剂盒和制品

还提供了试剂盒和制品，所述试剂盒和制品含有表达psma或其修饰形式和重组受体的所提供的工程化细胞、以及一种或多种psma靶向分子、和/或其组合物。本文还提供了制品。在一些实施方案中，制品包括本文提供的工程化细胞、组合物、多核苷酸、多核苷酸组、含有多核苷酸组的组合物、载体、载体组、含有载体组的组合物、试剂盒和/或psma靶向分子中的任一者。

在一些实施方案中，提供了试剂盒，所述试剂盒包括包含psma靶向分子的组合物；以及说明书，所述说明书用于向接受或已经被给予过治疗有效量的本文所述的任何工程化细胞的受试者给予和/或检测psma靶向分子，以检测所述工程化细胞和/或psma靶向分子。在一些实施方案中，说明书指定根据本文提供的任何方法进行给予和/或检测的步骤。

在一些实施方案中，提供了试剂盒，所述试剂盒包括包含治疗有效量的本文所述的任何工程化细胞和本文所述的psma靶向分子的组合物；以及向治疗疾病或病症的受试者给予工程化细胞和psma靶向分子的说明书，所述psma靶向分子是、包含或连接至提供信号或诱导可检测的信号的一个或多个部分；以及用于检测工程化细胞和/或psma靶向分子的说明书。在一些实施方案中，说明书指定根据本文提供的任何方法进行给予和/或检测的步骤。

在一些实施方案中，说明书还指定了确定受试者中所给予的工程化细胞的数量或浓度。在一些实施方案中，指定了所述确定的说明书包含将信号与标准曲线进行比较。在一些实施方案中，说明书还指定了标准曲线是通过从含有限定数量的表达psma或其修饰形式的细胞的多个对照样品中检测信号而产生的，所述多个对照样品已经与psma靶向分子接触。在一些实施方案中，说明书指定检测经由正电子发射断层扫描(pet)(任选地与计算机断层扫描(ct)偶联)进行，并且psma靶向分子是2-(3-{1-羧基-5-[(6-[¹⁸f]氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(¹⁸f-dcfpyl)。

在一些实施方案中，提供了试剂盒，所述试剂盒包括包含治疗有效量的本文所述的任何工程化细胞的组合物；以及用于向治疗疾病或病症的受试者以与psma靶向分子的组合疗法给予工程化细胞的说明书，所述psma靶向分子是或包含或连接至用于治疗疾病或病症的治疗剂。在一些实施方案中，psma靶向分子或治疗剂能够调节肿瘤微环境(tme)或对肿瘤具有细胞毒性。在一些实施方案中，说明书指定根据本文提供的任何方法进行给予的步骤。

在一些实施方案中，提供了试剂盒，所述试剂盒包括包含psma靶向分子的组合物；以及用于向治疗疾病或病症的受试者以与治疗有效量的本文所述的任何工程化细胞的组合疗法给予psma靶向分子以治疗所述疾病或病症的说明书。在一些实施方案中，说明书指定根据本文提供的任何方法进行给予的步骤。

在一些实施方案中，提供了试剂盒，所述试剂盒包括包含治疗有效量的本文所述的任何工程化细胞的组合物以及包含psma靶向分子的组合物。在一些实施方案中，psma靶向分子是或包含或还包含治疗剂。在一些实施方案中，试剂盒还含有用于向治疗疾病或病症的受试者以组合疗法给予工程化细胞和psma靶向分子以治疗疾病或病症的说明书。在一些实施方案中，试剂盒还含有向接受或已经被给予过工程化细胞的受试者给予psma靶向分子以检测所述工程化细胞的说明书。在一些实施方案中，治疗剂是免疫调节剂、细胞毒性剂、抗癌剂或放射性治疗剂。在一些实施方案中，说明书指定根据本文提供的任何方法进行给予的步骤。

所述试剂盒和制品可以包括容器和在所述容器上或与所述容器相连的标签或包装说明书。合适的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、iv溶液袋等。容器可以由各种材料(例如玻璃或塑料)形成。在一些实施方案中，容器容纳组合物自身或组合物与有效治疗、预防和/或诊断病症的另一种组合物的组合。在一些实施方案中，容器具有无菌入口。示例性容器包括静脉内溶液袋、小瓶(包括具有可被注射针刺穿的塞子的那些溶液袋、小瓶)或用于口服给药剂的瓶子或小瓶。标签或包装说明书可以指示，将组合物用于治疗疾病或病症。所述制品可以包括：(a)在其中含有组合物的第一容器，其中所述组合物包括表达psma或其修饰形式和重组受体的工程化细胞；(b)在其中含有组合物的第二容器，其中所述组合物包括第二药剂，如一种或多种psma靶向分子。所述制品还可以包括包装说明书，其指示组合物可以用于治疗特定病症。可替代地或另外地，制品还可以包括另一种或相同的容器，所述容器包含药学上可接受的缓冲剂。它还可以包括其他材料，如其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头和/或注射器。

viii.定义

除非另外定义，否则本文使用的所有领域术语、符号和其他技术和科学术语或用辞旨在具有与所要求保护的主题所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。在一些情况下，为了清楚和/或为了便于参考而在本文中定义具有通常理解的含义的术语，并且本文中包含的此类定义不应被解释为表示与本领域通常理解的实质性差异。

如本文所用的，单数形式“一种/个(a/an)”和“所述(the)”包括复数种/个指示物，除非上下文另外明确说明。例如，“一种/个(a或an)”意指“至少一种/个”或“一种/个或多种/个”。应理解，本文所述的方面和变化包括“由方面和变化组成”和/或“基本上由方面和变化组成”。

贯穿本公开文本，所要求保护的主题的各个方面以范围形式呈现。应当理解，范围形式的描述仅仅是为了方便和简洁，并且不应被解释为对所要求保护的主题的范围的僵硬限制。因此，应当认为范围的描述具体公开了所有可能的子范围以及所述范围内的各个数值。例如，在提供一系列值的情况下，应当理解，在所述范围的上限和下限之间的每个中间值以及在所述范围内的任何其他所述或中间值包含在所要求保护的主题内。这些更小范围的上限和下限可以独立地被包括在更小范围之内，并且也被涵盖在所要求保护地主题之内，服从于在所陈述范围内任何确切排除的限制。在所陈述的范围包括一个或两个限制时，排除了那些被包括的限制的任一个或两者的范围也被包括在所要求保护的主题之内。无论范围的广度如何，这都适用。

如本文所用术语“约”是指本技术领域的技术人员容易知道的相应值的通常误差范围。本文对“约”某一值或参数的提及包括(并描述)针对所述值或参数本身的实施方案。例如，涉及“约x”的描述包括“x”的描述。

如本文所用，叙述核苷酸或氨基酸位置“对应于”所公开序列中的核苷酸或氨基酸位置(例如序列表中所述)是指，在使用标准比对算法(例如gap算法)与所公开序列比对以使同一性最大化之后，所鉴定的核苷酸或氨基酸位置。通过比对序列，本领域技术人员可以例如使用保守和相同的氨基酸残基作为指导来鉴定相应的残基。通常，为了鉴定对应位置，比对氨基酸序列使得获得最高阶匹配(参见，例如：computationalmolecularbiology,lesk,a.m.编辑,oxforduniversitypress,newyork,1988；biocomputing:informaticsandgenomeprojects,smith,d.w.编辑,academicpress,newyork,1993；computeranalysisofsequencedata,parti,griffin,a.m.和griffin,h.g.编辑,humanapress,new.jersey,1994；sequenceanalysisinmolecularbiology,vonheinje,g.,academicpress,1987；和sequenceanalysisprimer,gribskov,m.和devereux,j.编辑,mstocktonpress,newyork,1991；carrillo等人(1988)siamjappliedmath48:1073)。

如本文所用，术语“载体”是指这样的核酸分子，它传播与其连接的另一个核酸。所述术语包括作为自我复制核酸结构的载体以及掺入已引入其的宿主细胞基因组中的载体。某些载体能够指导它们可操作地连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。载体包括病毒载体，例如逆转录病毒(例如γ逆转录病毒和慢病毒)载体。

术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用，并且是指已引入外源核酸的细胞，包括此类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“转化细胞”，其包括原代转化细胞和源自其的后代，不考虑传代次数。后代的核酸含量可能与亲代细胞不完全相同，但可能含有突变。本文包括如在初始转化细胞中所筛选或选择，具有相同功能或生物活性的突变体后代。

如本文所用，细胞或细胞群对特定标记呈“阳性”的陈述是指特定标记(通常为表面标记)在细胞上或细胞中的可检测的存在。当提及表面标记时，所述术语是指如通过流式细胞术检测到的，表面表达的存在，例如通过用与所述标记特异性结合的抗体进行染色并检测所述抗体，其中所述染色通过流式细胞术以如下水平是可检测的，所述水平基本上高于在其他方面相同的条件下用同种型匹配对照进行相同程序检测到的染色，和/或所述水平基本上与已知呈所述标记阳性的细胞的水平相似，和/或所述水平基本上高于已知呈所述标记阴性的细胞的水平。

如本文所用，细胞或细胞群对特定标记呈“阴性”的陈述是指特定标记(通常为表面标记)在细胞上或细胞中不存在实质上可检测的存在。当提及表面标记时，所述术语是指如通过流式细胞术检测到的，表面表达的不存在，例如通过用与所述标记特异性结合的抗体进行染色并检测所述抗体，其中所述染色通过流式细胞术以如下水平没有检测到，所述水平基本上高于在其他方面相同的条件下用同种型匹配对照进行相同程序检测到的染色，和/或所述水平基本上低于已知呈所述标记阳性的细胞的水平，和/或所述水平与已知呈所述标记阴性的细胞的水平相比是基本上相似的。

如本文所用，在关于氨基酸序列(参考多肽序列)使用时，“氨基酸序列同一性百分比(％)”和“同一性百分比”定义为，在比对序列并在必要时引入空位以实现最大序列同一性百分比并且不将任何保守取代视作序列同一性的一部分之后，候选序列(例如，主题抗体或片段)中与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。用于确定氨基酸序列同一性百分比的比对可以以本领域熟知的多种方式来实现，例如，使用公众可获得的计算机软件，如blast、blast-2、align或megalign(dnastar)软件。本领域技术人员可以确定用于比对序列的适当参数，包括在所比较序列的全长中实现最大比对所需的任何算法。

氨基酸取代可以包括用另一种氨基酸替代多肽中的一个氨基酸。所述取代可以是保守氨基酸取代或非保守氨基酸取代。可以将氨基酸取代引入感兴趣的结合分子(例如抗体)、和针对所希望的活性(例如保留/改进的抗原结合、降低的免疫原性或改进的adcc或cdc)筛选的产物中。

通常可以根据以下常见的侧链特性将氨基酸进行分组：

(1)疏水性：正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；

(2)中性亲水性：cys、ser、thr、asn、gln；

(3)酸性：asp、glu；

(4)碱性：his、lys、arg；

(5)影响链取向的残基：gly、pro；

(6)芳香族：trp、tyr、phe。

在一些实施方案中，保守取代可能涉及将这些类别之一的成员交换为同一类别的另一个成员。在一些实施方案中，非保守氨基酸取代可能涉及将这些类别之一的成员交换为另一个类别。

如本文所用的，组合物是指两种或更多种产物、物质或化合物(包括细胞)的任何混合物。其可以是溶液、悬浮液、液体、粉末、糊剂、水性、非水性或其任何组合。

如本文所用，“受试者”是哺乳动物，如人或其他动物，并且通常是人。

ix.示例性实施方案

所提供的实施方案包括：

1.一种工程化细胞，其包含：

前列腺特异性膜抗原(psma)或其修饰形式；以及

嵌合受体和/或重组抗原受体。

2.一种工程化细胞，其包含：

编码前列腺特异性膜抗原(psma)或其修饰形式的核酸；以及

编码嵌合受体和/或重组抗原受体的核酸。

3.根据实施方案1或实施方案2所述的工程化细胞，其中所述psma或其修饰形式在所述细胞的表面上表达。

4.根据实施方案1-3中任一项所述的工程化细胞，其中所述psma或其修饰形式包含细胞外部分和跨膜结构域。

5.根据实施方案1-4中任一项所述的工程化细胞，其中所述psma或其修饰形式，任选地所述细胞外部分，能够由psma靶向分子或其部分识别。

6.根据实施方案5所述的工程化细胞，其中所述psma靶向分子或其部分：

能够结合psma和/或其修饰形式，和/或

能够结合psma的活性位点和/或psma的修饰形式的活性位点，和/或

能够被psma切割和/或被psma的修饰形式切割；和/或

是psma和/或其修饰形式的拮抗剂、选择性拮抗剂、反向激动剂、选择性反向激动剂、激动剂、选择性激动剂、抑制剂和/或选择性抑制剂。

7.根据实施方案1-6中任一项所述的工程化细胞，其中所述psma或其修饰形式包含n-乙酰化α-连接的酸性二肽酶(naaladase)结构域，和/或包含一个或多个活性位点残基和/或参与psma底物结合和/或psma催化活性的残基，其参考seqidno:23所示的氨基酸序列中的位置任选地是在位置210、257、269、272、377、387、387、424、424、425、433、436、453、517、518、519、552、553、534、535、536、552、553、628、666、689、699和/或700处的残基。

8.根据实施方案1-7中任一项所述的工程化细胞，其中所述psma或其修饰形式是人psma或其修饰形式。

9.根据实施方案1-8中任一项所述的工程化细胞，其中所述psma或其修饰形式是野生型psma，任选地野生型人psma。

10.根据实施方案1-9中任一项所述的工程化细胞，其中所述psma或其修饰形式包含seqidno:23所示的氨基酸序列或其细胞外和/或跨膜结构域，或展现与seqidno:23或其细胞外和/或跨膜结构域至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。

11.根据实施方案1-8和10中任一项所述的工程化细胞，其中所述psma或其修饰形式是经修饰的psma，所述经修饰的psma与野生型或未经修饰的psma相比包含一个或多个氨基酸修饰。

12.根据实施方案11所述的工程化细胞，其中所述野生型或未经修饰的psma是人psma和/或包含seqidno:23所示的氨基酸序列或展现与其至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。

13.根据实施方案11或实施方案12所述的工程化细胞，其中所述一个或多个氨基酸修饰包含一个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入。

14.根据实施方案11-13中任一项所述的工程化细胞，其中与所述野生型或未经修饰的psma相比，所述经修饰的psma(i)展现出降低的内源性信号传导；(ii)展现出增加的细胞表面表达；和/或(iii)展现出降低的细胞内化。

15.根据实施方案1-8和10-14中任一项所述的工程化细胞，其中参考seqidno:23所示的氨基酸序列中的位置，所述经修饰的psma包含与w2g对应的至少一个氨基酸取代或者不包含w2或者不包含在位置2处的任何残基。

16.根据实施方案15所述的工程化细胞，其中所述经修饰的psma包含seqidno:24所示的氨基酸序列或其片段，或展现与seqidno:24或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且包含所述至少一个氨基酸取代的氨基酸序列。

17.根据实施方案1-8和10-16中任一项所述的工程化细胞，其中与所述野生型或未经修饰的psma相比，所述经修饰的psma包含在所述细胞内部分中的一个或多个n末端氨基酸残基的缺失。

18.根据实施方案17所述的工程化细胞，其中与所述野生型或未经修饰的psma相比，所述经修饰的psma包含至多2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个或18个n末端氨基酸残基的缺失。

19.根据实施方案1-8和10-18中任一项所述的工程化细胞，其中参考seqidno:23所示的氨基酸序列中的位置，与所述野生型或未经修饰的psma相比，所述经修饰的psma包含在从位置2、3、4或5的残基开始并且直至位置6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19的n末端处的连续氨基酸序列的缺失。

20.根据实施方案1-8和10-19中任一项所述的工程化细胞，其中所述psma或其修饰形式包含seqidno:25或52所示的氨基酸序列或其片段，或展现与seqidno:25或52或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且包含一个或多个n末端氨基酸残基的缺失并且任选地含有甲硫氨酸起始密码子的氨基酸序列。

21.根据实施方案1-20中任一项所述的工程化细胞，其中所述psma或其修饰形式由序列编码：seqidno:26或53所示的核酸序列或其片段；或展现与seqidno:26或53或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且任选地含有编码甲硫氨酸起始密码子的核酸的核酸序列。

22.根据实施方案1-21中任一项所述的工程化细胞，其中所述psma或其修饰形式由被修饰为无cpg和/或经密码子优化的核酸序列编码。

23.根据实施方案22所述的工程化细胞，其中所述psma或其修饰形式由以下编码：seqidno:27所示的核酸序列或其片段；或展现与seqidno:27或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且任选地含有编码甲硫氨酸起始密码子的核酸的核酸序列。

24.根据实施方案1-8和10-23中任一项所述的工程化细胞，其中：

所述经修饰的psma包含所述野生型或未经修饰的psma的跨膜结构域的全部或基本上全部；或

所述经修饰的psma包含具有与所述野生型或未经修饰的psma的跨膜结构域相同或至少相同数量的氨基酸的跨膜结构域。

25.根据实施方案5-24中任一项所述的工程化细胞，其中所述psma靶向分子是或包含小分子、配体、抗体或其抗原结合片段、适体、肽或其缀合物。

26.根据实施方案5-25中任一项所述的工程化细胞，其中所述psma靶向分子是或包含小分子。

27.根据实施方案26所述的工程化细胞，其中所述小分子选自2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)、(氨基苯乙烯基)吡啶鎓(asp)染料、2-(3-[1-羧基-5-[(5-碘-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基]-脲基)-戊二酸(yc-vi-11)、2-[3-[1-羧基-5-(4-碘-苯甲酰氨基)-戊基]-脲基]-戊二酸(dcibzl或yc-7)、1-(3-羧基-4-(3-羟基-6-氧代-6h-呫吨-9-基)苯基氨基)-9,16,24-三氧代-1-硫氧代-2,8,17,23,25-五氮杂二十八烷-7,22,26,28-四甲酸(yc-36)、glu-nh-co-nh-lys(ahx)-hbed-cc(psma-hbed-cc)、9-(4-氟-3-[羟基甲基]丁基)鸟嘌呤(fhbg)、glu-脲-lys-(ahx)-[(hbed-cc)](psma-11)、psma-617、2-(膦酰基甲基)戊二酸、2-pmpa、氟苯甲酰氨基磷酸酯、(2s,4s)-2-氟-4-(膦酰基甲基)戊二酸(bay1075553)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-s-甲基-l-半胱氨酸(-dcmc)、euk-subkff-dotaga、2-[3-(1,3-二羧基丙基)脲基]戊二酸(dupa)、psman、n'-双[2-羟基-5-(羧基乙基)苄基]乙二胺-n,n'-二乙酸、mip-1072、mip-1095、mip-1404、mip-1405和n-[[[(1s)-1-羧基-3-甲基丁基]氨基]羰基]-l-谷氨酸(zj43)、(s)-2-(4-碘苄基膦酰基甲基)-戊二酸(gpi-18431)、2-[(3-{4-[(2-氨基-4-羟基-蝶啶-6-基甲基)-氨基]-苯甲酰氨基}-3-羧基-丙基)-羟基-磷酰基甲基]-戊二酸(mpe)、(2s,3's)-{[(3'-氨基-3'-羧基-丙基)-羟基磷酰基]甲基}-戊二酸(epe)和(2s)-2-{[(2-羧基-乙基)-羟基-磷酰基]甲基}-戊二酸(spe)。

28.根据实施方案27所述的工程化细胞，其中所述psma靶向分子是或包含2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)或n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)。

29.根据实施方案5-25中任一项所述的工程化细胞，其中所述psma靶向分子是或包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段任选地具有与psma特异性地结合的结合位点。

30.根据实施方案29所述的工程化细胞，其中所述抗体或其抗原结合片段选自j591、dfo-j591、cyt-356、j415、3/a12、3/f11、3/e7、d2b、107-1a4、ypsma-1、ypsma-2、3e6、2g7、24.4e6、gcp-02、gcp-04、gcp-05、j533、e99、1g9、3c6、4.40、026、d7-fc、d7-ch3、4d4、a5、及其抗原结合片段和衍生物，或包含cdr3、vh和/或vl，和/或竞争与psma结合或结合与任何前述相同的psma表位。

31.根据实施方案5-25中任一项所述的工程化细胞，其中所述psma靶向分子是或包含适体或其缀合物。

32.根据实施方案31所述的工程化细胞，其中所述适体包含a9、a10、a10g、a10-3.2或szt101或其缀合物。

33.根据实施方案1-32中任一项所述的工程化细胞，其中所述嵌合受体和/或所述重组抗原受体能够结合如下靶抗原，所述靶抗原与疾病、障碍或病症的细胞或组织相关，对疾病、障碍或病症的细胞或组织是特异的，和/或在疾病、障碍或病症的细胞或组织上表达。

34.根据实施方案33所述的工程化细胞，其中所述疾病、障碍或病症是感染性疾病或障碍、自身免疫性疾病、炎性疾病、或肿瘤或癌症。

35.根据实施方案33或实施方案34所述的工程化细胞，其中所述靶抗原是肿瘤抗原。

36.根据实施方案33-35中任一项所述的工程化细胞，其中所述靶抗原选自αvβ6整合素(avb6整合素)、b细胞成熟抗原(bcma)、b7-h3、b7-h6、碳酸酐酶9(ca9，也称为caix或g250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1b(ctag，也称为ny-eso-1和lage-2)、癌胚抗原(cea)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、cc基序趋化因子配体1(ccl-1)、cd19、cd20、cd22、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、cd44v6、cd44v7/8、cd123、cd133、cd138、cd171、硫酸软骨素蛋白聚糖4(cspg4)、表皮生长因子蛋白(egfr)、截短的表皮生长因子蛋白(tegfr)、iii型表皮生长因子受体突变(egfrviii)、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、肝配蛋白b2、肝配蛋白受体a2(epha2)、雌激素受体、fc受体样蛋白5(fcrl5；也称为fc受体同源物5或fcrh5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿achr)、叶酸结合蛋白(fbp)、叶酸受体α、神经节苷脂gd2、o-乙酰化gd2(ogd2)、神经节苷脂gd3、糖蛋白100(gp100)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖(gpc3)、g蛋白偶联受体5d(gpcr5d)、her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-b2)、her3(erb-b3)、her4(erb-b4)、erbb二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(hmw-maa)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原a1(hla-a1)、人白细胞抗原a2(hla-a2)、il-22受体α(il-22rα)、il-13受体α2(il-13rα2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、l1细胞粘附分子(l1-cam)、l1-cam的ce7表位、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员a(lrrc8a)、路易斯y、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、mage-a10、间皮素(msln)、c-met、鼠类巨细胞病毒(cmv)、粘蛋白1(muc1)、muc16、自然杀伤细胞2族成员d(nkg2d)配体、黑色素a(mart-1)、神经细胞粘附分子(ncam)、癌胚胎抗原、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(psca)、前列腺特异性膜抗原(psma)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ror1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(tpbg，也称为5t4)、肿瘤相关糖蛋白72(tag72)、酪氨酸酶相关蛋白1(trp1，也称为tyrp1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(trp2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ异构酶或dct)、血管内皮生长因子受体(vegfr)、血管内皮生长因子受体2(vegfr2)、wilms肿瘤1(wt-1)、病原体特异性或病原体表达的抗原、或与通用标签相关的抗原、和/或生物素化分子、和/或由hiv、hcv、hbv或其他病原体表达的分子。

37.根据实施方案33-36中任一项所述的工程化细胞，其中所述靶抗原选自ror1、b细胞成熟抗原(bcma)、碳酸酐酶9(caix)、tegfr、her2/neu(受体酪氨酸激酶erbb2)、l1-cam、cd19、cd20、cd22、间皮素、cea和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、egfr、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、epha2、erb-b2、erb-b3、erb-b4、erbb二聚体、egfrviii、叶酸结合蛋白(fbp)、fcrl5、fcrh5、胎儿乙酰胆碱受体、gd2、gd3、g蛋白偶联受体5d(gpcr5d)、hmw-maa、il-22r-α、il-13r-α2、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、路易斯y、l1细胞粘附分子(l1-cam)、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、存活蛋白、tag72、b7-h6、il-13受体α2(il-13ra2)、ca9、gd3、hmw-maa、cd171、g250/caix、hla-a1、magea1、hla-a2、ny-eso-1、psca、叶酸受体-a、cd44v6、cd44v7/8、avb6整合素、8h9、ncam、vegf受体、5t4、胎儿achr、nkg2d配体、cd44v6、双重抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素、鼠cmv、粘蛋白1(muc1)、muc16、psca、nkg2d、ny-eso-1、mart-1、gp100、癌胚胎抗原、ror1、tag72、vegf-r2、癌胚抗原(cea)、her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白b2、cd123、c-met、gd-2、o-乙酰化gd2(ogd2)、ce7、wilms肿瘤1(wt-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、ccl-1、cd138、病原体特异性抗原和与通用标签相关的抗原。

38.根据实施方案1-37中任一项所述的工程化细胞，其中嵌合受体和/或所述重组抗原受体是或包含功能性非tcr抗原受体或者tcr或其抗原结合片段。

39.根据实施方案1-38中任一项所述的工程化细胞，其中嵌合受体和/或所述重组抗原受体是嵌合抗原受体(car)。

40.根据实施方案1-39中任一项所述的工程化细胞，其中嵌合受体和/或所述重组抗原受体包含含有抗原结合结构域的细胞外结构域。

41.根据实施方案40所述的工程化细胞，其中所述抗原结合结构域是或包含抗体或其抗体片段，所述抗体片段任选地是单链片段。

42.根据实施方案41所述的工程化细胞，其中所述片段包含通过柔性接头连接的抗体可变区。

43.根据实施方案41或实施方案42所述的工程化细胞，其中所述片段包含scfv。

44.根据实施方案1-43中任一项所述的工程化细胞，其中嵌合受体和/或所述重组抗原受体还包含间隔子和/或铰链区。

45.根据实施方案1-44中任一项所述的工程化细胞，其中嵌合受体和/或所述重组抗原受体包含细胞内信号传导区域。

46.根据实施方案45所述的工程化细胞，其中所述细胞内信号传导区域包含细胞内信号传导结构域。

47.根据实施方案46所述的工程化细胞，其中所述细胞内信号传导结构域是或包含初级信号传导结构域、能够在t细胞中诱导初级激活信号的信号传导结构域、t细胞受体(tcr)组分的信号传导结构域和/或包含基于免疫受体酪氨酸的激活基序(itam)的信号传导结构域。

48.根据实施方案47所述的工程化细胞，其中所述细胞内信号传导结构域是或包含cd3链任选cd3-zeta(cd3ζ)链的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。

49.根据实施方案45-48中任一项所述的工程化细胞，其中嵌合受体和/或所述重组抗原受体还包含设置在所述细胞外结构域与所述细胞内信号传导区域之间的跨膜结构域。

50.根据实施方案45-49中任一项所述的工程化细胞，其中所述细胞内信号传导区域还包含共刺激信号传导区域。

51.根据实施方案50所述的工程化细胞，其中所述共刺激信号传导区域包含t细胞共刺激分子的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。

52.根据实施方案50或实施方案51所述的工程化细胞，其中所述共刺激信号传导区域包含cd28、4-1bb或icos的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。

53.根据实施方案50-52中任一项所述的工程化细胞，其中所述共刺激信号传导区域位于所述跨膜结构域与所述细胞内信号传导区域之间。

54.根据实施方案2-53中任一项所述的工程化细胞，其中编码所述psma或其修饰形式的核酸和编码嵌合受体和/或所述重组抗原受体的核酸被包含在由所述细胞包含的一个或多个多核苷酸内。

55.根据实施方案54所述的工程化细胞，其中所述一个或多个多核苷酸是一个多核苷酸，并且编码所述psma或其修饰形式的核酸和编码所述嵌合受体和/或所述重组抗原受体的核酸可操作地连接至相同的启动子并且任选地通过内部核糖体进入位点(ires)或编码自切割肽或导致核糖体跳跃的肽的核酸分开，所述自切割肽或导致核糖体跳跃的肽任选地是t2a、p2a、e2a或f2a。

56.根据实施方案39-55中任一项所述的工程化细胞，其中编码所述psma或其修饰形式的核酸和编码所述car的核酸被包含在由所述细胞包含的一个多核苷酸内，所述多核苷酸按5’至3’的顺序包含：

i)编码信号肽的核酸；

ii)编码所述car的核酸，所述car包含scfv；间隔子；跨膜结构域；包含共刺激信号传导区域、和cd3-zeta(cd3ζ)链的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分的细胞内区域；

iii)编码自切割肽或导致核糖体跳跃的肽的核酸序列，所述自切割肽或导致核糖体跳跃的肽任选地是t2a、p2a、e2a或f2a；以及

iv)编码所述psma或其修饰形式的核酸，所述psma或其修饰形式任选地包含seqidno:52所示的氨基酸序列或其片段；或展现与seqidno:52或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且包含所述一个或多个n末端氨基酸残基的缺失的氨基酸序列。

57.根据实施方案55或56所述的工程化细胞，其中编码所述psma或其修饰形式的核酸和编码所述嵌合受体和/或所述重组抗原受体的核酸可操作地连接至两个不同的启动子。

58.根据实施方案55-57中任一项所述的工程化细胞，其中编码所述嵌合受体和/或所述重组抗原受体的核酸存在于编码所述psma或其修饰形式的核酸的下游。

59.根据实施方案54-58中任一项所述的工程化细胞，其中所述一个或多个多核苷酸包含两个不同的多核苷酸，编码所述psma或其修饰形式的核酸和编码所述嵌合受体和/或所述重组抗原受体的核酸可操作地连接至两个不同的启动子，和/或编码所述psma或其修饰形式的核酸和编码所述嵌合受体和/或所述重组抗原受体的核酸存在于或被插入在所述细胞的基因组内的不同位置。

60.根据实施方案1-59中任一项所述的工程化细胞，其中：

所述细胞是免疫细胞；

所述细胞是t细胞，任选地选自cd4+t细胞及其亚型和cd8+t细胞及其亚型；

所述细胞是nk细胞；和/或

所述细胞源自多潜能或多能细胞，其任选地是ipsc。

61.根据实施方案60所述的工程化细胞，其中：

所述细胞是如下t细胞，所述t细胞选自中枢记忆t细胞、效应记忆t细胞、幼稚t细胞、干细胞中枢记忆t细胞、效应t细胞和调节性t细胞；和/或

所述细胞包含多种细胞，所述多种细胞包含至少50％的如下细胞的群体，所述细胞选自：cd4+t细胞、cd8+t细胞、中枢记忆t细胞、效应记忆t细胞、幼稚t细胞、干细胞中枢记忆t细胞、效应t细胞和调节性t细胞。

62.根据实施方案61所述的工程化细胞，其中所述细胞是调节性t细胞。

63.根据实施方案60-62中任一项所述的工程化细胞，其还包含重组foxp3或其变体。

64.一种多核苷酸，其包含编码前列腺特异性膜抗原(psma)或其修饰形式的第一核酸和编码嵌合受体和/或重组抗原受体的第二核酸。

65.根据实施方案64所述的多核苷酸，其中编码所述psma或其修饰形式的核酸和编码所述嵌合受体和/或所述重组抗原受体的核酸可操作地连接至相同的启动子并且任选地通过内部核糖体进入位点(ires)或编码自切割肽或导致核糖体跳跃的肽的核酸分开，所述自切割肽或导致核糖体跳跃的肽任选地是t2a、p2a、e2a或f2a。

66.根据实施方案64所述的多核苷酸，其中编码所述psma或其修饰形式的核酸和编码所述嵌合受体和/或所述重组抗原受体的核酸可操作地连接至两个不同的启动子。

67.根据实施方案64-66中任一项所述的多核苷酸，其中编码所述嵌合受体和/或所述重组抗原受体的核酸存在于编码所述psma或其修饰形式的核酸的下游。

68.多核苷酸组，其包含含有编码前列腺特异性膜抗原(psma)或其修饰形式的核酸的第一多核苷酸和含有编码嵌合受体和/或重组抗原受体的核酸的第二多核苷酸。

69.一种组合物，其包含根据实施方案68所述的多核苷酸组。

70.根据实施方案64-69中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中编码所述psma或其修饰形式的核酸和编码所述嵌合受体和/或所述重组抗原受体的核酸各自独立地可操作地连接至启动子。

71.根据实施方案64-70中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述编码的psma或其修饰形式能够在细胞表面上表达。

72.根据实施方案64-71中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述编码的psma或其修饰形式包含细胞外部分和跨膜结构域。

73.根据实施方案64-72中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述psma或其修饰形式，任选地所述细胞外部分，能够由psma靶向分子或其部分识别。

74.根据实施方案73所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述psma靶向分子或其部分：

能够结合psma和/或其修饰形式，和/或

能够结合psma的活性位点和/或psma的修饰形式的活性位点，和/或

能够被psma切割和/或被psma的修饰形式切割；和/或

是psma和/或其修饰形式的拮抗剂、选择性拮抗剂、反向激动剂、选择性反向激动剂、激动剂、选择性激动剂、抑制剂和/或选择性抑制剂。

75.根据实施方案64-74中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述编码的psma或其修饰形式包含n-乙酰化α-连接的酸性二肽酶(naaladase)结构域，和/或包含一个或多个活性位点残基和/或参与psma底物结合和/或psma催化活性的残基，其参考seqidno:23所示的氨基酸序列中的位置任选地是在位置210、257、269、272、377、387、387、424、424、425、433、436、453、517、518、519、552、553、534、535、536、552、553、628、666、689、699和/或700处的残基。

76.根据实施方案64-75中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述编码的psma或其修饰形式是人psma或其修饰形式。

77.根据实施方案64-76中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述编码的psma或其修饰形式是野生型psma，任选地野生型人psma。

78.根据实施方案64-77中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述编码的psma或其修饰形式包含seqidno:23所示氨基酸序列或其细胞外和/或跨膜结构域，或展现与seqidno:23或其细胞外和/或跨膜结构域至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。

79.根据实施方案64-76和78中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述编码的psma或其修饰形式是经修饰的psma，所述经修饰的psma与野生型或未经修饰的psma相比包含一个或多个氨基酸修饰。

80.根据实施方案79所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述野生型或未经修饰的psma是人psma和/或包含seqidno:23所示的氨基酸序列或展现与其至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。

81.根据实施方案79或实施方案80所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述一个或多个氨基酸修饰包含一个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入。

82.根据实施方案79-81中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中与所述野生型或未经修饰的psma相比，所述编码的经修饰的psma(i)展现出降低的内源性信号传导；(ii)展现出增加的细胞表面表达；和/或(iii)展现出降低的细胞内化。

83.根据实施方案64-76和78-82中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中参考seqidno:23所示的氨基酸序列中的位置，所述编码的经修饰的psma包含与w2g对应的至少一个氨基酸取代或者不包含w2或者不包含在位置2处的任何残基。

84.根据实施方案83所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述编码的经修饰的psma包含seqidno:24所示的氨基酸序列或其片段，或展现与seqidno:24或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且包含所述至少一个氨基酸取代的氨基酸序列。

85.根据实施方案64-76和78-84中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中与所述野生型或未经修饰的psma相比，所述编码的经修饰的psma包含在所述细胞内部分中的一个或多个n末端氨基酸残基的缺失。

86.根据实施方案85所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述编码的经修饰psma包含至多2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个或18个n末端氨基酸残基的缺失。

87.根据实施方案64-76和78-86中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中参考seqidno:23所示的氨基酸序列中的位置，所述编码的经修饰的psma包含在从位置2、3、4或5的残基开始并且直至位置6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19的n末端处的连续氨基酸序列的缺失。

88.根据实施方案64-76和78-87中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述编码的psma或其修饰形式包含seqidno:25或52所示的氨基酸序列或其片段，或展现与seqidno:25或52或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且包含一个或多个n末端氨基酸残基的缺失并且任选地含有甲硫氨酸起始密码子的氨基酸序列。

89.根据实施方案64-88中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述psma或其修饰形式由以下编码：seqidno:26或53所示的核酸序列或其片段；或展现与seqidno:26或53或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且任选地含有编码甲硫氨酸起始密码子的核酸的核酸序列。

90.根据实施方案64-89中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述psma或其修饰形式由被修饰为无cpg和/或经密码子优化的核酸序列编码。

91.根据实施方案90所述的工程化细胞，其中所述psma或其修饰形式由以下编码：seqidno:27所示的核酸序列或其片段；或展现与seqidno:27或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且任选地含有编码甲硫氨酸起始密码子的核酸的核酸序列。

92.根据实施方案64-76和78-91中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中：

所述编码的经修饰的psma包含所述野生型或未经修饰的psma的跨膜结构域的全部或基本上全部；或

所述编码的经修饰的psma包含具有与所述野生型或未经修饰的psma的跨膜结构域相同或至少相同数量的氨基酸的跨膜结构域。

93.根据实施方案73-91中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述psma靶向分子是或包含小分子、配体、抗体或其抗原结合片段、适体、肽或其缀合物。

94.根据实施方案73-93中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述psma靶向分子是或包含小分子。

95.根据实施方案94所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述小分子选自2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)、(氨基苯乙烯基)吡啶鎓(asp)染料、2-(3-[1-羧基-5-[(5-碘-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基]-脲基)-戊二酸(yc-vi-11)、2-[3-[1-羧基-5-(4-碘-苯甲酰氨基)-戊基]-脲基]-戊二酸(dcibzl或yc-7)、1-(3-羧基-4-(3-羟基-6-氧代-6h-呫吨-9-基)苯基氨基)-9,16,24-三氧代-1-硫氧代-2,8,17,23,25-五氮杂二十八烷-7,22,26,28-四甲酸(yc-36)、glu-nh-co-nh-lys(ahx)-hbed-cc(psma-hbed-cc)、9-(4-氟-3-[羟基甲基]丁基)鸟嘌呤(fhbg)、glu-脲-lys-(ahx)-[(hbed-cc)](psma-11)、psma-617、2-(膦酰基甲基)戊二酸、2-pmpa、氟苯甲酰氨基磷酸酯、(2s,4s)-2-氟-4-(膦酰基甲基)戊二酸(bay1075553)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-s-甲基-l-半胱氨酸(-dcmc)、euk-subkff-dotaga、2-[3-(1,3-二羧基丙基)脲基]戊二酸(dupa)、psman、n'-双[2-羟基-5-(羧基乙基)苄基]乙二胺-n,n'-二乙酸、mip-1072、mip-1095、mip-1404、mip-1405和n-[[[(1s)-1-羧基-3-甲基丁基]氨基]羰基]-l-谷氨酸(zj43)、(s)-2-(4-碘苄基膦酰基甲基)-戊二酸(gpi-18431)、2-[(3-{4-[(2-氨基-4-羟基-蝶啶-6-基甲基)-氨基]-苯甲酰氨基}-3-羧基-丙基)-羟基-磷酰基甲基]-戊二酸(mpe)、(2s,3's)-{[(3'-氨基-3'-羧基-丙基)-羟基磷酰基]甲基}-戊二酸(epe)和(2s)-2-{[(2-羧基-乙基)-羟基-磷酰基]甲基}-戊二酸(spe)。

96.根据实施方案95所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述psma靶向分子是或包含2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)或n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)。

97.根据实施方案73-93中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述psma靶向分子是或包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段任选地具有与psma特异性地结合的结合位点。

98.根据实施方案97所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述抗体或其抗原结合片段选自j591、dfo-j591、cyt-356、j415、3/a12、3/f11、3/e7、d2b、107-1a4、ypsma-1、ypsma-2、3e6、2g7、24.4e6、gcp-02、gcp-04、gcp-05、j533、e99、1g9、3c6、4.40、026、d7-fc、d7-ch3、4d4、a5、及其抗原结合片段和衍生物，或包含cdr3、vh和/或vl，和/或竞争与psma结合或结合与任何前述相同的psma表位。

99.根据实施方案73-93中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述psma靶向分子是或包含适体或其缀合物。

100.根据实施方案99所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述适体包含a9、a10、a10g、a10-3.2或szt101或其缀合物。

101.根据实施方案64-100中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述编码的嵌合受体和/或所述编码的重组抗原受体能够结合如下靶抗原，所述靶抗原与疾病或障碍的细胞或组织相关、对疾病、障碍或病症的细胞或组织是特异的和/或在疾病或障碍的细胞或组织上表达。

102.根据实施方案101所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述疾病、障碍或病症是感染性疾病或障碍、自身免疫性疾病、炎性疾病、或肿瘤或癌症。

103.根据实施方案101或实施方案102所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述靶抗原是肿瘤抗原。

104.根据实施方案101-103中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述靶抗原选自αvβ6整合素(avb6整合素)、b细胞成熟抗原(bcma)、b7-h3、b7-h6、碳酸酐酶9(ca9，也称为caix或g250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1b(ctag，也称为ny-eso-1和lage-2)、癌胚抗原(cea)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、cc基序趋化因子配体1(ccl-1)、cd19、cd20、cd22、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、cd44v6、cd44v7/8、cd123、cd133、cd138、cd171、硫酸软骨素蛋白聚糖4(cspg4)、表皮生长因子蛋白(egfr)、截短的表皮生长因子蛋白(tegfr)、iii型表皮生长因子受体突变(egfrviii)、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、肝配蛋白b2、肝配蛋白受体a2(epha2)、雌激素受体、fc受体样蛋白5(fcrl5；也称为fc受体同源物5或fcrh5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿achr)、叶酸结合蛋白(fbp)、叶酸受体α、神经节苷脂gd2、o-乙酰化gd2(ogd2)、神经节苷脂gd3、糖蛋白100(gp100)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖(gpc3)、g蛋白偶联受体5d(gpcr5d)、her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-b2)、her3(erb-b3)、her4(erb-b4)、erbb二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(hmw-maa)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原a1(hla-a1)、人白细胞抗原a2(hla-a2)、il-22受体α(il-22rα)、il-13受体α2(il-13rα2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、l1细胞粘附分子(l1-cam)、l1-cam的ce7表位、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员a(lrrc8a)、路易斯y、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、mage-a10、间皮素(msln)、c-met、鼠类巨细胞病毒(cmv)、粘蛋白1(muc1)、muc16、自然杀伤细胞2族成员d(nkg2d)配体、黑色素a(mart-1)、神经细胞粘附分子(ncam)、癌胚胎抗原、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(psca)、前列腺特异性膜抗原(psma)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ror1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(tpbg，也称为5t4)、肿瘤相关糖蛋白72(tag72)、酪氨酸酶相关蛋白1(trp1，也称为tyrp1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(trp2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ异构酶或dct)、血管内皮生长因子受体(vegfr)、血管内皮生长因子受体2(vegfr2)、wilms肿瘤1(wt-1)、病原体特异性或病原体表达的抗原、或与通用标签相关的抗原、和/或生物素化分子、和/或由hiv、hcv、hbv或其他病原体表达的分子。

105.根据实施方案101-104中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述靶抗原选自ror1、b细胞成熟抗原(bcma)、碳酸酐酶9(caix)、tegfr、her2/neu(受体酪氨酸激酶erbb2)、l1-cam、cd19、cd20、cd22、间皮素、cea和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、egfr、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、epha2、erb-b2、erb-b3、erb-b4、erbb二聚体、egfrviii、叶酸结合蛋白(fbp)、fcrl5、fcrh5、胎儿乙酰胆碱受体、gd2、gd3、g蛋白偶联受体5d(gpcr5d)、hmw-maa、il-22r-α、il-13r-α2、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、路易斯y、l1细胞粘附分子(l1-cam)、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、存活蛋白、tag72、b7-h6、il-13受体α2(il-13ra2)、ca9、gd3、hmw-maa、cd171、g250/caix、hla-a1、magea1、hla-a2、ny-eso-1、psca、叶酸受体-a、cd44v6、cd44v7/8、avb6整合素、8h9、ncam、vegf受体、5t4、胎儿achr、nkg2d配体、cd44v6、双重抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素、鼠cmv、粘蛋白1(muc1)、muc16、psca、nkg2d、ny-eso-1、mart-1、gp100、癌胚胎抗原、ror1、tag72、vegf-r2、癌胚抗原(cea)、her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白b2、cd123、c-met、gd-2、o-乙酰化gd2(ogd2)、ce7、wilms肿瘤1(wt-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、ccl-1、cd138、病原体特异性抗原和与通用标签相关的抗原。

106.根据实施方案64-104中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述编码的嵌合受体和/或所述编码的重组抗原受体是或包含功能性非tcr抗原受体或者tcr或其抗原结合片段。

107.根据实施方案64-106中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述编码的嵌合受体和/或所述编码的重组抗原受体是嵌合抗原受体(car)。

108.根据实施方案64-107中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述编码的嵌合受体和/或所述编码的重组抗原受体包含含有抗原结合结构域的细胞外结构域。

109.根据实施方案108所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述抗原结合结构域是或包含抗体或其抗体片段，所述抗体片段任选地是单链片段。

110.根据实施方案109所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述片段包含通过柔性接头连接的抗体可变区。

111.根据实施方案109或实施方案110所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述片段包含scfv。

112.根据实施方案64-111中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述编码的嵌合受体和/或所述编码的重组抗原受体还包含间隔子和/或铰链区。

113.根据实施方案64-112中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述编码的嵌合受体和/或所述编码的重组抗原受体包含细胞内信号传导区域。

114.根据实施方案113所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述细胞内信号传导区域包含细胞内信号传导结构域。

115.根据实施方案114所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物细胞，其中所述细胞内信号传导结构域是或包含初级信号传导结构域、能够在t细胞中诱导初级激活信号的信号传导结构域、t细胞受体(tcr)组分的信号传导结构域和/或包含基于免疫受体酪氨酸的激活基序(itam)的信号传导结构域。

116.根据实施方案115所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述细胞内信号传导结构域是或包含cd3链任选cd3-zeta(cd3ζ)链的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。

117.根据实施方案113-116中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述嵌合受体和/或所述重组抗原受体还包含设置在所述细胞外结构域与所述细胞内信号传导区域之间的跨膜结构域。

118.根据实施方案113-117中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述细胞内信号传导区域还包含共刺激信号传导区域。

119.根据实施方案118所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述共刺激信号传导区域包含t细胞共刺激分子的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。

120.根据实施方案118或实施方案119所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述共刺激信号传导区域包含cd28、4-1bb或icos的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。

121.根据实施方案118-120中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物，其中所述共刺激信号传导区域位于所述跨膜结构域与所述细胞内信号传导区域之间。

122.根据实施方案107-121中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸按5’至3’的顺序包含：

i)编码信号肽的核酸；

ii)编码所述car的核酸，所述car包含scfv；间隔子；跨膜结构域；包含共刺激信号传导区域、和cd3-zeta(cd3ζ)链的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分的细胞内区域；

iii)编码自切割肽或导致核糖体跳跃的肽的核酸序列，所述自切割肽或导致核糖体跳跃的肽任选地是t2a、p2a、e2a或f2a；以及

iv)编码所述psma或其修饰形式的核酸，所述psma或其修饰形式任选地包含seqidno:52所示的氨基酸序列或其片段；或展现与seqidno:52或其片段至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且包含所述一个或多个n末端氨基酸残基的缺失的氨基酸序列。

123.一种载体，其包含根据实施方案66-67和70-122中任一项所述的多核苷酸。

124.根据实施方案123所述的载体，其是病毒载体。

125.根据实施方案123或实施方案124所述的载体，其是逆转录病毒载体。

126.根据实施方案123-125中任一项所述的载体，其是慢病毒载体或γ逆转录病毒载体。

127.一种载体组，其包含第一载体和第二载体，其中所述第一载体包含根据实施方案66-122中任一项所述的第一多核苷酸，并且所述第二载体包含根据实施方案66-122中任一项所述的第二多核苷酸。

128.一种组合物，其包含根据实施方案127所述的载体组。

129.一种生产工程化细胞的方法，所述方法包括将根据实施方案64-121中任一项所述的多核苷酸、或组的多核苷酸或组合物中的多核苷酸、或者根据实施方案123-128中任一项所述的载体或组的载体或组合物中的载体引入细胞中。

130.一种工程化细胞，其通过根据实施方案129所述的方法产生。

131.一种工程化细胞，其包含根据实施方案64-122中任一项所述的多核苷酸、或组的多核苷酸或组合物中的多核苷酸、或根据实施方案123-128中任一项所述的载体、或组的载体或组合物中的载体。

132.根据实施方案130和131所述的工程化细胞，其中：

所述细胞是免疫细胞；

所述细胞是t细胞，任选地选自cd4+t细胞及其亚型和cd8+t细胞及其亚型；

所述细胞是nk细胞；和/或

所述细胞源自多潜能或多能细胞，其任选地是ipsc。

133.一种组合物，其包含根据实施方案1-63和130-132中任一项所述的工程化细胞。

134.根据实施方案133所述的组合物，其还包含药学上可接受的赋形剂。

135.根据实施方案133或实施方案134所述的组合物，其还包含psma靶向分子。

136.一种治疗方法，其包括将根据实施方案1-63和130-132中任一项所述的工程化细胞或根据实施方案133-135中任一项所述的组合物给予至受试者。

137.根据实施方案136所述的方法，其还包括：

向所述受试者给予psma靶向分子或包含psma靶向分子的组合物。

138.根据实施方案137所述的方法，其中所述psma靶向分子是或包含治疗剂，或还包含治疗剂。

139.一种治疗方法，所述方法包括向受试者给予：

(a)根据实施方案1-63和130-132中任一项所述的工程化细胞或根据实施方案133-135中任一项所述的组合物，以及

(b)是或包含或还包含治疗剂的psma靶向分子、或含有是或包含或还包含治疗剂的psma靶向分子的组合物。

140.一种治疗方法，其包括向已经被给予根据实施方案1-63和130-132中任一项所述的工程化细胞或根据实施方案133-135中任一项所述的组合物的受试者给予psma靶向分子，所述psma靶向分子是或包含或还包含治疗剂，或含有是或包含或还包含治疗剂的psma靶向分子的组合物。

141.根据实施方案137-140中任一项所述的方法，其中所述psma靶向分子或包含所述psma靶向分子的组合物的给予与所述工程化细胞或包含所述工程化细胞的组合物的给予同时或按任何顺序依次进行。

142.根据实施方案137-141中任一项所述的方法，其中任选地在相同或不同组合物中，所述psma靶向分子或包含所述psma靶向分子的组合物的给予与所述工程化细胞或包含所述工程化细胞的组合物的给予同时进行。

143.根据实施方案137-141中任一项所述的方法，其中所述psma靶向分子或包含所述psma靶向分子的组合物的给予与所述工程化细胞或包含所述工程化细胞的组合物的给予按任何顺序依次进行。

144.根据实施方案137-143中任一项所述的方法，其中所述psma靶向分子或其部分：

能够结合psma和/或其修饰形式，和/或

能够结合psma的活性位点和/或psma的修饰形式的活性位点，和/或

能够被psma切割和/或被psma的修饰形式切割；和/或

是psma和/或其修饰形式的拮抗剂、选择性拮抗剂、反向激动剂、选择性反向激动剂、激动剂、选择性激动剂、抑制剂和/或选择性抑制剂。

145.根据实施方案136-144中任一项所述的方法，其中所述psma或其修饰形式在一种或多种所述工程化细胞上表达。

146.根据实施方案136-145中任一项所述的方法，其中所述受试者患有疾病、障碍或病症，任选地癌症，肿瘤，自身免疫性疾病、障碍或病症，或感染性疾病。

147.根据实施方案137-146中任一项所述的方法，其中所述psma靶向分子是或包含小分子、配体、抗体或其抗原结合片段、适体、肽或其缀合物。

148.根据实施方案137-147中任一项所述的方法，其中所述psma靶向分子是或包含小分子。

149.根据实施方案148所述的方法，其中所述小分子选自2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)、(氨基苯乙烯基)吡啶鎓(asp)染料、2-(3-[1-羧基-5-[(5-碘-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基]-脲基)-戊二酸(yc-vi-11)、2-[3-[1-羧基-5-(4-碘-苯甲酰氨基)-戊基]-脲基]-戊二酸(dcibzl或yc-7)、1-(3-羧基-4-(3-羟基-6-氧代-6h-呫吨-9-基)苯基氨基)-9,16,24-三氧代-1-硫氧代-2,8,17,23,25-五氮杂二十八烷-7,22,26,28-四甲酸(yc-36)、glu-nh-co-nh-lys(ahx)-hbed-cc(psma-hbed-cc)、9-(4-氟-3-[羟基甲基]丁基)鸟嘌呤(fhbg)、glu-脲-lys-(ahx)-[(hbed-cc)](psma-11)、psma-617、2-(膦酰基甲基)戊二酸、2-pmpa、氟苯甲酰氨基磷酸酯、(2s,4s)-2-氟-4-(膦酰基甲基)戊二酸(bay1075553)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-s-甲基-l-半胱氨酸(-dcmc)、euk-subkff-dotaga、2-[3-(1,3-二羧基丙基)脲基]戊二酸(dupa)、psman、n'-双[2-羟基-5-(羧基乙基)苄基]乙二胺-n,n'-二乙酸、mip-1072、mip-1095、mip-1404、mip-1405和n-[[[(1s)-1-羧基-3-甲基丁基]氨基]羰基]-l-谷氨酸(zj43)、(s)-2-(4-碘苄基膦酰基甲基)-戊二酸(gpi-18431)、2-[(3-{4-[(2-氨基-4-羟基-蝶啶-6-基甲基)-氨基]-苯甲酰氨基}-3-羧基-丙基)-羟基-磷酰基甲基]-戊二酸(mpe)、(2s,3's)-{[(3'-氨基-3'-羧基-丙基)-羟基磷酰基]甲基}-戊二酸(epe)和(2s)-2-{[(2-羧基-乙基)-羟基-磷酰基]甲基}-戊二酸(spe)。

150.根据实施方案149所述的方法，其中所述psma靶向分子是或包含2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)或n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)。

151.根据实施方案137-147中任一项所述的方法，其中所述psma靶向分子是或包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段任选地具有与psma特异性地结合的结合位点。

152.根据实施方案151所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段选自j591、dfo-j591、cyt-356、j415、3/a12、3/f11、3/e7、d2b、107-1a4、ypsma-1、ypsma-2、3e6、2g7、24.4e6、gcp-02、gcp-04、gcp-05、j533、e99、1g9、3c6、4.40、026、d7-fc、d7-ch3、4d4、a5、及其抗原结合片段和衍生物，或包含cdr3、vh和/或vl，和/或竞争与psma结合或结合与任何前述相同的psma表位。

153.根据实施方案137-152中任一项所述的方法，其中所述psma靶向分子是或包含适体或其缀合物，所述适体或其缀合物任选地是或包含a9、a10、a10g、a10-3.2或szt101或其缀合物。

154.根据实施方案138-153中任一项所述的方法，其中所述治疗剂能够调节肿瘤微环境(tme)或对肿瘤具有细胞毒性。

155.根据实施方案138-154中任一项所述的方法，其中所述治疗剂是免疫调节剂、细胞毒性剂、抗癌剂或放射性治疗剂。

156.根据实施方案138-155中任一项所述的方法，其中所述psma靶向分子是或包含前药，所述前药是或包含所述治疗剂或能够转化成或暴露所述治疗剂，和/或所述psma靶向分子在与所述psma或其修饰形式结合后能够被切割，其中切割产生包含所述治疗剂的至少一种切割产物。

157.根据实施方案156所述的方法，其中所述psma靶向分子是或包含米沙伽近(g-202(8-o-(12-氨基十二烷酰)-8-o-去丁酰基毒胡萝卜素)-asp-γ-glu-γ-glu-γ-glugluoh)。

158.根据实施方案138-155中任一项所述的方法，其中所述psma靶向分子是抗体-药物缀合物(adc)。

159.根据实施方案138-158中任一项所述的方法，其中所述psma靶向分子还包含治疗剂，并且所述治疗剂直接地或间接地任选地经由接头连接至所述psma靶向分子的能够与所述psma或其修饰形式结合的一部分。

160.根据实施方案159所述的方法，其中所述接头是肽或多肽或是化学接头。

161.根据实施方案159或实施方案160所述的方法，其中所述接头是可释放的接头或可切割的接头。

162.根据实施方案159-161中任一项所述的方法，其中所述接头能够在所述psma或其修饰形式被所述psma靶向分子结合后被切割，其中切割产生包含所述治疗剂的至少一种切割产物。

163.根据实施方案161或实施方案162所述的方法，其中所述可释放的接头或所述可切割的接头在所述肿瘤微环境(tme)中存在的一种或多种条件或因子的存在下被释放或切割，其中切割产生包含所述治疗剂的至少一种切割产物。

164.根据实施方案163所述的方法，其中存在于所述肿瘤微环境(tme)中的所述一种或多种条件或因子包含基质金属蛋白酶(mmp)、低氧条件或酸性条件。

165.根据实施方案138-164中任一项所述的方法，其中所述psma靶向分子诱导一种或多种所述工程化细胞和/或由所述嵌合受体和/或所述重组抗原受体特异性地识别的受试者中存在的细胞或组织的杀伤或破坏。

166.根据实施方案138-165中任一项所述的方法，其中所述治疗剂包含细胞毒性剂。

167.根据实施方案166所述的方法，其中所述细胞毒性剂是或包含毒素。

168.根据实施方案167所述的方法，其中所述毒素是肽毒素、蓖麻毒素a链毒素、相思豆毒素a链、白喉毒素(dt)a链、假单胞菌外毒素、志贺毒素a链、白树毒素、苦瓜毒蛋白(momordin)、美洲商陆抗病毒蛋白、皂草素、天花粉蛋白、气单胞菌溶素原(proaerolysin)或大麦毒素。

169.根据实施方案138-168中任一项所述的方法，其中所述治疗剂包含光敏剂，所述光敏剂任选地是或包含焦脱镁叶绿酸-a(ppa)或yc-9。

170.根据实施方案138-169中任一项所述的方法，其中所述psma靶向分子的给予不会或基本上不会诱导健康组织或健康细胞、不含所述工程化细胞和/或不表达所述抗原的细胞或组织的杀伤或破坏。

171.根据实施方案138-157和159-165中任一项所述的方法，其中所述治疗剂是免疫调节剂。

172.根据实施方案171所述的方法，其中所述免疫调节剂是免疫检查点抑制剂或调节剂或细胞因子。

173.根据实施方案172所述的方法，其中所述免疫调节剂是免疫检查点抑制剂，所述免疫检查点抑制剂能够抑制或阻断免疫检查点分子的功能或涉及免疫检查点分子的信号传导途径。

174.根据实施方案173所述的方法，其中所述免疫检查点分子选自pd-1、pd-l1、pd-l2、ctla-4、lag-3、tim3、vista、腺苷受体或细胞外腺苷，任选地腺苷2a受体(a2ar)或腺苷2b受体(a2br)、或涉及上述任何一种的腺苷或途径。

175.根据实施方案136-174中任一项所述的方法，所述方法还包括检测表达所述psma或其修饰形式的细胞，和/或检测所述psma靶向分子与所述psma或其修饰形式的结合和/或所述psma靶向分子的存在。

176.根据实施方案175所述的方法，其中所述检测是在体内进行的和/或所述检测是经由体内成像进行的。

177.一种检测工程化细胞的方法，所述方法包括：

(a)使根据实施方案1-63和130-132中任一项所述的工程化细胞或者根据实施方案133或实施方案134所述的组合物与psma靶向分子接触；并且

(b)检测所述psma靶向分子对或与所述psma或其修饰形式和/或所述工程化细胞的结合和/或所述psma靶向分子的存在。

178.根据实施方案177所述的方法，其中所述接触包括向已经被给予过所述工程化细胞的受试者给予所述psma靶向分子。

179.一种检测受试者中工程化细胞的存在或不存在的方法，所述方法包括：

(a)向受试者给予psma靶向分子，所述受试者先前已经被给予根据实施方案1-63和130-132中任一项所述的工程化细胞或根据实施方案133-135中任一项所述的组合物，其中所述工程化细胞在受试者中表达嵌合受体和/或重组抗原受体和psma或其修饰形式；并且

(b)检测所述受试者中所述psma靶向分子与所述psma或其修饰形式和/或与所述工程化细胞的结合和/或所述psma靶向分子的存在。

180.根据实施方案179所述的方法，其中所述检测是经由体内成像进行的。

181.根据实施方案177-180中任一项所述的方法，其中所述psma靶向分子或其部分：

能够结合psma和/或其修饰形式，和/或

能够结合psma的活性位点和/或psma的修饰形式的活性位点，和/或

能够被psma切割和/或被psma的修饰形式切割；和/或

是psma和/或其修饰形式的拮抗剂、选择性拮抗剂、反向激动剂、选择性反向激动剂、激动剂、选择性激动剂、抑制剂和/或选择性抑制剂。

182.根据实施方案177-181中任一项所述的方法，其中所述psma靶向分子是或包含小分子、配体、抗体或其抗原结合片段、适体、肽或其缀合物。

183.根据实施方案177-182中任一项所述的方法，其中所述psma靶向分子是或包含小分子。

184.根据实施方案183所述的方法，其中所述小分子选自2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)、(氨基苯乙烯基)吡啶鎓(asp)染料、2-(3-[1-羧基-5-[(5-碘-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基]-脲基)-戊二酸(yc-vi-11)、2-[3-[1-羧基-5-(4-碘-苯甲酰氨基)-戊基]-脲基]-戊二酸(dcibzl或yc-7)、1-(3-羧基-4-(3-羟基-6-氧代-6h-呫吨-9-基)苯基氨基)-9,16,24-三氧代-1-硫氧代-2,8,17,23,25-五氮杂二十八烷-7,22,26,28-四甲酸(yc-36)、glu-nh-co-nh-lys(ahx)-hbed-cc(psma-hbed-cc)、9-(4-氟-3-[羟基甲基]丁基)鸟嘌呤(fhbg)、glu-脲-lys-(ahx)-[(hbed-cc)](psma-11)、psma-617、2-(膦酰基甲基)戊二酸、2-pmpa、氟苯甲酰氨基磷酸酯、(2s,4s)-2-氟-4-(膦酰基甲基)戊二酸(bay1075553)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-s-甲基-l-半胱氨酸(-dcmc)、euk-subkff-dotaga、2-[3-(1,3-二羧基丙基)脲基]戊二酸(dupa)、psman、n'-双[2-羟基-5-(羧基乙基)苄基]乙二胺-n,n'-二乙酸、mip-1072、mip-1095、mip-1404、mip-1405和n-[[[(1s)-1-羧基-3-甲基丁基]氨基]羰基]-l-谷氨酸(zj43)、(s)-2-(4-碘苄基膦酰基甲基)-戊二酸(gpi-18431)、2-[(3-{4-[(2-氨基-4-羟基-蝶啶-6-基甲基)-氨基]-苯甲酰氨基}-3-羧基-丙基)-羟基-磷酰基甲基]-戊二酸(mpe)、(2s,3's)-{[(3'-氨基-3'-羧基-丙基)-羟基磷酰基]甲基}-戊二酸(epe)和(2s)-2-{[(2-羧基-乙基)-羟基-磷酰基]甲基}-戊二酸(spe)。

185.根据实施方案184所述的方法，其中所述psma靶向分子是或包含2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)或n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)。

186.根据实施方案177-182中任一项所述的方法，其中所述psma靶向分子是或包含抗体或其抗原结合片段。

187.根据实施方案186所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段选自j591、dfo-j591、cyt-356、j415、3/a12、3/f11、3/e7、d2b、164-1a4、ypsma-1、ypsma-2、3e6、2g7、24.4e6、gcp-02、gcp-04、gcp-05、j533、e99、1g9、3c6、4.40、026、d7-fc、d7-ch3、4d4、a5、及其抗原结合片段和衍生物，或包含cdr3、vh和/或vl，和/或竞争与psma结合或结合与任何前述相同的psma表位。

188.根据实施方案177-182中任一项所述的方法，其中所述psma靶向分子是或包含适体或其缀合物。

189.根据实施方案188所述的方法，其中所述适体包含a9、a10、a10g、a10-3.2或szt101或其缀合物。

190.根据实施方案156-189中任一项所述的方法，其中所述检测包括鉴定所述受试者中的信号或来自所述受试者的样品的信号，其中：

所述psma靶向分子提供所述信号或诱导可检测的所述信号或能够与提供所述信号或诱导可检测的所述信号的部分结合；和/或

所述psma靶向分子是或包含提供所述信号或诱导可检测的所述信号的部分。

191.根据实施方案190所述的方法，其中所述部分包含放射性同位素、生物发光化合物、化学发光化合物、荧光化合物、发色化合物、量子点、纳米粒子、金属螯合物或酶。

192.根据实施方案190或实施方案191所述的方法，其中所述psma靶向分子是或包含成像探针或检测试剂，所述成像探针或检测试剂任选地是放射性配体。

193.根据实施方案190-192中任一项所述的方法，其中所述psma靶向分子是或包含所述部分，和/或所述psma靶向分子能够在结合所述psma或其修饰形式后被切割，其中切割产生包含所述部分的至少一种切割产物和/或是发荧光的和/或放射性的。

194.根据实施方案190-193中任一项所述的方法，其中所述psma靶向分子还包含提供信号或诱导可检测的信号的部分，并且所述部分直接地或间接地任选地经由接头连接至所述psma靶向分子的能够与所述psma或其修饰形式结合的一部分。

195.根据实施方案194所述的方法，其中所述接头是可释放的接头或可切割的接头。

196.根据实施方案194或实施方案195所述的方法，其中所述接头能够在结合所述psma或其修饰形式后被切割，其中切割产生包含所述部分的至少一种切割产物和/或是发荧光的和/或放射性的。

197.根据实施方案195或实施方案196所述的方法，其中所述可释放的接头或所述可切割的接头在所述肿瘤微环境(tme)中存在的一种或多种条件或因子的存在下被释放或切割，其中切割产生包含所述部分的至少一种切割产物和/或是发荧光的和/或放射性的。

198.根据实施方案197所述的方法，其中存在于所述肿瘤微环境(tme)中的所述一种或多种条件或因子包含基质金属蛋白酶(mmp)、低氧条件或酸性条件。

199.根据实施方案156和191-198中任一项所述的方法，其中所述放射性治疗剂、放射性同位素、放射性配体或放射性切割产物包含¹¹c、¹⁸f、⁶⁴cu、⁶⁸ga、⁶⁸ge、⁸⁶y、⁸⁹zr、⁹⁰y、^99mtc、¹¹¹in、¹²³i、¹²⁵i、¹⁷⁷lu和/或²¹³bi。

200.根据实施方案199所述的方法，其中所述psma靶向分子是2-(3-{1-羧基-5-[(6-[¹⁸f]氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(¹⁸f-dcfpyl)或n-[n-[(s)-l,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-[¹⁸f]氟苄基-l-半胱氨酸(¹⁸f-dcfbc)。

201.根据实施方案177-200中任一项所述的方法，其中所述接触和/或所述检测是在体内进行的和/或所述检测是经由体内成像进行的。

202.根据实施方案176和180-201中任一项所述的方法，其中所述体内成像选自磁共振成像(mri)、单光子发射计算机断层扫描(spect)、计算机断层扫描(ct)、计算机轴向断层扫描(cat)、电子束计算机断层扫描(ebct)、高分辨率计算机断层扫描(hrct)、内摆线断层扫描、正电子发射断层扫描(pet)、闪烁扫描、γ照相机、β+检测器、γ检测器、荧光成像、低光成像、x射线、生物发光成像和近红外(nir)光学断层扫描。

203.根据实施方案176和180-202中任一项所述的方法，其中所述体内成像是正电子发射断层扫描(pet)，任选地与计算机断层扫描(ct)偶联。

204.根据实施方案175和177-203中任一项所述的方法，其中所述方法能够检测低至或少至、或低至或少至大约4,000个、5,000个、6,000个、7,000个、8,000个、9,000个或10,000个细胞，或在指定体积中存在的低至或少至大约4,000个、5,000个、6,000个、7,000个、8,000个、9,000个或10,000个细胞。

205.根据实施方案204所述的方法，其中所述指定体积是液体的、样品的和/或器官或组织的体积和/或在或在约10μl与约100μl之间。

206.根据实施方案177-200中任一项所述的方法，其中所述接触和/或所述检测在体外或离体进行。

207.根据实施方案177-200和206中任一项所述的方法，其中所述接触和/或所述检测包含免疫组织化学(ihc)、免疫细胞化学或流式细胞术。

208.根据实施方案177-200、206和207中任一项所述的方法，其中所述方法能够检测低至或少至、或低至或少至大约2,000个、3,000个、4,000个、5,000个、6,000个、7,000个、8,000个、9,000个或10,000个细胞，或在指定体积中存在的低至或少至大约2,000个、3,000个、4,000个、5,000个、6,000个、7,000个、8,000个、9,000个或10,000个细胞。

209.根据实施方案208所述的方法，其中所述指定体积是液体的、样品的和/或器官或组织的体积和/或在或在约10μl与约100μl之间。

210.根据实施方案190-209中任一项所述的方法，所述方法还包括确定所述受试者中所给予的工程化细胞的数量或浓度。

211.根据实施方案210所述的方法，其中确定包括将所述信号与标准曲线进行比较。

212.根据实施方案211所述的方法，其中所述标准曲线是通过从含有限定数量的表达所述psma或其修饰形式的细胞的多个对照样品中检测所述信号而产生的，所述多个对照样品已经与所述psma靶向分子接触。

213.根据实施方案176和180-185、192、199-205和210-212中任一项所述的方法，其中所述体内成像是正电子发射断层扫描(pet)，任选地与计算机断层扫描(ct)偶联，并且所述psma靶向分子是2-(3-{1-羧基-5-[(6-[¹⁸f]氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(¹⁸f-dcfpyl)。

214.一种选择、分离或分开表达psma或其修饰形式的细胞的方法，所述方法包括：

(a)使包含根据实施方案1-63和130-132中任一项所述的工程化细胞的多种细胞与psma靶向分子接触；并且

(b)选择、分离或分开由所述psma靶向分子识别或结合的细胞。

215.一种选择、分离或分开表达psma或其修饰形式的细胞的方法，所述方法包括从包含根据实施方案1-63和130-132中任一项所述的工程化细胞的多种细胞中选择、分离或分开由psma靶向分子识别或结合的细胞，所述多种细胞已经与所述psma靶向分子接触。

216.根据实施方案214或实施方案215所述的方法，其中所述psma靶向分子或其部分：

能够结合psma和/或其修饰形式，和/或

能够结合psma的活性位点和/或psma的修饰形式的活性位点，和/或

能够被psma切割和/或被psma的修饰形式切割；和/或

是psma和/或其修饰形式的拮抗剂、选择性拮抗剂、反向激动剂、选择性反向激动剂、激动剂、选择性激动剂、抑制剂和/或选择性抑制剂。

217.根据实施方案214-216中任一项所述的方法，其中所述多种细胞包含工程化细胞，所述工程化细胞包含根据实施方案58-110中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物或者根据实施方案111-116中任一项所述的载体、载体组或组合物。

218.根据实施方案214-218中任一项所述的方法，其中包含所述工程化细胞的所述多种细胞包含来自受试者的外周血白细胞，所述受试者已经被给予根据实施方案1-63和130-132中任一项所述的工程化细胞或根据实施方案133-135中任一项所述的组合物。

219.根据实施方案214-218中任一项所述的方法，其中所述psma靶向分子是或包含小分子、配体、抗体或其抗原结合片段、适体、肽或其缀合物。

220.根据实施方案214-219中任一项所述的方法，其中所述psma靶向分子是或包含小分子。

221.根据实施方案220所述的方法，其中所述小分子选自2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)、(氨基苯乙烯基)吡啶鎓(asp)染料、2-(3-[1-羧基-5-[(5-碘-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基]-脲基)-戊二酸(yc-vi-11)、2-[3-[1-羧基-5-(4-碘-苯甲酰氨基)-戊基]-脲基]-戊二酸(dcibzl或yc-7)、1-(3-羧基-4-(3-羟基-6-氧代-6h-呫吨-9-基)苯基氨基)-9,16,24-三氧代-1-硫氧代-2,8,17,23,25-五氮杂二十八烷-7,22,26,28-四甲酸(yc-36)、glu-nh-co-nh-lys(ahx)-hbed-cc(psma-hbed-cc)、9-(4-氟-3-[羟基甲基]丁基)鸟嘌呤(fhbg)、glu-脲-lys-(ahx)-[(hbed-cc)](psma-11)、psma-617、2-(膦酰基甲基)戊二酸、2-pmpa、氟苯甲酰氨基磷酸酯、(2s,4s)-2-氟-4-(膦酰基甲基)戊二酸(bay1075553)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-s-甲基-l-半胱氨酸(-dcmc)、euk-subkff-dotaga、2-[3-(1,3-二羧基丙基)脲基]戊二酸(dupa)、psman、n'-双[2-羟基-5-(羧基乙基)苄基]乙二胺-n,n'-二乙酸、mip-1072、mip-1095、mip-1404、mip-1405和n-[[[(1s)-1-羧基-3-甲基丁基]氨基]羰基]-l-谷氨酸(zj43)、(s)-2-(4-碘苄基膦酰基甲基)-戊二酸(gpi-18431)、2-[(3-{4-[(2-氨基-4-羟基-蝶啶-6-基甲基)-氨基]-苯甲酰氨基}-3-羧基-丙基)-羟基-磷酰基甲基]-戊二酸(mpe)、(2s,3's)-{[(3'-氨基-3'-羧基-丙基)-羟基磷酰基]甲基}-戊二酸(epe)和(2s)-2-{[(2-羧基-乙基)-羟基-磷酰基]甲基}-戊二酸(spe)。

222.根据实施方案221所述的方法，其中所述psma靶向分子是或包含2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)或n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)。

223.根据实施方案214-219中任一项所述的方法，其中所述psma靶向分子是或包含抗体或其抗原结合片段。

224.根据实施方案223所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段选自j591、dfo-j591、cyt-356、j415、3/a12、3/f11、3/e7、d2b、196-1a4、ypsma-1、ypsma-2、3e6、2g7、24.4e6、gcp-02、gcp-04、gcp-05、j533、e99、1g9、3c6、4.40、026、d7-fc、d7-ch3、4d4、a5、及其抗原结合片段和衍生物，或包含cdr3、vh和/或vl，和/或竞争与psma结合或结合与任何前述相同的psma表位。

225.根据实施方案214-219中任一项所述的方法，其中所述psma靶向分子是或包含适体或其缀合物。

226.根据实施方案225所述的方法，其中所述适体包含a9、a10、a10g、a10-3.2或szt101或其缀合物。

227.根据实施方案224-226中任一项所述的方法，其中所述psma靶向分子被包含在基质中或被固定在固体支持物上。

228.根据实施方案227所述的方法，其中所述固体支持物包含磁性粒子。

229.一种试剂盒，其包含：

(a)包含治疗有效量的根据实施方案1-63和130-132中任一项所述的工程化细胞的组合物；以及

(b)包含psma靶向分子的组合物。

230.根据实施方案229所述的试剂盒，其中所述检测包括鉴定所述受试者中的信号或来自所述受试者的样品的信号，其中：

所述psma靶向分子提供所述信号或诱导可检测的所述信号或能够与提供所述信号或诱导可检测的所述信号的部分结合；和/或

所述psma靶向分子是或包含提供所述信号或诱导可检测的所述信号的部分。

231.根据实施方案229或实施方案230所述的试剂盒，其还包含用于向治疗疾病或病症的受试者以组合疗法给予所述工程化细胞和所述psma靶向分子以治疗疾病或病症的说明书。

232.根据实施方案229或实施方案230所述的试剂盒，其还包含用于向接受或已经被给予所述工程化细胞的受试者给予所述psma靶向分子以检测所述工程化细胞的说明书。

233.一种试剂盒，其包含：

(a)包含治疗有效量的根据实施方案1-63和130-132中任一项所述的工程化细胞的组合物；以及

(b)用于向接受或已经被给予过所述工程化细胞的受试者给予psma靶向分子以检测所述工程化细胞的说明书。

234.一种试剂盒，其包含：

(a)包含psma靶向分子的组合物；以及

(b)用于向接受或已经被给予过治疗有效量的根据实施方案1-63和130-132中任一项所述的工程化细胞的受试者给予所述psma靶向分子以检测所述工程化细胞的说明书。

235.根据实施方案232-234中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书还指定了确定受试者中所给予的工程化细胞的数量或浓度。

236.根据实施方案235所述的试剂盒，其中所述说明书还指定了确定包括将所述信号与标准曲线进行比较。

237.根据实施方案232-236中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书指定了检测经由任选地与计算机断层扫描(ct)偶联的正电子发射断层扫描(pet)进行，并且所述psma靶向分子是2-(3-{1-羧基-5-[(6-[¹⁸f]氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(¹⁸f-dcfpyl)。

238.一种试剂盒，其包含：

(a)包含治疗有效量的根据实施方案1-63和130-132中任一项所述的工程化细胞的组合物；以及

(b)用于向治疗疾病或病症的受试者以与psma靶向分子的组合疗法给予所述工程化细胞的说明书，所述psma靶向分子是或包含或还包含用于治疗所述疾病或病症的治疗剂。

239.根据实施方案238所述的试剂盒，其中所述psma靶向分子或所述治疗剂能够调节所述肿瘤微环境(tme)或对所述肿瘤具有细胞毒性。

240.根据实施方案230、238和239中任一项所述的试剂盒，其中所述治疗剂是免疫调节剂、细胞毒性剂、抗癌剂或放射性治疗剂。

241.一种试剂盒，其包含：

(a)包含psma靶向分子的组合物；以及

(b)用于向治疗疾病或病症的受试者以与治疗有效量的根据实施方案1-63和130-132中任一项所述的工程化细胞的组合疗法给予所述psma靶向分子以治疗所述疾病或病症的说明书。

242.根据实施方案229-241中任一项所述的试剂盒，其中所述psma靶向分子是或包含小分子、配体、抗体或其抗原结合片段、适体、肽或其缀合物。

243.根据实施方案229-242中任一项所述的试剂盒，其中所述psma靶向分子是或包含小分子。

244.根据实施方案243所述的试剂盒，其中所述小分子选自2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)、(氨基苯乙烯基)吡啶鎓(asp)染料、2-(3-[1-羧基-5-[(5-碘-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基]-脲基)-戊二酸(yc-vi-11)、2-[3-[1-羧基-5-(4-碘-苯甲酰氨基)-戊基]-脲基]-戊二酸(dcibzl或yc-7)、1-(3-羧基-4-(3-羟基-6-氧代-6h-呫吨-9-基)苯基氨基)-9,16,24-三氧代-1-硫氧代-2,8,17,23,25-五氮杂二十八烷-7,22,26,28-四甲酸(yc-36)、glu-nh-co-nh-lys(ahx)-hbed-cc(psma-hbed-cc)、9-(4-氟-3-[羟基甲基]丁基)鸟嘌呤(fhbg)、glu-脲-lys-(ahx)-[(hbed-cc)](psma-11)、psma-617、2-(膦酰基甲基)戊二酸、2-pmpa、氟苯甲酰氨基磷酸酯、(2s,4s)-2-氟-4-(膦酰基甲基)戊二酸(bay1075553)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-s-甲基-l-半胱氨酸(-dcmc)、euk-subkff-dotaga、2-[3-(1,3-二羧基丙基)脲基]戊二酸(dupa)、psman、n'-双[2-羟基-5-(羧基乙基)苄基]乙二胺-n,n'-二乙酸、mip-1072、mip-1095、mip-1404、mip-1405和n-[[[(1s)-1-羧基-3-甲基丁基]氨基]羰基]-l-谷氨酸(zj43)、(s)-2-(4-碘苄基膦酰基甲基)-戊二酸(gpi-18431)、2-[(3-{4-[(2-氨基-4-羟基-蝶啶-6-基甲基)-氨基]-苯甲酰氨基}-3-羧基-丙基)-羟基-磷酰基甲基]-戊二酸(mpe)、(2s,3's)-{[(3'-氨基-3'-羧基-丙基)-羟基磷酰基]甲基}-戊二酸(epe)和(2s)-2-{[(2-羧基-乙基)-羟基-磷酰基]甲基}-戊二酸(spe)。

245.根据实施方案244所述的试剂盒，其中所述psma靶向分子是或包含2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)或n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)。

246.根据实施方案229-242中任一项所述的试剂盒，其中所述psma靶向分子是或包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段任选地具有与psma特异性地结合的结合位点。

247.根据实施方案246所述的试剂盒，其中所述抗体或其抗原结合片段选自j591、dfo-j591、cyt-356、j415、3/a12、3/f11、3/e7、d2b、107-1a4、ypsma-1、ypsma-2、3e6、2g7、24.4e6、gcp-02、gcp-04、gcp-05、j533、e99、1g9、3c6、4.40、026、d7-fc、d7-ch3、4d4、a5、及其抗原结合片段和衍生物，或包含cdr3、vh和/或vl，和/或竞争与psma结合或结合与任何前述相同的psma表位。

248.根据实施方案229-242中任一项所述的试剂盒，其中所述psma靶向分子是或包含适体或其缀合物。

249.根据实施方案248所述的试剂盒，其中所述适体包含a9、a10、a10g、a10-3.2或szt101或其缀合物。

250.一种psma靶向分子，其包含能够与psma或其修饰形式结合的部分，其中所述psma靶向分子是或还包含免疫调节剂。

251.根据实施方案250所述的psma靶向分子，其中所述免疫调节剂能够调节、任选地增加免疫细胞的活性或免疫应答和/或能够调节所述肿瘤微环境(tme)。

252.根据实施方案250或实施方案251所述的psma靶向分子，其中所述psma靶向分子是或包含前药，所述前药是或包含所述免疫调节剂或能够转化成或暴露所述免疫调节剂，和/或所述psma靶向分子在与所述psma或其修饰形式结合后能够被切割，其中切割产生包含所述免疫调节剂的至少一种切割产物。

253.根据实施方案250-252中任一项所述的psma靶向分子，其中所述免疫调节剂直接地或间接地任选地经由接头连接至所述psma靶向分子的能够与所述psma或其修饰形式结合的一部分。

254.根据实施方案253所述的psma靶向分子，其中所述接头是肽或多肽或是化学接头。

255.根据实施方案253或实施方案254所述的psma靶向分子，其中所述接头是可释放的接头或可切割的接头。

256.根据实施方案253-255中任一项所述的psma靶向分子，其中所述接头能够在所述psma或其修饰形式被所述结合分子结合后被切割，其中切割产生包含所述免疫调节剂的至少一种切割产物。

257.根据实施方案255或实施方案256所述的psma靶向分子，其中所述可释放的接头或所述可切割的接头在所述肿瘤微环境(tme)中存在的一种或多种条件或因子的存在下被释放或切割，其中切割产生包含所述免疫调节剂的至少一种切割产物。

258.根据实施方案257所述的psma靶向分子，其中存在于所述肿瘤微环境(tme)中的所述一种或多种条件或因子包含基质金属蛋白酶(mmp)、低氧条件或酸性条件。

259.根据实施方案250-258中任一项所述的psma靶向分子，其中所述免疫调节剂是免疫检查点抑制剂或调节剂或细胞因子。

260.根据实施方案250-259中任一项所述的psma靶向分子，其中所述免疫调节剂是免疫检查点抑制剂，所述免疫检查点抑制剂能够抑制或阻断免疫检查点分子的功能或涉及免疫检查点分子的信号传导途径。

261.根据实施方案260所述的psma靶向分子，其中所述免疫检查点分子选自pd-1、pd-l1、pd-l2、ctla-4、lag-3、tim3、vista、腺苷受体或细胞外腺苷，任选地腺苷2a受体(a2ar)或腺苷2b受体(a2br)、或涉及上述任何一种的腺苷或途径。

262.一种psma靶向分子，其包含能够与psma或其修饰形式结合的部分，其中所述psma靶向分子是或还包含能够调节肿瘤微环境(tme)的治疗剂，其中所述治疗剂通过对所述tme中存在的一种或多种条件或因子有响应的可释放或可切割的接头连接至所述psma靶向分子的所述部分。

263.根据实施方案262所述的psma靶向分子，其中存在于所述肿瘤微环境(tme)中的所述一种或多种条件或因子包含基质金属蛋白酶(mmp)、低氧条件或酸性条件。

264.根据实施方案262或实施方案263所述的psma靶向分子，其中所述治疗剂是免疫调节剂、细胞毒性剂、抗癌剂或放射性治疗剂。

265.根据实施方案250-264中任一项所述的psma靶向分子，其是抗体-药物缀合物(adc)。

266.根据实施方案250-265中任一项所述的psma靶向分子，其中所述psma靶向分子或其部分：

能够结合psma和/或其修饰形式，和/或

能够结合psma的活性位点和/或psma的修饰形式的活性位点，和/或

能够被psma切割和/或被psma的修饰形式切割；和/或

是psma和/或其修饰形式的拮抗剂、选择性拮抗剂、反向激动剂、选择性反向激动剂、激动剂、选择性激动剂、抑制剂和/或选择性抑制剂。

267.根据实施方案250-264和266中任一项所述的psma靶向分子，其中所述psma靶向分子是或包含小分子、配体、抗体或其抗原结合片段、适体、肽或其缀合物。

268.根据实施方案250-264、266和267中任一项所述的psma靶向分子，其中所述psma靶向分子是或包含小分子并且所述小分子选自2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)、(氨基苯乙烯基)吡啶鎓(asp)染料、2-(3-[1-羧基-5-[(5-碘-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基]-脲基)-戊二酸(yc-vi-11)、2-[3-[1-羧基-5-(4-碘-苯甲酰氨基)-戊基]-脲基]-戊二酸(dcibzl或yc-7)、1-(3-羧基-4-(3-羟基-6-氧代-6h-呫吨-9-基)苯基氨基)-9,16,24-三氧代-1-硫氧代-2,8,17,23,25-五氮杂二十八烷-7,22,26,28-四甲酸(yc-36)、glu-nh-co-nh-lys(ahx)-hbed-cc(psma-hbed-cc)、9-(4-氟-3-[羟基甲基]丁基)鸟嘌呤(fhbg)、glu-脲-lys-(ahx)-[(hbed-cc)](psma-11)、psma-617、2-(膦酰基甲基)戊二酸、2-pmpa、氟苯甲酰氨基磷酸酯、(2s,4s)-2-氟-4-(膦酰基甲基)戊二酸(bay1075553)、n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-s-甲基-l-半胱氨酸(-dcmc)、euk-subkff-dotaga、2-[3-(1,3-二羧基丙基)脲基]戊二酸(dupa)、psman、n'-双[2-羟基-5-(羧基乙基)苄基]乙二胺-n,n'-二乙酸、mip-1072、mip-1095、mip-1404、mip-1405和n-[[[(1s)-1-羧基-3-甲基丁基]氨基]羰基]-l-谷氨酸(zj43)、(s)-2-(4-碘苄基膦酰基甲基)-戊二酸(gpi-18431)、2-[(3-{4-[(2-氨基-4-羟基-蝶啶-6-基甲基)-氨基]-苯甲酰氨基}-3-羧基-丙基)-羟基-磷酰基甲基]-戊二酸(mpe)、(2s,3's)-{[(3'-氨基-3'-羧基-丙基)-羟基磷酰基]甲基}-戊二酸(epe)和(2s)-2-{[(2-羧基-乙基)-羟基-磷酰基]甲基}-戊二酸(spe)。

269.根据实施方案268所述的psma靶向分子，其中所述psma靶向分子是或包含2-(3-{1-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)或n-[n-[(s)-1,3-二羧基丙基]氨基甲酰基]-4-氟苄基-l-半胱氨酸(dcfbc)。

270.根据实施方案250-267中任一项所述的psma靶向分子，其中所述psma靶向分子是或包含抗体或其抗原结合片段。

271.根据实施方案270所述的psma靶向分子，其中所述抗体或其抗原结合片段选自j591、dfo-j591、cyt-356、j415、3/a12、3/f11、3/e7、d2b、107-1a4、ypsma-1、ypsma-2、3e6、2g7、24.4e6、gcp-02、gcp-04、gcp-05、j533、e99、1g9、3c6、4.40、026、d7-fc、d7-ch3、4d4、a5、及其抗原结合片段和衍生物，或包含cdr3、vh和/或vl，和/或竞争与psma结合或结合与任何前述相同的psma表位。

272.根据实施方案250-264、266和267中任一项所述的psma靶向分子，其中所述psma靶向分子是或包含适体或其缀合物。

273.根据实施方案272所述的psma靶向分子，其中所述适体包含a9、a10、a10g、a10-3.2或szt101或其缀合物。

274.一种治疗方法，其包括向受试者给予根据实施方案250-273中任一项所述的psma靶向分子。

275.一种制品，其包含根据实施方案1-63和130-132中任一项所述的工程化细胞，根据实施方案133-135中任一项所述的组合物，根据实施方案64-122中任一项所述的多核苷酸、多核苷酸组或组合物或者根据实施方案123-128中任一项所述的载体、载体组或组合物，根据实施方案229-249中任一项所述的试剂盒，或根据实施方案250-273中任一项所述的psma靶向分子。

i.实施例

以下实施例被包括在内仅用于说明目的，并不旨在限制本发明的范围。

实施例1:表达嵌合抗原受体(car)和前列腺特异性膜抗原(psma)或其变体的细胞的工程化

产生了编码嵌合抗原受体(car)和野生型人前列腺特异性膜抗原(psma)或其修饰变体的核酸构建体。编码psma或修饰变体的核酸通过编码自切割t2a序列的序列与编码car的核酸分开，以便在工程化细胞中在单一启动子的控制下共同表达psma或修饰变体和car。

具体地，由每个核酸构建体编码的car按顺序含有：抗cd19scfv(vh-接头-vl方向)，一种ig衍生的间隔子；人cd28衍生的跨膜结构域；人4-1bb衍生的细胞内信号传导结构域；以及人cd3ζ衍生的信号传导结构域。每个核酸分子还包括编码自切割p2a(seqidno:19所示，由seqidno:53所示的核酸序列编码)或t2a序列(seqidno:17所示)的核苷酸序列，随后是编码全长野生型psma(wtpsma，具有seqidno:23所示的氨基酸序列)或其修饰变体的序列。修饰变体包括：(1)参考seqidno:23的序列，观察到抑制受体循环的在位置2处带有氨基酸取代的n末端修饰的psma变体(psma^(w2g)，具有seqidno:24所示的氨基酸序列)；或(2)观察到抑制受体循环和信号传导的seqidno:23的9个最n末端氨基酸残基的n末端缺失，为清楚起见，其不包括翻译所需的起始甲硫氨酸的缺失(含有9个n末端氨基酸残基的缺失的psma^(n9del)；具有seqidno:52所示的氨基酸序列，由seqidno:53所示的核酸序列编码)。

为了比较，产生了相应的核酸分子，其包括编码抗cd19car的序列，并且代替psma(或经修饰的psma)编码序列，包括编码截短的egfr(egfrt；seqidno:16所示)序列的序列。

编码每个核酸分子的单独慢病毒载体被用于转导通过基于免疫亲和力的富集从人供体外周血样品中分离的原代人t细胞。作为对照，用不编码car和/或不编码psma的载体转导细胞(模拟物)。

富集表达car的t细胞之后，通过流式细胞术使用识别psma细胞外区域的抗psma抗体评估wtpsma或n末端修饰的psma变体(psma^(w2g)或psma^(n9del))的表面表达。还通过流式细胞术评估了非抗体psma靶向试剂(与psma特异性地结合的小分子化合物(dcfpyl)的fitc偶联类似物(yc-36-fitc))的结合。

图1a-1b列出了示例性facs图，其示出了来自每个转导群体的富含car+t细胞的样品中抗psma抗体和cd4的结合的检测水平。图1c列出了psma(或n末端修饰变体)表达的几何平均荧光强度(gmfi)，如通过本研究中对cd4+和cd8+t细胞的抗体结合所确定。如图所示，在转导的cd4+和cd8+细胞的表面上检测到psma和n末端修饰变体。在这项研究中，n末端修饰的psma^(w2g)和psma^(n9del)以更高的水平表达。类似地，如图1d所示，当对psma+细胞门控时，在cd4+和cd8+转导的细胞中n末端修饰的psma^(w2g)和psma^(n9del)的表达大于wtpsma的表达(图1d)。在未转导的细胞(模拟物)或用对照重组蛋白截短的egfr(egfrt)转导的细胞中未观察到psma的表达。

图1e-1f示出了在已经用psma或各自的修饰变体(psma^(w2g)和psma^(n9del))转导的car富集细胞中通过流式细胞术观察到的yc-36-fitc结合和cd8表达的水平。图1g示出了经修饰(n9del)的psma在表达car的细胞表面上的共表达，如通过对car的结合结构域特异的抗独特型抗体所确定。对于其他psma构建体观察到相似的结果(图1h-1l)。图1m示出了在使用由2个不同供体产生的工程化细胞的另外的实验中，在共表达截短的psma变体的抗cd19car表达细胞中(cd19-tpsma；psma^(n9del))或表达截短的受体作为对照替代标记的细胞中(cd19-t受体)，通过流式细胞术如通过对car的结合结构域特异的抗独特型抗体所确定的car表面表达的gmfi。结果确认了野生型和经修饰的psma变体以保留其与psma靶向小分子和psma特异性抗体结合的能力的方式在car-t细胞上表达的能力。

实施例2:表达抗cd19car和psma或n末端修饰psma变体的工程化t细胞的体外评估

在体外评估了如实施例1所描述产生的表达抗cd19car和/或psma或其n末端修饰变体的工程化人t细胞。

a.细胞溶解活性

将表达cd19的靶细胞(用cd19转导的k562细胞，命名为k562-cd19)用nuclightred(nlr)标记，并与如实施例1中所描述产生的各种工程化t细胞以4:1、2:1、1:1和1:2的效应细胞与靶细胞(e:t)比率一式三份进行孵育。

通过测量如通过红色荧光信号(使用活细胞分析系统，essenbioscience)测定的在三天的时间段内活靶细胞的损失来评估细胞溶解活性。在从0小时到66小时的时间内，每2小时确定一次nlr+靶细胞的数量。在指示的情况下，杀伤指数被确定为1/从0小时到66小时nlr+靶细胞计数随时间的曲线下面积(auc)。

图2a示出了4:1效应细胞与靶细胞比率的结果。图2b示出了来自不同e:t比率(4:1、2:1、1:1和1:2)的杀伤指数的结果的比较。结果表明，观察到共表达psma(wt、psma^(w2g)或psma^(n9del))的car表达细胞展现出对不表达psma(并表达替代性egfrt标记)的car表达细胞的抗原特异性杀伤活性。

如上所述的类似细胞溶解测定通过将表达抗cd19car/psma^(n9del)的工程化t细胞和k562-cd19靶细胞以4:1的e:t比率孵育来进行，除了所述孵育还在2-(3-{l-羧基-5-[(6-氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸(dcfpyl)(一种结合psma的催化结构域的试剂)的存在下进行以外(参见例如，chen等人,clincancerres.2011,17(24):7645-7653；wo2015/143029)。具体地，将共培养物与dcfpyl一起以从3.33x10^-6m开始的dcfpyl的七(7)种3倍系列稀释液中的一种孵育，或在没有dcfpyl(0m)的情况下孵育。如图2c所示，与dcfpyl一起孵育不影响表达抗cd19car/psma^(n9del)的t细胞的细胞溶解活性。

还以4:1和1:1的e:t比率和从1x10^-5m至4.59x10^-9m范围内的dfpcyl浓度评估了细胞溶解活性。如图2d所示，观察到相似的结果，dfpcyl对表达抗cd19car/psma^(n9del)的t细胞的细胞溶解活性没有影响。

所述结果与以下结论一致：psma^(n9del)与psma靶向剂(如dcfpyl)接合不会影响表达car的t细胞的car抗原特异性细胞毒性功能。

b.细胞因子释放

在将如实施例1中所描述产生的各种工程化t细胞与表达cd19的靶细胞(k562-cd19)共培养后，评估上清液中的细胞因子水平。具体地，在将靶细胞和各种工程化细胞群体孵育大约22-24小时的时段后，评估一种或多种细胞因子(il-2、ifn-γ、tnf-α)的累积量(pg/ml)。此类测定提供了在所述剂量中每个car+细胞的抗原特异性细胞因子分泌的量度。在其他测定中，在与t细胞孵育之后评估针对表达cd19的靶细胞的细胞溶解活性。

使用多重细胞因子免疫测定确定培养上清液中的细胞因子量。如图3a(ifn-γ)、图3b(tnf-α)和图3c(il-2)所示，表达抗cd19car/wtpsma、抗cd19car/psma^(w2g)或抗cd19car/psma^(n9del)的t细胞(但不是模拟物转导的细胞)的t细胞响应于与car抗原特异性细胞的孵育产生细胞因子。图3d示出了在使用由2个不同供体产生的工程化细胞的另外的实验中，在共表达截短的psma变体的抗cd19car表达细胞中(cd19-tpsma；psma^(n9del))或表达截短的受体作为对照替代标记的细胞中(cd19-t受体)的ifn-γ产生。

还在以4:1和1:1的e:t比率在dcfpyl的存在下培养的表达抗cd19car/psma^(n9del)的工程化t细胞和k562-cd19靶细胞的共培养物中评估了细胞因子水平。将共培养物与dcfpyl一起以从1x10^-5m开始的dcfpyl的八(8)种3倍系列稀释液中的一种孵育。如图3e所示，以4:1或1:1的e:t比率与psma靶向剂dcfpyl一起孵育基本上不影响ifn-γ产生。对于tnf-α和il-2获得了相似的结果。所述结果与以下结论一致：psma^(n9del)与psma靶向剂(如dcfpyl)接合基本上不影响表达car的t细胞的细胞因子产生。结果表明，表达经修饰的psma变体(例如，截短的psma，tpsma)的car+t细胞展现出与表达替代性标记的car+t细胞相似的体外car+t细胞功能。

实施例3:肿瘤模型中表达psma的car+t细胞的体内抗肿瘤活性的评估

通过给nod/scid/gc-/-(nsg)小鼠注射cd19+nalm-6散布性肿瘤细胞系来产生肿瘤异种移植物小鼠模型。具体地，在第零(0)天，向nsg小鼠静脉内(i.v.)注射5x10⁵个用绿色荧光蛋白和萤火虫萤光素酶转染的nalm6人b细胞前体白血病细胞系(nalm6-gfp-ffluc)。允许肿瘤植入发生持续4天，并使用生物发光成像进行验证。在第4天，将小鼠分组为两个研究组，所述研究组接受如实施例1所描述产生的如下工程化细胞(1x10⁶个car+t细胞)的次最佳剂量的单次静脉内(i.v.)注射：(1)用抗cd19car/psma^(n9del)工程化的t细胞或(2)用抗cd19car/egfrt工程化的t细胞。添加了两个另外的研究组作为对照，具体地，一个研究组中的小鼠未注射任何细胞(无治疗)和另一个研究组中的小鼠注射了1x10⁶个不表达car的t细胞(模拟物研究组)。

治疗后，通过生物发光成像测量随时间的肿瘤生长，并在第4、7、10、17、21、29、32和36天测量平均辐射率(p/s/cm²/sr)。对于生物发光成像，小鼠接受了重悬于pbs(15μg/g体重)的萤光素底物(caliperlifesciences,hopkinton,ma)的腹膜内(i.p.)注射。如图4a所示，在阴性对照小鼠中的肿瘤在过继转移对照t细胞后的整个研究过程中继续生长。与对照小鼠相比，观察到已经被给予过表达抗d19car/psma^(n9del)或抗cd19car/egfrt的工程化t细胞的过继转移的小鼠在所有测试的处理后时间点都具有平均辐射量的降低。结果表明，与抗cd19car/egfrtt细胞相比，抗cd19car/psma^(n9del)t细胞保持了相似的抗肿瘤活性。

在注射cd19+nalm-6细胞之后，还对每组小鼠的存活监测了长达40天。结果示于图4b中，观察到接受了抗cd19car/psma^(n9del)t细胞或抗cd19car/egfrtt细胞的过继转移的小鼠的存活是相似的，并且在每种情况下都比给予模拟物转导细胞或不予治疗的小鼠要大。结果表明，表达经修饰的psma变体(例如，截短的psma，tpsma)的car+t细胞展现出与表达替代性标记的car+t细胞相似的体内car+t细胞功能。

实施例4:使用[¹⁸f]dcfpyl对表达经修饰的psma的car+t细胞的体内pet/ct成像

将不同数量的表达psma^(n9del)的抗cd19car+t细胞注射到小鼠肿瘤模型中，并使用放射性标记的psma特异性(正电子发射断层扫描)pet试剂进行成像，以使用正电子发射断层扫描-计算机断层扫描(pet/ct)体内检测在体内的表达经修饰的psma的car+t细胞。

对四至六周龄的无胸腺雄性裸鼠皮下注射1,000(1k)、5,000(5k)、10,000(10k)、50,000(50k)、100,000(0.1m)、500,000(0.5m)、1,000,000(1m)或5,000,000(5m)个t细胞，其中一半是表达psma^(n9del)的工程化抗cd19car+t细胞。将细胞在含基质胶(bdbiosciences，bedford，ma)的50μl悬浮液中以2:1(细胞:基质胶)比率注射到上侧翼中。在每个50μl基质胶悬浮液中表达抗cd19car/psma^(n9del)的t细胞数量为500(0.5k)、2,500(2.5k)、5,000(5k)、25,000(25k)、50,000(50k)、250,000(250k)、500,000(0.5m)或2,500,000(2.5m)。每只小鼠接受400μci的psma特异性放射性标记的pet试剂2-(3-{l-羧基-5-[(6-[¹⁸f]氟-吡啶-3-羰基)-氨基]-戊基}-脲基)-戊二酸([¹⁸f]dcfpyl)(参见例如，wo2015/143029；chen等人,clincancerres.2011,17(24):7645-7653，szabo等人,molimagingbiol.2015年8月；17(4):565-574)，其与psma的活性位点结合。使用小动物pet扫描仪在[¹⁸f]dcfpyl注射后1小时获得pet扫描，并使用小动物成像装置获得相应的ct扫描(参见例如，wo2015/143029中所述的示例性方法)。pet结果以每立方厘米成像组织的注射剂量的百分比(％id/cc)表示。使用amide软件(sourceforge.net)共同登记pet和ct数据。重建图像以最小化肾脏中的背景信号。

如图5a所示，使用[¹⁸f]dcfpyl试剂可通过pet/ct检测每种情况下的细胞，从而证明表达car/psma^(n9del)的t细胞可以在体内结合[¹⁸f]dcfpyl试剂。通过给予少至1,000个抗cd19car/psma^(n9del)t细胞观察到可检测的信号。在另外的实验中，在注射50μl基质胶中的约1,000个、2,500个、5,000个、10,000个或更多个表达抗cd19car/psma^(n9del)的t细胞后，体内检测限为在50μl体积中约5,000个至10,000个抗cd19car/psma^(n9del)t细胞。进行了另外的类似体内幻影成像研究，其中将在50μl中的2,000(2k)、4,000(4k)、20,000(20k)、40,000(40k)、200,000(200k)、400,000(400k)或2,000,000(2m)个表达psma-n9del的抗cd19car+t细胞注射到nod/scid/gc-/-(nsg)小鼠的肩部中。将小鼠注射14.8mbq(400μci)的[¹⁸f]dcfpyl，并在注射之后1小时用小动物pet/ct装置进行成像。在这项研究中，使用[¹⁸f]dcfpyl和pet可靠地检测到在50μl体积中的少至4,000个表达抗cd19car/psma^(n9del)的t细胞，如图5b所示(白色箭头指示注射细胞的位置)。在一些实施方案中，检测限为(或所述测定能够检测)在50μl体积中的低至或少至或者低至或少至约4,000个抗cd19car/psma^(n9del)t细胞，例如在50μl体积的液体、样品、和/或器官或组织中。所述结果符合经修饰的psma变体(例如，截短的psma，tpsma)作为通过pet/ct以高灵敏度在体内检测car+t细胞的标记的实用性。

实施例5:通过pet/ct使用靶向psma的放射性标记的药剂([¹⁸f]dcfpyl)体内检测肿瘤模型中给予的表达psma的car+t细胞

为了评估在原发性和转移性肿瘤部位中工程化细胞的检测，开发了散布性肿瘤模型并对其给予表达car和psma变体的t细胞。向nsg小鼠皮下(s.c.)植入5x10⁶个nalm6-gfp-ffluc肿瘤细胞(n＝8/组)。在一些方面，nalm6皮下植入小鼠模型可以在脾、肝和骨髓中发生自发转移性病变。在肿瘤植入后第15天，小鼠接受单次静脉内(i.v.)注射2.5x10⁶个工程化原代人抗cd19car/psma^(n9del)表达t细胞或抗cd19car/egfrtt细胞。作为对照，使用没有注射任何细胞(无t细胞)或被注射不表达car的2.5x10⁶个t细胞(模拟物研究组)的小鼠。

在肿瘤植入后第24天，使用靶向psma的放射性标记的药剂对小鼠进行生物发光成像和pet/ct。通常如上文实施例3中所描述进行生物发光成像以检测肿瘤细胞。通常如上文实施例4中所描述进行pet/ct。具体地，每只小鼠接受400μci的psma特异性放射性标记的pet试剂([¹⁸f]dcfpyl)。注射[¹⁸f]dcfpyl后1小时获得pet扫描。

图6的顶图示出了在每个测试组的示例性小鼠中发生的肿瘤的生物发光成像。图6的底图示出了使用psma靶向剂在顶图的相应部分示出的每只小鼠中检测表达经修饰的psma的car+细胞的对应pet/ct扫描。

如图6所示，在未给予t细胞或已被给予模拟物t细胞或抗cd19car+/egfrtt细胞的小鼠中未观察到pet/ct信号。在已被给予抗cd19car/psma^(n9del)t细胞的小鼠中观察到pet/ct信号。如通过肿瘤生物发光和pet/ct信号的对应关系所示，所述信号共定位于肿瘤部位。在通过生物发光信号观察到已经发生自发性转移性病变的小鼠中，例如在图6最右边的图中所描绘的小鼠中，经由pet/ct试剂检测到所给予的抗cd19car/psma^(n9del)t细胞与指示转移性病变的生物发光信号共定位。所述结果表明，可以经由靶向psma的pet药剂(包括在局部和转移性肿瘤部位)检测到共表达含有psma细胞外区域的经修饰的psma和car的工程化t细胞。

实施例6:通过pet使用靶向psma的放射性标记的药剂([¹⁸f]dcfpyl)体外检测表达psma的car+t细胞

使用靶向psma的放射性标记的药剂([¹⁸f]dcfpyl)在体外检测到表达psma的细胞。向384孔细胞培养板的各个孔中在20μlpbs中添加不同数量的工程化抗cd19car/psma^(n9del)表达t细胞(40,000(40k)、20,000(20k)、10,000(10k)、8,000(8k)、6,000(6k)、4,000(4k)、2,000(2k)、1,000(1k)、800(0.8k)、600(0.6k)、400(0.4k)或200(0.2k)个细胞)。将饱和剂量(37mbq)的[¹⁸f]dcfpyl添加到板的每个孔中，并在1小时之后，通过pet对每个孔中的细胞进行成像。

如图7所示，使用[¹⁸f]dcfpyl和pet，在这项研究中可在体外检测到至少少至约2,000个表达psma的cart细胞/20μl。所述结果符合经修饰的psma变体(例如，截短的psma，tpsma)作为通过pet/ct以高灵敏度在体外检测car+t细胞的标记的实用性。

实施例7:在散布性肿瘤模型中表达psma的car+t细胞的体内抗肿瘤活性、体内检测和定位

为了产生其中发生自发性转移的散布性异种移植模型，向nsg小鼠皮下(s.c.)植入1x10⁶个nalm6-gfp-ffluc肿瘤细胞。在肿瘤植入后第21天，小鼠接受单次静脉内(i.v.)注射5x10⁶个原代人t细胞，其中2x10⁶个细胞是工程化以表达抗cd19car/psma^(n9del)的t细胞。作为对照，使用其中小鼠没有注射任何细胞(无t细胞)或被注射了不表达car的5x10⁶个t细胞(模拟物研究组)的两组小鼠。对每个组随时间监测小鼠的存活，并分别通过生物发光成像(bli)和pet/ct评估肿瘤细胞和car+t细胞的检测，通常如实施例3和4所描述。

a.存活曲线

在注射cd19+nalm-6细胞之后，对每组小鼠的存活监测了长达100天。结果示于图8中。如图所示，与被给予模拟物转导细胞或不予治疗的小鼠中观察到的存活相比，接受了抗cd19car/psma^(n9del)t细胞的过继转移的所有小鼠的存活均得到改善。

b.肿瘤细胞和car+t细胞的体内检测

在注射car+t细胞之后第0天和第11天对小鼠进行生物发光成像，并在注射car+t细胞之后第5天和第12天使用[¹⁸f]dcfpyl(靶向psma的放射性标记的药剂)进行pet/ct成像。

来自三只示例性小鼠的pet和bli结果示于图9a-9c中。第一幅和第三幅成像图分别示出了在第0天和第11天的bli结果，并且第二幅和第四幅成像图分别示出了在第5天和第12天的pet/ct扫描结果。如通过肿瘤生物发光和pet/ct信号的对应关系所示，pet/ct信号通常共定位于肿瘤部位。如图9d和9e所示，在相似处理的第四只小鼠中观察到相似的结果(图9d)，并且在未治疗的小鼠或在模拟物研究组中未观察到实质性pet/ct信号(图9e)。所述结果与以下发现一致：可以经由靶向psma的pet药剂(包括在局部和转移性肿瘤部位)检测到共表达含有psma细胞外区域的psma和car的工程化t细胞。

c.免疫组织化学

将在肿瘤植入之后从小鼠获得的肿瘤样品进行免疫组织化学，以确定表达car的细胞在肿瘤内的位置。将获得的肿瘤样品切片，并用抗cd3抗体染色以检测t细胞(未示于图10中)，用抗gfp抗体(图10中的α-gfp)染色以检测nalm6-gfp-ffluc肿瘤细胞，或用抗psma抗体(图10中的α-psma)染色以检测抗cd19car/psma^(n9del)t细胞。如图10所示，结果与以下发现一致：在接受抗cd19car/psma^(n9del)t细胞的过继转移的具有散布性肿瘤的小鼠的肿瘤部位内存在表达car的t细胞。

实施例8:肿瘤模型中表达psma的car+t细胞的体内药代动力学和肿瘤定位

通过pet/ct成像和流式细胞术确定所给予的表达psma的car+t细胞在小鼠异种移植肿瘤模型中的肿瘤、外周血和骨髓中的药代动力学。

a.从pet/ct进行药代动力学确定

在第0天对小鼠进行初始生物发光成像(bli)之后一天，对通常如实施例7所描述产生的nalm6-gfp-ffluc异种移植肿瘤模型小鼠给予2x10⁶个工程化以表达抗cd19car/psma^(n9del)的t细胞。在初始bli之后第4天、第5天、第6天、第7天、第8天、第9天、第10天、第11天和第12天，在用14.8mbq(400μci)的[¹⁸f]dcfpyl注射后通过pet/ct、并且通过bli评估小鼠。通过内插pet图像的信号强度与图11a所描绘的标准曲线进行比较可以计算出位于肿瘤内的car+t细胞总数(以百万计)。通过将来自体外幻影成像实验的pet图像(n＝8)的总的体素(三维空间中的图形信息单元)对相应细胞数量绘图来确定标准曲线。所得的线性回归方程式为y＝5×10^-6x+0.0122(r²＝0.9989)。图11a中的误差棒显示了标准偏差。通过流式细胞术确定了在外周血(ppb)或骨髓(bm)样品中活细胞中的肿瘤细胞(通过gfp信号)和car+t细胞(通过抗psma抗体染色)的百分比。

表1中列出了在图11b和11c中所描绘的小鼠的各个位置中确定的car+t细胞的数量(天代表每只小鼠的最终bli的日期)。所述结果符合psma变体作为用于检测和定量所给予的car+t细胞以及评估所给予细胞的药代动力学(两者在体内基于pet/ct和基于使用抗psma抗体的流式细胞术)的替代性标记的实用性。

表1.小鼠肿瘤模型中的car+t细胞药代动力学。

b.肿瘤中的car+t细胞密度

通过计数用抗psma抗体染色的psma+细胞的数量确定了给予后第6天与第13天之间获得的肿瘤活检样品中存在的所给予car+t细胞的密度。如图12所示，肿瘤中的car+t细胞密度与给予car+t细胞后从人肿瘤活检样品观察到的在相似的范围内。所述结果符合psma变体作为用于定量肿瘤中的car+t细胞密度的替代性标记的实用性。

c.免疫组织化学

将在给予car+t细胞之后第4天与第11天之间从小鼠获得的肿瘤样品进行免疫组织化学，以确定肿瘤内car表达细胞的存在。将获得的肿瘤样品切片，并用抗gfp抗体(图13a-13b中的α-gfp)染色以检测nalm6-gfp-ffluc肿瘤细胞，或用抗psma抗体(图13a-13b中的α-psma)染色以检测抗cd19car/psma^(n9del)t细胞。所述结果符合psma变体作为使用抗psma抗体通过免疫组织化学来检测所给予的car+t细胞的替代性标记的实用性。

实施例9:外周血和骨髓car+t细胞以及肿瘤定位的car+t细胞数量的确定

使用pet/ct和流式细胞术确定了存在于外周血和骨髓中的car+t细胞的数量以及定位于肿瘤的car+t细胞的数量。

在第0天对小鼠进行初始生物发光成像(bli)之后一天，对通常如实施例7所描述产生的五(5)只nalm6-gfp-ffluc异种移植肿瘤模型小鼠给予2x10⁶个工程化以表达抗cd19car/psma^(n9del)的t细胞。在初始bli之后第10天、第11天或第12天，在用14.8mbq(400μci)的[¹⁸f]dcfpyl注射后通过pet/ct、或通过bli评估小鼠。基于pet图像的信号强度与标准曲线进行比较计算了位于肿瘤整个区域内的car+t细胞的总数(参见图11a)。此外，通过用抗psma抗体染色使用流式细胞术确定了在外周血(ppb)中或在骨髓(bm)样品内活细胞中的car+t细胞的百分比。

代表性bli图像和pet/ct图像显示在图14a-14b中。与图14a-14b中所示的每只小鼠的ppb和bm中活细胞中的car+t细胞的百分比相比，从pet/ct图像确定的肿瘤中的细胞数量显示在图14c(ppb)和14d(bm)中。所述结果符合psma变体作为用于通过pet/ct和使用抗psma抗体的流式细胞术检测和定量所给予的car+t细胞的替代性标记的实用性。

本发明并不旨在限于具体公开的实施方案的范围，所提供的实施例例如是为了说明本发明的各个方面。根据本文的描述和传授，对组合物和方法的各种修改将变得清楚。可以在不脱离本公开文本的真实范围和精神的情况下实践这些变化，并且这些变化旨在落入本公开文本的范围内。

序列

序列表

<110>junotherapeutics,inc.

thejohnshopkinsuniversity

huss,davidjeffrey

levitsky,hyami.

minn,il

pomper,marting.

<120>表达前列腺特异性膜抗原（psma）或其修饰形式的工程化细胞及相关方法

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>f2a

<400>22

vallysglnthrleuasnpheaspleuleulysleualaglyaspval

151015

gluserasnproglypro

20

<210>23

<211>750

<212>prt

<213>智人

<220>

<223>psmawt（全长）

<400>23

mettrpasnleuleuhisgluthraspseralavalalathralaarg

151015

argproargtrpleucysalaglyalaleuvalleualaglyglyphe

202530

pheleuleuglypheleupheglytrppheilelysserserasnglu

354045

alathrasnilethrprolyshisasnmetlysalapheleuaspglu

505560

leulysalagluasnilelyslyspheleutyrasnphethrglnile

65707580

prohisleualaglythrgluglnasnpheglnleualalysglnile

859095

glnserglntrplysglupheglyleuaspservalgluleualahis

100105110

tyraspvalleuleusertyrproasnlysthrhisproasntyrile

115120125

serileileasngluaspglyasngluilepheasnthrserleuphe

130135140

gluproproproproglytyrgluasnvalseraspilevalpropro

145150155160

pheseralapheserproglnglymetprogluglyaspleuvaltyr

165170175

valasntyralaargthrgluaspphephelysleugluargaspmet

180185190

lysileasncysserglylysilevalilealaargtyrglylysval

195200205

pheargglyasnlysvallysasnalaglnleualaglyalalysgly

210215220

valileleutyrseraspproalaasptyrphealaproglyvallys

225230235240

sertyrproaspglytrpasnleuproglyglyglyvalglnarggly

245250255

asnileleuasnleuasnglyalaglyaspproleuthrproglytyr

260265270

proalaasnglutyralatyrargargglyilealaglualavalgly

275280285

leuproserileprovalhisproileglytyrtyraspalaglnlys

290295300

leuleuglulysmetglyglyseralaproproaspsersertrparg

305310315320

glyserleulysvalprotyrasnvalglyproglyphethrglyasn

325330335

pheserthrglnlysvallysmethisilehisserthrasngluval

340345350

thrargiletyrasnvalileglythrleuargglyalavalglupro

355360365

aspargtyrvalileleuglyglyhisargaspsertrpvalphegly

370375380

glyileaspproglnserglyalaalavalvalhisgluilevalarg

385390395400

serpheglythrleulyslysgluglytrpargproargargthrile

405410415

leuphealasertrpaspalagluglupheglyleuleuglyserthr

420425430

glutrpalaglugluasnserargleuleuglngluargglyvalala

435440445

tyrileasnalaaspserserilegluglyasntyrthrleuargval

450455460

aspcysthrproleumettyrserleuvalhisasnleuthrlysglu

465470475480

leulysserproaspgluglyphegluglylysserleutyrgluser

485490495

trpthrlyslysserproserproglupheserglymetproargile

500505510

serlysleuglyserglyasnaspphegluvalphepheglnargleu

515520525

glyilealaserglyargalaargtyrthrlysasntrpgluthrasn

530535540

lyspheserglytyrproleutyrhisservaltyrgluthrtyrglu

545550555560

leuvalglulysphetyraspprometphelystyrhisleuthrval

565570575

alaglnvalargglyglymetvalphegluleualaasnserileval

580585590

leupropheaspcysargasptyralavalvalleuarglystyrala

595600605

asplysiletyrserilesermetlyshisproglnglumetlysthr

610615620

tyrservalserpheaspserleupheseralavallysasnphethr

625630635640

gluilealaserlysphesergluargleuglnasppheasplysser

645650655

asnproilevalleuargmetmetasnaspglnleumetpheleuglu

660665670

argalapheileaspproleuglyleuproaspargprophetyrarg

675680685

hisvaliletyralaproserserhisasnlystyralaglygluser

690695700

pheproglyiletyraspalaleupheaspilegluserlysvalasp

705710715720

proserlysalatrpglygluvallysargglniletyrvalalaala

725730735

phethrvalglnalaalaalagluthrleusergluvalala

740745750

<210>24

<211>750

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>psmaw2g（全长）

<400>24

metglyasnleuleuhisgluthraspseralavalalathralaarg

151015

argproargtrpleucysalaglyalaleuvalleualaglyglyphe

202530

pheleuleuglypheleupheglytrppheilelysserserasnglu

354045

alathrasnilethrprolyshisasnmetlysalapheleuaspglu

505560

leulysalagluasnilelyslyspheleutyrasnphethrglnile

65707580

prohisleualaglythrgluglnasnpheglnleualalysglnile

859095

glnserglntrplysglupheglyleuaspservalgluleualahis

100105110

tyraspvalleuleusertyrproasnlysthrhisproasntyrile

115120125

serileileasngluaspglyasngluilepheasnthrserleuphe

130135140

gluproproproproglytyrgluasnvalseraspilevalpropro

145150155160

pheseralapheserproglnglymetprogluglyaspleuvaltyr

165170175

valasntyralaargthrgluaspphephelysleugluargaspmet

180185190

lysileasncysserglylysilevalilealaargtyrglylysval

195200205

pheargglyasnlysvallysasnalaglnleualaglyalalysgly

210215220

valileleutyrseraspproalaasptyrphealaproglyvallys

225230235240

sertyrproaspglytrpasnleuproglyglyglyvalglnarggly

245250255

asnileleuasnleuasnglyalaglyaspproleuthrproglytyr

260265270

proalaasnglutyralatyrargargglyilealaglualavalgly

275280285

leuproserileprovalhisproileglytyrtyraspalaglnlys

290295300

leuleuglulysmetglyglyseralaproproaspsersertrparg

305310315320

glyserleulysvalprotyrasnvalglyproglyphethrglyasn

325330335

pheserthrglnlysvallysmethisilehisserthrasngluval

340345350

thrargiletyrasnvalileglythrleuargglyalavalglupro

355360365

aspargtyrvalileleuglyglyhisargaspsertrpvalphegly

370375380

glyileaspproglnserglyalaalavalvalhisgluilevalarg

385390395400

serpheglythrleulyslysgluglytrpargproargargthrile

405410415

leuphealasertrpaspalagluglupheglyleuleuglyserthr

420425430

glutrpalaglugluasnserargleuleuglngluargglyvalala

435440445

tyrileasnalaaspserserilegluglyasntyrthrleuargval

450455460

aspcysthrproleumettyrserleuvalhisasnleuthrlysglu

465470475480

leulysserproaspgluglyphegluglylysserleutyrgluser

485490495

trpthrlyslysserproserproglupheserglymetproargile

500505510

serlysleuglyserglyasnaspphegluvalphepheglnargleu

515520525

glyilealaserglyargalaargtyrthrlysasntrpgluthrasn

530535540

lyspheserglytyrproleutyrhisservaltyrgluthrtyrglu

545550555560

leuvalglulysphetyraspprometphelystyrhisleuthrval

565570575

alaglnvalargglyglymetvalphegluleualaasnserileval

580585590

leupropheaspcysargasptyralavalvalleuarglystyrala

595600605

asplysiletyrserilesermetlyshisproglnglumetlysthr

610615620

tyrservalserpheaspserleupheseralavallysasnphethr

625630635640

gluilealaserlysphesergluargleuglnasppheasplysser

645650655

asnproilevalleuargmetmetasnaspglnleumetpheleuglu

660665670

argalapheileaspproleuglyleuproaspargprophetyrarg

675680685

hisvaliletyralaproserserhisasnlystyralaglygluser

690695700

pheproglyiletyraspalaleupheaspilegluserlysvalasp

705710715720

proserlysalatrpglygluvallysargglniletyrvalalaala

725730735

phethrvalglnalaalaalagluthrleusergluvalala

740745750

<210>25

<211>741

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>psmaaa1-9缺失

<400>25

seralavalalathralaargargproargtrpleucysalaglyala

151015

leuvalleualaglyglyphepheleuleuglypheleupheglytrp

202530

pheilelysserserasnglualathrasnilethrprolyshisasn

354045

metlysalapheleuaspgluleulysalagluasnilelyslysphe

505560

leutyrasnphethrglnileprohisleualaglythrgluglnasn

65707580

pheglnleualalysglnileglnserglntrplysglupheglyleu

859095

aspservalgluleualahistyraspvalleuleusertyrproasn

100105110

lysthrhisproasntyrileserileileasngluaspglyasnglu

115120125

ilepheasnthrserleuphegluproproproproglytyrgluasn

130135140

valseraspilevalpropropheseralapheserproglnglymet

145150155160

progluglyaspleuvaltyrvalasntyralaargthrgluaspphe

165170175

phelysleugluargaspmetlysileasncysserglylysileval

180185190

ilealaargtyrglylysvalpheargglyasnlysvallysasnala

195200205

glnleualaglyalalysglyvalileleutyrseraspproalaasp

210215220

tyrphealaproglyvallyssertyrproaspglytrpasnleupro

225230235240

glyglyglyvalglnargglyasnileleuasnleuasnglyalagly

245250255

aspproleuthrproglytyrproalaasnglutyralatyrargarg

260265270

glyilealaglualavalglyleuproserileprovalhisproile

275280285

glytyrtyraspalaglnlysleuleuglulysmetglyglyserala

290295300

proproaspsersertrpargglyserleulysvalprotyrasnval

305310315320

glyproglyphethrglyasnpheserthrglnlysvallysmethis

325330335

ilehisserthrasngluvalthrargiletyrasnvalileglythr

340345350

leuargglyalavalgluproaspargtyrvalileleuglyglyhis

355360365

argaspsertrpvalpheglyglyileaspproglnserglyalaala

370375380

valvalhisgluilevalargserpheglythrleulyslysglugly

385390395400

trpargproargargthrileleuphealasertrpaspalagluglu

405410415

pheglyleuleuglyserthrglutrpalaglugluasnserargleu

420425430

leuglngluargglyvalalatyrileasnalaaspserserileglu

435440445

glyasntyrthrleuargvalaspcysthrproleumettyrserleu

450455460

valhisasnleuthrlysgluleulysserproaspgluglypheglu

465470475480

glylysserleutyrglusertrpthrlyslysserproserproglu

485490495

pheserglymetproargileserlysleuglyserglyasnaspphe

500505510

gluvalphepheglnargleuglyilealaserglyargalaargtyr

515520525

thrlysasntrpgluthrasnlyspheserglytyrproleutyrhis

530535540

servaltyrgluthrtyrgluleuvalglulysphetyrasppromet

545550555560

phelystyrhisleuthrvalalaglnvalargglyglymetvalphe

565570575

gluleualaasnserilevalleupropheaspcysargasptyrala

580585590

valvalleuarglystyralaasplysiletyrserilesermetlys

595600605

hisproglnglumetlysthrtyrservalserpheaspserleuphe

610615620

seralavallysasnphethrgluilealaserlysphesergluarg

625630635640

leuglnasppheasplysserasnproilevalleuargmetmetasn

645650655

aspglnleumetpheleugluargalapheileaspproleuglyleu

660665670

proaspargprophetyrarghisvaliletyralaproserserhis

675680685

asnlystyralaglygluserpheproglyiletyraspalaleuphe

690695700

aspilegluserlysvalaspproserlysalatrpglygluvallys

705710715720

argglniletyrvalalaalaphethrvalglnalaalaalagluthr

725730735

leusergluvalala

740

<210>26

<211>2250

<212>dna

<213>智人

<400>26

atgtggaatctccttcacgaaaccgactcggctgtggccaccgcgcgccgcccgcgctgg60

ctgtgcgctggggcgctggtgctggcgggtggcttctttctcctcggcttcctcttcggg120

tggtttataaaatcctccaatgaagctactaacattactccaaagcataatatgaaagca180

tttttggatgaattgaaagctgagaacatcaagaagttcttatataattttacacagata240

ccacatttagcaggaacagaacaaaactttcagcttgcaaagcaaattcaatcccagtgg300

aaagaatttggcctggattctgttgagctagcacattatgatgtcctgttgtcctaccca360

aataagactcatcccaactacatctcaataattaatgaagatggaaatgagattttcaac420

acatcattatttgaaccacctcctccaggatatgaaaatgtttcggatattgtaccacct480

ttcagtgctttctctcctcaaggaatgccagagggcgatctagtgtatgttaactatgca540

cgaactgaagacttctttaaattggaacgggacatgaaaatcaattgctctgggaaaatt600

gtaattgccagatatgggaaagttttcagaggaaataaggttaaaaatgcccagctggca660

ggggccaaaggagtcattctctactccgaccctgctgactactttgctcctggggtgaag720

tcctatccagatggttggaatcttcctggaggtggtgtccagcgtggaaatatcctaaat780

ctgaatggtgcaggagaccctctcacaccaggttacccagcaaatgaatatgcttatagg840

cgtggaattgcagaggctgttggtcttccaagtattcctgttcatccaattggatactat900

gatgcacagaagctcctagaaaaaatgggtggctcagcaccaccagatagcagctggaga960

ggaagtctcaaagtgccctacaatgttggacctggctttactggaaacttttctacacaa1020

aaagtcaagatgcacatccactctaccaatgaagtgacaagaatttacaatgtgataggt1080

actctcagaggagcagtggaaccagacagatatgtcattctgggaggtcaccgggactca1140

tgggtgtttggtggtattgaccctcagagtggagcagctgttgttcatgaaattgtgagg1200

agctttggaacactgaaaaaggaagggtggagacctagaagaacaattttgtttgcaagc1260

tgggatgcagaagaatttggtcttcttggttctactgagtgggcagaggagaattcaaga1320

ctccttcaagagcgtggcgtggcttatattaatgctgactcatctatagaaggaaactac1380

actctgagagttgattgtacaccgctgatgtacagcttggtacacaacctaacaaaagag1440

ctgaaaagccctgatgaaggctttgaaggcaaatctctttatgaaagttggactaaaaaa1500

agtccttccccagagttcagtggcatgcccaggataagcaaattgggatctggaaatgat1560

tttgaggtgttcttccaacgacttggaattgcttcaggcagagcacggtatactaaaaat1620

tgggaaacaaacaaattcagcggctatccactgtatcacagtgtctatgaaacatatgag1680

ttggtggaaaagttttatgatccaatgtttaaatatcacctcactgtggcccaggttcga1740

ggagggatggtgtttgagctagccaattccatagtgctcccttttgattgtcgagattat1800

gctgtagttttaagaaagtatgctgacaaaatctacagtatttctatgaaacatccacag1860

gaaatgaagacatacagtgtatcatttgattcacttttttctgcagtaaagaattttaca1920

gaaattgcttccaagttcagtgagagactccaggactttgacaaaagcaacccaatagta1980

ttaagaatgatgaatgatcaactcatgtttctggaaagagcatttattgatccattaggg2040

ttaccagacaggcctttttataggcatgtcatctatgctccaagcagccacaacaagtat2100

gcaggggagtcattcccaggaatttatgatgctctgtttgatattgaaagcaaagtggac2160

ccttccaaggcctggggagaagtgaagagacagatttatgttgcagccttcacagtgcag2220

gcagctgcagagactttgagtgaagtagcc2250

<210>27

<211>2253

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>无cpgpsma

<400>27

atgtggaatctccttcatgaaacagactctgctgtggccacagccagaagacccagatgg60

ctgtgtgctggggccctggtgctggctggtggcttctttctcctgggcttcctctttggg120

tggtttataaaatcctccaatgaagctactaacattactccaaagcataatatgaaagca180

tttttggatgaattgaaagctgagaacatcaagaagttcttatataattttacacagata240

ccacatttagcaggaacagaacaaaactttcagcttgcaaagcaaattcaatcccagtgg300

aaagaatttggcctggattctgttgagctagcacattatgatgtcctgttgtcctaccca360

aataagactcatcccaactacatctcaataattaatgaagatggaaatgagattttcaac420

acatcattatttgaaccacctcctccaggatatgaaaatgtttctgatattgtaccacct480

ttcagtgctttctctcctcaaggaatgccagagggagatctagtgtatgttaactatgca540

agaactgaagacttctttaaattggaaagggacatgaaaatcaattgctctgggaaaatt600

gtaattgccagatatgggaaagttttcagaggaaataaggttaaaaatgcccagctggca660

ggggccaaaggagtcattctctactctgaccctgctgactactttgctcctggggtgaag720

tcctatccagatggttggaatcttcctggaggtggtgtccagagaggaaatatcctaaat780

ctgaatggtgcaggagaccctctcacaccaggttacccagcaaatgaatatgcttatagg840

agaggaattgcagaggctgttggtcttccaagtattcctgttcatccaattggatactat900

gatgcacagaagctcctagaaaaaatgggtggctcagcaccaccagatagcagctggaga960

ggaagtctcaaagtgccctacaatgttggacctggctttactggaaacttttctacacaa1020

aaagtcaagatgcacatccactctaccaatgaagtgacaagaatttacaatgtgataggt1080

actctcagaggagcagtggaaccagacagatatgtcattctgggaggtcacagggactca1140

tgggtgtttggtggtattgaccctcagagtggagcagctgttgttcatgaaattgtgagg1200

agctttggaacactgaaaaaggaagggtggagacctagaagaacaattttgtttgcaagc1260

tgggatgcagaagaatttggtcttcttggttctactgagtgggcagaggagaattcaaga1320

ctccttcaagagaggggagtggcttatattaatgctgactcatctatagaaggaaactac1380

actctgagagttgattgtacacccctgatgtacagcttggtacacaacctaacaaaagag1440

ctgaaaagccctgatgaaggctttgaaggcaaatctctttatgaaagttggactaaaaaa1500

agtccttccccagagttcagtggcatgcccaggataagcaaattgggatctggaaatgat1560

tttgaggtgttcttccaaagacttggaattgcttcaggcagagcaaggtatactaaaaat1620

tgggaaacaaacaaattcagtggctatccactgtatcacagtgtctatgaaacatatgag1680

ttggtggaaaagttttatgatccaatgtttaaatatcacctcactgtggcccaggttaga1740

ggagggatggtgtttgagctagccaattccatagtgctcccttttgattgtagagattat1800

gctgtagttttaagaaagtatgctgacaaaatctacagtatttctatgaaacatccacag1860

gaaatgaagacatacagtgtatcatttgattcacttttttctgcagtaaagaattttaca1920

gaaattgcttccaagttcagtgagagactccaggactttgacaaaagcaacccaatagta1980

ttaagaatgatgaatgatcaactcatgtttctggaaagagcatttattgatccattaggg2040

ttaccagacaggcctttttataggcatgtcatctatgctccaagcagccacaacaagtat2100

gcaggggagtcattcccaggaatttatgatgctctgtttgatattgaaagcaaagtggac2160

ccttccaaggcctggggagaagtgaagagacagatttatgttgcagccttcacagtgcag2220

gcagctgcagagactttgagtgaagtagcctaa2253

<210>28

<211>30

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>接头

<400>28

proglyglyglyserglyglyglyglyserglyglyglyglysergly

151015

glyglyglyserglyglyglyglyserglyglyglyglypro

202530

<210>29

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>接头

<400>29

glyseralaaspaspalalyslysaspalaalalyslysaspglylys

151015

ser

<210>30

<211>66

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>gmcsfrα链信号序列

<400>30

atgcttctcctggtgacaagccttctgctctgtgagttaccacacccagcattcctcctg60

atccca66

<210>31

<211>22

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>gmcsfrα链信号序列

<400>31

metleuleuleuvalthrserleuleuleucysgluleuprohispro

151015

alapheleuleuilepro

20

<210>32

<211>18

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>cd8α信号肽

<400>32

metalaleuprovalthralaleuleuleuproleualaleuleuleu

151015

hisala

<210>33

<211>4

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>接头

<400>33

glypheleugly

1

<210>34

<211>14

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>肽毒素

<400>34

lysleualalysleualalyslysleualalysleualalys

1510

<210>35

<211>12

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>psma结合肽1

<400>35

trpglnproaspthralahishistrpalathrleu

1510

<210>36

<211>12

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>psma结合肽2

<400>36

hisasnalatyrtrphistrpproprosermetthr

1510

<210>37

<211>11

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>psma结合肽3

<400>37

glyhisleuileproleuargglnproserhis

1510

<210>38

<211>12

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>psma结合肽4

<400>38

tyrthrserprohishisserthrthrglyhisleu

1510

<210>39

<211>11

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>psma结合肽5

<400>39

trpthrhishishissertyrproargproleu

1510

<210>40

<211>12

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>psma结合肽6

<400>40

asnserpheproleumetleumethishishispro

1510

<210>41

<211>11

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>psma结合肽7

<400>41

lyshismethistrphisproproalaleuasn

1510

<210>42

<211>12

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>psma结合肽8

<400>42

serleuaspsermetserproglntrphisalaasp

1510

<210>43

<211>12

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>psma结合肽9

<400>43

serglupheilehishistrpthrproproproser

1510

<210>44

<211>12

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>psma结合肽10

<400>44

asnglypheserhishisalaproleumetargtyr

1510

<210>45

<211>11

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>psma结合肽11

<400>45

hishisglutrpthrhishistrppropropro

1510

<210>46

<211>11

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>psma结合肽12

<400>46

alatrpprogluasnproserargargprophe

1510

<210>47

<211>12

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>psma结合肽13

<400>47

alaglypheglnhishisproserphetyrargphe

1510

<210>48

<211>12

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>psma结合肽14

<400>48

lysserleuserarghisasphisilehishishis

1510

<210>49

<211>11

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>psma结合肽15

<400>49

tyrarghistrpproileasptyrpropropro

1510

<210>50

<211>11

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>psma结合肽16

<400>50

metilehisthrasnhistrptrpalaglnasp

1510

<210>51

<211>12

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>psma结合肽17

<400>51

glnargserprometmetserargileargleupro

1510

<210>52

<211>741

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>psman9del

<400>52

metalavalalathralaargargproargtrpleucysalaglyala

151015

leuvalleualaglyglyphepheleuleuglypheleupheglytrp

202530

pheilelysserserasnglualathrasnilethrprolyshisasn

354045

metlysalapheleuaspgluleulysalagluasnilelyslysphe

505560

leutyrasnphethrglnileprohisleualaglythrgluglnasn

65707580

pheglnleualalysglnileglnserglntrplysglupheglyleu

859095

aspservalgluleualahistyraspvalleuleusertyrproasn

100105110

lysthrhisproasntyrileserileileasngluaspglyasnglu

115120125

ilepheasnthrserleuphegluproproproproglytyrgluasn

130135140

valseraspilevalpropropheseralapheserproglnglymet

145150155160

progluglyaspleuvaltyrvalasntyralaargthrgluaspphe

165170175

phelysleugluargaspmetlysileasncysserglylysileval

180185190

ilealaargtyrglylysvalpheargglyasnlysvallysasnala

195200205

glnleualaglyalalysglyvalileleutyrseraspproalaasp

210215220

tyrphealaproglyvallyssertyrproaspglytrpasnleupro

225230235240

glyglyglyvalglnargglyasnileleuasnleuasnglyalagly

245250255

aspproleuthrproglytyrproalaasnglutyralatyrargarg

260265270

glyilealaglualavalglyleuproserileprovalhisproile

275280285

glytyrtyraspalaglnlysleuleuglulysmetglyglyserala

290295300

proproaspsersertrpargglyserleulysvalprotyrasnval

305310315320

glyproglyphethrglyasnpheserthrglnlysvallysmethis

325330335

ilehisserthrasngluvalthrargiletyrasnvalileglythr

340345350

leuargglyalavalgluproaspargtyrvalileleuglyglyhis

355360365

argaspsertrpvalpheglyglyileaspproglnserglyalaala

370375380

valvalhisgluilevalargserpheglythrleulyslysglugly

385390395400

trpargproargargthrileleuphealasertrpaspalagluglu

405410415

pheglyleuleuglyserthrglutrpalaglugluasnserargleu

420425430

leuglngluargglyvalalatyrileasnalaaspserserileglu

435440445

glyasntyrthrleuargvalaspcysthrproleumettyrserleu

450455460

valhisasnleuthrlysgluleulysserproaspgluglypheglu

465470475480

glylysserleutyrglusertrpthrlyslysserproserproglu

485490495

pheserglymetproargileserlysleuglyserglyasnaspphe

500505510

gluvalphepheglnargleuglyilealaserglyargalaargtyr

515520525

thrlysasntrpgluthrasnlyspheserglytyrproleutyrhis

530535540

servaltyrgluthrtyrgluleuvalglulysphetyrasppromet

545550555560

phelystyrhisleuthrvalalaglnvalargglyglymetvalphe

565570575

gluleualaasnserilevalleupropheaspcysargasptyrala

580585590

valvalleuarglystyralaasplysiletyrserilesermetlys

595600605

hisproglnglumetlysthrtyrservalserpheaspserleuphe

610615620

seralavallysasnphethrgluilealaserlysphesergluarg

625630635640

leuglnasppheasplysserasnproilevalleuargmetmetasn

645650655

aspglnleumetpheleugluargalapheileaspproleuglyleu

660665670

proaspargprophetyrarghisvaliletyralaproserserhis

675680685

asnlystyralaglygluserpheproglyiletyraspalaleuphe

690695700

aspilegluserlysvalaspproserlysalatrpglygluvallys

705710715720

argglniletyrvalalaalaphethrvalglnalaalaalagluthr

725730735

leusergluvalala

740

<210>53

<211>2223

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>psman9deldna

<400>53

atggccgtcgcaaccgcccgccgaccccgctggctgtgcgccggagccctggtgctggcc60

ggcggcttctttctgctgggcttcctgtttggctggtttatcaagagctccaacgaggcc120

accaatatcacacctaagcacaatatgaaggccttcctggacgagctgaaggccgagaat180

atcaagaagttcctgtataacttcacccagatcccacacctggccggcacagagcagaac240

tttcagctggccaagcagatccagagccagtggaaggagttcggcctggactccgtggag300

ctggcccactacgatgtgctgctgtcttatccaaataagacccaccccaactatatcagc360

atcatcaacgaggatggcaatgagatcttcaacacatctctgtttgagccccctccaccc420

ggctacgagaatgtgagcgacatcgtgcctccattctctgcctttagcccacagggaatg480

cctgagggcgatctggtgtacgtgaattatgccagaaccgaggacttctttaagctggag540

agagatatgaagatcaactgcagcggcaagatcgtgatcgccagatacggcaaggtgttt600

cgcggcaataaggtgaagaacgcacagctggccggagcaaagggcgtgatcctgtactcc660

gaccccgccgattatttcgcccctggcgtgaagtcctatccagacggctggaatctgcca720

ggaggaggcgtgcagaggggaaacatcctgaacctgaatggagcaggcgatcctctgacc780

ccaggataccccgccaacgagtacgcctataggagaggaatcgcagaggcagtgggcctg840

ccttccatcccagtgcaccccatcggctactatgacgcccagaagctgctggagaagatg900

ggaggctctgccccacctgattctagctggaggggcagcctgaaggtgccttacaatgtg960

ggcccaggcttcaccggcaacttttccacacagaaggtgaagatgcacatccactctacc1020

aatgaggtgacacggatctataacgtgatcggcaccctgaggggagcagtggagcctgac1080

agatacgtgatcctgggcggccacagagacagctgggtgtttggaggaatcgatccacag1140

tccggagcagcagtggtgcacgagatcgtgaggtccttcggcaccctgaagaaggaggga1200

tggcgccccaggaggacaatcctgtttgcctcttgggatgccgaggagttcggcctgctg1260

ggctccacagagtgggcagaggagaattctcggctgctgcaggagagaggcgtggcctac1320

atcaatgccgactcctctatcgagggcaactataccctgagggtggattgcacacccctg1380

atgtactccctggtgcacaacctgaccaaggagctgaagtctcctgacgagggcttcgag1440

ggcaagtctctgtatgagagctggacaaagaagtctccaagccccgagtttagcggcatg1500

cctaggatctccaagctgggctctggcaatgatttcgaggtgttctttcagcgcctggga1560

atcgcctccggccgggcaagatacaccaagaattgggagacaaacaagttctctggctac1620

ccactgtatcacagcgtgtacgagacatatgagctggtggagaagttctacgaccccatg1680

tttaagtatcacctgacagtggcacaggtgcggggaggaatggtgtttgagctggccaat1740

agcatcgtgctgccattcgactgtagggattatgccgtggtgctgcgcaagtacgccgac1800

aagatctattccatctctatgaagcacccccaggagatgaagacctacagcgtgtccttc1860

gattccctgttttctgccgtgaagaacttcacagagatcgccagcaagttttccgagaga1920

ctgcaggacttcgataagagcaatcccatcgtgctgcggatgatgaacgaccagctgatg1980

ttcctggagagagcctttatcgaccctctgggcctgcctgataggccattctaccgccac2040

gtgatctatgcccctagctcccacaacaagtacgccggcgagtcctttccaggcatctat2100

gacgccctgttcgatatcgagagcaaggtggacccctccaaggcatggggagaggtgaag2160

agacagatctatgtcgcagcattcactgtccaggcagcagcagaaaccctgtcagaagtc2220

gca2223

<210>54

<211>66

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>p2adna

<400>54

ggatctggagcaacaaacttctcactactcaaacaagcaggtgacgtggaggagaatccc60

ggaccc66

<210>55

<211>12

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>铰链

<400>55

gluserlystyrglyproprocysprosercyspro

1510

<210>56

<211>9

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>铰链

<400>56

tyrglyproprocysproprocyspro

15

<210>57

<211>10

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>铰链

<400>57

lystyrglyproprocysproprocyspro

1510

<210>58

<211>14

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>铰链

<400>58

gluvalvalvallystyrglyproprocysproprocyspro

1510

<210>59

<211>11

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>fmc63cdrl1

<400>59

argalaserglnaspileserlystyrleuasn

1510

<210>60

<211>7

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>fmc63cdrl2

<400>60

serargleuhisserglyval

15

<210>61

<211>9

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>fmc63cdrl3

<400>61

glyasnthrleuprotyrthrphegly

15

<210>62

<211>5

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>fmc63cdrh1

<400>62

asptyrglyvalser

15

<210>63

<211>16

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>fmc63cdrh2

<400>63

valiletrpglysergluthrthrtyrtyrasnseralaleulysser

151015

<210>64

<211>7

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>fmc63cdrh3

<400>64

tyralametasptyrtrpgly

15

<210>65

<211>18

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>接头

<400>65

glyserthrserglyserglylysproglyserglygluglyserthr

151015

lysgly

<210>66

<211>5

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>间隔子

<220>

<221>变体

<222>1

<223>xaa=gly、cys或arg

<220>

<221>变体

<222>4

<223>xaa=cys或thr

<400>66

xaaproproxaapro

15