一种维生素C乙基醚中有关物质的高效液相色谱法测定方法与流程

本发明涉及一种维生素c乙基醚的有关物质检测方法，属于化妆品原料分析检测领域。

背景技术：

维生素c是自然界中最强的抗氧化剂之一,能捕捉自由基,保护细胞组织,抵御自由基和活性氧物质造成的损害。由于维生素c的低亲脂性、热敏性和自身氧化降解性等缺点,其应用受到限制。因此，许多改善其性能的维生素c衍生物应运而生,如已广泛应用的维生素c磷酸酯镁、维生素c棕榈酸酯等。维生素c乙基醚是一种新的亲油亲水两性维生素c衍生物,在配方中能够极为方便地使用,容易穿透皮肤角质层进入真皮层,进入皮肤后,容易被生物酶分解而发挥维生素c的生物学功效,从而提高其生物利用度,因此可在化妆品中用作防老化剂和美白剂。其化学结构式如下：

由于维生素c乙基醚在合成过程中有可能引入残留原料及其它有关物质，在储藏过程中还有可能产生降解产物，本法有效的对维生素c乙基醚进行纯度分析，本试验采用普通的色谱柱(c18色谱柱)快速准确的实现了维生素c乙基醚有关物质的测定，保证了维生素c乙基醚的质量可控。本发明维生素c乙基醚的有关物质检测方法，可快速准确的检测出维生素c乙基醚的杂质及降解产物情况。操作简捷，灵敏度高，可较好地控制产品质量。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种采用二极管阵列检测器对维生素c乙基醚进行有关物质检查的测定方法。

本发明有关物质检查方法的实现包括以下步骤：

(1)色谱条件：检测器采用二极管阵列检测器，柱温34℃～36℃，流速1.0ml/min，检测波长：246nm。色谱条件的流动相由磷酸盐缓冲液(用磷酸调节ph值为4.0)-乙腈组成，其配比为80:20。理论塔板数按维生素c乙基醚峰计算不低于3000。

(2)供试品溶液的制备：

取维生素c乙基醚适量，加流动相配制成0.2mg/ml的溶液，作为供试品溶液。

(3)对照溶液的制备：

量取上述(2)供试品溶液适量，加流动相稀释成每1ml中约含2μg的溶液，作为对照溶液。

(4)测定方法：

取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰高约为满量程的10％，再取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图至维生素c乙基醚主峰保留时间的2倍，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液中主峰的峰面积(见附图1、附图2)。

本发明维生素c乙基醚的有关物质检测方法，上述(2)中供试品溶液的制备：为满足供试品溶液检测浓度的需要，取维生素c乙基醚适量，用流动相配制成浓度为每1ml含0.2mg的溶液，作为供试品溶液。再分别用流动相稀释成一系列不同浓度的溶液，分别进样10μl，使之产生主峰为基线噪音三倍的信号。经试验，最小检知量为0.2ng(s/n≥3)，若以有关物质检查时的浓度0.2mg/ml计算，其检出限度为0.1％。

本发明维生素c乙基醚的有关物质检测方法，上述(3)中对照溶液的制备：精密量取上述供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，作为对照溶液。当该对照溶液浓度范围在1～10μg/ml内时，峰面积与浓度呈良好的线性关系，其线性相关系数为0.9998。

本发明维生素c乙基醚的有关物质检测方法，其有关物质检测高效液相色谱图中，如有杂质峰出现，量取各杂质峰面积的和，应不得大于对照溶液的主峰面积(1％)。

本发明的积极效果在于：

1、本发明使用二极管阵列检测器对本品进行有关物质检测，建立了一种快速直观的评价色谱峰纯度的有效方法:可直观的判断色谱峰的纯度,并判断存在干扰峰的位置,能够获得“在流”的全部光谱信息,快速得到色谱组分的吸收光谱,二极管阵列检测器较一般的紫外-可见检测器,优点在于不仅能依靠色谱的保留时间进行定性,而且能够根据其提供的光谱信息进行定性,大大提高了定性的可信度。

2、本发明检测方法准确，操作简捷，重现性好，灵敏度高，可以充分满足维生素c乙基醚有关物质检查与分解产物测定的要求，较好地控制样品中的特殊杂质，保证产品质量，在工作中实用性强。

附图说明

图1：对照溶液的高效液相色谱法图谱

图2：供试品溶液的高效液相色谱法图谱

具体实施方式

实施例一：

1、色谱条件与系统适用性试验：

1.1、色谱条件的选择：

仪器：安捷伦:1260ii，其最佳柱温35℃，流速1.0ml/min。液相色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(250mm×4.6mm，5μm)，参照相关文献并结合试验具体情况，先后选用甲醇-水、乙腈-水、甲醇-磷酸盐缓冲液溶液、乙腈-磷酸盐缓冲液溶液等多种条件，最终确定流动相由磷酸盐缓冲液(用磷酸调节ph值为4.0)-乙腈组成，其最佳配比为(80∶20)。进样量10μl。

在该色谱条件下，维生素c乙基醚主峰保留时间适中，峰形较好。

1.2、灵敏度测定取维生素c乙基醚对照品适量，用流动相配制成浓度为每1ml含0.2mg的溶液，再分别用流动相稀释成一系列不同浓度的溶液，分别进样10μl，使之产生主峰为基线噪音三倍的信号。经试验，最小检知量为0.2ng(s/n≥3)，若以有关物质检查时的浓度0.2mg/ml计算，其检出限度为0.1％。结果证明，该方法灵敏度高，可以充分满足有关物质检查测定的要求。

1.3、溶液稳定性取同一份供试品溶液，分别于0、2、4、8、10小时分别进样测定，其主峰峰面积及有关物质测定结果在10小时内基本稳定。

以上试验结果表明，此方法简便灵敏，重现性好，可较好地对样品中维生素c乙基醚的质量进行较好地检测。

2、供试品溶液的制备：

取维生素c乙基醚适量，加流动相配制成0.2mg/ml的溶液，作为供试品溶液。

3、对照溶液的制备：

量取上述(2)供试品溶液适量，加流动相稀释成每1ml中约含2μg的溶液，作为对照溶液。

4、维生素c乙基醚有关物质的检测：

取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰高约为满量程的10％，再取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图至维生素c乙基醚主峰保留时间的2倍，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液中主峰的峰面积。

技术特征：

1.一种维生素c乙基醚的有关物质检测方法，其特征在于检测方法包括以下步骤：

(1)色谱条件

采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以磷酸盐缓冲液(用磷酸调节ph值为4.0)-乙腈溶液为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长246nm，理论塔板数按维生素c乙基醚峰计算不低于3000；

(2)供试品溶液的制备

取维生素c乙基醚适量，加流动相配制成0.2mg/ml的溶液，作为供试品溶液；

(3)对照溶液的制备

量取上述(2)供试品溶液适量，加流动相稀释成每1ml中约含2μg的溶液，作为对照溶液；

(4)测定方法

取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰高约为满量程的10％，再取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图至维生素c乙基醚主峰保留时间的2倍，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液中主峰的峰面积(1.0％)。

2.根据权利要求1所述的一种维生素c乙基醚的有关物质检测方法，其特征在于，检测器采用二极管阵列检测器，柱温34℃～36℃，流速1.0ml/min；色谱条件的流动相由磷酸盐缓冲液-乙腈组成，配比为80:20，用磷酸调节磷酸盐缓冲液ph值为4.0。

3.根据权利要求1所述的一种维生素c乙基醚的有关物质检测方法，其特征在于：对照溶液的制备：取维生素c乙基醚适量，加流动相配制成0.2mg/ml的溶液，作为供试品溶液；再精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，作为对照溶液。

技术总结
本发明公开了一种维生素C乙基醚的检测方法，具体是采用二极管阵列检测器，以磷酸盐缓冲液(用磷酸调节pH值为4.0)‑乙腈溶液为流动相。取维生素C乙基醚适量，加流动相配制成每1ml中含维生素C乙基醚0.2mg的溶液，作为供试品溶液。并用流动相稀释成每1ml中约含2μg的溶液，作为对照溶液。分别进样，供试品溶液色谱图中各杂质峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积。本发明维生素C乙基醚有关物质检测方法，可快速准确的检测出维生素C乙基醚的杂质及降解产物情况。操作简捷，灵敏度高，可较好地控制产品质量。

技术研发人员：杨利;崔新强;孔祥雨;李新志;任文杰;张彬;冯光玲;刘文涛;段崇刚;郑德强;王洪臣;魏乐坤;李祥
受保护的技术使用者：山东省药学科学院
技术研发日：2020.06.30
技术公布日：2020.09.08