检测样品中抗新型冠状病毒的IgM抗体的装置和试剂盒的制作方法

检测样品中抗新型冠状病毒的igm抗体的装置和试剂盒
技术领域
1.本申请涉及检测样品中抗新型冠状病毒的igm抗体的装置和试剂盒。更具体地，本申请涉及用于用免疫印迹法检测样品中抗新型冠状病毒sars
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2的igm抗体的装置、用于用免疫印迹法检测样品中抗新型冠状病毒sars
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cov
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2的igm抗体的试剂盒、用免疫印迹法检测样品中抗新型冠状病毒sars
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cov
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2的igm抗体的方法、纯化s 蛋白抗原和纯化n蛋白抗原的组合或该装置或该试剂盒在检测样品中抗新型冠状病毒sars
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cov
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2的igm抗体中的用途、以及纯化s 蛋白抗原和纯化n蛋白抗原的组合或该装置或该试剂盒在制备诊断新型冠状病毒sars
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cov
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2感染的产品中的用途。


背景技术：

2.针对上述新型冠状病毒疫情，如何快速、准确地检测出患者是否患有新型冠状病毒肺炎至关重要。
3.目前，检测新型冠状病毒sars
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2的一种方法是核酸检测，其主要是基于荧光定量pcr(qrt
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pcr)对病毒核酸进行检测，检测基因包括orf1ab及n基因，除此之外核酸检测还包括基于crispr 的快速检测方法sherlock，其识别基因为orf1ab及s基因。目前，上述核酸检测方法被定为新冠病毒检测的金标准，但核酸检测目前存在最大的问题是假阴性。造成核酸检测假阴性的原因有很多，包括临床采样的误差。实际上，在临床检验过程中，鼻咽拭子、痰、下呼吸道分泌物、血液、粪便等标本中均可检测出新型冠状病毒核酸，但由于采样方法和采样时间的限制，目前最常用的样本是上呼吸道样本。但是，病毒性肺炎患者在下呼吸道具有更高的病毒载量，所以下呼吸道分泌物的检出率会更高一些。然而，获取肺泡灌洗液等下呼吸道样本操作上要求较高，且易喷溅，传播风险高，比较耗时，最终导致采集到的样本不能反映患者或肺炎疑似患者的真实状况。此外，样本运输的限制也是导致核酸检测出现假阴性的又一原因。各种rna病毒的核酸由于自降解和生物酶介导的降解，是最难以稳定保存的生物分子之一，其对样本的储存和运输条件要求较高。但目前的检测条件无法做到床旁检测，从采样到实际实验检测须经过漫长的等待时间，样本在一定程度上不能准确反映被检测者真实信息。除此之外，核酸检测还存在耗时长、设备昂贵等问题。
4.此外，检测新型冠状病毒sars
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2的另一种方法是蛋白检测。目前主要为新冠病毒igm/igg抗体检测试剂盒，其应用的方法学主要包括免疫层析(胶体金法)、化学发光、elisa、免疫荧光等等。但是，胶体金等检测方法无法同时对样本中的s蛋白和n蛋白进行检测，只能对两种蛋白进行单一指标检测，在实验操作、产品和时间消耗方面不占优势。
5.于此同时，现有的研究表明，在传染过程中igm是人体免疫系统中先出现的抗体，检测隐性感染新型冠状病毒sars
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2人员体内的igm抗体具有敏感性高、诊断时间早、能判定量疑似者是否感染等优点，对有效控制新型冠状病毒sars
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2的大规模传播具有重要的意义。
6.因此，非常需要开发一种用于检测样品中抗新型冠状病毒 sars
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2的igm抗体的新型试剂盒，以避免核酸检测中出现的样本采集操作困难、采集后的样本不能准确反应
肺炎疑似患者真实病情、样本保存困难等问题，同时具有操作时间短，成本低，对机器依赖性低等优点，并且还可同时对s蛋白和n蛋白进行检测，既降低了检测成本，又明显缩短了检测时间且提高了检测效率和检测准确度。


技术实现要素：

7.为了解决上述问题，本申请的第一方面提供检测样品中抗新型冠状病毒的igm抗体的装置，其包括：
8.背衬；以及
9.依次设置在所述背衬上的相互隔开的包被有纯化s蛋白抗原的固相支持物、包被有纯化n蛋白抗原的固相支持物、以及包被有igm 抗体的固相支持物。
10.本申请的第二方面提供检测样品中抗新型冠状病毒的igm抗体的装置，其包括：
11.背衬；以及
12.依次设置在所述背衬上的相互隔开的包被有纯化n蛋白抗原的固相支持物、包被有纯化s蛋白抗原的固相支持物、以及包被有igm 抗体的固相支持物。
13.在一种实施方案中，在上述第一方面或第二方面的装置的背衬上，在所述包被有igm抗体的固相支持物的下游还设置有与所述包被有igm抗体的固相支持物隔开的手柄标签。
14.在一种实施方案中，所述背衬是透明的和/或所述背衬由包括塑料的材料制成，优选地，所述塑料为pvc。
15.在一种实施方案中，所述固相支持物为膜。
16.在一种实施方案中，所述膜由包括硝酸纤维素、尼龙、pvdf、 nytron、biodyne或porex的材料制成，优选地，所述膜由硝酸纤维素制成。
17.在一种实施方案中，所述包被有纯化s蛋白抗原的固相支持物为白色和/或所述包被有纯化n蛋白抗原的固相支持物为白色和/或所述包被有igm抗体的固相支持物为白色。
18.在一种实施方案中，所述手柄标签由普通打印纸制成和/或所述手柄标签为白色。
19.在一种实施方案中，所述包被有纯化s蛋白抗原的固相支持物的面积和/或长度占所述装置的面积和/或长度的2％
‑
15％，优选4％
‑
6％，更优选5％；和/或所述包被有纯化n蛋白抗原的固相支持物的面积和/或长度占所述装置的面积和/或长度的2％
‑
15％，优选4％
‑
6％，更优选5％；和/或所述包被有igm抗体的固相支持物的面积和/或长度占所述装置的面积和/或长度的2％
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15％，优选4％
‑
6％，更优选5％。
20.在一种实施方案中，所述手柄标签的面积和/或长度占所述装置的面积和/或长度的5％
‑
20％，优选10％
‑
15％，更优选12％。
21.在一种实施方案中，所述包被有纯化s蛋白抗原的固相支持物或所述包被有纯化n蛋白抗原的固相支持物与所述包被有igm抗体的固相支持物之间的间隔的面积和/或长度占所述装置的面积和/或长度的40％
‑
80％，优选50％
‑
70％，更优选63％。
22.在一种实施方案中，所述包被有纯化s蛋白抗原的固相支持物与所述包被有纯化n蛋白抗原的固相支持物之间的间隔的面积和/或长度、以及所述包被有纯化n蛋白抗原的固相支持物与所述包被有igm 抗体的固相支持物之间的间隔的面积和/或长度分别占所述装置的面积和/或长度的1％
‑
5％和40％
‑
80％，优选地，分别占1.5％
‑
3.5％和 50％
‑
70％，更
优选地，分别占2％和63％。
23.在一种实施方案中，所述包被有纯化n蛋白抗原的固相支持物与所述包被有纯化s蛋白抗原的固相支持物之间的间隔的面积和/或长度、以及所述包被有纯化n蛋白抗原的固相支持物与所述包被有igm 抗体的固相支持物之间的间隔的面积和/或长度分别占所述装置的面积和/或长度的1％
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5％和40％
‑
80％，优选地，分别占1.5％
‑
3.5％和 50％
‑
70％，更优选地，分别占2％和63％。
24.在一种实施方案中，所述包被有igm抗体的固相支持物与所述手柄标签之间的间隔的面积和/或长度占所述装置的面积和/或长度的1％
‑
5％，优选2％
‑
4％，更优选3％。
25.本申请的第三方面提供检测样品中抗新型冠状病毒的igm抗体的试剂盒，其包括：
26.(1)根据上述第一方面或第二方面所述的装置；
27.(2)标记的第二抗体，其与igm抗体特异性地结合；
28.(3)缓冲液；
29.(4)底物液；
30.(5)产品说明书。
31.在一种实施方案中，所述试剂盒还包括：温育装置。
32.在一种实施方案中，所述温育装置为温育盘。
33.在一种实施方案中，所述标记的第二抗体是酶结合物，优选是碱性磷酸酶标记的抗人igm。
34.在一种实施方案中，所述缓冲液是tris缓冲液，优选是10倍浓缩的tris缓冲液。
35.在一种实施方案中，所述底物液是四唑硝基苯胺兰/5
‑
溴
‑4‑
氯啶
ꢀ‑3‑
吲哚
‑
磷酸盐。
36.本申请的第四方面提供用免疫印迹法检测样品中抗新型冠状病毒sars
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2的igm抗体的方法，其包括以下步骤：
37.(1)提供上述第一方面或第二方面所述的装置；
38.(2)提供样品；
39.(3)提供标记的第二抗体；
40.(4)使步骤(2)的样品，步骤(1)所述装置中的固相支持物上的纯化s蛋白抗原和纯化n蛋白抗原与步骤(3)的第二抗体发生免疫反应；
41.(5)检测所述步骤(4)中的免疫反应结果并判断样品中是否存在第一抗体。
42.在一种实施方案中，所述标记的第二抗体是酶结合物，优选是碱性磷酸酶标记的抗人igm。
43.在一种实施方案中，根据上述第一方面或第二方面所述的装置或根据上述第三方面所述的试剂盒或根据上述第四方面的所述的方法中，所述样品为人体样品，优选地，所述人体样本选自下组：血液、血清、血浆、尿样、体液、唾液和其它分泌物或排泄物以及组织或细胞提取物，更优选地，所述人体样本为血清和/或血浆。
44.本申请的第五方面提供纯化s蛋白抗原和纯化n蛋白抗原的组合；或根据上述第一方面或第二方面所述的装置；或根据上述第三方面所述的试剂盒在检测样品中抗新型冠状病毒sars
‑
cov
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2的igm抗体中的用途。
45.本申请的第六方面提供纯化s蛋白抗原和纯化n蛋白抗原的组合；或根据上述第一
方面或第二方面所述的装置；或根据上述第三方面所述的试剂盒在制备诊断新型冠状病毒sars
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cov
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2感染的产品中的用途。
46.本申请取得了如下有益技术效果：
47.(1)本申请的试剂盒采用免疫印迹法对人血清或血浆中的蛋白抗体进行检测，避免了核酸检测中出现的样本采集操作困难、采集后的样本不能准确反应肺炎疑似患者真实病情、样本保存困难等问题；
48.(2)本申请的试剂盒具有操作时间短，成本低，对机器依赖性低等优点，弥补了核酸检测的耗时长，检测仪器昂贵等问题；
49.(3)本申请的试剂盒可同时对纯化s蛋白抗原和纯化n蛋白抗原进行检测，降低了检测成本，明显缩短了检测时间，且检测效率和检测准确度得到提升。
附图说明
50.图1为本申请实施例1的检测装置的示意图。
具体实施方式
51.参考以下本申请的优选实施方案的详述以及包括的实施例可更容易地理解本公开内容。
52.除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本申请所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。
53.如本文所用术语“由
…
制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。
54.连接词“由
…
组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由
…
组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。
55.当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1至5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1至4”、“1 至3”、“1
‑
2”、“1
‑
2和4
‑
5”、“1
‑
3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。
56.此外，本申请要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显旨指单数形式。
57.装置
58.本申请的第一方面提供检测样品中抗新型冠状病毒的igm抗体的装置，其包括：
59.背衬；以及
60.依次设置在所述背衬上的相互隔开的包被有纯化s蛋白抗原的固相支持物、包被有纯化n蛋白抗原的固相支持物、以及包被有igm 抗体的固相支持物(又称为包被质控带)。
61.本申请使用的术语“s蛋白”和“n蛋白”是位于新型冠状病毒 sars
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2上的两种结构蛋白。新型冠状病毒sars
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2由多种结构蛋白组成，包括刺突蛋白(s蛋白)、小包膜蛋白(e蛋白)、膜蛋白(m蛋白)和核衣壳蛋白(n蛋白)，其中n蛋白是含量最丰富和最保守的蛋白，其主要分布在病毒内部。s蛋白是病毒体外壳上的i类病毒融合蛋白，通过识别宿主细胞受体并介导病毒和细胞膜融合来在病毒感染中发挥关键作用。s蛋白被合成为前体蛋白，由约 1,300个氨基酸组成，然后被切割成一个氨基(n)端s1亚基和一个羧基(c)端s2亚基)。三个s1/s2异二聚体组装形成一个三聚体尖峰，从病毒包膜突出。由三个s1
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s2异二聚体组成的三聚体s糖蛋白与细胞受体血管紧张素转化酶2(ace2)结合，并通过融合前到融合后的构象转换介导病毒膜和细胞膜的融合。进一步地，本申请中的s 蛋白和n蛋白具体如下(参见https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)：
62.类型基因id蛋白质ids蛋白43740568yp_009724390.1n蛋白43740575yp_009724397.2
63.本申请使用的术语“纯化”是指通过如下的方法获得纯化s蛋白或纯化n蛋白：利用目的蛋白上的组蛋白标签与镍柱特异性结合的作用，将蛋白粗提物，流过含镍亲和层析柱，目的蛋白特异性结合到含镍柱子上，将目的蛋白与非目的蛋白分开，再将高纯度目的蛋白洗脱。
64.本申请使用的术语“抗体”是指通过至少一个位于免疫球蛋白分子的可变区内的抗原识别位点，识别和特异性结合的免疫球蛋白分子。
65.本申请使用的术语“igm抗体”是一种保护性抗体，其具有免疫性。研究表明，在新型冠状病毒sars
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2感染过程中，igm是人体免疫系统中先出现的抗体。检测隐性感染新型冠状病毒 sars
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2人员体内的igm抗体具有敏感性高、诊断时间早、能判定量疑似者是否感染等优点。
66.本申请使用的术语“固相支持物”是指可在固相上固定蛋白质，尤其是纯化s蛋白和纯化n蛋白的材料。在一种优选实施方式中，固相支持物是膜，优选地该膜由包括硝酸纤维素、尼龙、pvdf、nytron、 biodyne或porex的材料形成，更优选地该膜由硝酸纤维素形成。
67.本申请使用的术语“免疫印迹法”是将蛋白质转移到固相支持物上，然后利用抗体进行检测的方法。
68.本申请使用的术语“样品”以其最广泛的意义使用。在某种情况下，样品包括细胞、有机体、从任何来源获得的试样或培养物，以及生物和环境样品。其中，生物样品可从动物(包括人)获得并且指在其中发现的生物材料或组合物，包括但不限于骨髓、组织间液、尿液、脑脊液、核酸、dna、血液、血清、血小板、血浆、组织以及其纯化或过滤形式；环境样品包括但不限于地表物质、土壤、水、晶体和工业样品。在一种优选实施方案中，样品为人体样品；优选地，所述人体样品选自下组：血液、血清、血浆、尿样、体液、唾液和其它分泌物或排泄物以及组织或细胞提取物；更优选地，所述人体样品选自血清和/或血浆。
69.术语“包被有igm抗体的固相支持物”又称为包被质控带，是作为阳性质量控制，其的正常显色与否可判断此次操作是否正确，结果是否可靠。一般而言，质控带强显色：表明此次操作正常，结果可信；反之，质控带未显色：表明此次操作异常，结果不可信。优选地，用于本申请的质控带中包被有人igm，其对应的酶结合物为碱性磷酸酶标记的抗人igm，它们
相互作用，然后加入底物液，可产生强的颜色带。
70.在一种实施方案中，在所述背衬上，在所述包被有igm抗体的固相支持物的下游还设置有与所述包被有igm抗体的固相支持物隔开的手柄标签。
71.在一种实施方案中，所述背衬是透明的和/或所述背衬由包括塑料的材料制成，优选地，所述塑料为pvc。
72.在一种实施方案中，所述固相支持物为膜。
73.在一种实施方案中，所述膜由包括硝酸纤维素、尼龙、pvdf、 nytron、biodyne或porex的材料制成，优选地，所述膜由硝酸纤维素制成。在一种实施方案中，所述膜为硝酸纤维素膜，又称为nc膜。
74.在一种实施方案中，所述包被有纯化s蛋白抗原的固相支持物为白色和/或所述包被有纯化n蛋白抗原的固相支持物为白色和/或所述包被有igm抗体的固相支持物为白色。
75.在一种实施方案中，所述手柄标签由普通打印纸制成和/或所述手柄标签为白色。
76.在一种实施方案中，所述包被有纯化s蛋白抗原的固相支持物的面积和/或长度占所述装置的面积和/或长度的2％
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15％，优选4％
‑
6％，更优选5％；和/或所述包被有纯化n蛋白抗原的固相支持物的面积和 /或长度占所述装置的面积和/或长度的2％
‑
15％，优选4％
‑
6％，更优选5％；和/或所述包被有igm抗体的固相支持物的面积和/或长度占所述装置的面积和/或长度的2％
‑
15％，优选4％
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6％，更优选5％。
77.在一种实施方案中，所述手柄标签的面积和/或长度占所述装置的面积和/或长度的5％
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20％，优选10％
‑
15％，更优选12％。
78.在一种实施方案中，所述包被有纯化s蛋白抗原的固相支持物或所述包被有纯化n蛋白抗原的固相支持物与所述包被有igm抗体的固相支持物之间的间隔的面积和/或长度占所述装置的面积和/或长度的40％
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80％，优选50％
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70％，更优选63％。
79.在一种实施方案中，所述包被有纯化s蛋白抗原的固相支持物与所述包被有纯化n蛋白抗原的固相支持物之间的间隔的面积和/或长度、以及所述包被有纯化n蛋白抗原的固相支持物与所述包被有igm 抗体的固相支持物之间的间隔的面积和/或长度分别占所述装置的面积和/或长度的1％
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5％和40％
‑
80％，优选地，分别占1.5％
‑
3.5％和 50％
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70％，更优选地，分别占2％和63％。
80.在一种实施方案中，所述包被有igm抗体的固相支持物与所述手柄标签之间的间隔的面积和/或长度占所述装置的面积和/或长度的 1％
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5％，优选2％
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4％，更优选3％。
81.本申请的第二方面提供检测样品中抗新型冠状病毒的igm抗体的装置，其包括：
82.背衬；以及
83.依次设置在所述背衬上的相互隔开的包被有纯化n蛋白抗原的固相支持物、包被有纯化s蛋白抗原的固相支持物、以及包被有igm 抗体的固相支持物。
84.本申请第二方面提供的装置与第一方面提供的装置基本相同，区别仅在于将包被有纯化s蛋白抗原的固相支持物和包被有纯化n蛋白抗原的固相支持物的位置互换。因此，在本申请第一方面中描述的各实施方案也同样适用于本申请的第二方面。
85.本申请的第一方面或第二方面的装置中，可以实现同时利用s蛋白和n蛋白进行检测，进而提高检测准确率。
86.试剂盒
87.本申请的第三方面提供检测样品中抗新型冠状病毒的igm抗体的试剂盒，其包括：
88.(1)根据上述第一方面或第二方面所述的装置；
89.(2)标记的第二抗体，其与igm抗体特异性地结合；
90.(3)缓冲液；
91.(4)底物液；
92.(5)产品说明书。
93.在一种实施方案中，所述试剂盒还包括：温育装置。
94.在一种实施方案中，所述温育装置为温育盘。
95.在一种实施方案中，所述标记的第二抗体是酶结合物，优选是碱性磷酸酶标记的抗人igm。
96.在一种实施方案中，所述缓冲液是tris缓冲液，优选是10倍浓缩的tris缓冲液。
97.在一种实施方案中，所述底物液是四唑硝基苯胺兰/5
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溴
‑4‑
氯啶
ꢀ‑3‑
吲哚
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磷酸盐。
98.检测方法
99.本申请的第四方面提供用免疫印迹法检测样品中抗新型冠状病毒sars
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cov
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2的igm抗体的方法，其包括以下步骤：
100.(1)提供上述第一方面或第二方面所述的装置；
101.(2)提供样品；
102.(3)提供标记的第二抗体；
103.(4)使步骤(2)的样品，步骤(1)所述装置中的固相支持物上的纯化s蛋白抗原和纯化n蛋白抗原与步骤(3)的第二抗体发生免疫反应；
104.(5)检测所述步骤(4)中的免疫反应结果并判断样品中是否存在第一抗体。
105.在一种实施方案中，所述标记的第二抗体是酶结合物，优选是碱性磷酸酶标记的抗人igm。
106.在一种实施方案中，根据上述第一方面或第二方面所述的装置或根据上述第三方面所述的试剂盒或根据上述第四方面的所述的方法中，所述样品为人体样品，优选地，所述人体样本选自下组：血液、血清、血浆、尿样、体液、唾液和其它分泌物或排泄物以及组织或细胞提取物，更优选地，所述人体样本为血清和/或血浆。
107.用途
108.本申请的第五方面提供纯化s蛋白抗原和纯化n蛋白抗原的组合；或根据上述第一方面或第二方面所述的装置；或根据上述第三方面所述的试剂盒在检测样品中抗新型冠状病毒sars
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cov
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2的igm抗体中的用途。
109.本申请的第六方面提供纯化s蛋白抗原和纯化n蛋白抗原的组合；或根据上述第一方面或第二方面所述的装置；或根据上述第三方面所述的试剂盒在制备诊断新型冠状病毒sars
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cov
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2感染的产品中的用途。
110.本申请包括以下实施方式：
111.实施方式1.用于用免疫印迹法检测样品中抗新型冠状病毒 sars
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cov
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2的igm抗体的装置，其包括：
112.背衬；以及
113.依次设置在所述背衬上的相互隔开的包被有纯化s蛋白抗原的固相支持物、包被有纯化n蛋白抗原的固相支持物、以及包被有igm 抗体的固相支持物。
114.实施方式2.用于用免疫印迹法检测样品中抗新型冠状病毒 sars
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cov
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2的igm抗体的装置，其包括：
115.背衬；以及
116.依次设置在所述背衬上的相互隔开的包被有纯化n蛋白抗原的固相支持物、包被有纯化s蛋白抗原的固相支持物、以及包被有igm 抗体的固相支持物。
117.实施方式3.根据实施方式1或2所述的装置，其中在所述背衬上，在所述包被有igm抗体的固相支持物的下游还设置有与所述包被有igm抗体的固相支持物隔开的手柄标签。
118.实施方式4.根据实施方式1或2所述的装置，其中所述背衬是透明的和/或所述背衬由包括塑料的材料制成，优选地，所述塑料为pvc。
119.实施方式5.根据实施方式1或2所述的装置，其中所述固相支持物为膜。
120.实施方式6.根据实施方式5所述的装置，其中所述膜由包括硝酸纤维素、尼龙、pvdf、nytron、biodyne或porex的材料制成，优选地，所述膜由硝酸纤维素制成。
121.实施方式7.根据实施方式1或2所述的装置，其中所述包被有纯化s蛋白抗原的固相支持物为白色和/或所述包被有纯化n蛋白抗原的固相支持物为白色和/或所述包被有igm抗体的固相支持物为白色。
122.实施方式8.根据实施方式3所述的装置，其中所述手柄标签由普通打印纸制成和/或所述手柄标签为白色。
123.实施方式9.根据实施方式1或2所述的装置，其中所述包被有纯化s蛋白抗原的固相支持物的面积和/或长度占所述装置的面积和/ 或长度的2％
‑
15％，优选4％
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6％，更优选5％；和/或所述包被有纯化 n蛋白抗原的固相支持物的面积和/或长度占所述装置的面积和/或长度的2％
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15％，优选4％
‑
6％，更优选5％；和/或所述包被有igm抗体的固相支持物的面积和/或长度占所述装置的面积和/或长度的 2％
‑
15％，优选4％
‑
6％，更优选5％。
124.实施方式10.根据实施方式3所述的装置，其中所述手柄标签的面积和/或长度占所述装置的面积和/或长度的5％
‑
20％，优选 10％
‑
15％，更优选12％。
125.实施方式11.根据实施方式1所述的装置，其中所述包被有纯化 s蛋白抗原的固相支持物与所述包被有纯化n蛋白抗原的固相支持物之间的间隔的面积和/或长度、以及所述包被有纯化n蛋白抗原的固相支持物与所述包被有igm抗体的固相支持物之间的间隔的面积和/ 或长度分别占所述装置的面积和/或长度的1％
‑
5％和40％
‑
80％，优选地，分别占1.5％
‑
3.5％和50％
‑
70％，更优选地，分别占2％和63％。
126.实施方式12.根据实施方式2所述的装置，其中所述包被有纯化 n蛋白抗原的固相支持物与所述包被有纯化s蛋白抗原的固相支持物之间的间隔的面积和/或长度、以及所述包被有纯化n蛋白抗原的固相支持物与所述包被有igm抗体的固相支持物之间的间隔的面积和/ 或长度分别占所述装置的面积和/或长度的1％
‑
5％和40％
‑
80％，优选地，分别占1.5％
‑
3.5％和50％
‑
70％，更优选地，分别占2％和63％。
127.实施方式13.根据实施方式3所述的装置，其中所述包被有igm 抗体的固相支持物与所述手柄标签之间的间隔的面积和/或长度占所述装置的面积和/或长度的1％
‑
5％，优选2％
‑
4％，更优选3％。
128.实施方式14.用于用免疫印迹法检测样品中抗新型冠状病毒 sars
‑
cov
‑
2的igm抗体的试剂盒，其包括：
129.(1)根据实施方式1
‑
13中任一项所述的装置；
130.(2)标记的第二抗体，其与igm抗体特异性地结合；
131.(3)缓冲液；
132.(4)底物液；
133.(5)产品说明书。
134.实施方式15.根据实施方式14所述的试剂盒，其还包括：温育装置。
135.实施方式16.根据实施方式15所述的试剂盒，其中所述温育装置为温育盘。
136.实施方式17.根据实施方式14所述的试剂盒，其中所述标记的第二抗体是酶结合物，优选是碱性磷酸酶标记的抗人igm。
137.实施方式18.根据实施方式14所述的试剂盒，其中所述缓冲液是tris缓冲液，优选是10倍浓缩的tris缓冲液。
138.实施方式19.根据实施方式14所述的试剂盒，其中所述底物液是四唑硝基苯胺兰/5
‑
溴
‑4‑
氯啶
‑3‑
吲哚
‑
磷酸盐。
139.实施方式20.用免疫印迹法检测样品中抗新型冠状病毒 sars
‑
cov
‑
2的igm抗体的方法，其包括以下步骤：
140.(1)提供根据实施方式1
‑
13中任一项所述的装置；
141.(2)提供样品；
142.(3)提供标记的第二抗体；
143.(4)使步骤(2)的样品，步骤(1)所述装置中的固相支持物上的纯化s蛋白抗原和纯化n蛋白抗原与步骤(3)的第二抗体发生免疫反应；
144.(5)检测所述步骤(4)中的免疫反应结果并判断样品中是否存在第一抗体。
145.实施方式21.根据实施方式20所述的方法，其中所述标记的第二抗体是酶结合物，优选是碱性磷酸酶标记的抗人igm。
146.实施方式22.根据实施方式1
‑
13中任一项所述的装置或根据实施方式14
‑
19中任一项所述的试剂盒或根据实施方式20或21所述的方法，其特征在于，所述样品为人体样品，优选地，所述人体样本选自下组：血液、血清、血浆、尿样、体液、唾液和其它分泌物或排泄物以及组织或细胞提取物，更优选地，所述人体样本为血清和/或血浆。
147.实施方式23.纯化s蛋白抗原和纯化n蛋白抗原的组合；或根据实施方式1
‑
13中任一项所述的装置；或根据实施方式14
‑
19中任一项所述的试剂盒在检测样品中抗新型冠状病毒sars
‑
cov
‑
2的igm抗体中的用途。
148.实施方式24.纯化s蛋白抗原和纯化n蛋白抗原的组合；或根据实施方式1
‑
13中任一项所述的装置；或根据实施方式14
‑
19中任一项所述的试剂盒在制备诊断新型冠状病毒sars
‑
cov
‑
2感染的产品中的用途。
149.优选实施例
150.下面结合说明书附图，进一步对本申请的优选实施例进行详细描述，以下的描述为示例性的，并非对本申请的限制，任何的其他类似情形也都落入本申请的保护范围之中。
151.实施例1
152.检测装置(参见附图1)，其具体结构为：
153.背衬1，所述背衬1为长100mm、宽2mm的透明pvc板；以及
154.依次设置在所述背衬上的相互隔开的包被有纯化s蛋白抗原的白色硝酸纤维素膜2、包被有纯化n蛋白抗原的白色硝酸纤维素膜3、包被有igm抗体的白色硝酸纤维素膜4(即包被质控带)以及由普通打印纸制成的白色手柄标签5；
155.其中所述包被有纯化s蛋白抗原的白色硝酸纤维素膜2长5mm、宽2mm，且其上端与背衬1上端之间的距离为5mm；
156.所述包被有纯化n蛋白抗原的白色硝酸纤维素膜3长5mm、宽 2mm，且其上端与所述包被有纯化s蛋白抗原的白色硝酸纤维素膜2 的下端之间的距离为2mm(即间隔为2mm)；
157.所述包被有igm抗体的白色硝酸纤维素膜4长5mm、宽2mm，且其上端与所述包被有纯化n蛋白抗原的白色硝酸纤维素膜3的下端之间的距离为63mm(即间隔为63mm)；
158.所述由普通打印纸制成的白色手柄标签5长12mm、宽2mm，且其上端与包被有igm抗体的白色硝酸纤维素膜4的下端之间的距离为 3mm(即间隔为3mm)。
159.上述s蛋白和n蛋白具体如下(参见https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)：
160.类型基因id蛋白质ids蛋白43740568yp_009724390.1n蛋白43740575yp_009724397.2
161.试剂盒，其组成为：
162.(1)上述检测装置；
163.(2)标记的第二抗体，其与igm抗体特异性地结合，所述标记的第二抗体是碱性磷酸酶标记的抗人igm；
164.(3)缓冲液，所述缓冲液是10倍浓缩的tris缓冲液；
165.(4)底物液，所述底物液是四唑硝基苯胺兰/5
‑
溴
‑4‑
氯啶
‑3‑
吲哚
ꢀ‑
磷酸盐；
166.(5)产品说明书；
167.(6)温育盘。
168.操作流程
169.注意：使用前所有试剂均必须于室温(18～25℃)平衡约30分钟。开封后的试剂盒也必须在2～8℃保存且注意避免污染。
170.实施例1的检测装置：直接使用。为防止检测装置上的膜发生冷凝，当平衡到室温后打开包装。取出检测装置后应立即密封好原包装并将其保存于2～8℃。
171.样本缓冲液的制备：将缓冲液(即10倍浓缩的tris缓冲液)与蒸馏水按体积比1:9进行稀释，得到样本缓冲液。
172.酶结合物(碱性磷酸酶标记的抗人igm)的使用：用移液器从瓶中吸取所需酶结合物，并将所述酶结合物与上述样本缓冲液按体积比 1:9进行稀释后使用。如需温育一个检测装置，用1.35ml样本缓冲液稀释0.15ml酶结合物。已稀释的酶结合物应在同一个工作日用完。
173.清洗缓冲液的制备：使用时用移液器从瓶中吸取需要量的缓冲液 (即10倍浓缩的tris缓冲液)，并将其与蒸馏水按体积比1:9进行稀释，以得到清洗缓冲液。如需温育一个检测装置，用9ml蒸馏水稀释1ml浓缩缓冲液。清洗缓冲液应在同一个工作日用完。
174.底物液(四唑硝基苯胺兰/5
‑
溴
‑4‑
氯啶
‑3‑
吲哚
‑
磷酸盐， nbt/bcip)：直接使用，对光敏感，使用后应立即盖紧瓶盖，实验过程中避光温育。
175.样本：人体血清。
176.具体操作流程依次如下：
177.(1)预处理：取出上述检测装置，将其放入温育槽内。该检测装置上有编号的一面朝上。在温育槽中分别加入1.5ml样本缓冲液，于室温在摇摆摇床上温育5分钟后，吸去温育槽中的液体；
178.(2)样本温育：在温育槽中分别加入1.5ml已稀释的样本，在摇摆摇床上室温(18～25℃)温育15分钟；
179.(3)清洗：吸去槽内液体，在摇摆摇床上用1.5ml清洗缓冲液清洗检测装置上的nc膜3次，每次5分钟；
180.(4)酶结合物温育：吸去槽内液体，加入1.5ml效价为5000 的酶结合物，在摇摆摇床上室温(18～25℃)温育15分钟；
181.(5)清洗：吸去槽内液体，在摇摆摇床上用1.5ml清洗缓冲液清洗检测装置上的nc膜3次，每次5分钟；
182.(6)底物温育：在温育槽中分别加入1.5ml底物液，于摇摆摇床上室温(18～25℃)避光温育10分钟；
183.(7)终止：吸去槽内液体，用蒸馏水清洗检测装置3次，每次1 分钟；
184.(8)通过目测，进行结果判断：将检测装置放置在结果判定模板中，风干后，观察显色的强弱程度来判断结果；或通过欧蒙 eurolinescan软件，进行结果判读。
185.目测结果判断和软件结果判读的标准如下：
[0186][0187][0188]
其中阴性结果为未感染患者，阳性结果为感染患者，阳性程度可定性反映患者患病程度，两者成正相关。
[0189]
实施例2
[0190]
与实施例1基本相同，区别仅在于将实施例1中的包被有纯化s 蛋白抗原的白色硝
酸纤维素膜2和包被有纯化n蛋白抗原的白色硝酸纤维素膜3位置互换。
[0191]
对比例1
[0192]
采用传统核酸检测试剂盒，具体操作如下(采用荧光定量pcr(聚合酶链式反应))：
[0193]
首先，进行样本采集，常规的样本类型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液等，提取样本中病毒rna将其逆转录为dna。
[0194]
然后，以一段包含taqman探针的特异性序列为引物，如样本中存在靶序列,pcr反应时探针与模板结合，发出荧光。每扩增一条dna 链,就有一个荧光分子产生。
[0195]
然后，通过荧光定pcr仪监测出荧光到达预先设定阈值的循环数(ct值)与病毒核酸浓度的关系,病毒核酸浓度越高，ct值越小。
[0196]
最后，通过设定的ct值判断阴阳性。
[0197]
测试结果
[0198]
选取19例核酸阳性且临床确诊阳性的样本，采用实施例1的试剂盒，通过欧蒙eurolinescan软件检测检出率。测试结果见下表1。
[0199]
表1
[0200][0201][0202]
从上表1可以看出，19例阳性均检出，即检出率为100％。然而，采用对比例1的传统核酸试剂盒，其检出率仅为30％～50％。
[0203]
综上所述，本申请相对于现有技术，取得了以下有益技术效果：
[0204]
1、样本可以为血清，血浆或全血，易获得，普通护士便可操作完成；而传统核酸试剂所需样本主要为鼻拭子、咽拭子、痰和支气管肺泡灌洗液(balf)等呼吸道样本；鼻拭子、咽拭子相对易获得，但检出率低，而肺泡灌洗液是理想的样本，但有技术难度，需要专业人员操作、被感染风险大、病人接受度低。
[0205]
2、检出率极高。
[0206]
3、由于igm抗体存在于感染初期且随着病程逐渐消失，本申请可检测
‑
igm抗体，帮助判断病人的感染时期，而传统的核酸检测仅能测到是否有病毒，无法区分感染期的长短。
[0207]
前述的示例仅是说明性的，用于解释本公开的特征的一些特征。所附的权利要求旨在要求可以设想的尽可能广的范围，且本文所呈现的实施例仅是根据所有可能的实施例的组合的选择的实施方式的说明。因此，申请人的用意是所附的权利要求并不被说明本申请的特征的示例的选择限制。如在权利要求中使用的，术语“包括”和其语意上的变体在逻辑上也包括不同和变化的用语，例如但不限于“基本组成为”或“组成为”。当需要时，提供了一些数值范围，而这些范围也包括了在其之间的子范围。这些范围中的变化也对于本领域技术人员也是自明的，且不应被认为被捐献给公众，而这些变化也应在可能的情况下被解释为被所附的权利要求覆盖。而且在科技上的进步将形成由于语言表达的不准确的原因而未被目前考虑的可能的等同物或子替换，且这些变化也应在可能的情况下被解释为被所附的权利要求覆盖。