定量检测全血、尿或乳汁中碘含量的方法与流程

本发明涉及检测
技术领域：
，主要涉及一种定量检测全血、尿或乳汁中碘含量的方法。
背景技术：
：碘的检测方法主要有砷铈催化分光光度法、气相色谱法、电感耦合等离子质谱法等。前处理方法主要有湿消解法、干灰化法和微波消解法等。砷-铈催化分光光度法是用于尿碘分析的标准方法(ws/t107-1999)，是根据物质对光的选择性吸收而建立的分析方法。该法灵敏度高，结果准确，但对实验条件要求严格。例如尿样需采用过硫酸铵消化处理，耗时较长，试剂中的三氧化二砷为剧毒物，容易对环境造成污染，对人体健康造成危害。消解仪每孔的温度应一致，实验前应测量每孔的实际温度。尿样消化时要选用温度一致的消化孔，以使消化过程中各管受热程度一致，消化后剩余液量基本一致。消化温度必须控制在110-115℃之间，温度过高，消化液损失过多；温度过低，消化不完全。消化过程无特异性终点指示剂及消化时间，温度有批间差异，每批样品消化要与标准系列及空白实验同时进行，以减少误差，提高实验的准确性。砷铈反应测定过程中必须严格控制反应条件，即反应时间、水浴、温度等。加入硫酸铈速度要快，加入量、加入时间要准确。气相色谱法具有分离效能高、分相速度快、试剂用量少等特点。但检测碘时常需要与衍生技术或顶空技术联用。有的操作步骤较为复杂、有的试剂昂贵、或者方法不够灵敏，限制了它们的实际应用。电化学分析法具有样品前处理简单、取样较少、分析快速等特点，但选择性差，对环境要求较高。尿碘目前的检测方法主要有砷铈催化分光光度法及电感耦合等离子质谱(icp-ms)法。砷铈催化分光光度法：采用过硫酸铵溶液在100℃条件下消化尿样，利用碘对砷铈氧化还原反应的催化作用，反应中黄色的ce4+被还原成无色的ce3+，碘含量越高，反应速度越快，所剩余的ce4+则越少：控制反应温度和时间，于420nm波长下测定体系中剩余ce4+的吸光度值，测出碘含量。此方法中仪器采用对实验条件要求比较严格，前处理复杂并且使用了剧毒的三价砷化合物，方法手工步骤较多，操作复杂，不适用于临床大样本量的检测。技术实现要素：砷铈催化分光光度法对实验条件要求比较严格，前处理复杂并且使用了剧毒的三价砷化合物，方法手工步骤较多，操作复杂，不适用于临床大样本量的检测。因此，亟需建立一种前处理简单、减少对环境污染和对检测人员健康的危害、检测成本可承受的碘的分析检测方法。本发明的目的是针对现有技术的不足，本发明提供以一种定量检测全血、尿或乳汁中碘含量的方法。为了实现本发明的目的，本发明提供以下技术方案：本发明一方面涉及一种定量检测全血、尿或乳汁中碘含量的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)样本处理：将尿液、全血或乳汁样本用混匀器充分混匀；取一定量的样本加入8-12倍体积的稀释液，混匀；(2)上机检测：用于0.5-1.5％氨水溶液洗针，然后液体样品在充满气体的雾化器中形成气溶胶；样品气溶胶在一个充满氩气的石英管或“炬管”中形成后进入等离子体，石英管或炬管位于通有高压、高频电流和带冷却的铜线中间，电流产生的强磁场引发自由电子和氩气原子的碰撞，产生更多的电子和离子，最终形成稳定的高温等离子体；等离子体中产生的正电荷离子经过一对接口“锥”被提取进入真空系统；离子透镜加上特定的电压，使来自等离子体的正离子被转向和聚焦，对准质量过滤器入口，然后离子进入质量过滤器，按照质荷比被分离；其中稀释液的配方如下：每500ml超纯水中加入4-6ml氨水以及0.08-0.12ml的0.8-1.2mg/ml的碲标准溶液。本发明的发明人发现碘在icp-ms会产生较强的记忆效应，影响方法的准确度和精密度。经实验出人意料的发现，使用稀氨水作为清洗剂可有效降低记忆效应，因此，本发明在稀释液以及洗液中均加入稀氨水。此外，现有技术还提出采用四甲基氢氧化铵作为稀释液的成分，但四甲基氢氧化铵存在毒性大的问题，而且采用四甲基氢氧化铵检测限仅能达到30μg/l，影响其在临床检测中的应用。此外，现有技术也曾报道将四甲基氢氧化铵作为洗液的成分，同样存在毒性大的问题，还存在线性差(r仅为0.993)的缺陷，本发明采用氨水作为洗液的成分，r可达到0.999。在本发明的一个优选实施方式中，所述样本处理和检测在避光条件下进行,可以避免碘元素见光分解。在本发明的一个优选实施方式中，本发明的载气氩气为惰性气体、相对便宜、且易于获得高纯度的氩气，还有ar的第一电离电位是15.75电子伏特，高于大多数元素的第一电离电位(除了he，f，ne)，低于大多数元素的第二电离电位(除了ca，sr，ba)，由于等离子体的电离环境由ar限定，所以，本发明的分析元素被有效地电离为单电荷离子。在本发明的一个优选实施方式中，所述质谱检测模式为he模式，仪器参数如下：载气：0.6l/min稀释气体：0.6l/min采样深度：8mm射频功率：1600w雾化室温度：2℃检测模式：质量数：名称类型he125te内标he127i待测元素在该仪器参数条件下，可以获得较好的灵敏度，另外还可消除基体的干扰。在本发明的一个优选实施方式中，所述样品中碘含量为10～5000μg/l。本发明的方法线性范围在10-5000μg/l，r是0.999，检测限为10μg/l。在本发明的一个优选实施方式中，单个样品的检测时间不超过2min。本发明用时短，只需2分钟就可以完成一个样品的检测。在本发明的一个优选实施方式中，所述的方法是诊断目的或者非诊断目的的。本发明消除了基体效应，实现了自动化检测，检测速度快，适用于各种样本类型中碘含量的定量分析。本发明所使用的电感耦合等离子体质谱仪(icp-ms)是20世纪80年代早期发展起来的商品化的分析技术，这项技术已经应用于几乎所有分析领域内痕量、微量和常量元素的测定。该技术的优势包括：(1)元素覆盖范围宽：事实上icp-ms能测定几乎所有的元素，包括碱金属、碱土金属、过渡金属和其它金属类金属、稀土元素、大部分卤素和一些非金属元素；(2)性能好：灵敏度高、背景信号低、检出限极低，icp-ms在许多痕量和超痕量元素测定中超越了gfaas(石墨炉原子吸收光谱法)的检出能力(ng/l或ppt浓度)；(3)分析速度快：由于四极杆分析器的扫描速度快，每个样品全元素测定只需2min；(4)线性范围宽：一次测量线性范围能覆盖9个数量级；(5)能够提供同位素的信息。附图说明图1：本发明方法的流程图。具体实施方式:下面结合实例对本发明作进一步说明，以下实施例用来解释说明本发明，而不是对本发明进行限制，在本发明的精神和权利要求的保护范围内，对本发明做出的任何修改和改变，都落入本发明的保护范围。电感耦合等离子体质谱的实验原理为：被测元素通过一定形式进入高频等离子体中，在高温下电离成离子，产生的离子经过离子光学透镜聚焦后进人四极杆质谱分析器按照荷质比分离，既可以按照荷质比进行半定量分析，也可以按照特定荷质比的离子数目进行定量分析。实施例1：1：标准品配制：采购碘单元素标准溶液(1mg/ml)以及碲元素标准溶液(1mg/ml)作为内标物质。随后用1％氨水稀释液稀释标准溶液，按下表的浓度配制标准工作曲线。碘std1std2std3std4std5std6std7std8μg/l1025502005001000250050002、样本处理：将尿液、全血或乳汁样本室温下用混匀器充分混匀。样本前处理：取200μl样本(取样前需混匀，使所有沉淀物混悬)，加入2.0ml(500ml超纯水和5ml氨水及0.1ml的1mg/ml的碲标准溶液)稀释液，混匀。(3)取4ml离心管，标记sd1至sd8，以及样本若干，标记sample1、2…，向各个离心管中加入2.0ml内标稀释液，再加入200μl标准曲线工作液或者待测样本(全血、尿液或乳汁)，混匀，上机检测。注意：所有实验应在避光条件下进行，避免碘元素见光分解。3、电感耦合等离子体质谱条件(1)洗针液：1％氨水溶液液体在充满气体的雾化器中形成气溶胶。样品气溶胶在一个充满氩气的石英管或“炬管”中形成后进入等离子体，炬管位于通有高压、高频电流和带冷却的铜线中间，电流产生的强磁场引发自由电子和氩气原子的碰撞，产生更多的电子和离子，最终形成稳定的高温等离子体。等离子体中产生的正电荷离子经过一对接口“锥”被提取进入真空系统。离子透镜加上特定的电压，使来自等离子体的正离子被转向和聚焦，对准质量过滤器入口。然后离子进入质量过滤器，按照质荷比被分离。采用he模式进行检测，仪器参数如下：载气：0.6l/min稀释气体：0.6l/min采样深度：8mm射频功率：1600w雾化室温度：2℃(2)技术特征：检出限和测定范围：本发明方法的检出限为10μg/l，可以直接测定碘含量为10～5000μg/l的尿样。精密度：在相同条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。准确度：方法加标回收率在85％～115％之间，如下表1至表3所示。多次重复测定相对标准偏差(rsd)在5.0％以内。表1检测尿液中碘的加标回收率尿液本底加标后理论值加标后实测值偏差re％1137.83142.43141.5599％2137.83186.43179.4696％3447.40452.00401.3489％4447.40496.00439.3489％5145.65150.25139.6093％6145.65194.25181.6093％表2检测乳汁中碘的加标回收率乳汁本底加标后理论值加标后实测值偏差re％169.8974.4966.2789％269.89117.89105.3289％337.6742.2739.1093％437.6785.6798.16115％5131.54136.14124.5992％6131.54179.54161.8190％表3检测全血中碘的加标回收率全血本底加标后理论值加标后实测值偏差re％123.0527.6522.9483％223.0571.0561.8787％322.5127.1124.5290％422.5170.5167.4396％515.9920.5917.5485％615.9963.9959.4993％从上述可知：1)本发明用时短，只需2min就可以完成一个样品的检测，线性范围在10-5000μg/l，r是0.999。速度快、精密度高、准确性好、检出限低等优点。2)本发明检测样本类型多样化，适用于人体尿液，全血和乳汁，可满足不同人群对碘含量检测的需求。3)哺乳妇女为碘缺乏的高危人群，其碘摄入量与乳汁中的碘含量呈正相关。已有研究证明，为保证婴幼儿的正常发育，哺乳妇女每天大约分泌乳汁500-800ml，而乳汁中碘的浓度应维持在100-200μg/l，只有这样才能满足婴幼儿对碘的需求，所以本发明可以直接检测母乳中的碘含量来判断哺乳妇女需不需要补充碘。本发明采用电感耦合等离子体质谱法实现对各种样本类型中碘含量的检测，质谱分析条件如下：样品溶液经氨水处理后，经过蒸发、解离、原子化、电离后转化为带正电荷的正离子，经离子采集系统进质谱仪，离子计数率与样品中待测物的含量成正比，通过标准加入法消除基体效应，实现样品中碘含量的定量分析。用于检测的分析物和内标的检测离子对如下，碘元素127/碲元素125，碲元素与待测元素碘的分子量比较接近，可以最大程度消除基体效应。以上描述了本发明优选实施方式，然其并非用以限定本发明。本领域技术人员对在此公开的实施方案可进行并不偏离本发明范畴和精神的改进和变化。当前第1页12