1.本发明涉及烟草成分检测技术领域，尤其涉及一种用吸光值估测烟梗中美拉德大分子含量的方法。
背景技术：
2.与叶丝相比，烟梗制成的梗丝具有较高的填充值、较低的焦油和有害成分释放量。在卷烟配方中使用一定比例的梗丝，不但可以降低配方成本，还可以降低卷烟焦油和多种有害成分的释放量。
3.在烟梗中有一类含量丰富的重要香味物质，即美拉德大分子化合物。美拉德大分子化合物是美拉德反应后期产物互相聚合产生的高分子化合物，呈棕色，其赋予烟梗烟丝样颜色。美拉德大分子化合物燃烧热解产生的吡嗪类、吡啶类、吡咯类香味成分是卷烟烟气中的重要香味成分，能够掩盖烟梗中纤维素、木质素等化合物燃烧带来的不良气息。因此，对烟梗中美拉德大分子化合物进行定量测试，一方面可以对烟梗的颜色进行定量描述，另一方面可以反应烟梗的感官质量，对于烟梗的使用具有重要指导意义。
4.目前，对烟草样品中美拉德反应产物的研究主要集中在美拉德反应中间产物amadori化合物，如王晓瑜等（烟草科技. 2021,54（04））采用hplc-q-tof-ms测定了不同类型烟叶中的amadori化合物，马立超等（烟草科技. 2021,54（07））采用lc-ms/ms测定了烤烟中amadori化合物，张婕等（烟草科技. 2017,50（11））采用lc-ms/ms同时测定了烟草中的部分氨基酸和amadori化合物。
5.由于美拉德大分子化合物的结构、分子量复杂多样，所以难以对其进行准确定量，目前尚缺乏其定量方法研究。
技术实现要素：
6.针对上述问题，现提供一种方法简便易行、对设备要求低的用吸光值估测烟梗中美拉德大分子含量的方法。
7.具体技术方案如下：一种用吸光值估测烟梗中美拉德大分子含量的方法，具有这样的特征，包括如下步骤：1）制备校正试剂：按比例称取脯氨酸、缬氨酸、谷酰胺、天冬酰胺、天冬氨酸、丝氨酸、丙氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和葡萄糖及果糖，以水溶解后搅拌回流反应一段时间，冷却，透析去除反应液中杂质，冷冻干燥，得校正试剂；2）制作校正曲线：称取不同质量的校正试剂，配制形成不同浓度的校正溶液，测定各校正溶液吸光度，制作形成校正溶液浓度-吸光度校正曲线；3）制备测试样品：将烟梗干燥后、粉碎过筛，得烟梗样品；取烟梗样品，向其中加入萃取剂，超声提取，将提取液以水相滤膜过滤后测定其吸光度，代入校正曲线，计算得到烟梗样品中美拉德大分子含量。
8.上述的用吸光值估测烟梗中美拉德大分子含量的方法，还具有这样的特征，步骤1）中脯氨酸、缬氨酸、谷酰胺、天冬酰胺、天冬氨酸、丝氨酸、丙氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和葡萄糖及果糖的质量比为0.7:0.1:0.1:0.1:0.05:0.05:0.05:0.05:0.02:0.02:10:10。
9.上述的用吸光值估测烟梗中美拉德大分子含量的方法，还具有这样的特征，步骤1）中反应温度为65-80 ℃、反应时间8 h以上。
10.上述的用吸光值估测烟梗中美拉德大分子含量的方法，还具有这样的特征，步骤2）中吸光度测定波长为295 nm。
11.上述的用吸光值估测烟梗中美拉德大分子含量的方法，还具有这样的特征，步骤3）中干燥温度为40-50 ℃，筛网孔径为40目，水相滤膜孔径为0.45 μm。
12.上述方案的有益效果是：（1）本发明中依据烟梗中氨基酸、糖的比例选取对应氨基酸、糖等使二者在模拟烟梗烤制温度条件下反应制备形成美拉德大分子校正试剂（透析去除了反应中形成的小分子副产物），从而较好地利用该与烟梗中存在的美拉德大分子具有类似结构和光谱吸收性能的校正试剂用于烟梗中美拉德大分子的定量测定中；（2）本发明提供的测定方法具有干扰小、方法简便易行、对仪器设备要求低的优点。
具体实施方式
13.下面将结合本发明实施例对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
14.需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
15.下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但不作为本发明的限定。
16.一种用吸光值估测烟梗中美拉德大分子含量的方法，其包括如下步骤：1）制备校正试剂：称取0. 7 g脯氨酸、0.1 g缬氨酸、0.1 g谷酰胺、0.1 g天冬酰胺、0.05 g天冬氨酸、0.05 g丝氨酸、0.05 g丙氨酸、0.05 g苏氨酸、0.02 g苯丙氨酸、0.02 g酪氨酸和10 g葡萄糖、10 g果糖，加入到三颈瓶中，再在瓶中加入100g水，将三颈瓶于75 ℃油浴中搅拌回流反应10 h，冷却，透析去除反应液中杂质，冷冻干燥，得校正试剂；2）制作校正曲线：分别称取不同质量的校正试剂，配制形成浓度分别为50 mg/l、100 mg/l、200 mg/l、300 mg/l、400 mg/l、500mg/l校正溶液，再分别测得各校正溶液于295 nm吸光度，得线性校正曲线 y=3.44e-3*x+0.012，相关系数r2=0.9999。其中y为吸光度值，x为校正试剂浓度，单位mg/l。
17.3）制备测试样品：将烟梗于40-50 ℃烘箱中干燥后、粉碎、过40目筛，得烟梗样品；取1 g烟梗样品，向其中加入50 ml乙醇:水(w/w=40:60)，超声提取，将提取液以0.45 μm水相滤膜过滤后测定其吸光度，代入校正曲线，计算得到烟梗样品中美拉德大分子含量。
18.本发明中对方法的线性范围进行考察，结果表明该方法在10 mg/l~700 mg/l范围
内具有较好的线性响应，检出限为2.3 mg/l，定量限为6.9 mg/l。
19.本发明中采用上述方法对不同烟梗样品进行测试，结果见下表所示：编号产地等级美拉德大分子含量（%）1四川凉山上部b2f1.622四川凉山中部c3f1.973四川凉山下部x2f2.384云南保山中部c3f1.305贵州毕节中部c3f1.576河南襄县中部c3f1.167湖南湘南中部c3f1.84由上表可以看出应用该方法测试的同产地不同部位的烟梗中美拉德大分子含量符合下部》中部》上部的规律，说明本方法可以很好地区分并用于烟梗样品中美拉德大分子含量的测定。
20.上述测试表明，不同产地同等级(c3f）烟梗的美拉德大分子含量依次为云南凉山》湖南湘南》贵州毕节》云南保山》河南襄县。
21.以上所述仅为本发明较佳的实施例，并非因此限制本发明的实施方式及保护范围，对于本领域技术人员而言，应当能够意识到凡运用本发明说明书内容所作出的等同替换和显而易见的变化所得到的方案，均应当包含在本发明的保护范围内。
技术特征：
1.一种用吸光值估测烟梗中美拉德大分子含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：1）制备校正试剂：按比例称取脯氨酸、缬氨酸、谷酰胺、天冬酰胺、天冬氨酸、丝氨酸、丙氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和葡萄糖及果糖，以水溶解后搅拌回流反应一段时间，冷却，透析去除反应液中杂质，冷冻干燥，得校正试剂；2）制作校正曲线：称取不同质量的校正试剂，配制形成不同浓度的校正溶液，测定各校正溶液吸光度，制作形成校正溶液浓度-吸光度校正曲线；3）制备测试样品：将烟梗干燥后、粉碎过筛，得烟梗样品；取烟梗样品，向其中加入萃取剂，超声提取，将提取液以水相滤膜过滤后测定其吸光度，代入校正曲线，计算得到烟梗样品中美拉德大分子含量。2.根据权利要求1所述的用吸光值估测烟梗中美拉德大分子含量的方法，其特征在于，步骤1）中脯氨酸、缬氨酸、谷酰胺、天冬酰胺、天冬氨酸、丝氨酸、丙氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和葡萄糖及果糖的质量比为0.7:0.1:0.1:0.1:0.05:0.05:0.05:0.05:0.02:0.02:10:10。3. 根据权利要求1所述的用吸光值估测烟梗中美拉德大分子含量的方法，其特征在于，步骤1）中反应温度为65-80 ℃、反应时间8 h以上。4. 根据权利要求1所述的用吸光值估测烟梗中美拉德大分子含量的方法，其特征在于，步骤2）中吸光度测定波长为295 nm。5. 根据权利要求1所述的用吸光值估测烟梗中美拉德大分子含量的方法，其特征在于，步骤3）中干燥温度为40-50 ℃，筛网孔径为40目，水相滤膜孔径为0.45 μm。
技术总结
本发明涉及一种用吸光值估测烟梗中美拉德大分子含量的方法，属于烟草成分检测技术领域。本发明模拟烟梗中美拉德大分子的产生条件，控制氨基酸和糖的类别、比例，控制反应温度和时间，通过反应、纯化制备美拉德大分子校正试剂，以校正试剂制作校正曲线。依据美拉德大分子是烟梗中主要有色物质，采用溶剂提取烟梗样品，以295 nm处的吸光值估测烟梗中美拉德大分子含量。该方法具有操作简便、校正曲线线性好、对仪器设备要求低等优点。对仪器设备要求低等优点。
技术研发人员：杨明 张胜华 关爱章 王姗姗 袁海霞
受保护的技术使用者：湖北中烟工业有限责任公司
技术研发日：2022.06.07
技术公布日：2022/9/8