用于电子显微镜观察液态样品的冷冻溶蚀制样方法

文档序号:6086682
专利名称:用于电子显微镜观察液态样品的冷冻溶蚀制样方法
技术领域
本发明属于电子显微镜领域。
冷冻蚀刻技术是研究生物组织微观结构的较成熟的电子显微镜制样技术;对于液态样品采用深冷快速封固和实施蚀刻的制样方法是人们直接想到的可利用的方法,特别是微乳液体系的液态样品的冷冻蚀刻方法,但以往报导的这类方法所用设备复杂,同时需采用丙烷作溶剂。众所周知液体丙烷不易保存,需要在低温、高压条件下操作,而且有易燃易爆的危险性,这样对一般实验室势必难于操作,并有一定的困难。针对这些问题本发明特研制了一种较简单的方法,即选用实验室使用的一般有机溶剂,结合特殊的操作方法用于电子显微镜观察液态样品的冷冻溶蚀样品制备技术,并且得到了理想的效果。
本发明的目的在于对于一个微乳液样品亦即液体样品,其中即含有油又含有水及其他物质的液体样品,使用深冷速冻的方法和特殊的溶蚀方法的制样技术,得到了满意的结果。
本发明的任务是,根据以往的报道采用电子显微镜观察液态样品的冷冻蚀刻技术所用设备复杂,同时需采用丙烷作溶剂,这样对于一般实验室来说很困难,因此,针对存在的问题,研制出一种简单的方法,同时选用了实验室使用的一般有机溶剂,以及普通的粘合剂,从而提高了经济效益。
本发明研制的用于电子显微镜观察液态样品的冷冻溶蚀制样方法,其主要是对于微乳液样品,即含有油又含有水以及其他物质的液体样品,利用深冷速冻溶蚀的制样技术,同时选用了实验室使用的一般有机溶剂即1、2-二氯乙烷,四氯化碳,氯仿,二氯甲烷,异丙醇,乙醇,丙酮,乙醚;粘合剂即正庚烷、苯、甲苯、乙醇、异丙醇、甘油,水结合一定的操作方法进行冷冻溶蚀。具体方法是将取得的液体样品直接滴入液氮中,使之骤冷至液氮温度(-196℃),样品即成固态,将固态样品放入予先涂有正庚烷、苯、甲苯、乙醇、异丙醇、甘油、水作粘合剂的样品台孔中,使样品快速粘结在孔中,之后即投入液氮中,待样品冷却到液氮温度时,检查样品是否粘结牢固,并保存于液氮中。按常规冷冻蚀刻法磨制碳棒和烧制铂珠,并调好碳棒和铂珠蒸发点的角度及距离,然后从液氮中取出样品台,用预冷的刀片将样品外露的部分割断,注意保护断面不受任何的擦伤和污染。将割断的样品连同样品台放入予冷的1、2-二氯乙烷、四氯化碳、氯仿、二氯甲烷、异丙醇、乙醇、丙酮、乙醚中浸泡处理,溶剂的予冷温度控制在0-95℃范围。浸泡处理后的样品再度放入液氮中,保持温度。从液氮中取出冷冻块和样品台,迅速将样品台放入冷冻块中样品台的位置,然后将它们放入真空喷镀仪的钟罩中抽至真空,抽真空操作在10-50分钟之间完成。设定与样品断面成45°角进行喷铂投影,再与样品断面成垂直方向喷碳5-8次,多次的喷碳是为加固复型膜;给钟罩通大气将冷冻块提出,从其中取出样品台,把经过复型的面扣在预备好的带膜的电镜铜网上,(操作时要使复型膜对准铜网),待样品台升到室温时,复型膜连同样品台上的少量剩余液态样品一同附在了铜网膜上,待铜网上的液态样品干燥后,即可放在50-98%的异丙醇、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮的水溶液中充分漂洗,尽可能使沾在复型膜上的样品漂洗干净,以利于复型膜的观察与拍照,同时可减少对电子显微镜的污染,为使复型膜铜网上的福尔膜瓦膜沾得更牢,不被轻易洗掉,洗膜时要掌握好时机,洗膜后的附有复型膜的铜网干燥后,即可进入电子显微镜观察和拍照。
实施例将1.5%的十二烷基硫酸钠,2.7%的苯氧基乙醇,15.4%的氯化钠的水溶液与正庚烷按1∶1的比例混合而形成的油、微乳、盐水三相体系,静置30天取样采用本发明所研制的方法经制样过程得到样品结果令人非常满意。
附图

权利要求
1.一种用于电子显微镜观察的液态样品的冷冻溶蚀制样方法,其特征在于该方法是对于微乳液样品,即含有油又含有水以及其他物质的液体样品,利用深冷速冻溶蚀的制样技术,同时选用了实验室使用的一般有机溶剂1、2-二氯乙烷,四氯化碳,氯仿,二氯甲烷,异丙醇,乙醇、丙酮,乙醚;粘合剂即正庚烷,苯、甲苯,乙醇,异丙醇,甘油,水;漂洗剂异丙醇、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮;结合一定的操作方法进行冷冻溶蚀。
2.根据权利要求1所述的用于电子显微镜观察液态样品的冷冻溶蚀制样方法,其特征在于将取得的液体样品直接滴入液氮中,使之骤冷至液氮温度(-196℃)样品即成固态,将固态样品放入予先涂有正庚烷,苯,甲苯,乙醇,异丙醇,甘油,水作粘合剂的样品台孔中,使样品快速粘结在孔中,之后立即投入液氮中,将样品冷却到液氮温度,检查样品是否粘结牢固并保存于液氮中。
3.根据权利要求2所述的用于电子显微镜观察液态样品的冷冻溶蚀制样方法,其特征在于从液氮中取出样品台,用预冷的刀片将样品外露部分割断,将割断的样品连同样品台放入予冷的1、2-二氯乙烷,四氯化碳,氯仿,二氯甲烷,异丙醇,乙醇,丙酮,乙醚溶剂中浸泡,溶剂的予冷温度控制在0-95℃范围,处理后的样品再度放入液氮中保持温度。
4.根据权利要求3所述的用于电子显微镜观察液态样品的冷冻溶蚀制样方法,其特征在于,从液氮中取出冷冻块和样品台,迅速将样品放入冷冻块中的样品台的位置,之后将其放入真空喷镀仪的钟罩中抽真空,时间为10-50分钟;设定与样品断面成45°角进行喷铂投影;再与样品的断面成垂直方向喷碳5-8次加固复型膜。
5.根据权利要求4所述的用于电子显微镜观察液态样品的冷冻溶蚀制样方法,其特征在于将钟罩通大气之后,将冷冻块提出,从中取出样品台,把经过复型的面扣在预备好的带膜的电镜铜网上(一定要使复型膜对准铜网),待样品台升至室温时复型膜连同样品台上少量剩余液态样品一同附在了铜网膜上,待铜网上的液态样品干燥后,放在50-98%的异丙醇,甲醇,乙醇,乙醚,丙酮的水溶液中充分漂洗,尽可能使沾在复型膜上的样品漂洗干净,以利于复型膜的观察与拍照。
6.根据权利要求5所述的用于电子显微镜观察液态样品的冷冻溶蚀制样方法,其特征在于洗膜后的附有复型膜的铜网干燥后即可进入电子显微镜观察和拍照。
全文摘要
本发明所研制的用于电子显微镜观察液态样品的冷冻溶蚀制样方法,其主要特点是该方法对于微乳液样品亦即液体样品利用深冷速冻的方法,选用实验室使用的一般有机溶剂及粘合剂,结合一定的操作方法进行冷冻溶蚀,得到了很好的效果。
文档编号G01N1/28GK1066923SQ9110552
公开日1992年12月9日 申请日期1991年8月7日 优先权日1991年8月7日
发明者张炳林, 高林, 沈艳芳, 伊夏提·阿木提 申请人:中国科学院新疆生物土壤沙漠研究所, 中国科学院新疆化学研究所
再多了解一些
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1