专利名称：快速唾液癌胚抗原检测试纸的制作方法
技术领域：
本发明是一种快速唾液癌胚抗原检测试纸。
癌胚抗原(CEA)是癌和胚胎组织产生的一种糖蛋白，是世界上公认的肿瘤标志之一。CEA的检测被广泛应用于消化道肿瘤的诊断及术后观察。目前国内外检测癌胚抗原(CEA)，主要是放射免疫分析和酶联免疫吸附测定。放射免疫分析主要是应用放射性同位素标记抗CEA抗体，制备成诊断试剂盒，用来检测人血清及各种体液中的CEA，最后需要用放射性同位素测定仪来测定分析。该法存在放射性污染和放射性防护问题，需要特殊的实验室和昂贵的设备，对操作者需要特殊训练，操作复杂。酶联免疫吸附测定法主要是应用辣根过氧化物酶标记抗CEA抗体，以聚苯乙烯等材料制成的反应板为固相载体来结合抗CEA单克隆抗体，制备成酶免疫分析的诊断试剂盒，并通过酶标测定仪来检测人血清及各种体液中的CEA。该法对实验室的条件要求较高，设备较昂贵、成本高、操作复杂、费时。上述两种方法均难以在基层医疗单位普及推广，更不适合于人群的肿瘤筛查。
本发明的目的是为克服CEA放射免疫分析和酶联免疫吸附测定法之不足，提供一种操作简便，结果准确，成本低，无污染的快速唾液癌胚抗原检测试纸。
本发明的目的是这样实现的。由硝酸纤维素微孔滤膜、牛血清白蛋白、抗CEA单克隆抗体组成，在0.25μm～0.45μm的硝酸纤维素微孔滤膜上共价结合1～10μg/cm的牛血清白蛋白，在牛血清白蛋白上又共价结合10～50μng/cm的抗CEA单克隆抗体。
本发明是一种以单克隆抗体夹心法酶联免疫测定为原理，选用纸片(微孔滤膜)为固相载体的快速唾液CEA检测试纸。本试纸为胃癌、结肠癌等恶性肿瘤的筛查、诊断、疗效观察提供了简便可靠的方法，尤其适用于大范围的人群普查。本试纸仅取唾液为检测标本，受检者无痛苦、易于接受、易于操作、简便快捷，甚至受检者在家也可如法操作。一滴唾液、一块试纸、十分钟内即能显示检测结果。使用时，取唾液一滴，滴于试纸上，待唾液渗入后，滴加酶标抗体一滴，室温放置2～3分钟后，滴加底物溶液和显色剂。如显片状兰色为阳性，无色为阴性。全过程10分钟内即可完成。灵敏度为65ng/ml;批内变异为4.5%，批间变异为9.2%，平均回收率为97.7%，与NCA(Non specific eross-reactive antigen)无交叉反应，该试纸及试剂(酶标抗体，底物溶液和显色剂)4℃～8℃保存观察六个月结果稳定。
本发明无放射性污染及放射性防护问题，无需特殊设备和受过特殊训练的操作人员，特异性强、检测结果可靠、价格低廉(每人份成本仅一元钱人民币)。便于向基层医疗卫生单位推广普及应用。适用于任何检验科室及家庭自检，对癌症的早期发现，早期治疗有重大意义。
检测原理如图1。将试纸2与一层玻璃纤维滤纸3和四层普通滤纸4共同压装在一个带圆孔的扁塑料盒1内。如果滴入试纸上的唾液中含有一定量的CEA，便与试纸上抗体相结合，再将辣根过氧化物酶标记的抗CEA抗体滴在试纸上，这样便形成了固相抗体-CEA-酶标抗体的复合物，此时加入底物溶液(H2O2)和显色剂(四甲基联苯胺硫酸盐)，便显兰色。如果唾液中CEA含量过低或无CEA，固相抗体-CEA-酶标抗体的复合物便不能形成。酶标抗体便通过试纸上的微孔渗入普通滤纸中，此时加入底物溶液和显色剂后不显色。本试纸经临床试用证明对胃癌诊断的附合率达90.7%;对结肠癌的诊断附合率达87.1%，经门诊一千余例患者中筛查出胃癌4例，结肠癌2例，直肠癌1例，肺癌2例，喉癌2例。
附图1为本发明的使用示意图1塑料盒、2试纸、3玻璃纤维试纸、4普通滤纸实施例
(1)选用0.3μm的硝酸纤维素微孔滤膜，共价结合4μg/cm牛血清白蛋白再结合20ng/cm的抗CEA单克性抗体，制备成试纸。
酶标抗体选用辣根过氧化物酶通过改良高碘酸钠法标记于抗CEA单克隆抗体上，经320倍稀释制备成酶标抗体溶液。
底物溶液0.6mmol/L H2O2。
显色剂1.0mmol/L四基联苯胺硫酸盐。
(2)选用0.45μm的硝酸纤维素微孔滤膜，共价结合6ng/cm的牛血清白蛋白，再结合25ng/cm的抗CEA单克隆抗体，制备成试纸。
酶标抗体同上法标记，经200倍稀释制备成酶标抗体溶液。
底物溶液0.4mmol/L H2O2。
显色剂0.8mmol/L四基联苯胺硫酸盐。
权利要求
1.一种快速唾液癌胚抗原检测试纸，其特征在于由硝酸纤维素微孔滤膜、牛血清白蛋白、抗CEA单克隆抗体组成，在0.25μm～0.45μm的硝酸纤维素微孔滤膜上共价结合1～10μg/cm的牛血清白蛋白，在牛血清白蛋白上又共价结合10～50ng/cm的抗CEA单克隆抗体。
2.按照权利要求1所述的快速唾液癌胚抗原检测试纸，其特征在于在0.3μm的硝酸纤维素微孔滤膜上共价结合4μg/cm的牛血清白蛋白，在牛血清白蛋白上又共价结合20ng/cm的抗CEA单克隆抗体。
3.按照权利要求1所述的快速唾液癌胚抗原检测试纸，其特征在于在0.4的硝酸纤维素微孔滤膜上共价结合6μg/cm的牛清白蛋白，在牛血清白蛋白上又共价结合25ng/cm的抗CEA单克隆抗体。
全文摘要
一种快速唾液癌胚抗原检测试纸，由硝酸纤维素微孔滤膜、牛血清白蛋白、抗CEA单克隆抗体组成，在0.25μm～0.45μm的硝酸纤维素微孔滤膜上共价结合1～10μg/cm的牛血清白蛋白，在牛血清白蛋白上又共价结合10～50ng/cm的抗CEA单克隆抗体。本发明无放射性污染及放射性防护问题，无需特殊设备和受过特殊训练的操作人员，特异性强、检测结果可靠、价格低廉，便于向基层医疗卫生单位推广普及应用。
文档编号G01N33/574GK1102709SQ9311590
公开日1995年5月17日 申请日期1993年11月11日 优先权日1993年11月11日
发明者王嘉政, 刘大程, 唐志刚 申请人:王嘉政, 刘大程, 唐志刚