一种成熟桔子中多菌灵残留的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种成熟桔子中多菌灵残留的检测方法，属于农药残留检测技术领域。O
【背景技术】
[0002]多菌灵属于苯并咪挫类，英文通用名称为carbendazim，化学名称为苯并咪唑-2-基氯基甲酸甲酯，其分子式为C9N3H1002。其纯品为白色结晶，熔点310°C (分解)，几乎不溶于水，在有机溶剂中的溶解度分别为丙酮300mg/l，氯仿100mg/l，二氯甲烷68mg/1可溶于稀无机酸和有机酸形成相应的盐。
[0003]多菌灵是一种低毒高效杀菌剂，按我国农药毒性分级标准属低毒广谱内吸性杀菌剂。其主要作用机制是干扰菌的有丝分裂中纺垂体的形成，从而影响细胞分裂，对许多子囊菌和半知菌都有效，而对卵菌和细菌引起的病害无效。主要对水稻瘟病、三麦赤霉病、油菜菌核病及棉花、蔬菜等的苗期病害均有过较好疗效，但80年代以来，病原菌对其抗性日益严重。近年来，由多菌灵衍生出的新的农药产品和复配试剂不断出现，并不断用于防治各种病害，其中，运用多菌灵有机酸盐防治各种作物贮藏期病害弊多菌灵具有更好的防效。根据联合国粮农组织(FAO)的规定，多菌灵在果蔬中的残留量应低于0.5mg/kg，我国的国标规定与联合国粮农组织的规定相同(GB18406.1 — 2001)。
[0004]多菌灵残留量的测定方法有很多，如高效液相色谱分析法，红外光谱分析法，气相色谱法，薄层扫描法，可见光比色法及紫外光谱法，荧光分析法等。但是常用的提取方法操作复杂，且没有针对成熟桔子的专用方法，多菌灵在桔皮和果肉中残留的量应该不同的，不能将桔子作为一个整体进行检测。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种成熟桔子中多菌灵残留的检测方法。
[0006]本发明是通过以下技术方案来实现的:
一种成熟桔子中多菌灵残留的检测方法，包括以下几个步骤:
(1)样品处理:将成熟桔子分成桔皮和果肉两部分，桔皮剪碎，果肉用榨汁机炸成果汁，备用;
(2)提取:取桔皮25g和果肉50g分别置于锥形瓶中，分别加入50mL和10mL的甲醇水溶液，并且分别加入0.1mL和0.2mL的盐酸，超声提取30_50min ;抽滤后得到清液，将清液置于加有氯化钠的分液漏斗中，分别加入10mL和200mL的乙酸乙酯，萃取两次，静置分层后合并上层液体，浓缩至5mL以下，用乙酸乙酯定容至5mL，得到样品液备用；
(3)小柱分离:用1mL乙酸乙酯洗涤C18小柱，上样，用5mL体积比为1:1的甲醇水溶液洗涤，再用5mL体积比为4:1的甲醇水溶液洗涤，最后用1mL甲醇溶液洗脱，得到洗脱液，将洗脱液浓缩至5mL以下，用甲醇定容至5mL，待检测； (4)检测:采用HPLC进行检测，检测条件为:采用C18柱，规格为4.6*250mm，检测波长为280nm，流动相采用体积比为9:1的甲醇和0.5%的醋酸水溶液，流速为1.0mL/min。
[0007]所述的一种成熟桔子中多菌灵残留的检测方法，步骤(2)中甲醇水溶液中甲醇与水的体积比为2:5。
[0008]所述的一种成熟桔子中多菌灵残留的检测方法，所述盐酸为普通市售分析纯浓盐酸。
[0009]所述的一种成熟桔子中多菌灵残留的检测方法，步骤(2)中，萃取时加入的氯化钠为 5-7g?
[0010]所述的一种成熟桔子中多菌灵残留的检测方法，步骤(2)中将抽滤得到的清液浓缩后再进行萃取。
[0011]所述的一种成熟桔子中多菌灵残留的检测方法，所用C18小柱的规格为500mg，6mL0
[0012]标准曲线的制作:取多菌灵标品配制成0.01mg/L、0.02 mg/L、0.05 mg/L、0.1mg/L、0.2 mg/L、0.5 mg/L和lmg/L六个浓度的标准液，采用HPLC进行检测，检测条件为:检测波长为280nm，流动相采用体积比为9:1的甲醇和0.5%的醋酸水溶液，流速为1.0mL/min。将得到的数值与浓度绘制成标准曲线。
[0013]回收率测定:取空白桔皮25g和果肉50g分别置于锥形瓶中，分别添加0.5 mg/L的标准液lmL，经过提取、小柱分离后检测，平行做五个空白样，计算回收率。
[0014]本发明所达到的有益效果:
本发明的检测方法将桔皮和果肉分开检测，更加合理；用甲醇和水混合溶液作为提取液，提取效果好，超声提取提高了提取的效率；通过萃取将多菌灵转移到乙酸乙酯相，C18分离效果好，采用HPLC检测，出峰时间为3.8min，最低检测限为0.01 mg/L,出峰快捷；经计算，在0.01 mg/L-1 mg/L的浓度范围内呈良好的线性关系，相关系数为0.995，平均回收率为 94.27%，RSD 值为 9.92%。。
【具体实施方式】
[0015]下面结合实施例对本发明作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。
[0016]实施例1
本实施例中，一种成熟桔子中多菌灵残留的检测方法，包括以下几个步骤:
(1)样品处理:将成熟桔子分成桔皮和果肉两部分，桔皮剪碎，果肉用榨汁机炸成果汁，备用;
(2)提取:取桔皮25g和果肉50g分别置于锥形瓶中，分别加入50mL和10mL的甲醇水溶液，并且分别加入0.1mL和0.2mL的盐酸，超声提取30_50min ;抽滤后得到清液，将清液置于加有氯化钠的分液漏斗中，分别加入10mL和200mL的乙酸乙酯，萃取两次，静置分层后合并上层液体，浓缩至5mL以下，用乙酸乙酯定容至5mL，得到样品液备用；
(3)小柱分离:用1mL乙酸乙酯洗涤C18小柱，上样，用5mL体积比为1:1的甲醇水溶液洗涤，再用5mL体积比为4:1的甲醇水溶液洗涤，最后用1mL甲醇溶液洗脱，得到洗脱液，将洗脱液浓缩至5mL以下，用甲醇定容至5mL，待检测； (4)检测:采用HPLC进行检测，检测条件为:采用C18柱，规格为4.6*250mm，检测波长为280nm，流动相采用体积比为9:1的甲醇和0.5%的醋酸水溶液，流速为1.0mL/min。
[0017]其中，步骤(2)中甲醇水溶液中甲醇与水的体积比为2:5，所述盐酸为普通市售分析纯浓盐酸。步骤(2)中，萃取时加入的氯化钠为5-7g。所用C18小柱的规格为500mg，6mL0
[0018]实施例2
本实施例中，一种成熟桔子中多菌灵残留的检测方法，包括以下几个步骤:
(1)样品处理:将成熟桔子分成桔皮和果肉两部分，桔皮剪碎，果肉用榨汁机炸成果汁，备用;
(2)提取:取桔皮25g和果肉50g分别置于锥形瓶中，分别加入50mL和10mL的甲醇水溶液，并且分别加入0.1mL和0.2mL的盐酸，超声提取30_50min ;抽滤后得到清液，将清液置于加有氯化钠的分液漏斗中，分别加入10mL和200mL的乙酸乙酯，萃取两次，静置分层后合并上层液体，浓缩至5mL以下，用乙酸乙酯定容至5mL，得到样品液备用；
(3)小柱分离:用1mL乙酸乙酯洗涤C18小柱，上样，用5mL体积比为1:1的甲醇水溶液洗涤，再用5mL体积比为4:1的甲醇水溶液洗涤，最后用1mL甲醇溶液洗脱，得到洗脱液，将洗脱液浓缩至5mL以下，用甲醇定容至5mL，待检测；
(4)检测:采用HPLC进行检测，检测条件为:采用C18柱，规格为4.6*250mm，检测波长为280nm，流动相采用体积比为9:1的甲醇和0.5%的醋酸水溶液，流速为1.0mL/min。
[0019]其中，步骤(2)中甲醇水溶液中甲醇与水的体积比为2:5。所述盐酸为普通市售分析纯浓盐酸。步骤(2)中，萃取时加入的氯化钠为7g。步骤(2)中将抽滤得到的清液浓缩后再进行萃取。所用C18小柱的规格为500mg，6mL。
[0020]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变形，这些改进和变形也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种成熟桔子中多菌灵残留的检测方法，其特征是，包括以下几个步骤: (1)样品处理:将成熟桔子分成桔皮和果肉两部分，桔皮剪碎，果肉用榨汁机炸成果汁，备用; (2)提取:取桔皮25g和果肉50g分别置于锥形瓶中，分别加入50mL和10mL的甲醇水溶液，并且分别加入0.1mL和0.2mL的盐酸，超声提取30_50min ;抽滤后得到清液，将清液置于加有氯化钠的分液漏斗中，分别加入10mL和200mL的乙酸乙酯，萃取两次，静置分层后合并上层液体，浓缩至5mL以下，用乙酸乙酯定容至5mL，得到样品液备用； (3)小柱分离:用1mL乙酸乙酯洗涤C18小柱，上样，用5mL体积比为1:1的甲醇水溶液洗涤，再用5mL体积比为4:1的甲醇水溶液洗涤，最后用1mL甲醇溶液洗脱，得到洗脱液，将洗脱液浓缩至5mL以下，用甲醇定容至5mL，待检测； (4)检测:采用HPLC进行检测，检测条件为:采用C18柱，规格为4.6*250mm，检测波长为280nm，流动相采用体积比为9:1的甲醇和0.5%的醋酸水溶液，流速为1.0mL/min。
2.根据权利要求1所述的一种成熟桔子中多菌灵残留的检测方法，其特征是，步骤(2)中甲醇水溶液中甲醇与水的体积比为2:5。
3.根据权利要求1所述的一种成熟桔子中多菌灵残留的检测方法，其特征是，所述盐酸为普通市售分析纯浓盐酸。
4.根据权利要求1所述的一种成熟桔子中多菌灵残留的检测方法，其特征是，步骤(2)中，萃取时加入的氯化钠为5-7g。
5.根据权利要求1所述的一种成熟桔子中多菌灵残留的检测方法，其特征是，步骤(2)中将抽滤得到的清液浓缩后再进行萃取。
6.根据权利要求1所述的一种成熟桔子中多菌灵残留的检测方法，其特征是，所用C18小柱的规格为500mg，6mL。
【专利摘要】本发明公开了一种成熟桔子中多菌灵残留的检测方法。方法包括以下几个步骤：（1）将成熟桔子分成桔皮和果肉两部分，桔皮剪碎，果肉用榨汁机炸成果汁，备用；（2）取桔皮和果肉分别置于锥形瓶中，加入甲醇水溶液和盐酸，超声提取30-50min；抽滤后得到清液，将清液置于加有氯化钠的分液漏斗中，加入乙酸乙酯，萃取两次，静置分层后合并上层液体，浓缩至5mL以下，用乙酸乙酯定容至5mL，得到样品液备用；（3）用乙酸乙酯洗涤C18小柱，上样，用体积比为1:1的甲醇水溶液洗涤，再用体积比为4:1的甲醇水溶液洗涤，最后用甲醇溶液洗脱，得到洗脱液，将洗脱液用甲醇定容至5mL，待检测；（4）采用HPLC进行检测。
【IPC分类】G01N30-02, G01N30-06
【公开号】CN104535670
【申请号】CN201410725218
【发明人】徐晓华, 金艳华
【申请人】苏州国环环境检测有限公司
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年12月4日