一种果蔬中四氯虫酰胺残留的lc-ms/ms测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种果蔬中四氯虫酰胺残留的LC-MS/MS测定方法，更具体地说是采 用液相色谱串联质谱（LC-MS/MS)定性定量测定蔬菜和水果中残留的四氯虫酰胺含量的方 法，属于农药残留量的测定技术领域。
【背景技术】
[0002] 双酰胺类杀虫剂是近年来全球热门的杀虫剂产品，可广泛应用于水稻、蔬菜、棉花 等作物的害虫控制，具有低毒、环境安全、高活性等优点，包括氯虫苯甲酰胺、氰虫酰胺、氟 虫双酰胺等品种，四氯虫酰胺（SYP-9080)是由中化集团下属沈阳化工研究院研发、中化农 化有限公司经营的新产品，我国首个具有自主知识产权的双酰胺类杀虫剂，已获得国家农 业部的临时登记。
[0003] 四氯虫酰胺（SYP-9080)属于鱼尼丁受体激活剂类杀虫剂，其通过与害虫体内鱼 尼丁受体结合，打开钙离子通道，使储存在细胞内的钙离子持续释放到肌浆中，钙离子和肌 浆中基质蛋白结合，引起肌肉持续收缩。昆虫体症状表现为抽搐、拒食，最终死亡。四氯虫 酰胺为低毒、广谱杀虫剂，对鳞翅目害虫均具有很好的活性。防治对象包括稻纵卷叶螟、二 化螟、小菜蛾、甜菜夜蛾、玉米螟、甘蔗螟、小卷蛾、食心虫等。
[0004] 随着四氯虫酰胺的登记、推广和使用，有关四氯虫酰胺残留消解动态及最终残留 量等环境行为的研究势必增加，同时，作为我国主要出口市场的欧盟、日本等国家规定若田 间使用农药没有在该国家登记，没有制定相应的残留限量标准时，出口至其国家的食品农 产品包括畜禽肉等动物源性食品中残留限量均实行0. 〇lmg/L的"一律标准"。
[0005] 迄今为止，未见国内外有关于食品农产品中四氯虫酰胺残留量检测方法的报道， 使用LC-MS/MS测定食品农产品中农药残留具有快速、简便、灵敏度高等优点，因此建立简 便、快速、准确、耐用、能准确定性和定量分析蔬菜和水果中四氯虫酰胺残留量的LC-MS/MS 检测方法具有重要意义。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种果蔬中四氯虫酰胺残留的LC-MS/MS测定方法。
[0007] 为实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：一种果蔬中四氯虫酰胺残留的 LC-MS/MS测定方法，包括如下步骤：
[0008] (1)提取 称取样品于具塞离心管中，加入乙腈或含1 %乙酸的乙腈溶液均质提取lmin，加入氯 化纳或乙fe纳中的一种和无水硫fe缓，振汤后尚心。
[0009] (2)净化 移取样品提取液上清液于离心管中，加入基质分散固相萃取剂，涡旋振荡离心，过膜 后，待液相色谱串联质谱（LC-MS/MS)检测；
[0010] ⑶标准工作溶液的配制 将不含四氯虫酰胺的同种类基质空白样品按上述步骤（1)、（2)处理，得样品提取净化 液，用空白提取净化液配制成至少3个浓度的四氯虫酰胺系列混合标准工作液；
[0011] ⑷液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS)测定 将步骤（3)中的各浓度梯度的标准工作液进行LC-MS/MS测定，以标准工作液的色谱 峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；在相同条件下将步骤（2)中净化 后的样品液注入LC-MS/MS进行测定，测得样品液中四氯虫酰胺的色谱峰面积，代入标准曲 线，得到样品液中四氯虫酰胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中四 氯虫酰胺残留量。
[0012] 步骤（1)中样品若为脱水蔬菜和水果，需降低称样量，并加适量水充分浸润。
[0013] 步骤（1)中采用乙腈提取时加入氯化钠盐析，采用含1 %乙酸的乙腈溶液提取时 加入乙酸钠盐析；含水量较少的样品盐析时需加入一定量的水。
[0014] 步骤（2)中基质分散固相萃取剂由无水硫酸镁、C18和PSA组成，每体积提取液中 无水硫酸镁、C18和PSA加入量分别为150mg、50mg和25mg。
[0015] 步骤⑷中液相色谱的流动相为：含5mmol/L乙酸铵的水溶液和乙腈，流速 0. 2-0. 4mL/min，进样量 5iiL。
[0016] 步骤（4)中液相色谱使用梯度洗脱的方法，梯度洗脱程序为：
【主权项】
1. 一种果蔬中四氯虫酰胺残留的LC-MS/MS测定方法，其特征在于，所述方法包括以下 步骤： (1) 提取 称取蔬菜和水果样品于具塞离心管中，加入乙腈或含1 %乙酸的乙腈溶液均质提取 Imin，加入氣化纳或乙酸纳中的一种和无水硫酸缓振汤后尚心； (2) 净化 移取样品提取液上清液于离心管中，加入基质分散固相萃取剂，涡旋振荡离心，过膜 后，待液相色谱串联质谱（LC-MS/MS)检测； (3) 标准工作溶液的配制 将不含四氯虫酰胺的同种类基质空白样品按上述步骤（1)、（2)处理，得样品提取净化 液，用空白提取净化液配制成至少3个浓度的四氯虫酰胺系列混合标准工作液； (4) 测定和结果计算 将步骤（3)中的各浓度梯度的标准工作液进行LC-MS/MS测定，以标准工作液的色谱峰 面积对其相应浓度进行回归分析，得到基质标准工作曲线；在相同条件下将步骤（2)中净 化后的样品液注入LC-MS/MS进行测定，测得样品液中四氯虫酰胺的色谱峰面积，代入基质 标准曲线，得到样品液中四氯虫酰胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样 品中四氯虫酰胺残留量。
2. 根据权利要求1所述的一种果蔬中四氯虫酰胺残留的LC-MS/MS测定方法，其特征在 于，步骤（1)中蔬菜和水果样品若为脱水样品，需降低称样量，并加适量水充分浸润。
3. 根据权利要求1所述的一种果蔬中四氯虫酰胺残留的LC-MS/MS测定方法，其特征在 于，步骤（1)中采用乙腈提取时需加入氯化钠盐析，采用含1%乙酸的乙腈溶液提取时需加 入乙酸钠盐析。
4. 根据权利要求1所述的一种果蔬中四氯虫酰胺残留的LC-MS/MS测定方法，其特征在 于，步骤（2)中基质分散固相萃取剂由无水硫酸镁、C 18和PSA组成，每体积提取液中无水硫 酸镁、C18和PSA加入量分别为150mg、50mg和25mg。
5. 根据权利要求1所述的一种果蔬中四氯虫酰胺残留的LC-MS/MS测定方法，其特征在 于，步骤（4)中LC-MS/MS的液相色谱分析条件为：填料为C 18的色谱柱，柱温为30°C ;进样 体积为5 μ L· ;流动相为：含5mmol/L乙酸铵的水溶液和乙腈，梯度洗脱；梯度洗脱程序为:
质谱条件为：电喷雾质谱检测；电喷雾电压为-3500至-4500V ;雾化气压力为 275. 9kPa ;干燥气为氮气；干燥气温度为350°C ;干燥气流速为10. OL/min ;多反应监测 (MRM)负离子扫描模式；四氯虫酰胺的母离子为535. 3?536. 3,子离子分别为499. 2? 502. 2 和 201. 4 ?202. 4。
【专利摘要】本发明公开了一种果蔬中四氯虫酰胺残留的LC-MS/MS测定方法，用乙腈或含1%乙酸的乙腈溶液均质提取样品中残留的四氯虫酰胺，提取液经乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）和十八烷基硅烷键合相（C18）基质分散净化后，液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）检测，采用不含待测农药的空白基质溶液建立校正的标准曲线，外标法定量。本方法平均回收率为88.3%～92.1%，平均相对标准偏差（RSD）为3.6%～5.3%，检出限低于0.73μg/kg，具有操作简便、快速、灵敏度高、重复性好、定性定量准确的优点。能满足0.01mg/kg残留限量的“一律标准”技术要求，为保障我国人民食品安全、对外出口贸易健康发展提供有力的技术支撑。
【IPC分类】G01N30-02
【公开号】CN104535692
【申请号】CN201510026280
【发明人】崔淑华, 程刚, 刘润珠, 赵峰
【申请人】山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2015年1月19日