一种血浆中鸟氨酸的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种血浆中鸟氨酸的检测方法，属于化学分析检测领域。
【背景技术】
[000引鸟氨酸，是一种碱性氨基酸，具有生物活性，可W与精氨酸、瓜氨酸互相转化，在生 物代谢中有重要的作用。其检测方法主要有氨基酸分析仪法、液相色谱、气相色谱、离子交 换色谱、酶法分析及比色法等。目前高效液相色谱法是最常用的检测血液中鸟氨酸的方法。
【发明内容】
[0003] 本发明提供了一种高准确性和高灵敏度的血浆中鸟氨酸的检测方法。
[0004] -种血浆中鸟氨酸的检测方法，其特征在于按如下步骤： a. 从血浆样品中萃取鸟氨酸样品；取血浆样品50-200UL置于离也管中，加入甲 醇-水-氯仿(体积比5:2:2)溶液500UL，在37°C下震荡萃取30min后，4°C下leOOOg离 也5min，取上清液移入小瓶，冻干； b. 加入甲氧基胺盐酸盐进行巧化反应：向a步骤所得样品中，加入50-100 y L浓度为 20mg/mL的甲氧基胺盐酸盐化巧溶液，在3(TC下震荡反应90min ; C.加入娃焼化试剂进行衍生化反应；向b步骤所得样品中，加入20-50 y L娃焼化试 剂炬STFA+TMCS 99:1);在37C下震荡反应30min，制得待测衍生化产物；上述的BSTFA为 N，0-双（H甲基娃焼基）H氣己醜胺，TMCS为H甲基氯娃焼； d.对衍生化化产物进行气相色谱质谱分析；仪器条件为；DB-5MS毛细管色谱柱；进样 体积为1. 0-2. 0 y L，分流或不分流进样；氮气作载气；载气流速为0. 8-1. 2mL/min ;进样口 温度为250-28(TC ;质谱条件；离子源温度200-23(TC，电离方式EI (电子轰击电离）；采用 W下升温程序；初始温度为7〇°C，保持3min，升温速率5°C /min,至28(TC，保持lOmin。
【附图说明】
[0005] 图1本发明标样及血浆样品分析谱图。
【具体实施方式】
[0006] 实施例1 a.从血浆样品中萃取鸟氨酸样品；取血浆样品50-200UL置于离也管中，加入甲 醇-水-氯仿(体积比5:2:2)溶液500UL，在37°C下震荡萃取30min后，4°C下leOOOg离 也5min，取上清液移入小瓶，冻干。
[0007] b.加入甲氧基胺盐酸盐进行巧化反应：向a步骤所得样品中，加入50-100UL浓 度为20mg/mL的甲氧基胺盐酸盐化巧溶液，在3(TC下震荡反应90min。
[0008] C.加入娃焼化试剂进行衍生化反应；向b步骤所得样品中，加入20-50 y L娃焼 化试剂炬STFA+TMCS 99:1)，在37C下震荡反应30min，制得待测衍生化产物。BSTFA为 N，0-双（H甲基娃焼基）H氣己醜胺，TMCS为H甲基氯娃焼。
[0009] d.对衍生化化产物进行气相色谱质谱分析。仪器条件为；DB-5MS毛细管色谱柱； 进样体积为1. 0-2. 0 y L，分流或不分流进样；氮气作载气；载气流速为0. 8-1. 2mL/min ;进 样口温度为250-280°C ;质谱条件；离子源温度200-230°C，电离方式EI(电子轰击电离);采 用W下升温程序；初始温度为7〇°C，保持3min，升温速率5C /min,至28(TC，保持lOmin。
[0010] 有关标准溶液的配制及血浆样品检测分析(包括检出限、RSD%、回收率）； W水为溶剂，按表1浓度范围配置系列标准溶液，然后进行气相色谱质谱分析检测，W 色谱图上组分峰面积为响应信号，建立鸟氨酸的标准曲线，其线性关系见表2。表2的结果 表明响应信号与组分浓度有显著的线性相关性；将最低浓度标准溶液进行稀释，根据信噪 比S/N = 3,得出检出限，实验结果见表2,表明本方法的检出限低，灵敏度高。 表1系列标准溶液
【主权项】
1. 一种血浆中鸟氨酸的检测方法，其特征在于是有如下的步骤： a. 从血浆样品中萃取鸟氨酸样品：取血浆样品50-200 μ L置于离心管中，加入甲 醇-水-氯仿，其体积比为5:2:2的混合溶液50(^1^，在371：下震荡萃取3〇1^11后，41： 下16000g离心5min，取上清液移入小瓶；冻干； b. 加入甲氧基胺盐酸盐进行肟化反应：向a步骤所得样品中，加入50-100 μ L浓度为 20mg/mL的甲氧基胺盐酸盐批陡溶液,在30°C下震荡反应90min ; c. 加入硅烷化试剂进行衍生化反应：向b步骤所得样品中，加入20-50 μ L硅烷化试剂 BSTFA+TMCS，两者之比为99:1 ;在37°C下震荡反应30min，制得待测衍生化产物 d. 对衍生化化产物进行气相色谱质谱分析：仪器条件为：DB-5MS毛细管色谱柱；进样 体积为1. 0-2. 0 μ L，分流或不分流进样；氦气作载气；载气流速为0. 8-1. 2mL/min ;进样口 温度为250-280°C ;质谱条件：离子源温度200-230°C，电离方式EI ;采用以下升温程序：初 始温度为70°C，保持3min，升温速率5°C /min，至280°C，保持lOmin。
【专利摘要】本发明涉及一种用气相色谱质谱检测血浆中鸟氨酸的方法，属于化学分析检测领域。该方法采用如下步骤进行：将血浆样品通过甲醇-水-氯仿溶液萃取、离心分离和干燥，制取鸟氨酸样品。加入甲氧基胺盐酸盐吡啶溶液进行肟化反应，然后加入硅烷化试剂进行衍生化反应，制得待测衍生化产物。对待测衍生化产物进行气相色谱质谱分析，仪器条件为：DB-5MS？毛细管色谱柱；分流或不分流进样；氦气作载气；进样口温度为250-280℃；程序升温。本方法具有较高的准确度和灵敏度。
【IPC分类】G01N30-02
【公开号】CN104569191
【申请号】CN201410823691
【发明人】曹铁华, 钱光人, 成旦红, 耿淑华, 邱星园, 刘世豪
【申请人】上海大学
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2014年12月26日