花生质谱检测特征序列组及检测试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明提供一种花生的检测方法，属于食品检测领域，具体地讲，涉及用质谱方法 来检测花生中特征序列组的技术。
【背景技术】
[0002] 食物过敏症是越来越被重视的健康问题，坚果属于八大食物过敏原之一，涉及食 物过敏症的90%。树坚果过敏原对于食品加工和消化是稳定的。在一些种子中，类似的稳 定过敏原已经被确定，因为它们的独特口味，种子和坚果经常用于食品工业。自90年代W 来，由于食品产品的多样化，导致与坚果和种子相关的食谱越来越多。不包含坚果或种子的 产品也许会利用加工过坚果和种子的设备，形成了潜在的风险交叉接触。对于目前假设的 含有丰富坚果或种子成分的产品中过敏原的探索发现，该些过敏原已导致一些严重的过敏 反应。该表明，检测坚果和种子过敏原的方法是食品工业控制制造和处理程序的重要手段。 由于花生利用了很长一段时间，尤其是在西欧，许多的努力是投入于花生的检测。
[0003] 1996年，Tariq等发表了一篇关于流行的树坚果过敏症的调查研究，其中包括英 国的怀特岛的1218新生儿。经过皮肤反应测试，其中1. 2%是树坚果Ig E阳性，临床反应 0. 16%。该与Sicherer等人的研究相一致，利用随机数字拨号电话调查超过12 000在美 国的个体，评估出树坚果过敏症患者在0.5%。坚果诱导的过敏性反应有所不同，有的是轻 微的局部反应如口腔过敏综合征，有的是严重的全身过敏性反应，有些甚至是致命和近乎 致命的过敏反应。由于美国和欧洲坚果消费量的不同，导致对过敏原的感受度不同。在欧 洲，花生过敏十分普遍，而在美国过敏反应主要由胡桃导致，腰果，杏仁，山核桃，开也果次 之。欧盟在2007/68/EC中要求的14种必须标注的过敏原中包含花生，同样加拿大的CODEX STAN118-1979中同样对过敏原的标注做出了明确的要求。为了满足监管的要求及过敏人群 的需求，需要开发相应的检测方法。目前花生的检测方法有酶联免疫法，由于抗体制备的问 题容易导致假阳性结果。
【发明内容】
[0004] 本发明需要解决的技术问题是提供用于质谱检测的花生特征序列。
[0005] 本发明是通过W下技术方案实现的： 1. 花生过敏原Ara h3/4和Ara hi氨基酸序列 2. 特征序列的筛选；通过Pinpoint软件针对花生过敏原Ara h3/4和Ara hi找到适 合的氨基酸序列作为检测标签。
[0006] 花生过敏原Ara h3/4氨基酸序列uniprot ;Q8LKN1和Ara hi氨基酸序列 uniprot ：P43237 特征序列1 :WLGLSAEYGNLY民 特征序列 2 ;DLAFPGSGEQVEK 经过筛选确认适合的花生质谱检测标签组为： 表1花生过敏蛋白特征性肤段及SRM离子对
【主权项】
1. 一种花生质谱检测特征序列组，其特征在于，其为用于通过质谱法检测花生过敏原 的检测标签组，含有以下特征序列 ： 特征序列 I :WLGLSAEYGNLYR 特征序列 2 :DLAFPGSGEQVEK。
2. 根据权利要求2所述的花生质谱检测特征序列组，所述试样可以是面包、蛋糕、冰激 淋、饼干含有花生的加工产品。
3. 权利要求1至2中所述的质谱检测特征序列组需要用花生成分检测试剂盒处理试 样，其特征在于包括： (1) 提取缓冲液 〇· 2M Tris-HCl pH8. 1 ?8. 3 ;和 (2) 胰酶IOng/μ 1，溶剂为50mM碳酸氢氨；和 (3) 质谱检测特征序列组的标肽。
4. 权利要求1至3中一种花生的检测方法，其中步骤包括：以试剂盒中的提取缓冲液 提取试样中的蛋白质，进行酶解，溶于溶解缓冲液，通过分离器分离肽段，在质谱仪上进行 离子化及检测，以峰面积及标签浓度进行线性回归处理，计算样品中的花生过敏原的有无 及浓度。
5. 根据权利要求4所述的花生质谱检测特征序列组的检测方法，其在所述步骤中，用 到的分离器可以是碳18柱，也可以是离子交换柱和碳18柱的串接或者离子交换柱和碳18 柱的二维一体柱。
6. 根据权利要求4所述的花生质谱检测特征序列组的检测器可以是三重四级杆，或复 合型电场轨道阱回旋共振质谱，或串联质谱。
7. -种检测结果的判断方法，其特征在于，如果同时出现花生质谱检测特征序列组的 阳性结果则试样中含有花生，如果出现花生质谱检测特征序列组阴性结果则试样中不含花 生成分。
8. -种检测结果的判断方法，其特征在于，通过线性回归的方法可以对试样中的花生 含量进行定量检测。
【专利摘要】本发明涉及一种花生质谱检测特征序列组及检测试剂盒，其特征在于，其为通过酶解的方法制备花生质谱检测特征序列组的方法，含有下述步骤：以试剂盒中的提取缓冲液提取试样中的蛋白质，进行修饰后，通过酶解的方法进行花生质谱检测特征序列组的制备，溶于溶解缓冲液，在质谱仪上进行离子化及检测。试样可以是面包、蛋糕、冰激淋、饼干等可能含有花生的产品，通过检测花生质谱检测特征序列组来判断其是否有花生成分。如果花生质谱检测特征序列组检测结果同时为阳性，则试样中含有花生成分，如果花生过敏原标签检测结果为阴性，则试样中不含花生成分。
【IPC分类】G01N30-88, G01N30-06
【公开号】CN104569243
【申请号】CN201410235993
【发明人】贺艳, 郑文杰, 张裕君, 赵璟源, 张霞, 陈其勇, 赵卫东, 许泓
【申请人】天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2014年5月29日