一种有机磷农药残留化学发光传感检测方法及用图

文档序号:8280953阅读:591来源:国知局
一种有机磷农药残留化学发光传感检测方法及用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于分析检测新方法和新原理,特别涉及利用化学发光酶标仪和化学发 光探针高通量、快速检测有机磯农药残留的新原理及应用。
【背景技术】
[0002] 有机磯农药是我国目前应用最为广泛和常见的杀虫剂。近年来,由于有机磯农药 的滥用、超量使用及误用,导致有机磯中毒事件时有发生。特别是农作物病虫防害过程中, 经常超量使用有机磯农药,导致农产品中有机磯农药残留情况严重,长期食用农残超标的 农产品对身体造成的伤害毋庸置疑。此外,误服有机磯农药导致的急性中毒事件也经常发 生。为满足农残检测、环境及误服患者血液监控的需要,发明快速、高通量的有机磯毒物检 测方法或仪器,意义显著。目前已有的有机磯毒物检测方法或仪器存在灵敏度低、样品处 理能力低、耗时的缺陷,对农残样本、环境样本、中毒患者血样本的快速、高通量检测难W实 现。

【发明内容】

[0003] 本发明旨在提供一种高灵敏度、高通量的有机磯农药残留化学发光传感检测新方 法。
[0004] 本发明的另一目的是提供该种传感检测方法的用途。
[0005] 本发明的高灵敏度、高通量的有机磯农药残留化学发光传感检测新方法的原理 是:有机磯农药是己醜胆碱醋酶的抑制剂,能够竞争性抑制己醜胆碱醋酶催化氯己醜胆碱 生成甜菜碱的反应,进而导致了胆碱氧化酶催化甜菜碱生成过氧化氨量的减少,从而抑制 了化学发光探针与过氧化氨的化学发光反应,导致了化学发光强度的降低。利用化学发光 传感仪,检测该种化学发光被抑制的程度,可反映出测试样中有机磯的残留量。
[0006] 本发明的目的是该样实现的,所述的一种有机磯农药残留化学发光传感检测方 法,其特征在于: W化学发光探针为指示剂,有机磯农药同时竞争性抑制胆碱醋酶催化己醜胆碱生成胆 碱的反应,导致胆碱生成减少,引起酶催化胆碱生成的过氧化氨的量减少,化学发光探针被 过氧化氨氧化产生的化学发光强度随之降低;通过发光检测仪检测化学发光强度的变化测 定有机磯农药残留量。
[0007] 所述的一种有机磯农药残留化学发光传感检测方法,其特征在于1) W鲁米诺或 过氧化草酸醋为化学发光探针,W己醜胆碱醋酶及胆碱氧化酶为酶体系,W氯化己醜胆碱 为底物;有机磯农药抑制己醜胆碱醋酶催化己醜胆碱生成胆碱的反应,导致胆碱生成减少, 引起胆碱氧化酶催化胆碱生成的过氧化氨的量减少,化学发光探针被过氧化氨氧化产生的 化学发光强度随之降低,通过发光检测仪检测化学发光强度的变化而建立敌敌畏农药的标 准曲线;2)有机磯农药残留样品检测,取有机磯农药残留待测样品配制成溶液放置在酶标 板的孔中,取蒸觸水加入酶标板的其它孔中做空白对照,所有加了溶液的孔均加入己醜胆 碱醋酶溶液,酶标板震摇器上在30-4(TC震摇反应后再各加入氯己醜胆碱及胆碱氧化酶, 30-4(TC震摇反应,随后将酶标板转移到化学发光传感检测仪上,自动注射化学发光探针试 剂鲁米诺,同时检测化学发光反应强度变化;代入敌敌畏标准曲线,计算残留量。
[0008] 所述胆碱醋酶为己醜胆碱醋酶,其浓度为1?lOOU/mL。
[0009] 所述催化胆碱生成过氧化氨的酶为胆碱氧化酶,其浓度为1?lOOU/mL。
[0010] 所用的化学发光探针为鲁米诺或过氧化草酸醋,鲁米诺浓度为1X10^5?IX 10^2 mol/L,过氧化草酸醋TCP0浓度为IXIO-4?IXIO-2 mol/Lo
[0011] 所述的发光检测仪为英光或化学发光检测酶标仪。
[0012] 所述的一种有机磯农药残留化学发光传感检测方法,其特征在于1)建立敌敌畏农 药的标准曲线,吸取50 y L 1 ng/mL?1 y g/mL系列敌敌畏标准溶液放置在96孔酶标板 的孔中,再另外吸取空白溶液50 y 1加入96孔酶标板的其他孔中,所有加了溶液的孔均加 入己醜胆碱醋酶(pH=7)溶液50y 1,酶标板震摇器上37C震摇反应10分钟,之后再各加入 氯己醜胆碱及胆碱氧化酶各50 y 1 (pH=7),37C震摇反应10分钟,随后将酶标板转移到化 学发光传感检测仪上,自动注射化学发光探针试剂鲁米诺,同时检测化学发光反应强度。化 学发光强度与样品中的有机磯物质成负相关,其线性方程为A/= 3333 logC (mol [1) + 120. 19,检测限为Inmol/L ;2)有机磯农药残留样品检测,取有机磯农药残留待测样品配制 成溶液放置在96孔酶标板的孔中,取蒸觸水50 y 1加入96孔酶标板的其它孔中做空白对 照,所有加了溶液的孔均加入己醜胆碱醋酶(pH=7)溶液50y 1,酶标板震摇器上37C震摇 反应10分钟,之后再各加入氯己醜胆碱及胆碱氧化酶各50y l(pH=7),37°C震摇反应10分 钟,随后将酶标板转移到化学发光传感检测仪上,自动注射化学发光探针试剂鲁米诺,同时 检测化学发光反应强度变化;代入敌敌畏标准曲线,计算残留量。
[0013] 本发明所述的一种有机磯农药残留化学发光传感检测方法,其特征在于应用于食 品、水样及有机磯毒物中毒病人的血样监控。
[0014] 具体地说,本发明提供了如下技术方案: 本发明的胆碱醋酶为己醜胆碱醋酶,其浓度为1?lOOU/mU优选为lOU/mL。
[0015] 本发明的催化胆碱氧化生成甜菜碱和过氧化氨的酶为胆碱氧化酶,其浓度为1? lOOU/mU 优选为 lOU/mL。
[001引本发明的己醜胆碱醋酶反应底物为氯化己醜胆碱,其浓度为IX l(T8g/mL ?1 X 10-2g/mL,优选为 1 X 10-4g/mL。
[0017] 本发明的化学发光探针为鲁米诺或过氧化草酸醋TCP0,其浓度分别为IX 1(T5 ?1 X 1〇-2 mol/L,1 X 1〇-4?1 X 1〇-2 mol/L。优选的浓度分别为1 X 1〇-4 mol/L的鲁米诺溶液 和1 X 1(T3 mol/L过氧化草酸醋溶液。
[0018] 本发明的有机磯农药竞争性抑制胆碱醋酶催化己醜胆碱醋酶的反应时间为1? 30min,优选为 lOmin。
[0019] 本发明的胆碱氧化酶催化胆碱反应时间为1?30min,优选为lOmin。
[0020] 本发明的化学发光传感检测仪为流动注射化学发光分析仪、静态化学发光检测 仪、化学发光及英光酶标检测仪,优选为化学发光酶标检测仪。
[0021] 本发明的化学发光检测时间点为化学发光探针混合到反应溶液后0. 1?60s,优 选为0,1s。
[0022] 本发明的优点: 本发明的有机磯农药残留化学发光传感检测新方法可应用于果蔬、生物体液、环境水 样本中有机磯农药的残留灵敏、高通量检测。该传感检测方法在20分钟内能检测96个样 本,W敌敌畏为例,检测限达到Inmol/L。
【具体实施方式】
[0023] 下面将结合实施例进一步说明本发明的实质内容和有益效果,该实施例仅用于说 明本发明而非对本发明的限制。
[0024] 实施例一敌
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