癌症尿液检测试剂的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种临床诊断用的体外检测试剂，具体涉及一种癌症尿液检测试剂。
【背景技术】
[0002]近年来，全世界肿瘤疾病的发病率呈不断上升趋势，据美国癌症学会(AmericanCancer Society)对世界范围癌症的统计数据显示，从2008年至2030年，全球新增癌症人数将从每年的1270万增至2140万，癌症死亡人数将由760万上升至1320万人。与此同时，我国近年的统计资料表明，预计2020年中国癌症新发病例将达349万，因恶性肿瘤而死亡的人数将达263万，较2002年上升60%。由此可见，无论在发达国家还是发展中国家，恶性肿瘤(癌症)均已取代心血管病成为死亡人数最多的疾病。由于癌症发病隐匿、进展快、恶性程度高，因此，“早期发现、早期诊断、早期治疗”仍是降低癌症死亡率最主要的措施。
[0003]目前诊断癌症的方法，基本上是通过特异性不高且操作费时的方法，现在普遍采用的确诊手段有CT、B趣.核磁共振、细胞学检查等，这些手段都直接与人体联系，或价格昂贵、复杂、痛苦且损伤身体的物理学和病理学检查。这些都是早期(特别是无症状期)人们不易接受的，因而，不能及时检查或不便多次检测，不能及时发现和早期发现恶性肿瘤，延误了早期根治性手术和治疗的机会。因此，开展区域性防癌普查，能够发现早期癌症病人，对提高癌症患者的生存率是很重要的。故癌症早期筛查技术已成为世界各国关注的热点。鉴于此，研制一种既适合肿瘤普查又适合肿瘤筛查的无创性测试剂和检测方法已是当务之急O
[0004]由于肿瘤标志物对肿瘤的诊断、分类、预后判断以及治疗有重要的指导意义，因此，对于肿瘤标志物的研究得到了国内外学者的广泛关注，尿中肿瘤标志物的检测是目前研究的热点之一。
[0005]尿中肿瘤标志物主要分两大类:一类是特异性蛋白质，如本一周氏蛋白、硫酸酯酶等；另一类则是肿瘤代谢产物，如核酸代谢产物多胺、含巯基化合物、氨基酸代谢产物5-羟吲哚乙酸、对羟基苯丙铜酸等。对后者的检测方法很多，其中包括含汞试剂，最近的相关技术专利为《用于检测人体尿液中酪氨酸类酚代谢物的试剂盒》CN102004103B (申请号:201010505793.4)和《对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂及其制备方法》CN103323452B (申请号:201310247724.1)。它们分别提出了较为实用的含汞尿检试剂配方，其共同点是均采用了两种汞离子Hg+与Hg2+，将二者按一定比例溶解在酸性溶液中，稳定剂的Ni2+，即得专利所述试剂。该试剂中的两种汞离子分别与尿中的不同成分反应，Hg+与底物单羟酚类代谢物反应生成红色沉淀，Hg2+与无机盐(其他阴离子反应如Cl-、N02-等)生成白色沉淀。CN102004103B (申请号:201010505793.4)发明原理是将该试剂中的汞盐与患者酪氨酸及代谢酚类物反应生成红色沉淀物。CN 103323452 B (专利申请号201310247724.1 )本发明原理是将该试剂汞盐与患者尿中酪氨酸、色氨酸及其衍生物及含有此类氨基酸残基的变性蛋白反应生成具特异性的红色沉淀物。
[0006]上述专利的发明原理相同，即:被测者处于癌前病变及癌症早中期时，细胞的异常增殖引发应激反应，导致人体内氨基酸代谢异常，尿液中单羟酚类代谢物(如色氨酸、酪氨酸及其代谢衍生物)含量远远超过正常人。基于米伦试剂而改进的检测试剂与尿液中单羟酚类代谢物发生具特异性颜色的沉淀反应，从而判断恶性肿瘤发生的可能性。
[0007]上述专利所提供的试剂，在应用中有一定效果，特异性、灵敏度较高，但仍有不足之处。由于该方法在反应离子与其溶解的溶解之间、反应离子之间等方面存在的问题，以及尿样的颜色、尿中所含蛋白及无机盐干扰，致使利用所给条件进行重复实验时，其方法、效果均不太稳定，检测试剂在肿瘤的普查筛检应用中，还有待于进一步改进，以提高灵敏度和特异度，减少漏检率。
【发明内容】
[0008]本发明的目的在于克服已有技术存在的问题，研制一种适用于临床应用的，稳定性优良的，检测灵敏度和特异度高、漏检率低的癌症尿液检测试剂，该试剂生产成本低，工艺简单，只要将试液滴入被检者的尿液中，即可用肉眼从颜色判断出被检者是健康者还是癌症患者，或其他疾病患者。检测快速、准确、简便。
[0009]本发明的目的采用如下方案实现:
对已有技术的癌症尿检比色方法加以改进，克服癌症尿检试剂的缺点，发明一种新的配方。
[0010]一、该尿液检测试剂的制备方法包括以下步骤
A溶液制备:称取碘2-3g，加入10ml蒸馏水中，待溶解后，定容至250ml;
B溶液制备:称取碘化钾40-60g，加入10ml蒸馏水中，待溶解后，定容至250ml;
C溶液制备:称取氯化汞3-6g，加入10ml蒸馏水中，待溶解后，缓慢向内加入60_80ml12N硫酸,而后加蒸懼水至500ml ；
将A溶液、B溶液和C溶液按体积比1: 0.8?1.5: 1.0?1.5进行混合后，即得到目标产品癌症尿液检测试剂。
[0011]二、检测方法
本试剂为目测比色试剂，不受响尿样的颜色、尿中所含蛋白及无机盐干扰，试剂滴入尿液后，立即出现沉淀，根据沉淀的有无和沉淀的颜色即可判断被检测者是否患有癌症，其具体检测方法如下:
取3天禁食高蛋白食物、中西药物后的新鲜晨尿5ml，加入癌症相关因子尿液检测试剂0.5ml,振匀后静置5-15分钟,观察沉淀的有无和沉淀的颜色。
[0012]判断标准:与标准色板对照做出判断:沉淀物呈微白色、黄色者为阴性；沉淀呈红色球、灰红色球状、草绿色球状、红色球状者为阳性；沉淀呈乳白色并直接沉入管底者为急、慢性肾炎、囊肿或良性肿瘤。
[0013]在使用中，本试剂对几种特殊尿液，呈现的颜色不同，应予以注意:
静脉注射葡萄糖后的尿液呈乳白色，口服利福平后的尿液呈桔红色的浑浊物等，这都为假阳性，为此特要求所用的尿液必须为在口服中西药或注射药物24小时后的尿液。
[0014]癌症经手术、化疗、放疗等治疗好转后，亦呈阴性反映。
[0015]本试剂用于病情检测时，可用上述方法连续定期监测，在此过程中如出现由阴性反应转为阳性反应，则提示癌症的复发或转移。
[0016]本试剂用于疗效评价时,可在某治疗前后进行检测,如治疗后仍为阳性,则为疗效不明显，如在治疗前为阳性反应，转为治疗后的阴性，则说明效果的有效性。
[0017]本发明依据的理论基础是:
1、致癌因素(物理因索、化学因索、病毒因素和其它因素等)引起细胞畸变，使癌细胞代谢旺盛造成某些物质成分激增。虽然这些特殊成分的质和量随不同部位类型的癌细胞而异，但仍有其共性，这些与癌变相关的因子统称为恶性肿瘤相关因子(CAR)，可随尿液排出体外，并可与某些离子发生络合反应，形成具有特异性颜色的有色络合物。
[0018]2、具体的表现为当受检者体内有癌细胞活动时，细胞的异常增殖引发应激反应，