阿卡波糖及其制剂的高效液相色谱分析方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药物新技术领域，涉及一种治疗胰岛素依赖型或非依赖型糖尿病的药物阿卡波糖及其制剂分析测定方法，具体的说是阿卡波糖及其制剂的高效液相色谱分析方法。
【背景技术】
[0002]根据文献报道及国家药品标准，测定阿卡波糖及其制剂采用高效液相分析方法有:
1、国家药品标准收载的阿卡波糖含量方法照高效液相色谱法(中国药典2000年版二部附录V D)。
[0003]色谱条件与系统适应性试验用氨基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-磷酸盐缓冲液(70:30)为流动相；流速为2ml/min ;柱温35°C，检测波长为210nm。称取20mg阿卡波糖对照品适量，用水超声振摇溶解制成每Iml中含Img的溶液，取上述溶液25ml置50ml量瓶中，用0.lmol/L氢氧化钠溶液1ml，摇匀，室温放置8小时后，用0.lmol/L盐酸溶液1ml，加水至刻度作为系统适用性溶液。取此液10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图，阿卡波糖峰与其降解产物峰之间的分离度不得小于1.3，出峰顺序为阿卡波糖碱降解产物峰和阿卡波糖峰。
[0004]测定法精密称取本品约10mg，置1ml量瓶中，加水溶解稀释至刻度，摇匀，精密量取10 μ I注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿卡波糖对照品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。
[0005]2、国家药品标准收载的阿卡波糖有关物质方法照高效液相色谱法(中国药典2000年版二部附录V D)。
[0006]色谱条件与系统适应性试验用氨基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-磷酸盐缓冲液(70:30)为流动相；流速为2ml/min ;柱温35°C，检测波长为210nm。称取20mg阿卡波糖对照品适量，用水超声振摇溶解制成每Iml中含Img的溶液，取上述溶液25ml置50ml量瓶中，用0.lmol/L氢氧化钠溶液1ml，摇匀，室温放置8小时后，用0.lmol/L盐酸溶液1ml，加水至刻度作为系统适用性溶液。取此液10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图，阿卡波糖峰与其降解产物峰之间的分离度不得小于1.3，出峰顺序为阿卡波糖碱降解产物峰和阿卡波糖峰。
[0007]测定法取本品适量，精密称定，加水制成每Iml中含Img的溶液，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液适量，加水稀释成每Iml中含0.04mg的溶液作为对照溶液。取对照溶液20 μ I注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成份色谱峰的峰高约为记录仪满量程的10°/Γ15%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20 μ 1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成份峰保留时间的2倍。供试品溶液色谱图中如显杂质峰，各杂质面积的和不得大于对照溶液主成份峰面积，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主成份峰面积的3/8。
[0008]3、国家药品标准收载的阿卡波糖片含量方法照高效液相色谱法(中国药典2000年版二部附录V D)。
[0009]色谱条件与系统适应性试验用氨基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-磷酸盐缓冲液(70:30)为流动相；流速为2ml/min ;柱温35°C，检测波长为210nm。理论塔板数按阿卡波糖峰计不得低于2500，组分A相对保留时间为0.9，应与主峰完全分离，阿卡波糖峰的保留时间约为If 18分钟。
[0010]测定法取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于阿卡波糖250mg)，置25ml量瓶中，加水约15ml，超声处理10分钟，加水稀释至刻度，摇匀，用滤膜滤过，取续滤液10 μ I注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿卡波糖对照品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算。
[0011]4、国家药品标准收载的阿卡波糖片有关物质方法照高效液相色谱法(中国药典2000年版二部附录V D)。
[0012]色谱条件与系统适应性试验用氨基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-磷酸盐缓冲液(70:30)为流动相；流速为2ml/min ;柱温35°C，检测波长为210nm。理论塔板数按阿卡波糖峰计不得低于2500，组分A相对保留时间为0.9，应与主峰完全分离，阿卡波糖峰的保留时间约为If 18分钟。
[0013]测定法取含量测定项下的供试品溶液作为供试品溶液。另精密量取供试品溶液Iml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，作为对照溶液。取对照溶液10 μ I注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成份色谱峰的峰高约为记录仪满量程的25%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各10 μ 1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成份峰保留时间的2倍。
[0014]已知副产物组分2、B、A、C、4A、4B、4C的相对保留时间分别为0.5,0.8,0.9，1.2，1.8,2.0,2.3。除主成份及以上副产物以外的其他单个未知杂质峰面积不得大于对照溶液主成份峰面积的1/2。未知杂质峰面积之和不得大于对照溶液主成份峰面积，已知副产物A的峰面积不得大于对照溶液主成份峰面积的1.2倍。
[0015]5、欧洲药典、美国药典及英国药典收载的阿卡波糖有关物质方法
色谱条件与系统适应性试验用氨基硅烷键和硅胶为填充剂(5 μ m，4.0_X 250mm)色谱柱，柱温35°C，流动相:乙腈-磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾0.60g，磷酸氢二钠二水合物0.35g，加 100ml 水使溶解)(75:25)。流速为 2.0ml/min，
检测波长为210nm。进样量为10 μ 1，记录色谱图至阿卡波糖主峰保留时间的2.5倍。
[0016]精密称取0.200g阿卡波糖用去二氧化碳的水溶解，并稀释至1ml作为供试品溶液；用5ml去二氧化碳的水溶解I瓶阿卡波糖CRS作为对照溶液(a);称取20mg阿卡波糖峰鉴别对照品(含杂质A，B, C，D, E, F，H，G)，用Iml去二氧化碳的水溶解作为对照溶液(b);量取1.0ml供试品溶液，用去二氧化碳的水稀释至10ml作为对照溶液(C)。对照溶液(b)色谱图中，杂质A的峰高和杂质A与主峰见的峰谷比值不小于1.2。
[0017]以上有关物质及含量的分析方法，流动相的pH值显弱碱性，所用的氨基柱阿卡波糖主峰保留时间不稳定，逐渐向后漂移。为解决阿卡波糖主峰漂移的问题，我们后摸索出一套适合阿卡波糖及制剂有关物质和含量测定的分析方法。该方法快速简便，精密度高，稳定性好,结果准确,重复性试验及含量回收率试验RSD均小于2.0%,最低检出量(s/n=3)为
0.40ng/ml。
[0018]
【发明内容】
[0019]本发明目的在于提供一种稳定性好、重现性好、操作简单，用于阿卡波糖及其制剂的分析测定方法。
[0020]本发明解决上述技术问题所采取的技术方案是:本方法是采用高效液相分离与紫外检测串联的方式对阿卡波糖及其制剂进行分析检测；将阿卡波糖及其制剂用水溶解稀释成每Iml中含阿卡波糖0.5mg?50mg的溶液作为供试品溶液,进样体积1?100 μ I,采用采用固定相氨基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相为乙腈-磷酸盐溶液，其中所述的流动相中含乙腈的体积比例范围为50°/Γ90%，含磷酸盐溶液的体积比例范围为10°/Γ50%，流动相流速为
0.5^3.0ml/min ;紫外检测波长200nnT230nm，对阿卡波糖及其制剂的有关物质和含量进行测