一种基于几何平均荧光指数检测弱抗原表达水平的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及流式细胞术技术领域，更具体地讲，涉及一种利用流式细胞仪基于几 何平均荧光指数检测弱抗原表达水平的方法。
【背景技术】
[0002] 流式细胞术（Flow Cytometry，FCM)是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒 子进行定量分析和分选的检测手段。它以激光为激发光源，可以高速分析上万个细胞，并能 同时从一个细胞中测得多个参数，具有速度快、精度高、准确性好等优点，成为当代最先进 的细胞定量分析技术，被广泛应用于医学临床以及各个生物研宄领域。当前，绝大多数流式 细胞仪在理论性能参数上认为能检测到单个细胞上低至100个荧光分子数的弱抗原。但是 在实际工作中，不同实验室对这类弱抗原表达的结果判断存在很大偏差。
[0003] 目前在实际操作中，通常会通过常规设置同型对照或阴性对照的方法来判定目的 抗原的表达。这对于强阳性和阴性标本容易判断，但抗原表达量低时，结果很难判断。即使 在操作中选用荧光强度最强的荧光素如藻红蛋白（PE)和别藻青蛋白（APC)标记的单抗也 无法改善结果。也有研宄者尝试采用间接标记法来改善抗原表达弱的数据分析问题。但间 接标记法一方面耗时长，增加了细胞的丢失；另一方面非特异性荧光背景强，因此该方法并 不适合临床标本和细胞数少的样本的检测。
[0004] 平均荧光强度是目前检测弱抗原表达水平最常用的统计学指标。但对于小样本事 件来说，分析者无法通过抗原表达强度高于同型对照的多少去判断结果有无统计学差异。 因此，如果能研发一种简单客观的统计分析方法，最大限度地减少检测弱抗原表达的实验 误差和主观判断误差，将会有效推动流式细胞术在多应用领域的实用价值。
【发明内容】
[0005] 针对上述现有技术中流式细胞仪无法准确检测弱抗原表达的问题，本发明提供了 一种利用流式细胞仪检测弱抗原表达水平的方法。该方法基于几何平均荧光指数可以增加 弱抗原检测的准确性，避免人为的误差。
[0006] 为实现上述的发明目的，本发明采用如下的技术手段：一种基于几何平均荧光指 数检测弱抗原表达水平的方法，包括以下步骤： (1) 将目的细胞进行免疫荧光染色； (2) 设置流式细胞仪性能参数，上机检测分析；设置待测荧光通道的分辨率；轻微调节 电压，使待测抗原同型对照或阴性细胞的几何平均荧光强度为一固定值后，获取阳性细胞 和目的细胞待测抗原的几何平均荧光强度，计算出该抗原的几何平均荧光指数； (3) 数据分析：若目的细胞待测抗原几何平均荧光强度指数高于同型对照几何平均荧 光强度指数，则为待测抗原表达。
[0007] 所述几何平均荧光指数为：
【主权项】
1. 一种基于几何平均荧光指数检测弱抗原表达水平的方法，其特征在于包括以下步 骤： (1) 将目的细胞进行免疫荧光染色； (2) 设置流式细胞仪性能参数，上机检测分析；设置待测荧光通道的分辨率；轻微调节 电压，使待测抗原同型对照或阴性细胞的几何平均荧光强度为一固定值后，获取阳性细胞 和目的细胞待测抗原的几何平均荧光强度，计算出该抗原的几何平均荧光指数； (3) 数据分析：若目的细胞待测抗原几何平均荧光指数高于同型对照几何平均荧光强 度指数，则为待测抗原表达。
2. 根据权利要求1所述的基于几何平均荧光指数检测弱抗原表达水平的方法，其特征 在于：所述几何平均荧光指数为：
3. 根据权利要求1所述的基于几何平均荧光指数检测弱抗原表达水平的方法，其特征 在于：所述待测荧光通道的分辨率设置为小于等于256。
4. 根据权利要求1所述的基于几何平均荧光指数检测弱抗原表达水平的方法，其特征 在于：所述目的细胞为浓度为± IO6细胞/100 μ L的单细胞悬液。
5. 根据权利要求1所述的基于几何平均荧光指数检测弱抗原表达水平的方法，其特征 在于：所述抗原为单个细胞上至少100个荧光分子数的弱抗原。
【专利摘要】本发明公开了基于几何平均荧光指数检测弱抗原表达水平的方法，首先将目的细胞进行免疫荧光染色，然后将染色后的细胞上流式细胞仪检测、进行数据计算和分析。其中在设定所述流式细胞仪的参数时，将待测荧光通道的分辨率降低；设定目的细胞待测抗原同型对照的几何平均荧光强度为一固定值后，获取阳性细胞和目的细胞待测抗原的几何平均荧光强度，计算出该抗原的几何平均荧光指数，若目的细胞待测抗原的几何平均荧光指数高于界定值，则为该待测抗原表达。本发明有效提高了对目的细胞测定的准确度和精确度，最大限度地减少检测弱抗原表达的实验误差和主观判断误差，将会有效推动流式细胞术在多领域的实用价值。
【IPC分类】G01N15-14
【公开号】CN104634720
【申请号】CN201510112700
【发明人】吴雨洁, 何广胜, 陈梓灵, 李建勇, 徐卫, 王慧, 沈安俐
【申请人】南京医科大学第一附属医院
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年3月13日