兰索拉唑中兰索氯化物的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药品检测，具体是兰索拉唑中基因毒性杂质检测，更具体是兰索拉唑 中兰索氯化物的测定方法。
【背景技术】
[0002] 基因毒性杂质是在以DNA反应物质为主要研宄对像的体内体外试验中，如果发现 它们对DNA有替在的破坏性，那可称之为基因毒性。根据目前研宄实践，具有体内遗传毒性 的化合物在任何暴露剂量下均有可能对DNA产生损伤，而这种损伤有可能引发肿瘤。
[0003] 目前，欧美国家对基因毒性杂质控制较为严格，对所有可能含有基因毒性杂质的 药品，均要求检测其基因毒性杂质的含量，并发布了《基因毒性杂质限度指南》。根据EM 《基因毒性杂质限度指南》(2006年）规定，2-氯甲基-3-甲基-4-(2, 2, 2-三氟乙氧基）吡 啶盐酸盐（又名兰索氯化物）为基因毒性杂质，应对其在兰索拉唑中的含量进行严格的控 制。按阈值法来计算，TTC(threshold of toxicological concern,毒理学关注阈值）为 1. 5 μ g/d，兰索拉唑最大日用剂量为180mg/d，其控制限度为不得过8ppm (限度=TTC/最大 日用剂量）。
[0004] 而目前兰索拉唑药品是进行有关物质检测。如"用加校正因子的自身对照法检测 兰索拉唑的有关物质的含量"（谭宏宇，高丽，《黑龙江医药》2012年第6期）。有关物质的 检测方法的灵敏度不高，检测限约为700ppm，远远达不到《基因毒性杂质限度指南》中对兰 索拉唑中基因毒性物质的控制要求。
[0005] 目前尚未公开有专门用于兰索拉唑中兰索氯化物的检测方法，所以迫切需要开发 新的方法，专门用于兰索拉唑中兰索氯化物的含量测定。
【发明内容】
[0006] 为了解决上述问题，满足生产实际的要求，本发明提供一种兰索拉唑中兰索氯化 物的测定方法。
[0007] 本发明所述的测定方法，采用高效液相色谱法中的杂质对照品外标法，色谱柱为 反相强极性柱，流动相为乙腈-PH6. 2~6. 5磷酸盐缓冲液，稀释剂为乙腈-PH10. 5磷酸盐 缓冲液，检测波长为210nm。
[0008] 进一步，反相强极性柱选用氨基十六烷基硅胶色谱柱。
[0009] 所述的氨基十六烷基硅胶色谱柱规格为：5 μ m，250 X 4. 6mm。
[0010] 进一步，流动相体积比例为：乙腈：pH6. 2~6. 5磷酸盐缓冲液=35:65。
[0011] 进一步，稀释剂体积比例为：乙腈：pH10. 5磷酸盐缓冲液=50:50。
[0012] 所述的磷酸盐缓冲液的配制方法包括：无水磷酸氢二钠加入到水中溶解，用磷酸 调PH值。
[0013] 本发明测定时流速控制I. 0ml/min。测定时进样量为50 μ 1。测定时柱温为 25°C -35°C。
[0014] 本发明具体测定的过程包括：
[0015] 1)、用稀释剂配制杂质对照品液；
[0016] 2)、用稀释剂配制供试液；
[0017] 3)、用稀释剂配制分离度试验液；
[0018] 4)、测定：取稀释剂作空白液、分离度试验液各50 μ 1，其中一份杂质对照品液平 行5针各50 μ 1，另一份杂质对照品液和供试液分别平行2针各50 μ 1，分别注入高效液相 色谱仪测定，记录色谱图；
[0019] 5)、按面积外标法计算兰索拉唑中兰索氯化物的含量X% :
[0020] X%= (AX*C对 /A对 /Cx)*100%
[0021] 其中：4表示供试品中兰索氯化物的峰面积；
[0022] Cx表示供试品溶液的浓度，μ g/ml ;
[0023] C对表示对照品溶液的浓度，μ g/ml ;
[0024] A5fit表示兰索氯化物对照品的峰面积。
[0025] 本发明的方法为目前主流的高效液相色谱法（HCLP)，灵敏度极高，实验显示检测 限为0. 5ppm，完全达到《基因毒性杂质限度指南》中对兰索拉唑中基因毒性物质Sppm的控 制要求，专属性好，准确度高。根据ICH指导原则《Q2b方法学》进行方法学验证，结果均符 合指导原则要求。
【附图说明】
[0026] 图1140408-供试液1-1的HCLP图谱。表示批号为140408的供试液第一份样第 一针的HCLP色谱图，以下类似；
[0027] 图 2140408-供试液 1-2 的 HCLP 图谱；
[0028] 图3140408-供试液2-1的HCLP图谱，表示批号为140408的供试液第二份样第一 针的HCLP色谱图，以下类似；
[0029] 图 4140408-供试液 2-2 的 HCLP 图谱；
[0030] 图 5140409-供试液 1-1 的 HCLP 图谱；
[0031] 图 6140409-供试液 1-2 的 HCLP 图谱；
[0032] 图 7140409-供试液 2-1 的 HCLP 图谱；
[0033] 图 8140409-供试液 2-2 的 HCLP 图谱；
[0034] 图 9140410-供试液 1-1 的 HCLP 图谱；
[0035] 图 10140410-供试液 1-2 的 HCLP 图谱；
[0036] 图 11140410-供试液 2-1 的 HCLP 图谱；
[0037] 图 12140410-供试液 2-2 的 HCLP 图谱；
[0038] 图13测试三批样品时的对照液1-1的HCLP图谱。图中兰索氯化物的峰面积为 4890 ；
[0039] 图14测试三批样品时的对照液1-2的HCLP图谱。图中兰索氯化物的峰面积为 4874 ；
[0040] 图15测试三批样品时的对照液2-1的HCLP图谱。图中兰索氯化物的峰面积为 4960 ；
[0041] 图16测试三批样品时的对照液2-2的HCLP图谱。图中兰索氯化物的峰面积为 4937 ；
[0042] 图17测试三批样品时的空白液的HCLP图谱，图中数据如下表；
【主权项】
1. 兰索拉唑中兰索氯化物的测定方法，采用高效液相色谱法中的杂质对照品外标法， 色谱柱为反相强极性柱，流动相为乙腈-PH6. 2~6. 5磷酸盐缓冲液，稀释剂为乙腈-PH10. 5 磷酸盐缓冲液，检测波长为210nm。
2. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：反相强极性柱选用氨基十六烷基硅 胶色谱柱。
3. 根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于：氨基十六烷基硅胶色谱柱规格为： 5 μ m，250 X 4. 6mm。
4. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：流动相体积比例为：乙腈：pH6. 2~ 6. 5磷酸盐缓冲液=35:65。
5. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：稀释剂体积比例为：乙腈：ρΗΙΟ. 5磷 酸盐缓冲液=50:50。
6. 根据权利要求1、4或5所述的测定方法，其特征在于：磷酸盐缓冲液的配制方法包 括：无水磷酸氢二钠加入到水中溶解，用磷酸调PH值。
7. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：测定时流速控制1.0 ml/min。
8. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：测定时进样量为50 μ 1。
9. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：测定时柱温为25°C _35°C。
10. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：具体测定的过程包括： 1) 、用稀释剂配制杂质对照品液； 2) 、用稀释剂配制供试液； 3) 、用稀释剂配制分离度试验液； 4) 、测定：取稀释剂作空白液、分离度试验液各50 μ 1，其中一份杂质对照品液平行5针 各50 μ 1，另一份杂质对照品液和供试液分别平行2针各50 μ 1，分别注入高效液相色谱仪 测定，记录色谱图； 5) 、按面积外标法计算兰索拉唑中兰索氯化物的含量X% : X%= (Ax^/A5it/Cx)*100% 其中：\表示供试品中兰索氯化物的峰面积； Cx表示供试品溶液的浓度，μg/ml ; 表示对照品溶液的浓度，μg/ml ; Aw表示兰索氯化物对照品的峰面积。
【专利摘要】本发明所述的兰索拉唑中兰索氯化物的测定方法，采用高效液相色谱法中的杂质对照品外标法，色谱柱为反相强极性柱，流动相为乙腈-pH6.2～6.5磷酸盐缓冲液，稀释剂为乙腈-pH10.5磷酸盐缓冲液，检测波长为210nm。本发明的方法为目前主流的高效液相色谱法(HCLP)，灵敏度极高，实验显示检测限为0.5ppm，完全达到《基因毒性杂质限度指南》中对兰索拉唑中基因毒性物质8ppm的控制要求，专属性好，准确度高。根据ICH指导原则《Q2b方法学》进行方法学验证，结果均符合指导原则要求。
【IPC分类】G01N30-02
【公开号】CN104634892
【申请号】CN201510040575
【发明人】时孟军, 于利庆, 叶家强, 唐世锭, 陈如, 黎德南, 张晓程
【申请人】桂林华信制药有限公司
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年1月27日