裸花紫珠药材中三种有效成分含量的测定方法

文档序号:8317743阅读:724来源:国知局
裸花紫珠药材中三种有效成分含量的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及裸花紫珠药材中三种有效成分含量的测定方法,具体涉及裸花紫珠药 材中毛蕊花糖苷、木犀草素、5, 4'-二羟基-3, 7, 3'-三甲氧基黄酮三种有效成分含量的 测定方法,属于医药领域。
【背景技术】
[0002] 裸花紫珠(i7aJ7ica/77a Hook. Et A rn.)为马鞭草科紫珠属植物。黎 药名补阀,主产于海南、广东和广西。其叶味微苦、涩,性平;有抗菌止血,消炎解毒,散瘀消 肿的功能。用于化脓性炎症、急性传染性肝炎、呼吸道及消化道出血、血小板减少性紫癜;外 用治烧、烫伤及外伤出血,是海南黎族医生常用药材之一。
[0003] 国内外对裸花紫珠化学成分的研究报道较少,从中分离的成分主要有黄酮类、萜 类、挥发油和酚类等。裸花紫珠中黄酮类化合物主要有木犀草素及其配糖体;从裸花紫珠叶 中分离得到酚类化合物主要有酚苷类如毛蕊花糖苷、samioside,连翘酯苷等。
[0004] 裸花紫珠质量研究常用的方法有显微鉴别法、薄层色谱(TLC)法、紫外分光光度计 法,高效液相色谱(HPLC)法等。对裸花紫珠药材或其中药制剂的有效成分含量测定方法报 道中主要有黄酮类、萜类及酚苷类。目前对于裸花紫珠药材及其制剂中有效成分的含量测 定方法多采用高效液相色谱法对其中某一有效成分如木犀草素、毛蕊花糖苷、齐墩果酸等 进行含量测定,文献报道很多,专利如中国专利"裸花紫珠制剂中毛蕊花糖苷含量的测定方 法"(【申请号】201010289134. 1)。这种采用单一有效成分含量控制药材及其制剂的质量标 准不能全面控制药材质量,而采用不同测定方法测定两种以上有效成分的含量,事必使得 测定工作繁重,测定周期延长,不利于实际工作特别是企业大生产中推广及操作。目前采用 一种测定条件同时测定两种以上有效成分的测定方法鲜有报道。
[0005] 本发明提供了一种测定方法,采用高效液相色谱可以同时测定裸花紫珠药材中毛 蕊花糖苷、木犀草素及5,4'-二羟基_3,7,3'-三甲氧基黄酮三种有效成分的含量。这 种同时测定裸花紫珠药材中多个有效成分含量的分析方法,不仅完善了裸花紫珠药材质量 控制的方法,而且方法可靠,易操作。

【发明内容】

[0006] 本发明的目的在于提供一种同时测定裸花紫珠药材中毛蕊花糖苷、木犀草素及 5, 4'-二羟基-3, 7, 3'-三甲氧基黄酮三种有效成分含量的测定方法。
[0007] 实现本发明目的的技术方案如下: 采用高效液相色谱测定裸花紫珠药材中毛蕊花糖苷、木犀草素及5,4'-二羟 基-3, 7, 3'-三甲氧基黄酮三种有效成分含量。色谱条件与系统适用性为:用十八烷基硅 烷键合硅胶为填充剂,流动相为有机溶剂一酸性溶液,采用梯度洗脱,如下 : O-IOmin有机溶剂比例为10%~50% ; 10-20min有机溶剂比例为20%~60% ; 20-30min有机溶剂比例为25%~70% ; 30-40min有机溶剂比例为30%~80% ; 40-50min有机溶剂比例为35%~80% ; 50-60min有机溶剂比例为40%~80%, 酸性溶液浓度为〇-〇. 3%,检测波长320-360nm,柱温25°C -40°C。
[0008] 所述流动相中的有机溶剂包括甲醇或乙腈中的一种,甲醇和乙腈均为色谱纯;酸 性溶液的酸包括磷酸、乙酸或甲酸中的一种,磷酸、乙酸和甲酸均为分析纯。
[0009] 所述色谱条件与系统适用性优选为:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,流动相 为甲醇一0. 15%磷酸水溶液,采用梯度洗脱,如下: 0-5min甲醇一 0. 15%磷酸水溶液38:62 ; 5-14min甲醇一0. 15%磷酸水溶液45:55 ; 14-23min甲醇一0. 15%磷酸水溶液60:40 ; 23-30min甲醇一 0. 15%磷酸水溶液70:30 ; 30-35111丨11甲醇一0.15%磷酸水溶液75:25, 检测波长350nm,柱温40°C。
[0010] 对照品溶液制备:取毛蕊花糖苷,木犀草素和5, 4'-二羟基-3, 7, 3'-三甲氧基 黄酮对照品适量,精密称定,加75%甲醇溶解分别约制成每I mL各含毛蕊花糖苷1. 48啤、 木犀草素0.05 mg和5,4'-二羟基-3, 7, 3'-三甲氧基黄酮0.13 mg的混合对照品溶液, 微孔滤膜(0.22 μ m)过滤即得。
[0011] 供试品溶液制备:取干燥裸花紫珠药材粉末约I. 〇g,精密称定,置于100 mL具塞 锥形瓶,精密加入75%甲醇50mL,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用 75%甲醇补足减失的重量,摇匀,0. 45 μ m滤膜滤过,取续滤液,即得。
[0012] 分别吸取对照品溶液、供试品溶液各5 μ L,注入液相色谱仪,测定,即得。
[0013] 该方法能够准确有效的测定裸花紫珠药材中毛蕊花糖苷、木犀草素及5, 4'-二 羟基-3, 7, 3'-三甲氧基黄酮三种有效成分的含量,可进一步提高裸花紫珠药材的质量标 准,确保裸花紫珠药材的质量和临床疗效。 1.线性关系考察 分别精密量取毛蕊花糖苷,木犀草素和5,4'-二羟基_3,7,3'-三甲氧基黄酮对照 品混合溶液为0. 2mL、0. 5mL、l. 0mL、2. 0mL、5. OmLUO. OmL置于10 mL容量瓶,加75%甲醇稀 释至刻度,摇匀即得系列对照品混合液①,②,③,④,⑤,⑥。在上述色谱条件下测定,精密 吸取5PL进样,测定峰面积,以浓度(X,Pg. mL-Ι)为横坐标,峰面积(Y)为纵坐标进行线性 回归,绘制标准曲线。结果表明,在该浓度范围内,3成分浓度与峰面积呈良好的线性关 系。
[0014] 表1线性关系试验结果
【主权项】
1. 裸花紫珠药材中毛蕊花糖苷、木犀草素、5,4'-二羟基-3, 7,3'-三甲氧基黄酮 三种有效成分含量的测定方法,采用高效液相色谱法,其特征在于:色谱条件与系统适用性 为:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,流动相为有机溶剂一酸性溶液,采用梯度洗脱,如 下: O-IOmin有机溶剂比例为10%~50% ; 10-20min有机溶剂比例为20%~60% ; 20-30min有机溶剂比例为25%~70% ; 30-40min有机溶剂比例为30%~80% ; 40-50min有机溶剂比例为35%~80% ; 50-60min有机溶剂比例为40%~80%, 酸性溶液浓度为〇-〇. 3%,检测波长320-360nm,柱温25°C -40°C。
2. 如权利要求1所述测定方法,其中流动相中有机溶剂为甲醇或乙腈,酸性溶液为磷 酸或乙酸或甲酸。
3. 如权利要求1所述测定方法,其中酸性溶液浓度为0. 15%。
4. 如权利要求1所述测定方法,其色谱条件与系统适用性优选为以下条件:用十八烷 基硅烷键合硅胶为填充剂,流动相为甲醇一0. 15%磷酸水溶液,采用梯度洗脱,如下: 0-5min甲醇一0. 15%磷酸水溶液38:62 ; 5-14min甲醇一0. 15%磷酸水溶液45:55 ; 14-23min甲醇一0. 15%磷酸水溶液60:40 ; 23-30min甲醇一0. 15%磷酸水溶液70:30 ; 30-35min甲醇一0. 15%磷酸水溶液75:25, 检测波长350nm,柱温40°C。
【专利摘要】本发明涉及裸花紫珠药材中毛蕊花糖苷、木犀草素、5,4′-二羟基-3,7,3′-三甲氧基黄酮三种有效成分含量的测定方法,属于医药领域。采用高效液相色谱法,其色谱条件与系统适用性为:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,流动相为有机溶剂—酸性溶液,采用梯度洗脱,酸性溶液浓度为0-0.3%,检测波长320-360nm,柱温25℃-40℃。本发明建立采用HPLC法同时测定裸花紫珠药材中多个有效成分含量的分析方法,方法可靠易操作,进一步提高裸花紫珠药材的质量标准,确保裸花紫珠药材的质量和临床疗效。
【IPC分类】G01N30-36
【公开号】CN104634903
【申请号】CN201310555020
【发明人】刘明生, 盛琳, 关薇薇, 董琳, 蔡金平
【申请人】海南医学院
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2013年11月11日
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