乳腺癌的诊断标志物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物医学和临床医学技术领域，更具体地本发明涉及一种可用于诊断 乳腺癌和/或乳腺癌预后的异常岩藻糖基化鞘糖脂。
【背景技术】
[0002] 糖脂是含有糖基的脂质，由糖的半缩醛羟基通过糖苷键与脂质相连而成。其非脂 部分为糖基，脂部分为鞘氨醇或甘油，而且糖脂可根据脂部分的构成而再分为鞘糖脂与甘 油糖脂，其中研究得较为深入的是糖鞘脂。鞘糖脂分子中的糖基数目不等。仅含一个糖基 的鞘糖脂统称脑苷脂。含多个糖基的鞘糖脂又分为两大类：不含唾液酸的中性鞘糖脂和含 有唾液酸的酸性鞘糖脂。
[0003] 鞘糖脂位于细胞膜脂质双分子层，非极性的碳氢长链埋在外侧脂层中，极性的糖 链伸展到胞外水相中，是哺乳动物细胞膜上的必需组成成分之一。细胞膜上的鞘糖脂与细 胞生理状况密切相关，参与细胞的多种生物学活动，其生物学功能非常复杂，在免疫应答、 细胞发育、细胞识别及分化中都发挥重要的作用。此外，鞘糖脂的组成，无论是神经酰胺部 分还是糖链部分，都表现出一定的种族、个体、组织以及同一组织内各部分细胞的专一性。 即使同一类细胞，在不同的发育阶段，鞘糖脂的组成也不同。正因为某些类型鞘糖脂是某 种细胞在某个发育阶段所特有的，所以组织器官中鞘糖脂的异常表达往往与各种疾病具有 明显的相关性，而鞘糖脂也常常被作为细胞表面标志物质。
[0004] 乳腺癌是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤。乳腺癌中99%发生在女性，男性仅 占1%。原位乳腺癌虽然不致命，但是由于乳腺癌细胞丧失了正常细胞的特性，细胞之间的 粘连作用变小，容易脱落，也因此非常容易扩散，游离的癌细胞可以随血液或淋巴液播散全 身，形成转移，危及生命。目前乳腺癌已成为威胁女性身心健康的常见肿瘤。全球乳腺癌发 病率自20世纪70年代末开始一直呈上升趋势。近年来，我国乳腺癌的发病率也呈现上升 的趋势。据国家癌症中心和卫生部疾病预防控制局2012年公布的2009年乳腺癌发病数据 显示：全国肿瘤登记地区乳腺癌发病率位居女性恶性肿瘤的第1位，女性乳腺癌发病率(粗 率)全国合计为42. 55/10万，城市为51. 91/10万，农村为23. 12/10万。然而，遗憾的是，目 前尚不完全清楚乳腺癌的发病机制。因此，目前对于乳腺癌的早期发现、早期诊断，是提高 疗效的关键途径。
[0005] 目前对于乳腺癌的早期诊断大部分还停留在影像学检验、组织病理学检验上，因 此急需发展一种生物学的分子诊断标志物。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是针对目前乳腺癌分子诊断标志物匮乏的情况下，发现和发展一种 新的生物学诊断标志物。这种标志物的发现，将进一步推动乳腺癌的早期诊断、治疗、以及 预后处理，具有重要的临床意义。
[0007] 为达此目的，本发明采用以下技术方案：
[0008] 在第一方面，本发明提供了异常岩藻糖基化鞘糖脂在制备用于诊断乳腺癌和/或 乳腺癌预后的药物中的用途，其中所述异常岩藻糖基化鞘糖脂中包含Fuc-LacCer结构，优 选地所述药物中包含以Fuc-LacCer结构为抗原或表位的抗体，更优选地，所述抗体为单克 隆抗体。
[0009] 在第二方面，本发明提供了 FUTl基因和/或FUT2基因在制备用于诊断乳腺癌和 /或乳腺癌预后的药物或试剂盒中的用途，其中所述FUTl基因的序列为SEQ ID NO: 1 ;所述 FUT2基因的序列为SEQ ID N0:2。
[0010] 本发明的FUTl基因和/或FUT2基因在制备用于诊断乳腺癌和/或乳腺癌预后的 药物或试剂盒中的用途中，所述药物或所述试剂盒包含可扩增FUTl基因和/或FUT2基因 的引物对。
[0011] 本发明的FUTl基因和/或FUT2基因在制备用于诊断乳腺癌和/或乳腺 癌预后的药物或试剂盒中的用途中，所述可扩增FUTl基因的引物对为：FUTl-F : GCAGGTTATGCCTCAGCG (SEQ ID NO:3) ；FUT1-R ：TCCATCGCCAGCAAACG (SEQ ID N0:4)〇
[0012] 本发明的FUTl基因和/或FUT2基因在制备用于诊断乳腺癌和/或乳腺 癌预后的药物或试剂盒中的用途中，所述可扩增FUT2基因的引物对为：FUT2-F : CGTTCAGATGCCTTTCTCCTTT (SEQ ID NO: 5) ；FUT2-R ：GGTCCCAGTGCCTTTGATGTTG (SEQ ID N0:6)。
[0013] 本发明的FUTl基因和/或FUT2基因在制备用于诊断乳腺癌和/或乳腺癌预后的 药物或试剂盒中的用途中，所述药物组合物或所述试剂盒还包含对照引物对：β-actin-F: CACCATTG GCAATGAGCGGTTCC (SEQ ID NO:7)； β-actin-R =GTAGTT TCGTGGATGCCACAGG (SEQ ID N0:8)。
[0014] 本发明的FUTl基因和/或FUT2基因在制备用于诊断乳腺癌和/或乳腺癌预后的 药物或试剂盒中的用途中，所述试剂盒还包含逆转录体系。
[0015] 本发明的FUTl基因和/或FUT2基因在制备用于诊断乳腺癌和/或乳腺癌预后的 药物或试剂盒中的用途中，所述逆转录体系包含T重复寡核苷酸Ologo dT、逆转录反应液、 M-MLV逆转录酶、RNA酶抑制剂、dNTPs。
[0016] 本发明的FUTl基因和/或FUT2基因在制备用于诊断乳腺癌和/或乳腺癌预后的 药物或试剂盒中的用途中，所述试剂盒还包含PCR扩增体系。
[0017] 本发明的FUTl基因和/或FUT2基因在制备用于诊断乳腺癌和/或乳腺癌预后的 药物或试剂盒中的用途中，所述PCR扩增体系为SYBR Green聚合酶链反应体系。
[0018] 附图简述
[0019] 图1显示乳腺癌中的Fuc-LacCer高表达(A为癌旁对照组织的鞘糖脂质谱结构，B 为肿瘤组织的鞘糖脂质谱图谱，其中m/zll84即为Fuc-LacCer);
[0020] 图2显示Fuc-LacCer在乳腺癌中高表达（A质谱的相对定量统计学证明 Fuc-LacCer在乳腺癌中表达，B为ROC分析结果证明Fuc-LacCer同Globo-H -样在乳腺癌 中有很高的阳性率）
[0021] 图3为显示在多个乳腺癌细胞系中的FUTl和FUT2的表达水平都高于对照组的 PCR扩增结果
【具体实施方式】
[0022] 下面结合附图并通过【具体实施方式】来进一步说明本发明的技术方案。
[0023] 实施例1
[0024] 乳腺癌组织中Fuc-LacCer水平的的检测，样本从苏州大学附属第二人民医院获 得，彳目息如表1所不。
【主权项】
1. 异常岩藻糖基化鞘糖脂在制备用于诊断乳腺癌和/或乳腺癌预后的药物中的用 途，其中所述异常岩藻糖基化鞘糖脂中包含Fuc-LacCer结构，优选地所述药物中包含以 Fuc-LacCer结构为抗原或表位的抗体，更优选地，所述抗体为单克隆抗体。 2. FUT1基因和/或FUT2基因在制备用于诊断乳腺癌和/或乳腺癌预后的药物或试剂 盒中的用途，其中所述FUT1基因的序列为SEQ ID N0:1;所述FUT2基因的序列为SEQ ID N0:2。
3. 根据权利要求2中所述的用途，其特征在于，所述药物或所述试剂盒包含可扩增 FUT1基因和/或FUT2基因的引物对。
4. 根据权利要求3中所述的用途，其特征在于，所述可扩增FUT1基因的引物对为： FUT1-F ：GCAGGTTATGCCTCAGCG(SEQ ID NO:3)；FUT1-R ：TCCATCGCCAGCAAACG(SEQ ID N0:4)〇
5. 根据权利要求3或4中所述的用途，其特征在于，所述可扩增FUT2基因的引物对为： FUT2-F ：CGTTCAGATGCCTTTCTCCTTT (SEQ ID N0:5)；FUT2-R ：GGTCCCAGTGCCTTTGATGTTG (SEQ ID N0:6)。
6. 根据权利要求3至5中任一项所述的用途，其特征在于，所述药物组合物或所述 试剂盒还包含对照引物对：0 -actin-F :CACCAITG GCAATGAGCGGITCC (SEQ ID NO: 7 ); ^-actin-R ：GTAGTT TCGTGGATGCCACAGG (SEQ ID N0:8)〇
7. 根据权利要求3至6中任一项所述的用途，其特征在于，所述试剂盒还包含逆转录体 系。
8. 根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述逆转录体系包含T重复寡核苷酸 Ologo dT、逆转录反应液、M-MLV逆转录酶、RNA酶抑制剂、dNTPs，优选地所述逆转录体系还 包含焦炭酸二乙酯处理的水、M-MLV逆转录酶缓冲液。
9. 根据权利要求3至8中任一项所述的用途，其特征在于，所述试剂盒还包含PCR扩增 体系。
10. 根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述PCR扩增体系为SYBR Green聚合酶 链反应体系。
【专利摘要】本发明公开了异常岩藻糖基化鞘糖脂及编码其合成关键酶的基因FUT1和FUT2基因在制备诊断乳腺癌和/或乳腺癌预后的药物或试剂盒中的用途。
【IPC分类】G01N33-92, C12Q1-68, G01N33-574, G01N33-577
【公开号】CN104655859
【申请号】CN201310596407
【发明人】吴忠福, 李云森, 许秀坤
【申请人】苏州中赢医疗科技有限公司
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2013年11月21日