一种除虫脲中对氯苯胺含量的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及检测农药中杂质含量的方法，具体涉及一种使用高效液相色谱测定除 虫脲中对氯苯胺含量的分析方法。
【背景技术】
[0002] 除虫脲又名敌灭灵，灭幼脲1号，属苯甲酸基苯基脲类除虫剂，是20世纪70年代 发现的昆虫生长调节剂。杀虫机理是通过抑制昆虫的几丁质合成酶的合成，从而抑制幼虫、 卵、蛹表皮几丁质的合成，使昆虫不能正常蜕皮虫体畸形而死亡，对甲壳类和家蚕有较大的 毒性，对人畜和环境中其他生物安全，属低毒无公害农药。主要作用方式是胃毒和触杀。
[0003] 在除虫脲的生产过程中需要使用对氯苯胺，除虫脲产品中往往也含有极微量的对 氯苯胺，而对氯苯胺能经无损的皮肤吸收，引发人高铁血红蛋白血症，并对眼有刺激作用。 IARC对其致癌性评论为：对人可能致癌。因此，除虫脲产品中含有多少对氯苯胺杂质以及 如何在除虫脲中精确检测对氯苯胺的含量越来越受到关注。
[0004] 除虫脲以及其中的主要杂质由于沸点高，在气相色谱中大部分不出峰，用气相色 谱测定，分离的难度比较小，用气相色谱法内标法测定已有报道，但由于除虫脲可能会在气 化室部分分解生成对氯苯胺，从而造成对氯苯胺的测定结果偏高。
[0005] 中国专利CN102323342B公开了一种利用离子液体萃取，液相色谱分离测定水样 中的对氯苯胺、1-萘胺和4-氨基联苯，通过萃取富集后，进行液相色谱等度洗脱测定。
[0006] 液相色谱显然可以克服高温气化时造成的除虫脲分解而影响对氯苯胺的检测。但 是对于除虫脲来说，其主要成分除虫脲及合成除虫脲时产生的绝大多数杂质在液相色谱中 都会出峰，而且峰面积较对氯苯胺杂质来说要大很多，对对氯苯胺的含量检测来说影响很 大。
[0007] 另外，对氯苯胺与除虫脲及其他杂质的溶解性质相似，不能利用溶剂萃取等技术 提取浓缩以减少除虫脲及其他杂质的影响，因此从复杂的基质中测定极微量的对氯苯胺组 分，分离是技术瓶颈，其难点在于创建合适的分离方法和液相色谱条件，以实现对氯苯胺与 其他组分的分离进而定量测定。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的在于建立一种使用高效液相色谱测定除虫脲中对氯苯胺含量的分 析方法，以便能够准确测定除虫脲中对氯苯胺的含量。
[0009] 为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种除虫脲中对氯苯胺含量的测定方法，其包括以下步骤： 1) 用乙腈溶解对氯苯胺标准品，配制对照品溶液； 2) 称取除虫脲原药，加入二甲基甲酰胺，经超声波溶解后，再加入乙腈定容，混合均匀， 静置5分钟，取上清液经0. 45 μ m滤膜过滤后得到试样处理液； 3) 使用高效液相色谱仪分别测得对照品溶液和试样处理液的色谱峰面积，色谱条 件为：色谱柱固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相A为水，流动相B为乙腈，流速为 0. 8~1. 2mL/min梯度洗脱，流动相A的比例为60~10%，流动相B的比例为40~90%，柱温 20~30°C，检测波长237~247nm，进样量5~20 μ L，检测器为二级管阵列检测器； 4)根据对照品溶液的浓度及其色谱峰面积，试样处理液的色谱峰面积及除虫脲原药质 量，用外标法计算除虫脲原药中的对氯苯胺的含量。
[0010] 进一步的，所述步骤3)中的柱温为25°C。
[0011] 进一步的，所述步骤3)中的检测波长为242nm。
[0012] 进一步的，所述步骤3)中的进样量为20 μ L。
[0013] 进一步的，所述步骤3)中的流速为1.0 mL/min。
[0014] 本发明有以下优点： 1、 采用液相色谱在室温（20~30°C )下测定，避免除虫脲在高温下分解产生对氯苯胺，使 得测定结果偏高； 2、 试样用二甲基甲酰胺（DMF)完全溶解后，加入乙腈稀释，乙腈对除虫脲的溶解度小， 部分除虫脲析出，而其中的杂质留在溶液中，这样可以缓解除虫脲浓度太大对色谱柱的影 响； 3、 本发明的检测方法的平均回收率是110. 9%，满足当杂质含量小于0. 1%时可接受的 回收率范围为75%~125%的要求；同一个样品6次平行测定精密度（RSD)是2. 72%，满足含 量小于0. 1%时可接受的RSD为3. 3%的要求； 4、 本发明的检测方法可对除虫脲基质中极微量的对氯苯胺组分进行测定，其检测限和 定量限分别为 0.049 mg/L、0. 015 mg/L。
【附图说明】
[0015] 图1对氯苯胺光谱图； 图2实施例2条件下，对氯苯胺标准溶液色谱图； 图3实施例2条件下，对氯苯胺试样溶液色谱图； 图4对比例1条件下，对氯苯胺标准溶液色谱图； 图5对比例1条件下，对氯苯胺试样溶液色谱图； 图6对比例2条件下，对氯苯胺标准溶液色谱图； 图7对比例2条件下，对氯苯胺试样溶液色谱图； 图8对氯苯胺标准曲线。
【具体实施方式】
[0016] 下面结合附图和实施例对本发明进行详细说明。本发明保护范围不限于实施例， 本领域技术人员在权利要求限定的范围内做出任何改动也属于本发明保护的范围。
[0017] 实施例中，所用到的仪器和药品有： 高效液相色谱仪：安捷伦1100系列高效液相色谱仪，配有DAD (二极管阵列）检测器， 自动进样器，安捷伦工作站。
[0018] 色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的不锈钢色谱柱（250mmX4. 6mm， 5 μm)〇
[0019] 二甲基甲酰胺（DMF):分析纯；乙腈：色谱纯；水：娃哈哈纯净水；对氯苯胺：分析 纯；除虫脲试样：河北威远生化农药有限公司。
[0020] 实施例1 以对氯苯胺标准溶液（300mg/L)进行液相色谱检测，使用二极管阵列（DAD)检测器测 定光谱图，如图1所示，对氯苯胺在237nm ~247nm处有较强吸收，特别是在242nm有最大吸 收，此波长处也无干扰，因此将242nm确定为检测波长。
[0021] 实施例2 (1) 标样溶液的制备： 标准母液：称取对氯苯胺标准品0. 03g (精确至0. 0002g)于IOOmL容量瓶中用乙腈溶 解并稀释至刻度摇匀。（对氯苯胺浓度300 mg/L) 标准溶液1 :准确移取1.0 mL上述标准溶液母液于IOOmL容量瓶中用乙腈稀释至刻度 摇勾。（对氯苯胺浓度3 mg/L) 标准溶液2 :准确吸取1.0 mL标准溶液1于IOmL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度摇匀。（对 氯苯胺浓度〇. 3 mg/L) (2) 试样溶液的制备 称取除虫脲原药约0. 3g (精确至0. 0002g)于IOmL容量瓶中，加入少量二甲基甲酰胺， 超声溶解后，用乙腈稀释至刻度摇匀，静置5min。取上清液经0. 45 μ m滤膜过滤。
[0022] (3)分别取标准溶液1和试样溶液使用高效液相色谱仪分别测得色谱峰面积。
[0023] 液相色谱分析：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为水，流动相B为乙 腈，流速0. 8~1. 2mL/min梯度洗脱，流动相A的比例为60~10%，流动相B的比例为40~90% ; 柱温20~30°C ;检测波长242nm ;进样量5~20 μ L。流动相梯度洗脱程序见表1。
[0024] 表 1
【主权项】
1. 一种除虫脲中对氯苯胺含量的测定方法，其特征在于其包括以下步骤： 1) 用乙腈溶解对氯苯胺标准品，配制对照品溶液； 2) 称取除虫脲原药，加入二甲基甲酰胺，经超声波溶解后，再加入乙腈定容，混合均匀， 静置5分钟，取上清液经0. 45 y m滤膜过滤后得到试样处理液； 3) 使用高效液相色谱仪分别测得对照品溶液和试样处理液的色谱峰面积，色谱条 件为：色谱柱固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相A为水，流动相B为乙腈，流速为 0. 8~1. 2mL/min梯度洗脱，流动相A的比例为60~10%，流动相B的比例为40~90%，柱温 20~30°C，检测波长237~247nm，进样量5~20 y L，检测器为二级管阵列检测器； 4) 根据对照品溶液的浓度及其色谱峰面积，试样处理液的色谱峰面积及除虫脲原药质 量，用外标法计算除虫脲原药中的对氯苯胺的含量。
2. 根据权利要求1所述的一种除虫脲中对氯苯胺含量的测定方法，其特征在于所述步 骤3)中的柱温为25°C。
3. 根据权利要求1所述的一种除虫脲中对氯苯胺含量的测定方法，其特征在于所述步 骤3)中的检测波长为242nm。
4. 根据权利要求1所述的一种除虫脲中对氯苯胺含量的测定方法，其特征在于所述步 骤3)中的进样量为20 yL。
5. 根据权利要求1所述的一种除虫脲中对氯苯胺含量的测定方法，其特征在于所述步 骤3)中的流速为1. OmL/min。
【专利摘要】本发明涉及一种除虫脲中对氯苯胺含量的测定方法，其包括样品的预处理、液相色谱分析和外标法定量，其中色谱条件为：流动相A为水，流动相B为乙腈，流速0.8~1.2mL/min梯度洗脱，流动相A的比例为60~10%，流动相B的比例为40~90%；检测波长237~247nm；本发明的方法的专属性强，精密度好，可以快速准确地测定除虫脲中的对氯苯胺含量。
【IPC分类】G01N30-02
【公开号】CN104678009
【申请号】CN201510042822
【发明人】次素英
【申请人】河北威远生化农药有限公司
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2015年1月28日