一种参麦注射液中皂苷类成分的定量检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种参麦注射液中皂苷类成分的定量测定方法，属于药物分析领域。
【背景技术】
[0002] 参麦注射液是由红参和麦冬两味药材提取制成的复方制剂，具有益气固脱、养阴 生津等功能，主治元气亏损、气少神疲、汗出津伤、气喘欲脱等症，在心血管疾病与肿瘤辅助 治疗中疗效明确，并得到了广泛的临床应用。参麦注射液中含有皂苷类、黄酮类、糖类化合 物等活性成分，其中人参皂苷包括原人参二醇型皂苷（人参皂苷Rbl、Rb2、Rc、Rd)、原人参 三醇型皂苷（人参皂苷此、1^1、1^)、齐墩果酸型人参皂苷（人参皂苷1?0)及其他（人参皂 苷Rg2、Rhl、Rh2、Rg3、Rg5、Rg6、Rs4-Rs7、Rkl-Rk3)等成分，麦冬皂苷D为麦冬中的代表性 皂苷。
[0003] 参麦注射液现执行标准（国家药品标准WS3-B-3428-98-2010)规定了人参皂苷 Rbl、Rgl、Re的定性鉴别，以及总皂苷及人参皂苷Rbl、Rgl、Re的定量测定，其中采用比色法 测定总皂苷，专属性不强。鉴于参麦注射液中成分复杂且各种成分含量差别很大，而现有参 麦注射液中皂苷类成分的定量测定仅仅对少数几种人参皂苷进行测定，难以全面控制其质 量。因此，急需一种能够一次测定十多种皂苷类成分的定量检测方法，以加强参麦注射液的 质量控制，提尚广品的有效性及可控性。
【发明内容】
[0004] 本发明提供了一种参麦注射液中皂苷类成分的定量检测方法，其包括下列步骤： (a) 混合对照品溶液制备：精密称取人参皂苷Rbl、Re、Rgl，还包括人参皂苷Rgl、Re、Rf、Rhl、Rg2、Rbl、Rc、Rb2、Rb3、Rd或Rg3中至少一种的对照品适量，加50%甲醇制成混合 对照品溶液； (b) 供试品溶液制备：精密量取参麦注射液适量，制成供试品溶液； (c) 液相测定条件：十八烷基硅烷键合硅胶反相色谱柱，以乙腈-水为流动相进行梯度 洗脱，紫外检测器检测；其中，所述乙腈-水梯度洗脱的体积比为18%- 22%:82%- 78% (0 ~27min)、22 % - 26 % :78 % - 74 % (27 ~28min)、26 % - 31 % :74 % - 69 % (28 ~ 65min)、31%-39%:69%一 61% (65 ~80min)、39%-50%:61%一 50% (80 ~105min)、 50%一 60% :50%一 40% (105 ~115min)、60%- 75% :40%一 25% (115 ~125min)、 75% :25% (125 ~135min); (d) 样品测定：取混合对照品溶液和供试品溶液各20-30yL，注入液相色谱仪进行测 定，外标法计算样品中各皂苷类成分含量。
[0005] 本发明所述的定量检测方法，适用于参麦注射液中人参皂苷Rbl、Re、Rgl，还包括 人参皂苷Rgl、Re、Rf、Rhl、Rg2、Rbl、Rc、Rb2、Rb3、Rd或Rg3中至少一种的皂苷类化合物的 含量测定，或还包括结构类似的皂苷类化合物的含量测定。本领域的技术人员可以根据待 检测物质选择合适的对照品配制混合对照品溶液。
[0006] 在本发明的一些优选实施方案中，步骤（a)中所述混合对照品溶液制备方法包括 精密称取人参皂苷Rbl、Re、Rgl、Rgl、Re、Rf、Rhl、Rg2、Rbl、Rc、Rb2、Rb3、Rd和Rg3 适量， 加50%甲醇制成混合对照品溶液。
[0007] 在本发明的一些优选实施方案中，步骤（a)中所述混合对照品溶液中人参皂苷 Rgl、Re、Rf、Rbl、Rc、Rb2、Rb3、Rd或Rg3 的浓度为 0? 20mg/mL，人参皂苷Rhl或Rg2 的浓度 为 0? 10mg/mL。
[0008] 在本发明的一些优选实施方案中，步骤（c)中所述色谱条件为：流速为lmL/min; 柱温为30°C;进样量为20yL;检测波长为203nm。
[0009] 在本发明的一些优选实施方案中，步骤（b)中所述供试品溶液按照如下方法制 备：精密量取参麦注射液5mL，过固相萃取小柱（Alltech500mgX4mL)，依次用5mL水，5mL 30%甲醇，5mL甲醇洗脱，收集甲醇洗脱部分，并转移至5mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度， 摇匀，0. 45ym微孔滤膜滤过，即得。
[0010] 进一步地，在本发明的优选实施方案中，本发明所述的定量检测方法包括如下步 骤： (a) 混合对照品溶液制备：混合对照品溶液制备：精密称取人参皂苷他1、此、1^1，还包 括人参皂苷Rgl、Re、Rf、Rhl、Rg2、Rbl、Rc、Rb2、Rb3、Rd或Rg3中至少一种的对照品适量， 加50%甲醇制成混合对照品溶液，其中所述混合对照品溶液中人参皂苷Rgl、Re、Rf、Rbl、 Rc、Rb2、Rb3、Rd或Rg3的浓度为0? 20mg/mL，人参皂苷Rhl或Rg2的浓度为0?lOmg/mL; (b) 供试品溶液制备：精密量取参麦注射液5mL，过固相萃取小柱（Alltech 500mgX4mL)，依次用5mL水，5mL30%甲醇，5mL甲醇洗脱，收集甲醇洗脱部分，并转移至 5mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，0. 45ym微孔滤膜滤过，制成供试品溶液； (c) 液相测定条件：C18分析柱（250mmX4. 6mm，5ym)，以乙腈-水为流动相进行梯度洗 脱，流速为lmL/min，柱温为30°C，进样量为20yL，检测波长为203nm，其中，所述乙腈-水 梯度洗脱的体积比为 18%- 22% :82%- 78% (0 ~27min)、22%- 26% :78%- 74% (27 ~28min)、26%一 31% :74%一 69% (28 ~65min)、31%一 39% :69%一 61% (65 ~ 80min)、39 % - 50 % :61 % - 50 % (80 ~105min)、50 % - 60 % :50 % - 40 % (105 ~ 115min)、60%一 75% :40%一 25% (115 ~125min)、75% :25% (125 ~135min); (d) 样品测定：取混合对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪进行测定，外标法计 算样品中各皂苷类成分含量。
[0011] 更进一步地，在本发明的优选实施方案中，本发明所述的定量检测方法包括如下 步骤： (a) 混合对照品溶液制备：精密称取人参皂苷Rbl、Re、Rgl、Rgl、Re、Rf、Rhl、Rg2、Rbl、 此、他2、他3、1?(1和1^3的对照品适量，加50%甲醇制成混合对照品溶液，其中所述混合对 照品溶液中人参皂苷Rgl、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd或Rg3的浓度为0? 20mg/mL，人参皂 苷Rhl或Rg2的浓度为0?lOmg/mL; (b) 供试品溶液制备：精密量取参麦注射液5mL，过固相萃取小柱（Alltech 500mgX4mL)，依次用5mL水，5mL30%甲醇，5mL甲醇洗脱，收集甲醇洗脱部分，并转移至 5mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，0. 45ym微孔滤膜滤过，制成供试品溶液； (c) 液相测定条件：C18分析柱（250mmX4. 6mm，5ym)，以乙腈-水为流动相进行梯度洗 脱，流速为lmL/min，柱温为30°C，进样量为20yL，检测波长为203nm，其中，所述乙腈-水 梯度洗脱的体积比为 18%- 22% :82%- 78% (0 ~27min)、22%- 26% :78%- 74% (27 ~28min)、26%一 31% :74%一 69% (28 ~65min)、31%一 39% :69%一 61% (65 ~ 80min)、39 % - 50 % :61 % - 50 % (80 ~105min)、50 % - 60 % :50 % - 40 % (105 ~ 115min)、60%一 75% :40%一 25% (115 ~125min)、75% :25% (125 ~135min); (d)样品测定：取混合对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪进行测定，外标法计 算样品中各皂苷类成分含量。
[0012] 本发明能够同时测定参麦注射液中多种皂苷类成分，其适用于参麦注射液成品及 其生产过程中皂苷类成分的质量控制，尤其是含量测定，其在一定范围内进样量与峰面积 呈良好的线性关系，具有专属性好、干扰较少、灵敏度高、精密度好、重现性好、供试品溶液 稳定、方法测定准确、方法快捷准确、分析相对时问较短等特点，对浓度较高的人参皂苷类 成分（如人参皂苷Rbl)和浓度较低的人参皂苷类成分（如人参皂苷Rb3、Rf)均能同时进 行准确定量特点，且供试品处理方法简单，检测仪器常用易于操作，方法简便