抗体精制用阳离子交换色谱法载体及抗体医药的制程中生产的抗体单体与其聚合物的分离法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种抗体医药的精制步骤中所使用的阳离子交换色谱法载体及抗体 医药的制造过程中所生产的抗体单体与其聚合物的分离方法。
【背景技术】
[0002] 使用色谱法进行生物医药品的精制已众所周知，且利用各种分子间相互作用而进 行目标物与杂质的分离。作为例，有利用离子交换色谱法的静电相互作用的分离方法、利用 疏水色谱法的疏水性相互作用的分离方法及利用蛋白A色谱法等的对抗体的亲和相互作 用的分离方法等。
[0003] 在抗体医药的制造中，重要的是提供纯度高的制品，其精制工艺是将蛋白A色谱 法、阳离子交换色谱法及阴离子交换色谱法等组合而实施。其中，作为杂质之一的抗体聚合 物生产于培养或精制阶段，可认为是抗原辨识能力降低或产生副作用的原因，去除该抗体 聚合物于抗体医药制造中成为重要的管理项目。
[0004] 在生物技术与生物工程炬iotechnologyandBioengineering) 108,1494-1508， 2011 (非专利文献1)中报告有抗体聚合物的生成机制及聚合物去除的重要性等，但存在如 下问题：抗体聚合物在利用蛋白A色谱法的亲和精制步骤中无法去除。因此，在利用蛋白 A色谱法的精制步骤W后的步骤中将抗体与其聚合物进行分离而获得纯度高的抗体对抗体 医药厂商而言成为重要的课题。
[0005] 为了此种目的，例如在非专利文献1中提出有利用具有混合模式（mix-mode)型 配体的色谱法载体进行抗体与其聚合物的分离。另外，在J.化romatographyA，1217， 216-224, 2010 (非专利文献 2)及J.C虹omatographyA, 1216,902-909, 2009 (非专利文献 3)中提出有利用疏水（苯基）色谱法载体进行抗体与其聚合物的分离。但是，该些使用载 体的分离方法存在较多实用性课题，例如，成为目标物的抗体的吸附容量低，或者是在高盐 浓度下使用。
[0006] 阳离子交换色谱法是用W去除抗体聚合物、来自宿主的蛋白质、及蛋白A泄露，该 阳离子交换色谱法廉价，且在制造大量生物制剂时使用实绩高，从而在蛋白A色谱法W后 的精制步骤中成为非常重要的步骤。因此，期望利用阳离子交换色谱法处理尽量地减少在 抗体医药的制造过程中产生的抗体聚合物或来自宿主的蛋白质等杂质。
[0007] 关于阳离子交换色谱法对抗体精制的适应性，例如在国际公开第2010/127069 号手册（专利文献1)中揭示有膜岛素样生长因子-1受体（Insulin-1化eGrowth Factor-lReceptor，IGFIR)的精制，且揭示有对去除抗体聚合物等杂质有效的阳离子交换 体的使用。
[000引但是，在用于抗体医药制造的情况下，对于阳离子交换色谱法载体而言，不仅要求 与杂质的分离性能，就生产性的观点而言，还要求抗体的吸附量高，进而可在不压缩的情况 下W高流速进行处理。
[0009] 近年来，开发、贩卖有Capto(注册商标）S(通用电气医疗（GEhealthcare)公司制 造）、T0Y0PEA化（注册商标）GigaCapS(东曹公司制造）、Rractogel(注册商标）SEHicap 及Eshmuno(注册商标）S(W上由默克公司制造）、UNOsphere(注册商标）S(伯乐炬I0-RAD) 公司制造）、P〇R〇S(注册商标）XS(应用生物系统（AP化IEDBIOSYSTEM巧公司）等作为具 有高吸附容量的蛋白质精制用阳离子交换色谱法载体。
[0010] 例如，在日本专利特开平1-310744号公报（专利文献2)中揭示有具有接枝聚合 物作为配体的离子交换色谱法载体的制造方法。此处，记载有使用化actogel(注册商标） TSK册65(巧或Li化rospher(注册商标）二醇作为基础载体的阳离子交换色谱法及阴离 子交换色谱法、进而具有共聚物作为配体的色谱法载体的制造方法。但是，在本报告例中， 没有对抗体与其聚合物的分离进行研究。
[0011] 作为所述W外的具有接枝聚合物作为配体的阳离子交换色谱法载体的例，例如在 日本专利特表2011-529508号公报（专利文献3)中揭示有通过接枝聚合将共聚物作为配 体导入化actogel(注册商标）TSKHW65(M)的方法。在该公报中记载有如下情况；通过 使含有横酸的单体与不含有横酸的单体进行共聚合，而与仅使含有横酸的单体进行接枝聚 合的情况相比，接触时间2分钟内所测得的多株抗体的动态结合容量变高。但是，在该公报 中，没有明确地揭示共聚物的组成与动态结合容量的关系。另外，在该公报中，没有认识到 共聚物的强阳离子基与中性基的组成对抗体与其聚合物的分离所造成的影响的重要性，也 没有对其进行研究。
[0012] 在日本专利特表2010-528271号公报（专利文献4)中，揭示有使用具有疏 水性相互作用的单体，将具有离子交换基与疏水基两者的接枝聚合物作为配体导入 化actogel(注册商标）TSKHW65(M)而成的阳离子交换色谱法载体。在该公报中记载有 如下情况：通过使用该色谱法载体，即便在化C1为150mM的浓度条件下单株抗体也显示 76.Img/ml的动态结合容量（表3)。但是，在此处也没有对抗体与其聚合物的分离进行研 究。
[0013] 另一方面，在国际公开第2007/123242号手册（专利文献5)中记载有如下情况： W甲基丙締酸系聚合物为原料的使聚丙締酸作为配体结合于基础载体而成的载体与使駿 甲基直接结合于基础载体而成的载体相比，抗体单体与其聚合物的分离优异。但是，在制造 所述载体的情况下，必须事先合成聚丙締酸，而有可能无法应对如下课题，即提供抗体医药 厂商所期望的廉价的色谱法载体。另外，没有对抗体结合容量等其它重要的色谱法载体特 性进行研究，在实用性方面留有课题。
[0014] 如上所述，可有效率地将抗体单体与其聚合物进行分离且吸附性高的具有接枝聚 合物作为配体的阳离子交换色谱法载体尚未被人所知。
[0015] 现有技术文献
[0016] 专利文献
[0017] 专利文献1 ;国际公开第2010/127069号手册
[0018] 专利文献2 ;日本专利特开平1-310744号公报
[0019] 专利文献3 ;日本专利特表2011-529508号公报
[0020] 专利文献4 ;日本专利特表2010-528271号公报 [002U专利文献5 ;国际公开第2007