测定鲜竹沥中有效成分愈创木酚含量的方法

文档序号:8429343阅读:730来源:国知局
测定鲜竹沥中有效成分愈创木酚含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种药物的检测方法,具体设及测定鲜竹渐中有效成分愈创木酪含量 的方法。
【背景技术】
[0002] 鲜竹渐是《卫生部药品标准》中药材第一册收载的中药制剂,具有清热化疲功能, 用于肺热咳嗽疲多,气喘胸闷,中风舌强,疲诞塞盛,小儿疲热惊风,由于鲜竹渐现行质量标 准(《卫生部药品标准》中药材第一册)仅规定了常规检查,此标准无含量测定项检测,不 能有效地控制药品的内在质量,根据相关要求,需要对该制剂增订含量测定标准,W更好的 控制产品质量。
[0003] 鲜竹渐为禾木科植物竹的鲜杆经加热后自然渐出的液体,煮沸后,加适量防腐剂 制得,鲜竹渐的化学成分有多种氨基酸,酪类(甲酪、苯酪、愈创木酪)、有机酸类等,目前认 为愈创木酪为其止咳化疲活性成分,据此愈创木酪作为含量测定对象,适合作为含量测定 对象。
[0004] 因此,迫切需要研发一种测定鲜竹渐中有效成分愈创木酪含量的方法,来作为评 定鲜竹渐质量的标准具有重要的意义。

【发明内容】

[0005] 为克服上述现有【背景技术】的不足,本发明的目的在于提供一种能更好地控制鲜竹 渐产品质量的愈创木酪含量的测定方法。
[0006] 本发明的目的是通过如下措施来达到的;一种测定鲜竹渐中有效成分愈创木酪含 量的方法,包括W下步骤:
[0007] (1)对照品溶液的制备;取愈创木酪对照品适量,精密称定,加流动相制成每ImL 含5yg的溶液,即得对照品愈创木酪溶液;
[0008] (2)供试品溶液的制备;量取鲜竹渐25ml,用稀盐酸调抑值至1~2,用己離萃 取3次,第一次使用己離20ml,第二次使用己離20ml,第=次使用己離10ml,合并萃取液, 自然挥干己離,残留物用少量甲醇溶解,转移至5ml容量瓶,加甲醇定容至刻度,摇匀,用 0. 45 y m滤膜过滤,取续滤液,即得供试品溶液;
[0009] (3)用高效液相色谱测定;W十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,其中流动相流速 为0. 7mL/min,柱温为30°C,检测波长为220nm,理论板数按愈创木酪峰计不低于5000,分别 吸取对照品溶液和供试品溶液各20 y 1,注入液相色谱仪,测定,得供试品溶液每ImL含愈 创木酪不少于0. 25 y g为合格;
[0010] 所述流动相中各成分的体积比为;己膳;〇. 2%磯酸的水溶液=30 : 70。
[0011] 进一步地,使用高效液相色谱测定时,所用色谱柱的柱高250mm,内径4. 6mm,填充 剂粒径为5ym。
[0012] 本发明的有益效果在于;本发明使用高效液相色谱法对控制鲜竹渐产品质量的愈 创木酪含量进行测定,相比于现有标准中无含量测定项的检测,本发明能直接通过检测愈 创木酪的含量来控制药品的内在质量,而且本测定方法中,愈创木酪分离效果好,稳定性和 准确度高,重复性好,该样能更好地控制鲜竹渐产品的质量。
【附图说明】
[0013] 图1为愈创木酪对照品色谱图;
[0014] 图2为供试品色谱图;
[0015] 图3为阴性对照色谱图;
[0016] 图4为愈创木酪标准曲线。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合附图和实施例对本发明作进一步的详细描述,但它们并不构成对本发明 的限定,仅作举例而已。同时通过说明本发明的优点将变得更加清楚和容易理解。
[001引 实施例
[0019] 本发明提供一种测定鲜竹渐中有效成分愈创木酪含量的方法,包括W下步骤:
[0020] (1)对照品溶液的制备;取愈创木酪对照品适量,精密称定,加流动相制成每ImL 含5 y g的溶液,即得对照品愈创木酪溶液;
[002U (2)供试品溶液的制备;量取鲜竹渐25ml,用稀盐酸调抑值至1~2,用己離萃 取3次,第一次使用己離20ml,第二次使用己離20ml,第=次使用己離10ml,合并萃取液, 自然挥干己離,残留物用少量甲醇溶解,转移至5ml容量瓶,加甲醇定容至刻度,摇匀,用 0. 45 y m滤膜过滤,取续滤液,即得供试品溶液;
[0022] (3)用高效液相色谱测定;W十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,其中流动相流速 为0. 7mL/min,柱温为30°C,检测波长为220nm,理论板数按愈创木酪峰计不低于5000,分别 吸取对照品溶液和供试品溶液各20 y 1,注入液相色谱仪,测定,得供试品溶液每ImL含愈 创木酪不少于0. 25 y g为合格;
[0023] 所述流动相中各成分的体积比为;己膳;0. 2%磯酸的水溶液=30 : 70。
[0024] 使用高效液相色谱测定时,所用色谱柱的柱高250mm,内径4. 6mm,填充剂粒径为 Sum。
[0025] 相关试验报告如下:
[0026] 1、仪器与试药
[0027] DIONEX高效液相色谱仪,MVD170 yLC紫外检测器,电子天平(北京赛多利斯天平 有限公司),Aglilent Extend C18柱(250mmX4.6mm,5]im)。鲜竹渐口服液(湖北端正药 业有限公司生产,批号131001、131002、131003);愈创木酪对照品(中国食品药品检定研究 院,批号111510-200202,供含量测定使用);HPLC用水为双蒸水(实验室自己制备),己膳 为色谱纯,盐酸(开封东大化工有限公司试剂厂)、无水己離、甲醇(国药集团化学试剂有限 公司,批号为20131115)等均为分析纯。
[002引 1. 1对照品洛浓的制备
[0029] 取愈创木酪对照品适量,精密称定,加流动相制成每ImL含5yg的溶液,即得对照 品愈创木酪溶液;
[0030] 1. 2对照品贬备液的制备
[0031] 精密称取愈创木酪对照品8. 08mg,加入到25ml容量瓶,加甲醇定容,得浓度为 323. 2 y g/ml的愈创木酪对照品储备液。
[0032] 1.3供试品溶液的制备
[003引量取鲜竹渐25ml,用稀盐酸调抑值至1~2,用己離萃取3次,第一次使用己離 20ml,第二次使用己離20ml,第S次使用己離10ml,合并萃取液,自然挥干己離,残留物用 少量甲醇溶解,转移至5ml容量瓶,加甲醇定容至刻度,摇匀,用0.45 ym滤膜过滤,取续滤 液,即得供试品溶液。
[0034] 1. 4阴性对照溶液的制备
[0035] 按现行鲜竹渐制法(《卫生部药品标准》中药材第一册)制成不含鲜竹渐的阴性 对照品,按"供试品溶液的制备"项下的方法制成阴性对照溶液。
[0036] 2.方法与结果
[0037] 2. 1色谱系统适应性试验
[003引 Aglilent Extend C18 柱(250mmX4. 6mm,5 y m) ; W 己膳-0. 2 % 磯酸的水溶液 (30 : 70)为流动相;流速为0. 7ml/min ;柱温30°C;检测波长为220nm ;分别取制备好的对 照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液进样,进样量都为20 y以结果如图1至3,图1愈创木 酪保留时间在21. 521min ;与图1愈创木酪对照品保留时间相对应,图2中的愈创木酪色谱 峰与其他杂质峰完全分离,分离效果好,因此说明实验所采用的色谱柱、流动相及配比、保 留时间的选择恰当,色谱条件良好;图3中所呈现的色谱峰为防腐剂,及供试品色谱图中位 于愈创木酪色谱峰之后的巨型峰,阴性对照溶液在与对照品溶液和供试品溶液相同保留时 间处未显愈创木酪色谱峰,故认为对测定无干扰。
[0039] 2. 2标准曲线
[0040] 取愈创木酪对照品储备液,稀释制成系列浓度(1. 616 y g/ml、3. 232 y g/ml、 6. 464 y g/ml、16. 16 y g/ml、32. 32 y g/ml),精密吸取上述不同浓度的对照品溶液各20 y L, 注入高效液相色谱仪,照2. 1条件测定色谱峰面积,相关浓度与峰面积见表1,W对照品溶 液的浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,回归方程为;Y = 1. 3004X-0. 4386, r =0. 9996,见图4,结果表明愈创木酪在1. 616~32. 32 y g/ml线性关系良好。
[0041] 表1线性关系
[0042]
【主权项】
1. 测定鲜竹沥中有效成分愈创木酚含量的方法,其特征在于,包括以下步骤: 步骤一:对照品溶液的制备:取愈创木酷对照品适量,精密称定,加流动相制成每ImL 含5 y g的溶液,即得对照品愈创木酚溶液; 步骤二:供试品溶液的制备:量取鲜竹沥25ml,用稀盐酸调pH值至1~2,用乙醚萃 取3次,第一次使用乙醚20ml,第二次使用乙醚20ml,第三次使用乙醚10ml,合并萃取液, 自然挥干乙醚,残留物用少量甲醇溶解,转移至5ml容量瓶,加甲醇定容至刻度,摇匀,用 0. 45 y m滤膜过滤,取续滤液,即得供试品溶液; 步骤三:用高效液相色谱测定:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,其中流动相流速 为0. 7mL/min,柱温为30°C,检测波长为220nm,理论板数按愈创木酚峰计不低于5000,分别 吸取对照品溶液和供试品溶液各20 y 1,注入液相色谱仪,测定,得供试品溶液每ImL含愈 创木酷不少于〇. 25 y g为合格; 所述流动相中各成分的体积比为:乙腈:〇. 2%磷酸的水溶液=30 :70。
2. 根据权利要求1所述测定鲜竹沥中有效成分愈创木酚含量的方法,其特征在于所述 步骤三中,使用高效液相色谱测定时,所用色谱柱的柱高250mm,内径4. 6mm,填充剂粒径为 5 u m〇
【专利摘要】本发明公开一种测定鲜竹沥中有效成分愈创木酚含量的方法,它包括对照品溶液的制备步骤、供试品溶液的制备步骤和高效液相色谱测定步骤,确定产品每1ml含愈创木酚不得少于0.25μg,本发明使用高效液相色谱法对控制鲜竹沥产品质量的愈创木酚含量进行测定,相比于现有标准中无含量测定项的检测,能直接通过检测愈创木酚的含量来控制药品的内在质量,而且本测定方法中,愈创木酚分离效果好,稳定性和准确度高,重复性好,这样能更好地控制鲜竹沥产品的质量。
【IPC分类】G01N30-02, G01N30-06
【公开号】CN104749282
【申请号】CN201510160121
【发明人】余国斌
【申请人】湖北端正药业股份有限公司
【公开日】2015年7月1日
【申请日】2015年4月7日
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