一种利用CdTe量子点定量检测沙丁胺醇的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种利用CdTe量子点定量检测沙丁胺醇的方法，属于沙丁胺醇的检 测领域。
【背景技术】
[0002] 沙丁胺醇属于受体激动剂，能使动物体内的营养成分由脂肪向肌肉转移，表 现出营养再分配效应，进而调控动物体的物质代谢，增强脂肪分解，促进蛋白质合成，显著 提高胴体瘦肉率和饲料报酬。但是，β -受体激动剂易在动物组织，特别是内脏中蓄积残留， 其通过食物链进入人体后可引发肌肉震颤、心律失常、头痛等症状，严重者可能危及生命。 鉴于以上原因，我国已于1997年将沙丁胺醇、克伦特罗、莱克多巴胺等β-受体激动剂列为 禁止在饲料和养殖家畜饮用水中使用的药品。但是，目前仍有养殖者将其违法使用在畜牧 业中，引发药物残留，从而对消费者健康造成严重损害。
[0003] 中国专利CN104251898公开了一种膜透析-液相色谱串联质谱测定畜产品中多 种β-受体激动剂残留的方法，具体步骤如下：（1)样品前处理：准确称取5g粉碎好的样 品，加入20ml0. 02mol/L乙酸铵缓冲液（用乙酸调成pH4-5)，混匀，超声20分钟，8000转 离心5分钟，上清液移入透析袋中，将透析袋浸入盛有400-500ml0. 02mol/L乙酸铵缓冲液 (PH4-5)的棕色烧杯中，放入转子，将烧杯置于磁力搅拌器上进行透析，搅拌转速以杯内形 成涡旋带动透析袋转动，透析袋不下沉为准，杯外罩上不透明袋子，时间为6h。透析完成后 取出透析袋，将烧杯中的透析液调至pH至9-10,移入IL的梨形分流漏斗中，加入40ml溶 剂（环己烷：乙酸乙酯=4:1)，萃取2次，合并萃取液进行旋蒸，用0. 1 %甲酸水溶液（v/v) 定容成I. 0ml，供HPLC-MS/MS测定分析；（2)HPLC-MS/MS测定：采用外标法测定β -受体激 动剂的含量，液相色谱柱采用Thermo Hypersil Gold(2. ImmX IOOmrn, 3 μπι)，填料选自十八 烷基键合相硅胶，流动相为〇. 1 %甲酸水溶液A-乙腈Β，流速为0. 2ml/min，梯度洗脱条件 为：t = 0min，96% A，4% B ;t = 2min，96% A，4% B ;t = 5min，77% A，23% B ;t = 12min， 5% A,95% B ；t = 28min,44% A,56% B ；t = 24min,5% A,95% B ；t = 24. lmin,96% A, 4% B ;t = 32min，96% A，4% B ;质谱条件为：电喷雾电离源正离子扫描ESI+，多反应监测模 式MRM;电喷雾电压：5. 5kV;离子源温度：550°C，雾化气压力GSI :40psi ;辅助气流速GS2 : 60psi，气帘气压力CUR :40psi ;碰撞室入口电压EP :10V ;碰撞室出口电压CXP :13V，监测分 析物的离子对进行药物残留确证分析。
[0004] 上述方法先采用膜透析进行样品前处理，之后再采用液相色谱串联质谱测定畜产 品中多种β-受体激动剂，然而，上述检测方法存在样品前处理复杂、检测过程繁琐、分析 成本高、检测周期长、仪器昂贵、难以操作等问题，难以进行现场操作，在实际应用中受到限 制。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题在于现有技术中采用液相色谱串联质谱检测畜产品 中β-受体激动剂时，存在样品前处理复杂、检测过程繁琐、分析成本高、检测周期长、仪 器昂贵、难以操作等问题，从而提出一种操作简单、成本低并能够实现快速测定沙丁胺醇的 CdTe荧光传感器及其制备方法和应用。
[0006] 为解决上述技术问题，本发明的技术方案如下：
[0007] 一种用于沙丁胺醇检测的CdTe量子点的制备方法，包括如下步骤：
[0008] (1)分别称取0· 12g-0. 13g碲粉和0· 07g-0. 09g硼氢化钠，并加入l-2ml高纯水， 在冰水浴条件下进行搅拌反应，即得透明的NaHTe溶液；
[0009] (2)称取0. 1-0. 2gCdCl2 · 2. 5H20溶于200ml高纯水中，再加入100 μ L巯基乙酸， 形成乳白色悬浊液体系；
[0010] ⑶先用〇· Imol · T1NaOH溶液调节所述悬浊液体系的pH为10-12,预充氮气 3〇min，再在氮气保护下加入步骤（1)所述的NaHTe溶液，控制Cd 2+、HIV、巯基乙酸的摩尔比 为0. 8-1. 0:0. 4-0. 5:1. 5-2. 5,即得褐色的CdTe量子点前驱体；
[0011] (4)将所述的CdTe量子点前驱体转移至反应釜中，在140-160°C加热5-60min，经 冷却、洗涤、离心即得所述的CdTe量子点。
[0012] 一种利用所述的CdTe量子点定量检测沙丁胺醇的方法，其包括如下步骤：
[0013] (a)制作Stern-Volmer曲线的线性回归方程：
[0014] 配制一系列不同浓度的沙丁胺醇标准工作溶液，并将其分别移至5ml的比色管 中，向每个所述比色管中均加入I. 5ml浓度为I. 45X 10_3mol/L的CdTe溶液，用pH = 7. 4 的磷酸盐缓冲溶液定容，摇匀后用分子荧光光度计检测上述各个体系的荧光强度F ;同时， 取I. 5ml浓度为I. 45X 10_3mol/L的CdTe溶液加入到5ml的比色管中，用pH = 7. 4的磷酸 盐缓冲溶液定容，摇匀后用分子荧光光度计检测体系的荧光强度Ftl;
[0015] 以沙丁胺醇浓度为横坐标，以FcZF为纵坐标，即得沙丁胺醇对CdTe量子点荧光淬 灭的Stern-Volmer曲线的线性回归方程；
[0016] (b)分别取I. 5ml所述的CdTe溶液和含沙丁胺醇的样品液加入到5ml的比色管 中，用pH = 7. 4的磷酸盐缓冲溶液定容，摇匀使其充分反应后用分子荧光光度计检测得到 体系的荧光强度，与Stern-Volmer曲线的线性回归方程对照，即得所述样品液中沙丁胺醇 的含量。
[0017] 步骤（a)和步骤（b)中，所述荧光强度的检测条件均为：激发波长为365nm，激发 和发射狭缝宽度均为5nm。
[0018] 所述沙丁胺醇的标准工作溶液的浓度分别为0. 042X ΙΟ'Ο. 084X 10' 0· 126X 10-6、0· 168X 10-6、0· 210X 10-6、0· 252X 10-6、0· 420X 10-6、0· 630X 10-6、0· 84X 10' L 26Χ10_6、1· 68Χ10_6、2· 10X10_6mol/L。
[0019] 所述Stern-Vo Imer曲线的线性回归方程分为两部分，所述沙丁胺醇的浓度 范围为0. 042 X KT6-O. 420 X KT6时，所述的Stern-Volmer曲线的线性回归方程为 0. 8428 X 106C+1. 0434,线性相关系数为 0. 976 ;
[0020] 所述沙丁胺醇的浓度范围为 0· 420 X lCT6-2. IOX lCT6mol/L 时，Stern-Volmer 曲线 的线性回归方程为FcZF = 0. 1491 X 106C+1. 3078,线性相关系数为0.999。
[0021] 所述含沙丁胺醇的样品液为猪尿。
[0022] 所述猪尿经过如下预处理：
[0023] 取猪尿样品液，用NaOH溶液调节pH为7. 0,过滤并将收集滤液，即得待测样品液。
[0024] 本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：
[0025] (1)本发明所述的利用CdTe量子点定量检测沙丁胺醇的方法，通过将表面修饰 巯基乙酸的CdTe量子点与待测物质沙丁胺醇在磷酸盐缓冲液进行混合均匀，之后采用分 子荧光光度计对体系的荧光强度检测，即可实现对沙丁胺醇的痕量检测，这是由于在弱碱 性的溶液体系中，表面修饰了带负电的羧基的CdTe量子点与带正电荷的目标分子沙丁胺 醇通过静电相互作用形成新的复合体系，造成荧光淬灭，从而利用CdTe量子点荧光强度的 改变，实现对沙丁胺醇的定量检测，结果显示，沙丁胺醇在〇. 042 X KT6-O. 420 X l(T6m〇l/L 的范围内和0. 420X 10-6-2. 09X l(T6m〇l/L的范围内，沙丁胺醇的浓度与相对荧光强度Ftl/ F均呈现良好的线性关系，线性相关系数分别高达0. 976和0. 999,从而说明沙丁胺醇对 CdTe量子点的荧光淬灭具有较高的灵敏度和较宽的线性范围，本发明所述的利用CdTe量 子点定量检测沙丁胺醇的方法，实验操作非常简单，检测时间短，分析成本低，检出限较低 为2X 10_8mol/L，加标回收率较高为86. 6% -95. 8%，能够有效避免现有技术中采用液相色 谱串联质谱检测畜产品中β -受体激动剂时，存在样品前处理复杂、检测过程繁琐、分析成 本高、检测周期长、仪器昂贵、难以操作等问题。
[0026] (2)本发明所述的CdTe量子点定量检测猪尿中沙丁胺醇的方法，还对所述猪尿进 行预处理，以有效去除猪尿样品中金属离子的干扰。
【附图说明】
[0027] 为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，