一种hplc-esi-ms/ms法检测饲料中多种喹诺酮类药残的方法

文档序号:8471779阅读:303来源:国知局
一种hplc-esi-ms/ms法检测饲料中多种喹诺酮类药残的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于分析测试领域,特别涉及一种HPLC-ESI-MS/MS法检测饲料中多种喹 诺酮类药残的方法。
【背景技术】
[0002] 喹诺酮类,又称吡酮酸类或吡啶酮酸类,是人工合成的含4-喹诺酮基本结构的抗 菌药。常用药物有诺氟沙星、达氟沙星、环丙沙星等。此类药物对多种革兰阴性菌有杀菌作 用,广泛用于泌尿生殖系统疾病、胃肠疾病,以及呼吸道、皮肤组织的革兰阴性细菌感染的 治疗。随着我国畜牧业的飞速发展,以及全球生态环境不断恶化引起的各种动物疾病频发, 使得广大养殖户开始大量应用药物防治疾病或作为饲料添加剂以促进动物生长。然而,动 物在使用药物治疗后,药物的原形或其代谢产物可能蓄积、储存在动物的细胞、组织或器官 中,形成"兽药残留"。
[0003] 人类长期食用含较低浓度喹诺酮类药物的动物性食品、中成药保健食品等,容易 诱导耐药性的传递,从而影响该类药物的临床疗效。因此,喹诺酮类药物残留问题越来越引 起人们的关注。此外,兽残超标食品的出口也将严重影响我国在国际贸易中的声誉,影响出 口贸易的稳定健康发展。喹诺酮类、磺胺类、大环内酯类、硝基呋喃类等兽药在动物饲喂过 程中应用广泛,是国内外重点检测和监控的兽药,也是国际贸易间设置技术壁皇的重要指 标内容。联合国粮农组织/世界卫生组织食品添加剂专家联席委员会、欧盟都已制定了多 种喹诺酮类药物在动物组织中的最高残留限量。美国食品药品安全管理局于2005年宣布 禁止用于治疗家禽细菌感染的抗菌药物恩诺沙星的销售和使用。我国也于2002年规定了 环丙沙星、单诺沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、二氟沙星、恶喹酸和氟甲喹等7种喹诺酮类药物 在动物肌肉组织中的最高残留限量为10~500 μ g/kg。

【发明内容】

[0004] 本发明的目的在于:利用高效液相色谱-串联质谱开发了一种同时检测饲料中8 种喹诺酮类药残的方法,该方法具有快速、准确、简便、灵敏度高,适用范围广等特点,完全 满足饲料的检测要求,具有一定的推广应用价值。
[0005] 为解决上述问题,本发明采用如下方案:
[0006] 一种HPLC-ESI-MS/MS法检测饲料中多种喹诺酮类药残的方法,包括如下步骤:对 经前处理后的待测样品进行正离子MRM扫描,以环丙沙星-D8为内标,采用C18色谱柱分 离,以含甲酸的水-含甲酸的乙腈为流动相作梯度洗脱,对样品进行质谱检测。
[0007] 进一步地,所述多种喹诺酮选自二氟沙星、达氟沙星、沙拉沙星、氧氟沙星、恩诺沙 星、培氟沙星、环丙沙星或诺氟沙星中的至少一种;优选的为二氟沙星、达氟沙星、沙拉沙 星、氧氟沙星、恩诺沙星、培氟沙星、环丙沙星和诺氟沙星。
[0008] 进一步地,所述梯度洗脱条件为:0~311^11,8相从10%变到30%8,3~61^118 相从20%变为90%,811^11停止,将8相变到10%,运行51^11;流速:0.3111171^11,柱温 :30°〇; 其中,A相为含0. 1%甲酸的水溶液,B相为含0. 1%甲酸的乙腈溶液。
[0009] 进一步地,所述质谱检测条件为:电喷雾电离源正离子扫描ESI+,多反应监测模 式皿冊 ;干燥气:队,干燥气温度:300°0,干燥气流速:10171^11,雾化压力 :2.8\10午&,毛细 管电压:4000V。
[0010] 进一步地,所述待测样品的进样量为:5yL。
[0011] 进一步地,所述前处理的步骤为:准确称取〇. 50g样品,加入5. OOmL甲醇和水的混 合溶液,震荡混匀后,超声30min,有机滤膜过滤。
[0012] 进一步地,所述甲醇和水的混合溶液中,甲醇和水的体积比为1:1。
[0013] 进一步地,所述质谱检测中,目标组分MRM模式下质谱分析参数如下:
【主权项】
1. 一种HPLC-ESI-MS/MS法检测饲料中多种嗟诺酬类药残的方法,其特征在于,包括如 下步骤:对经前处理后的待测样品进行正离子MRM扫描,W环丙沙星-D8为内标,采用C18 色谱柱分离,W含甲酸的水-含甲酸的己膳为流动相作梯度洗脱,对洗脱液进行质谱检 测。
2. 如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述多种嗟诺酬选自二氣沙星、达氣沙星、 沙拉沙星、氧氣沙星、恩诺沙星、培氣沙星、环丙沙星或诺氣沙星中的至少一种。
3. 如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述梯度洗脱条件为;0~3min,B相从10 % 变到30 %B,3~6minB相从20 %变为90 %,8min停止,将B相变为10 %,运行5min;流 速;0. 3血/min,柱温;3(TC;其中,A相为含0. 1 %甲酸的水溶液,B相为含0. 1 %甲酸的己膳 溶液。
4. 如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述质谱检测条件为;电喷雾电离源正离子 扫描ESI+,多反应监测模式MRM;干燥气;馬,干燥气温度;300°C,干燥气流速;1化/min,雾 化压力;2. 8X105Pa,毛细管电压;4000V。
5. 如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述待测样品的进样量为;5yL。
6. 如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述前处理的步骤为:准确称取0. 50g样 品,加入5.OOmL甲醇和水的混合溶液,震荡混匀后,超声30min,有机滤膜过滤。
7. 如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述甲醇和水的混合溶液中,甲醇和水的体 积比为1:1。
8. 如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述质谱检测中,目标组分MRM模式下质谱 分析参数如下:

9. 如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述多种嗟诺酬为二氣沙星、达氣沙星、沙 拉沙星、氧氣沙星、恩诺沙星、培氣沙星、环丙沙星和诺氣沙星。
【专利摘要】本发明公开了一种HPLC-ESI-MS/MS法检测饲料中多种喹诺酮类药残的方法,采用常温超声的方法同时提取饲料样品中的多种喹诺酮类药物,并建立了高效液相色谱-三重串联四极杆质谱检测饲料中多种喹诺酮类药残的方法,不仅可以极大地缩短样品预处理时间,而且检测方法的回收率和重复性均满足饲料中兽药分析要求,回收率均在95%以上,RDS在6%以内,检测限可达50μg/kg。本发明操作简单,检测灵敏度高,且结果可靠,可实现饲料中8种喹诺酮类药残的快速、低成本检测。
【IPC分类】G01N30-02
【公开号】CN104792899
【申请号】CN201510205676
【发明人】王珊珊, 赵汝松, 王晓利, 宁凡盛, 苑金鹏, 陈相峰, 陈跃, 李磊, 张莉莉, 赵金
【申请人】山东省分析测试中心
【公开日】2015年7月22日
【申请日】2015年4月27日
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