一种利用考马斯亮蓝g-250测定可溶解木素含量的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及木素含量的测定，尤其涉及一种利用考马斯亮蓝G-250测定可溶解木素含量的方法。
【背景技术】
[0002]现有测定木素含量的方法大都是测定固体木质纤维素原料或纸浆中的木素，通常是将木质纤维素原料或纸浆用浓硫酸酸解，分别测定酸溶木素的和酸不溶木素的含量。对于酸溶木素，测定205nm或280nm吸光度值，根据经验公式计算酸溶木素的含量。但木质纤维素硫酸水解的过程产生的碳水化合物水解物如糠醛，在紫外光区也有吸收，会干扰木素含量测定的准确性。
[0003]现有测定溶解木素的方法包括木素衍生测定法、光谱学测定法和特定化学反应对木素改性测定法。木素衍生测定法是根据木素磺酸盐与有机碱反应产生沉淀，通过测定形成沉淀的量来计算木素磺酸盐的量，该方法测定的木素种类有限。紫外吸收光谱法是测定亚硫酸盐和硫酸盐制浆废液中的木素含量，该方法受到制浆废液中二氧化硫和碳水化合物降解产物的干扰。另外一种光谱学测定方法是荧光定量，该方法的缺点是成本较高。化学改性测定溶解木素的方法是木素中的酚型单元与酸化的亚硝酸钠反应在碱性条件下产生有色的醌单肟，其在430nm处有吸收，该方法会受到其它酚类物质的干扰，单次测定时间需要30分钟左右。但在公开的光谱学测定法中多采用在紫外光区进行测定，其易造成碳水化合物的降解产物对测定的干扰，经检索目前使用可见光区波长为595nm测定可溶解木素含量的方法还未见报道。
【发明内容】
[0004]针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供简便快捷且排除具有紫外吸收的物质特别是碳水化合物降解产物对可溶解木素含量测定干扰的一种利用考马斯亮蓝G-250测定可溶解木素含量的方法。
[0005]本发明所述利用考马斯亮蓝G-250测定可溶解木素含量的方法，步骤是:
[0006](I)取待测木素溶液，利用IM的NaOH将该溶液的pH调整至11?13，备用；若待测木素是粉末状固体，先用0.1M的NaOH溶解制备其饱和溶液，并调整其pH至11?13，备用；
[0007](2)以8000?100g对步骤⑴备用的溶液离心5?10分钟，然后取上清液，进行1X，20 X，30 X，40 X，50 X的浓度梯度稀释，分别取稀释后的溶液各100^1，加入51111的考马斯亮蓝G-250试剂，利用漩涡混匀器混匀15?20秒，待测；
[0008](3)取100 μ I的0.1M NaOH,加入5ml的考马斯亮蓝G-250试剂，利用漩涡混匀器混匀15?20秒，作为测试空白对照；
[0009](4)取步骤(I)待测样品或步骤(2)空白对照各3ml，放入用Icm光程的玻璃比色皿内，2?5分钟内在595nm处测定吸光度值；
[0010](5)待测样品的吸光度值减去空白对照的吸光度值为净吸光度值，根据事先绘制的标准曲线，查出净吸光度值对应的木素浓度值，即得出待测样品的木素浓度值；若上述待测样品进行了 NX稀释，换算时应根据稀释倍数先换算出原溶液的木素浓度值；
[0011]步骤(4)测定吸光度值时，若得到的待测样品净吸光度值大于0.8，应按照比例再进行浓度梯度稀释，并重复步骤(4)的测定步骤直至测得的净吸光度值小于0.8。
[0012]上述利用考马斯亮蓝G-250测定可溶解木素含量的方法中:步骤(I)备用溶液的pH优选为12±0.2。
[0013]上述利用考马斯亮蓝G-250测定可溶解木素含量的方法中:步骤(5)所述标准曲线绘制的方法是:用0.1M的NaOH配制lmg/ml的木素标准溶液，分别取0，10 μ 1，20 μ 1，40 μ I，60 μ I，80 μ I，90 μ I lmg/ml的木素标准溶液，用0.1M的NaOH补足体积至100 μ I ;然后分别加入5ml考马斯亮蓝G-250试剂，利用漩涡混匀器混匀15?20秒；依次取各溶液3ml，放入用Icm光程的玻璃比色皿内，2?5分钟内在595nm处测定吸光度值；各样品的吸光度值减去空白对照的吸光度值为净吸光度值，用净吸光度值做纵坐标，木素浓度值做横坐标绘制标准曲线。
[0014]本发明的有益效果是:
[0015]1.相应试剂配制简单，测定方法简便快捷，单次测定可在2?5分钟完成。
[0016]2.可避免在紫外光波长区测定时碳水化合物的降解产物对测定结果的干扰。
【附图说明】
[0017]图1:木素浓度在0-900 μ g/ml范围内的标准曲线。
【具体实施方式】
[0018]IM的NaOH的配制:称取40g氢氧化钠，蒸馏水溶解，冷却后，用容量瓶定容至1L。
[0019]0.1M的NaOH的配制:量取1ml IM的NaOH用容量瓶定容至100ml。
[0020]考马斯亮蓝G-250试剂的配制:称取10mg考马斯亮蓝G-250，溶于50ml 95%乙醇中，加入85% (m/v)的磷酸100ml，最后用蒸饱水定容到1000ml，滤纸过滤后使用。
[0021]实施例1
[0022](I)取待测木素溶液，利用IM的NaOH将该溶液的pH调整至12，备用；
[0023](2)以9000g对步骤⑴备用的溶液离心5分钟，然后取上清液，进行1X，20 X，30X，40X，50X的浓度梯度稀释，分别取稀释后的溶液各ΙΟΟμΙ，加入5ml的考马斯亮蓝G-250试剂，利用漩涡混匀器混匀15秒，待测；
[0024](3)取100 μ I的0.1M NaOH,加入5ml的考马斯亮蓝G-250试剂，利用漩涡混匀器混匀15秒，作为测试空白对照；
[0025](4)取步骤(I)待测样品或步骤(2)空白对照各3ml，放入用Icm光程的玻璃比色皿内，2?5分钟内在595nm处测定吸光度值；
[0026](5)待测样品的吸光度值减去空白对照的吸光度值为净吸光度值，根据事先绘制的标准曲线(见图1)，查出净吸光度值对应的木素浓度值，即得出待测样品的木素浓度值。
[0027]上述实验中每个样品做三个平行。
[0028]实施例2
[0029](I)取待测粉末状固体木素，先用0.1M的NaOH溶解制备其饱和溶液，并调整其pH至13，备用；
[0030](2)以100g对步骤⑴备用的溶液离心5分钟，然后取上清液，进行1X，20 X，30X，40X，50X的浓度梯度稀释，分别取稀释后的溶液各ΙΟΟμΙ，加入5ml的考马斯亮蓝G-250试剂，利用漩涡混匀器混匀20秒，待测；
[0031](3)取100 μ I的0.1M NaOH,加入5ml的考马斯亮蓝G-250试剂，利用漩涡混匀器混匀20秒，作为测试空白对照；
[0032](4)取步骤(I)待测样品或步骤(2)空白对照各3ml，放入用Icm光程的玻璃比色皿内，2?5分钟内在595nm处测定吸光度值；
[0033](5)待测样品的吸光度值减去空白对照的吸光度值为净吸光度值，根据事先绘制的标准曲线(见图1)，查出净吸光度值对应的木素浓度值，即得出待测样品的木素浓度值；若上述待测样品进行了 NX稀释，换算时应根据稀释倍数先换算出原溶液的木素浓度值；
[0034]步骤(4)测定吸光度值时，若得到的待测样品净吸光度值大于0.8，应按照比例再进行浓度梯度稀释，并重复步骤(4)的测定步骤直至测得的净吸光度值小于0.8。
[0035]实施例3
[0036](I)取待测木素溶液，利用IM的NaOH将该溶液的pH调整至11，备用；
[0037](2)以8000g对步骤⑴备用的溶液离心10分钟，然后取上清液，进行1X，20 X，30X，40X，50X的浓度梯度稀释，分别取稀释后的溶液各ΙΟΟμΙ，加入5ml的考马斯亮蓝G-250试剂，利用漩涡混匀器混匀17秒，待测；
[0038](3)取100 μ I的0.1M NaOH,加入5ml的考马斯亮蓝G-250试剂，利用漩涡混匀器混匀17秒，作为测试空白对照；
[0039](4)取步骤(I)待测样品或步骤(2)空白对照各3ml，放入用Icm光程的玻璃比色皿内，2?5分钟内在595nm处测定吸光度值；
[0040](5)待测样品的吸光度值减去空白对照的吸光度值为净吸光度值，根据事先绘制的标准曲线(见图1)，查出净吸光度值对应的木素浓度值，即得出待测样品的木素浓度值；若上述待测样品进行了 NX稀释，换算时应根据稀释倍数先换算出原溶液的木素浓度值；
[0041]步骤(4)测定吸光度值时，若得到的待测样品净吸光度值大于0.8，应按照比例再进行浓度梯度稀释，并重复步骤(4)的测定步骤直至测得的净吸光度值小于0.8。
[0042]每个样品做三个平行。
【主权项】
1.一种利用考马斯亮蓝G-250测定可溶解木素含量的方法，步骤是: (1)取待测木素溶液，利用IM的NaOH将该溶液的pH调整至11?13，备用；若待测木素是粉末状固体，先用0.1M的NaOH溶解制备其饱和溶液，并调整其pH至11?13，备用； (2)以8000?100g对步骤(I)备用的溶液离心5?10分钟，然后取上清液，进行10 X，20 X，30 X，40 X，50 X的浓度梯度稀释，分别取稀释后的溶液各100^1，加入51111的考马斯亮蓝G-250试剂，利用漩涡混匀器混匀15?20秒，待测； (3)取100μ I的0.1M NaOH，加入5ml的考马斯亮蓝G-250试剂，利用漩涡混匀器混匀15?20秒，作为测试空白对照； (4)取步骤⑴待测样品或步骤(2)空白对照各3ml，放入用Icm光程的玻璃比色皿内，2?5分钟内在595nm处测定吸光度值； (5)待测样品的吸光度值减去空白对照的吸光度值为净吸光度值，根据事先绘制的标准曲线，查出净吸光度值对应的木素浓度值，即得出待测样品的木素浓度值；若上述待测样品进行了 NX稀释，换算时应根据稀释倍数先换算出原溶液的木素浓度值； 步骤(4)测定吸光度值时，若得到的待测样品净吸光度值大于0.8，应按照比例再进行浓度梯度稀释，并重复步骤(4)的测定步骤直至测得的净吸光度值小于0.8。
2.根据权利要求1所述利用考马斯亮蓝G-250测定可溶解木素含量的方法，其特征在于:步骤⑴备用溶液的pH为12±0.2。
3.根据权利要求1所述利用考马斯亮蓝G-250测定可溶解木素含量的方法，其特征在于:步骤(5)所述标准曲线绘制的方法是:用0.1M的NaOH配制lmg/ml的木素标准溶液，分别取 0，10 μ 1，20 μ 1，40 μ 1，60 μ 1，80 μ 1，90 μ I lmg/ml 的木素标准溶液，用 0.1M 的 NaOH补足体积至100 μ I ;然后分别加入5ml考马斯亮蓝G-250试剂，利用漩涡混匀器混匀15?20秒；依次取各溶液3ml，放入用Icm光程的玻璃比色皿内，2?5分钟内在595nm处测定吸光度值；各样品的吸光度值减去空白对照的吸光度值为净吸光度值，用净吸光度值做纵坐标，木素浓度值做横坐标绘制标准曲线。
【专利摘要】本发明公开了一种利用考马斯亮蓝G-250测定可溶解木素含量的方法，是取待测木素溶液，先用1M的NaOH将该溶液的pH调整至11～13，再以8000～1000g对备用的溶液离心，然后取上清液，进行浓度梯度稀释，分别加入考马斯亮蓝G-250试剂，在595nm处测定吸光度值，根据事先绘制的标准曲线，查出净吸光度值对应的木素浓度值，即得出待测样品的木素浓度值。本发明方法简单快捷、可避免在紫外光波长区测定时碳水化合物的降解产物对测定结果的干扰，适用于研究木素降解实验中木素含量的测定及其他含木素样品中木素含量的测定。
【IPC分类】G01N21-31
【公开号】CN104819948
【申请号】CN201510256589
【发明人】黄峰, 王芳芳, 艾明强, 张玉忠, 卢雪梅
【申请人】山东大学
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2015年5月19日