一种生物样品中醇类化合物的分析方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种醇类化合物的祀上衍生化-基质辅助激光解析质谱-傅立叶变换 离子回旋共振质谱（MALDI-FTICRM巧分析方法，其特征是W嗟咐駿酸为衍生化试剂和基 质，在质谱的祀板上与醇类化合物反应，生成衍生化产物，同时过量嗟咐駿酸为基质，从而 提高MLDI离子化效率，经基质辅助激光解析-傅立叶变换离子回旋共振质谱分析醇类化 合物。
【背景技术】
[0002] 醇类化合物如胆固醇、脂肪醇、维生素A、类固醇激素、麦角酱醇等是人体内重要的 代谢物和抗真菌药物作用祀点，与多种代谢酶的功能相关。该些化合物的含量变化可W反 应疾病和人体内代谢酶的异常，例如，人体内胆固醇含量变化与阿尔茨海默病，冠屯、病等多 种疾病相关；人体中脂肪醇含量与Sjogren-Larsson综合症，DHAP合酶缺乏等疾病相关；真 菌细胞的酱醇代谢是抗真菌药物作用祀点和真菌耐药机制之一。因此，对生物样本（如血 浆，尿液、毛发、细胞）中醇类化合物进行定性和定量分析对研究许多生理变化、疾病诊断 和药物筛选有非常重要的作用。
[0003] 生物样本（如尿液、毛发、细胞）中醇类化合物的分析方法主要是高效液相色 谱-质谱（LC-M巧和气相色谱-质谱（GC-M巧，但前处理较复杂，需要分离纯化，不能满足 高通量筛选的需要，基质辅助激光解吸离子化一傅立叶变换离子回旋共振质谱（MALDI-FT ICRM巧由于其高分辨率，高通量和高灵敏度而具有极大的优势，简化繁琐的样品处理步 骤，FTMS的高分辨率使我们能够检测复杂样本中质荷比十分接近的化合物。MLDI-FTICR MS已被广泛应用于各种生物样本中内源性物质的定性和定量分析。
[0004] 在已有报道的的生物样本中醇类化合物的分析方法中，醇类化合物由于其较弱 的质子亲和力和较弱的酸性，不易电离，在MLDI和ESI中信号较弱，灵敏度较低，且易被 其他易电离的物质抑制。为了提高其质谱响应，已有各种不同的衍生化试剂被开发出，甜 菜醒（参见胖11，(：.口.；^3,0.尺.；]\&111^1?5，仇6.;(：〇〇1^3，尺.6.八1131.〇16111.2009,81，7618-7624.) ,2- [I比晚甲酸（参见Higashi,T.;化ibayama,Y.J. ;Shimada,K.J.Qiromatogr. B2007, 846, 195-201.)，2-氨基化嗦（Analyst, 2013, 138, 6270-6276)和丹横酷氯（参见 Tang,Z.M.;PeterGuengerich,F.Anal.Qiem. 2010,82, 7706 - 7712.)被用于衍生化醇类化 合物。但该些方法都存在缺点，包括前处理较复杂，过量的衍生化试剂需要除去，衍生化试 剂本身有较强的离子化效率，会抑制待测物的检测。
【发明内容】
[0005] 本发明要解决的问题是；提供一种基于嗟咐駿酸的基质衍生化方法结合MLDI-FT ICRMS用于定性分析生物样本中醇类化合物的方法，进一步说是一种通过祀上醋化反应， 将该些醇类化合物转化为嗟咐醋，过量的试剂发挥基质的作用，该样可W极大地提高目标 化合物在随后基质辅助激光解吸离子化一傅立叶变换质谱分析中的分析灵敏度和特异性， 无须复杂的样品前处理过程，用于高通量定性分析生物体样本中的醇类化合物，为一种快 速、高效、灵敏的分析方法，为进一步研究该类化合物在体内含量变化与生理功能、疾病的 关系奠定基础。
[0006] 为实现上述目的，本发明提供了一种生物样品中醇类化合物的分析方法，其包括 如下步骤：
[0007] 将经过前处理的样品用有机溶剂萃取后，取有机层进行干燥后加入嗟咐駿酸的己 膳溶液W及碳酷氯的二氯甲烧溶液，得到反应液；
[0008] 将所述反应液点样0. 5~1yL于激光解析-傅立叶变换离子回旋共振质谱分析 仪的祀上，在15~40°C下反应30~60分钟，W过量的嗟咐駿酸作为基质进行基质辅助激 光解析-傅立叶变换离子回旋共振质谱分析，所述嗟咐駿酸与待测的醇类化合物的摩尔比 为 20:1-50:1;
[0009] 通过对比高分辨数据分析图谱，获得醇类化合物的定性结果；
[0010] 其中，所述样品为含醇类化合物的生物体物质，所述醇类化合物为胆固醇、真菌麦 角酱醇、雄酬、维生素D3、胆酱烧醇、脱氨胆固醇、豆酱醇、脱氨采油酱醇、羊毛酱醇中的一 种。
[0011] 本发明的原理是；使嗟咐駿酸与醇类化合物的发生化学反应，利用反应产物进行 经基质辅助激光解析-傅立叶变换离子回旋共振质谱分析醇类化合物的嗟咐駿酸衍生产 物。反应式如图1所示。
[0012] 作为优选方案，所述嗟咐駿酸的己膳溶液中，嗟咐駿酸的浓度为2~5mg/mU体积 50-100ULo
[0013] 作为优选方案，所述嗟咐駿酸为嗟咐-3-駿酸、嗟咐-4-駿酸、嗟咐-5-駿酸、嗟 咐-6-駿酸、嗟咐-7-駿酸或嗟咐-8-駿酸。
[0014] 作为优选方案，所述碳酷氯的二氯甲烧溶液中，碳酷氯的体积分数为10~40%， 体积 50-100uL。
[0015] 作为优选方案，所述样品的前处理过程为：将样品加入1~2mL体积比1:1的氨氧 化钟/己醇溶液，在60~70°C下皂化水解1~化。
[0016]作为优选方案，所述基质辅助激光解析-傅立叶变换离子回旋共振质谱分析的 条件是：激光能量20~30 %，扫描范围；m/z100~1500,频率：1000Hz，斑点直径500~ 1000ym，数据采集均在正离子模式下进行；子离子扫描条件；碰撞能10-30eV。
[0017] 作为优选方案，所述样品为毛发或酵母细胞。
[001引与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
[0019] 1、用于在MLDI祀上特异性衍生化醇哲基，在质谱分析的过程中更有针对性，提 高待测物的离子化效率，增强了分析灵敏度（检测限0.2-0. 5ng/mL);
[0020] 2、祀上反应后无需复杂的样品前处理过程，反应后直接分析，实现高通量分析，操 作简便，高分辨率使我们能够检测复杂样本中质荷比十分接近的化合物；
[0021] 3、此发明所用的衍生化试剂简单，易得，标记部分相对较小（173化），结构也相对 简单，性质比较稳定，在质谱子离子扫描分析中碰撞能作用下可产生脱去一分子嗟咐駿酸 醋碎片离子[M-172]+，提高选择性，有利于增强定性分析的准确性。
[0022] 本发明被应用于定性分析各类生物样品中的醇类化合物，胆固醇、胆酱烧醇、真菌 麦角酱醇，雄酬，维生素D3,脱氨胆固醇、豆酱醇、谷酱醇、菜油酱醇，脱氨菜油酱醇、羊毛酱 醇等。通过此方法可W实现快速、高效、灵敏的检测醇类化合物。
【附图说明】
[0023] 通过阅读参照W下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、 目的和优点将会变得