一种羊肉快速检测卡及其检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种羊肉快速检测卡及其检测方法，是一种检测羊肉的检测器具，属于肉类检测技术领域。
【背景技术】
[0002]羊肉营养丰富，肉质鲜美，为全世界普遍的肉品之一。在中国更是大受欢迎，成为百姓羊肉肉质与牛肉相似，但肉味较浓。羊肉较猪肉的肉质要细嫩，较猪肉和牛肉的脂肪、胆固醇含量少。它既能御风寒，又可补身体，对一般风寒咳嗽、慢性气管炎、虚寒哮喘、肾亏阳瘘、腹部冷痛、体虚怕冷、腰膝酸软、面黄肌瘦、气血两亏、病后或产后身体虚亏等一切虚状均有治疗和补益效果，最适宜于冬季食用，故被称为冬令补品，深受人们欢迎。
[0003]由于羊肉市场广阔，羊肉造假案时有发生。俗话说“挂羊头卖狗肉”，而今挂羊头卖鸭肉、马肉、猪肉、狐狸肉、鼠肉、鸡肉等“羊肉造假”问题屡见不鲜，买到手里的羊肉到底是什么肉，相信不少人会产生这种疑问，但是从表面上又看不出来。目前都是采用基因检测，对实验仪器设备要求高，方法操作复杂，对操作人员的专业知识要求高，只能在专业实验室内进行，费时费力。因此建立一种准确可靠又快速方便的检测羊肉的分析方法是非常必要的。
[0004]虽然也有公开不需要特殊设备进行肉类鉴定的方法，但都是基于基因检测技术，例如:
[0005]对比文件CN102534035A公开了一种快速鉴别牛羊肉的试剂盒，试剂盒由I组具有高特异性的引物、2X等温反应缓冲液、BstDNA聚合酶和染料共同组成，是利用LAMP技术和动物线粒体DNA相结合对牛羊肉进行鉴定的方法。
[0006]对比文件CN102337328A公开了一种鉴别猪、牛、羊肉及其制品的方法，通过PCR技术和凝胶电泳技术，利用一对检测引物鉴别生鲜猪牛羊的线粒体DNA，从而将猪、牛、山羊、绵羊区分开来。
[0007]由于，羊肉中必定含有一定量的羊血，而羊血中的红细胞的90%由血红蛋白组成。一般，血红蛋白(Hb)由珠蛋白和亚铁血红素结合而成，而每种动物的血红蛋白有同源性，但也存在差异，因此每种动物的血红蛋白具有一些独特的抗原性。基于不同来源的动物血中的血红蛋白的抗原性差异，可建立特异的免疫学检测方法进行检测和鉴定。根据肉类中血红蛋白的不同，可进行肉类的区分。
[0008]本发明拟发明一种基于羊血红蛋白免疫学的检测方法，采取免疫学竞争法的原理，结合胶体金(或乳胶颗粒)标记技术和免疫层析法设计的一种快速检测试剂，能快速特异地检测肉类样品中的羊血红蛋白，从而判定肉类样品是否为羊肉。根据检测卡样品检测线(T)和质控线(C)的有无显色来判定样品中是否为羊肉。反应是利用羊血红蛋白而建立的一种检测方法，具有特异快速等优点。同时检测卡操作简单快速，无需特殊的仪器设备，适合现场操作。由于样本量需要少、简便快速，适用于大量样本的筛查。结果准确，灵敏度高，准确率大。
【发明内容】
[0009]本发明的目的在于提供一种能快速检测羊肉的检测器具，直接应用免疫学方法进行检测并确定肉类样品中是否为羊肉，克服了现有基因检测的操作繁琐等缺点，建立基于免疫学特异性的检测方法。
[0010]为解决本发明的技术问题，所采用的技术方案如下:
[0011]—种羊肉快速检测卡包括在长条扁平薄壳状的检测卡外壳和设置在外壳中的测试条；所述检测卡外壳表面有检测窗孔和加样孔；所述测试条是多层结构的窄条薄片，由支承背板上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫、胶体金膜、硝酸纤维素膜、和吸水膜所组成；所述支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜，所述支承背板一端叠置粘贴吸水膜，另一端叠置粘贴样品垫，所述吸水膜内端与所述样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在所述样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜；所述胶体金膜为含抗羊血红蛋白抗体胶体金标记的玻璃纤维膜；所述硝酸纤维素膜上依次设有一条检测带和一条质控带，所述检测带为含抗羊血红蛋白单克隆抗体的检测带；所述质控带为含抗鼠抗体的质控带；所述测试条置入检测卡外壳内，所述样品垫正对加样孔，所述硝酸纤维素膜正对检测窗孔。
[0012]所述胶体金膜也可以为乳胶颗粒膜，所述乳胶颗粒膜为含抗羊血红蛋白抗体乳胶颗粒标记的玻璃纤维膜。
[0013]优选地，所述检测卡外壳由壳盖与壳座两半联接构成，所述检测窗孔和加样孔开设在所述检测卡外壳壳盖上。
[0014]优选地，所述长条扁平薄壳状的检测卡外壳由长70mm，宽20mm，厚5mm，薄壳壁厚Imm的工程塑料制成。
[0015]优选地，所述测试条⑵片长60mm，片宽4mm，厚度2.5mm。
[0016]优选地，所述支承背板(21)，为聚氯乙稀塑料薄片，厚约0.5_，长60_，宽4_。
[0017]优选地，所述样品垫(22)为吸水玻璃纤维膜，厚0.5-0.8mm，长20mm，宽4臟。
[0018]优选地，所述胶体金膜(23)厚0.5-0.8mm,长5mm，宽4mm。
[0019]优选地，所述硝酸纤维素膜(24)厚0.5mm，长20_25mm，宽4mm ;所述检测带(241)和质控带(242)在所述硝酸纤维素膜(24)上横向间隔开排列。
[0020]优选地，所述吸水膜(25)为吸水纸，厚0.5-0.8mm，长16_20mm，宽4臟。
[0021]优选地，所述胶体金膜(23)、样品垫(22)及吸水膜(25)与所述硝酸纤维素膜(24)的搭接长度为1-2_。
[0022]本发明还涉及采用上述羊肉快速检测卡快速检测羊肉的检测方法，该检测方法是应用免疫学的方法直接检测肉类样品中羊血红蛋白的含量，具体处理方法如下:
[0023]①提取样品液:称取1.0g切碎的肉类样品，置于含有3ml反应液的5ml反应管中，混合均匀，室温下反应5分钟，得到待检测的样品液，供羊肉检测用；
[0024]所述反应液的配方为:NH4Cl8.29g，NaHCO3L 00g, Na2EDTA37.2mg,蒸馏水100ml ；
[0025]②检测卡检测:先将待检测的样品液从所述加样孔中滴注入所述羊肉快速检测卡的样品垫上，由于虹吸作用原理，带动待检测的样品液及胶体金膜所含的抗羊血红蛋白抗体胶体金标记物一起向所述硝酸纤维素膜扩散，5-10分钟内观察结果。
[0026]③检测结果对比:检测卡的主要反应是免疫学的抗原和抗体反应，若待检肉类样品为羊肉时，在所述加样孔中加入样品液后，样品液中的羊血红蛋白即与所述胶体金膜内用胶体金标记的抗羊血红蛋白抗体发生反应，并往所述硝酸纤维素膜迀移，在迀移过程中，再与所述检测带内含有的抗羊血红蛋白单克隆抗体反应，形成抗体-抗原-抗体的夹心复合物，从而所述检测带显棕红色；同时，游离的或结合的胶体金标记的抗羊血红蛋白抗体移动到所述质控带并与其中的抗鼠抗体反应，形成棕红色条带，从而显色；主要反应的结果有以下3种情况:
[0027]a、当所述检测带和所述质控带同时显现棕红色印迹带，表示检测结果为阳性，说明被检测样品是羊肉；
[0028]b、当所述检测带不显示颜色，只有所述质控带显现棕红色印迹，检测结果为阴性，说明被检测样品不是羊肉；
[0029]C、当所述检测带和所述质控带均不显色，则表明检测试条已失效。
[0030]本发明的有益效果:本发明能快速、特异地检测肉类样品中的羊血红蛋白，从而判定肉类样品是否为羊肉；本发明易于制备且节省检测费用，使用方便，检测快速，灵敏度高，结果准确。
【附图说明】
[0031]为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0032]图1为本发明羊肉快速检测卡外壳及测试条在外壳内的安置示意图；
[0033]图2为本发明的羊肉快速检测卡的测试条结构示意图；
[0034]图3为本发明的羊肉快速检测卡的测试条的硝酸纤维素膜上显示印迹示意图；
[0035]附图标注说明:
[0036]1、外壳；11、检测窗孔；12、加样孔；
[0037]2、测试条；21、支承背板；22、样品垫；23、胶体金膜(或乳胶颗粒膜)；24、硝酸纤维素膜；25、吸水膜；241、检测带；242、质控带。
【具体实施方式】
[0038]以下面结合附图以及具体实施例对本发明作进一步描述:
[0039]检测卡实施例1
[0040]一种羊肉快速检测卡，如图1所示，它是在检测卡外壳I中设置测试条2，检测卡外壳I为长条扁平薄壳状外壳，长70mm，宽20mm，厚5mm，薄壳壁厚1mm，由工程塑料制成。检测卡外壳I由壳盖与壳座两半联接构成，在检测卡外壳I壳盖上有检测窗孔11和加样孔12。测试条2放置在检测卡外壳I的壳座内。
[0041]如图2所示，测试条2是多层结构的窄条薄片，片长约60mm，片宽约4mm，厚度约
2.5mm。测试条2为多层结构，底层是支承背板21，为聚氯乙烯塑料薄片，厚约0.5mm，长60mm，宽4mm ;支承背板21中部叠置粘贴硝酸纤维素膜24，硝酸纤维素膜24厚0.5mm，长20-25mm，宽4mm。如图3所示，硝酸纤维素膜24上有二条间隔开的横向显示印迹带，二条显示印迹带中，一条是检测带241，含抗羊血红蛋白抗体；另一条是质控带242，含抗鼠抗体。支承背板21 —端部上叠置粘贴吸水膜25，支承背板21另一端部上叠置粘贴样品垫22，吸水膜25内端与样品垫22内端各自分别与硝酸纤维素膜24 —端搭接，在样品垫22与硝酸纤维素膜24的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜23，胶体金膜23是含抗羊血红蛋白抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜。胶体金膜23厚0.5-0.8mm,长5mm，宽4mm。样品垫22厚 0.5-0.8mm,长 20mm，宽 4mm。吸水膜 25 厚 0.5-0.8mm,长 16_20mm，宽 4mm。胶体金膜 23、样品垫22及吸水膜25与硝酸纤维素膜24搭接长度为l_2mm。吸水膜25材料是吸水纸，样品垫22材料是吸水玻璃纤维膜。
[0042]本发明羊肉检测卡用于快速特异地检测肉类样品中的羊血红蛋白，从而判定肉类样品是否为羊肉。
[0043]检测卡实施例2
[0044]本实施例与检测卡实施例1的区别在于，胶体金膜23为乳胶颗粒膜，乳胶颗粒膜为含抗羊血红蛋白抗体乳胶颗粒标记的玻璃纤维膜。
[0045]检测方法实施例1
[0046]本实施例的检测方法是应用免疫学的方法直接检测肉类样品中羊血红蛋白的含量，具体处理方法如下:
[0047]①提取样品液:称取1.0g切碎的肉类样品，置于含有3ml反应液的5ml反应管中，混合均匀，室温下反应