一种药材中总重金属含量检测的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种药材中总重金属含量检测的方法，具体涉及一种建立荧光探针标 记法药材中总重金属含量检测的数学模型的方法和利用模型测定药材中总重金属含量检 测的方法，属于中药材质量全检测领域。
【背景技术】
[0002] 重金属通常是指比重大于5g?cnT3的一类金属元素，如铜、镉、金、银、铅、锌、镍、 钴、铬和汞等。目前随着城市化工业化进程的加快，环境污染日益加剧，使中药材重金属含 量日益增高，中药材品质降低，严重危害人体健康。重金属可以通过空气、水、食物等渠道进 入体内，与体内有机成分、蛋白质、核糖、维生素、激素、生物酶等结合成或反应，使其丧失或 改变了原来的生理化学功能而产生病变或表现出毒性，从而对人体造成危害。
[0003] 目前，重金属的检测方法仍以传统的重金属检测方法如紫外分光光度法、电感耦 合等离子体质谱法和高效液相色谱法等为主，所用仪器基本为大型仪器。近年来对于特定 金属离子的定性或半定量的荧光检测方法有报道，但不能够快速、简便的进行总重金属的 定量测定。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种建立药材中总重金属含量检测的模型的方法，同时本发 明还提供了一种药材中总重金属含量检测的模型及其检测的方法，本发明能快速测定药材 中总重金属含量。
[0005] 本发明提供的建立药材中总重金属含量检测的模型的方法，包括如下步骤：
[0006] 1)取已知等梯度浓度的铅离子溶液，与HEPES缓冲溶液和荧光探针溶液混合得混 合液，然后分别测定所述混合液的荧光强度值，以所述混合液的荧光强度比值1 45(|/138(|为横 坐标，铅离子浓度为纵坐标，绘制出线性标准曲线I，得到线性标准曲线I的方程；
[0007] 2)将药材与HEPES缓冲溶液和荧光探针溶液混合反应后，测定反应后体系的荧光 强度值，将所述反应后体系的荧光强度比值1 45〇/138(1代入所述线性标准曲线I的方程，得到 所述药材中金属离子浓度C值；
[0008] 3)用现有方法测定与步骤2)中所述药材的同一批的药材中总重金属含量，以该 药材中总重金属含量为纵坐标，以步骤2)中所述药材中金属离子浓度C值为横坐标，绘制 出线性标准曲线II，得到线性标准曲线II的方程，所述线性标准曲线I的方程和所述线性 标准曲线II的方程即为所述药材中总重金属含量检测的数学模型。
[0009] 本发明中，步骤1)得到的所述线性标准曲线I的方程，需要分别考察其稳定性、 精密性和重现性。
[0010] 上述的方法，所述铅离子溶液为硝酸铅溶液；
[0011] 所述荧光探针溶液中荧光探针的结构式为式I所示。
[0012]
[0013] 上述的方法，所述铅离子溶液的浓度可为0~5. Omg/L，具体可为0、0. 5、1. 0、1. 5、 2. 0、2. 5、3. 0、3. 5、4. 0、4. 5和5. Omg/L，所述铅离子溶液的浓度梯度可为0~1. Omg/L，优选 为 0? 5mg/L;
[0014] 步骤1)中，所述荧光探针溶液的浓度可为1. 6~2mM，优选为1. 8mM;
[0015] 所述HEPES缓冲溶液的浓度为0.75M~1. 25M;
[0016] 所述药材为天麻、丹参、木通、金银花、茯苓、白芥子、栀子、厚朴、青蒿和鹿茸中的 至少6种；
[0017] 步骤2)中，所述荧光探针溶液的浓度可为1. 6~2mM，优选为1. 8mM;
[0018] 所述HEPES缓冲溶液（即羟乙基哌嗪乙硫磺酸的缓冲溶液）的浓度可为0.75~ 1. 25M，优选为 1. 0M。
[0019] 上述的方法，所述药材、所述荧光探针溶液和所述HEPES缓冲溶液的体积比可为 5 :3 ~5 :0? 5 ~1. 5,优选为 5 :4 :1。
[0020]步骤1)和步骤2)中，所述荧光强度值测定的激发波长可为340nm，所述荧光强度 值测定的扫描波长可为350~600nm。
[0021] 本发明中，步骤3)中，所述药材中总重金属含量采用紫外分光光度法测定。
[0022] 上述的方法，所述药材中总重金属含量检测的数学模型中，所述线性标准曲线I 的方程如下式II所示，
[0023] y= 0. 1165x+0. 5413 式II
[0024] 式II中，y为所述混合液的荧光强度比值145(|/138(|，x为所述铅离子的浓度；
[0025] 所述线性标准曲线II的方程如下式III所示，
[0026] z = 1. 2335x+28. 355 式III
[0027] 式III中，x为与步骤2)中所述药材中金属离子浓度C值，z为与步骤2)中所述药 材同一批的药材中总重金属离子浓度。
[0028] 本发明还提供了一种载体，其上记载了上述的方法建立的药材中总重金属含量检 测的模型。
[0029] 本发明进一步提供了一种药材中总重金属含量检测的方法，包括如下步骤：1)将 待测药材与ffiPES缓冲溶液和荧光探针溶液混合反应后，测定反应体系的荧光强度值；
[0030] 2)采用权利要求6所述药材中总重金属含量检测的数学模型，将所述待测药材的 荧光强度比值1 45(1/138(1代入所述线性标准曲线I的方程中，得到所述待测药材中金属离子 浓度C值；再将所述待测药材中金属离子浓度C值代入所述线性标准曲线II的方程中，即得 到所述测药材中总金属含量。
[0031] 上述的方法，所述待测药材可为天麻、丹参、木通、金银花、茯苓、白芥子、栀子、厚 朴、青蒿或鹿茸；
[0032] 所述荧光探针溶液中荧光探针的结构式为式I所示；
[0033]
[0034] 所述荧光探针溶液的浓度可为1. 6~2mM，优选为1. 8mM;
[0035] 所述HEPES缓冲溶液的浓度可为0.75~1. 25M，优选为1. 0M。
[0036] 上述的方法，所述待测药材、所述HEPES缓冲溶液和所述荧光探针溶液的体积比 可为5 :3~5 :0. 5~1. 5,优选为5 :4 :1;
[0037] 所述反应体系的荧光强度值测定的激发波长可为340nm，所述反应体系的荧光强 度值测定的扫描波长可为350~600nm。
[0038] 本发明药材中总重金属含量检测的数学模型应用于采用荧光探针测定药材中重 金属含量中。
[0039] 本发明中，药材中重金属离子与荧光探针结合，对药材进行荧光标定，利用荧光探 针的反应灵敏、快速的特点，建立了药材中重金属离子含量测定的模型，利用该模型测定待 测药材中总重金属含量。
[0040] 本发明具有以下优点：
[0041] 本发明中药材中重金属离子与荧光探针结合，对药材进行荧光标定，利用荧光探 针的反应灵敏、快速的优点，建立了药材中重金属离子含量测定的模型，利用该模型测定待 测药材中总重金属含量，对药材含量进行测定；本发明测定药材中总重金属含量准确，操作 简便、用时短。
【附图说明】
[0042] 图1为本发明实施例1中线性标准曲线I。
[0043] 图2为本发明实施例1中线性标准曲线II。
【具体实施方式】
[0044] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0045] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0046] 下述实施例中的仪器：LD-250中药打粉机（长沙长宏药机，中国），SB-800DTD超 声仪（宁波新芝生物科技有限公司，中国），WD-9403C紫外分析仪（北京市六一仪器厂，中 国），F-4500荧光光度计（日立，日本）。
[0047] 下述实施例中试剂：乙腈（分析纯），硝酸铅标准品；
[0048] 荧光探针结构如式I。
[0049]
[0050] 实施例1、药材中总重金属含量检测的数学模型的建立
[0051] -、溶液的配制
[0052] 荧光探针溶液的配制：精密称取荧光探针晶体0. 380g使其完全溶于乙腈中，置于 1L容量瓶中，然后加入乙腈定容，得到浓度为1. 8mM的荧光探针溶液，在紫外光下该荧光探 针溶液显绿色荧光。4°C