一种阿托伐他汀钙有关物质的测定方法

文档序号:9215757阅读:557来源:国知局
一种阿托伐他汀钙有关物质的测定方法
【技术领域】:
[0001] 本发明涉及一种药物杂质的测定方法,特别涉及一种HPLC法测定阿托伐他汀钙 有关物质含量的方法。
【背景技术】:
[0002] 阿托伐他汀钙,通常以三水合物形式存在,化学式如下:
[0004] 化学名称为:[R-(R*,R*,)]-2-(4_氣苯基)-(?(-二羟基_5_(1_甲基乙基)_3_苯 基-4-[(苯胺)羰基]-1-氢-吡咯-1-庚酸钙三水合物
[0005] 本品为白色或类白色结晶性粉末;无臭,味苦。
[0006] 本品在甲醇中易溶,在乙醇或丙酮中微溶,在水中极微溶解,在氯仿、乙醚中几乎 不溶或不溶。
[0007] 其鉴别方法如下:
[0008] 取本品,加甲醇制成每1ml中约含12(g的溶液,照分光光度法(中国药典1995年 版二部附录IV A)测定,在246nm的波长处有最大吸收。
[0009] 其主要适应症为:
[0010] 1.原发性高胆固醇血症和混合性高脂血症,降低升高的TC、LDL-C、ApoB和TG水 平。
[0011] 2.高胆固醇血症并有动脉粥样硬化的危险病人。
[0012] 其片剂的用法与用量
[0013]口服,每日一次,每次1片或遵医嘱。
[0014] 病人在接受阿托伐他汀钙治疗前及治疗过程中都要进行标准低胆固醇饮食。阿托 伐他汀钙的推荐起始剂量为l〇mg/日,剂量范围10~60mg/日,应用2~4周内应监测血 脂水平,剂量根据治疗目标和疗效反映作相应调整。
[0015] 现有技术中,已经报道了几种阿托伐他汀钙有关物质的测定方法,
[0016] 201110197172. 9阿托伐他汀钙胶囊有关物质的检测方法
[0017] 201310239929. 5阿托伐他汀钙制剂溶出度的测定方法
[0018] 200910087797. 2 -种用高效液相色谱法测定阿托伐他汀钙有关物质的方法
[0019] 但现有技术没有公开如何测定阿托伐他汀钙中一种特殊杂质E的方法。
[0020] 本发明人发现,阿托伐他汀钙在合成过程中混入了多种杂质,而且有些杂质难以 分离,这些杂质包括:
[0021] 杂质A :去氟阿托伐他汀钙
[0022] 杂质B :阿托伐他汀非对映异构体钙
[0023] 杂质C :二氟阿托伐他汀钙
[0024] 杂质D :阿托伐他汀内酯
[0025] 杂质E:阿托伐他汀缩合物,名称和结构式如下:
[0026] (4R-cis-6-[2-[2_(4-氟苯基)-5-(1_ 异丙基)_3_ 苯基 _4_[(苯胺)羰 基]-1H-吡咯-1-基]乙基]-2, 2-二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯,
[0028] 本发明经过研宄发现,现有技术杂质B分离困难,杂质E难以检测和分离,使用现 有技术无法控制好产品的质量,为此,本发明人对检测方法进行了研宄,找到一种对上述杂 质分离良好,精密度高,误差小的测定方法。

【发明内容】

[0029] 本发明的目的是提供一种阿托伐他汀钙有关物质的测定方法。
[0030] 所述测定方法,包括以下步骤:
[0031] 步骤1,供试品溶液的配制:
[0032] 取阿托伐他汀钙适量,加溶剂[乙腈_四氢呋喃-水(体积比1 : 1 : 2)]溶解 并定量稀释制成每lml中约含lmg的溶液,作为供试品溶液;步骤2,混合对照品溶液的配 制:
[0033] 精密称取杂质A对照品、杂质B对照品、杂质C对照品、杂质D对照品、杂质E对 照品与阿托伐他汀钙对照品各适量,加上述溶剂溶解并定量稀释制成每lml中约含杂质A 3 y g,杂质B、杂质C、杂质D、杂质E各2 y g与阿托伐他汀钙10 y g的溶液,作为混合对照 品溶液。步骤3,高效液相色谱HPLC分析:
[0034] 取供试品溶液与混合对照品溶液各20 y 1,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至梯 度洗脱程序结束,根据色谱图的峰面积计算各成分的含量。
[0035] 其中的色谱条件如下:
[0036]色谱柱:WondasilC18 (4. 6mmX 250mm,5 y m);
[0037] 流动相A:乙腈-四氢呋喃-醋酸盐缓冲液(取1. 54g醋酸按,加水800mL溶解后, 用冰醋酸调pH值至4. 0,再加水至1000mL)(体积比40 : 5 : 55),流动相B :乙腈-四氢 呋喃-醋酸盐缓冲液(体积比85 : 5 : 10);流速d.OmL.mirT1;
[0038]检测波长:244nm;
[0039]柱温:30°C ;
[0040]进样量:20yL;
[0041] 梯度洗脱程序见表1。
[0042] 表1梯度洗脱程序
[0044] 本发明的方法,是经过筛选获得的,筛选过程如下:
[0045] 1?仪器与试药
[0046] 1. 1仪器
[0047] Agilentl200高效液相色谱仪(美国);DAD检测器,四元泵,软件为B. 04. 01工作 站。
[0048] 1. 2 试药
[0049] 阿托伐他汀钙对照品(中国药品生物制品检定所,含量为95. 2% )、阿托伐他汀 钙原料药(批号:110301、110401、110402,本公司自制),杂质8和杂质(:对照品卬5?对照 品),杂质A、杂质D和杂质E对照品(本公司自制);乙腈、四氢呋喃、醋酸铵、冰醋酸为色 谱纯,水为超纯水。
[0050] 2?方法与结果
[0051] 2. 1 色谱条件:色谱柱:Wondasil C18 (4. 6mmX 250mm,5 y m);流动相 A :乙腈-四氢 呋喃-醋酸盐缓冲液(取1. 54g醋酸按,加水800mL溶解后,用冰醋酸调pH值至4. 0,再加 水至1000mL)(40 : 5 : 55),流动相B:乙腈-四氢呋喃-醋酸盐缓冲液(85 : 5 : 10); 流速:1. OmL ? mirT1;检测波长:244nm ;柱温:30°C ;进样量:20 y L ;梯度洗脱程序见下表。 [0052] 梯度洗脱程序
[0054] 2. 2供试品溶液的配制:取阿托伐他汀钙适量,加溶剂[乙腈-四氢呋喃-水(体 积比1 : 1 : 2)]溶解并定量稀释制成每lml中约含lmg的溶液,作为供试品溶液;
[0055] 2. 3混合对照品溶液的配制:精密称取杂质A对照品、杂质B对照品、杂质C对照 品、杂质D对照品、杂质E对照品与阿托伐他汀钙对照品各适量,加上述溶剂溶解并定量稀 释制成每lml中约含杂质A 3 y g,杂质B、杂质C、杂质D、杂质E各2 y g与阿托伐他汀隹$ 10 u g的溶液,作为混合对照品溶液。
[0056] 2. 4高效液相色谱HPLC分析:取混合对照品溶液20 y 1,注入液相色谱仪,洗脱顺 序依次为:杂质A、杂质B、阿托伐他汀、杂质C、杂质D、杂质E,阿托伐他汀保留时间约为22 分钟,各峰之间的分离度均应符合要求;调节检测灵敏度,使阿托伐他汀的峰高约为满量程 的20%。再精密量取供试品溶液与混合对照品溶液各20 y 1,分别注入液相色谱仪,记录色 谱图至梯度洗脱程序结束。
[0057] 2. 5系统适用性试验:精密称取杂质A对照品、杂质B对照品、杂质C对照品、杂 质D对照品、杂质E对照品与阿托伐他汀钙对照品各适量,加溶剂[乙腈-四氢呋喃-水 (1 : 1 : 2)]溶解并稀释制成每lmL中含阿托伐他汀钙lmg,杂质A、杂质B、杂质C、杂 质D、杂质E各10y g的溶液。色谱图见图1,出峰顺序依次为杂质A(19. 145min)、杂质 B(21. 060min)、阿托伐他汀(22. 230min)、杂质 C(24. 299min)、杂质 D(33. 566min)、杂质 E (44. 990min);阿托伐他汀与相邻杂质B和C的分离度分别为1. 56和2. 58,杂质A与杂质 B的分离度为2. 75,杂质C与杂质D的分离度为16. 70,杂质D与杂质E的分离度为45. 59。
[0058] 2. 6专属性试验取本品进行如下试验:(1)光照破坏:取光照(80001x) 10天后的 样品适量,加溶剂溶解并稀释制成每lmL中含lmg的溶液;(2)高温破坏:取高温(105°C ) 2 天后的样品适量,加溶剂溶解并稀释制成每lmL中含lmg的溶液;(3)碱破坏:取本品20mg, 加溶剂10mL溶解后,加0. 2mol吨4氢氧化钠溶液10mL,水浴回流6h,冷却,用盐酸调pH至 中性;⑷酸破坏:取本品20mg,加溶剂10mL溶解后,加0. lmol吨4盐酸10mL,放置45min, 用氢氧化钠试液调pH至中性;(5)氧化破坏:取本品20mg,置20mL量瓶中,加溶剂溶解后, 加双氧水10滴,水浴回流lOmin,加溶剂稀释至刻度。取上述溶液,按"2. 1"项下色谱条件 进样测定,色谱图见图2,结果表明,阿托伐他汀峰与光照、高温、酸、碱、氧化破坏产生的降 解产物峰均能有效分离,说明该色谱条件能有效分离杂质。
[0059] 2. 7溶液的稳定性试验取本品,加溶剂[乙腈-四氢呋喃-水(1 : 1 : 2)]溶解 并稀释制成每lmL中含lmg的溶液,分别在0、l、2、3、4、5、6h进行测定。结果表明,样品溶 液中阿托伐他汀钙峰面积和杂质峰面积在6h内稳定,有关物质量、个数未变。
[0060] 2. 8检出限和定量限精密称取阿托伐他汀钙对照品适量,用溶剂溶解并逐级稀释, 当浓度为lXKrtigiL'进样量为20yL时,S/N为3,故检出限为2ng。精密称取杂质A 对照品、杂质B对照品、杂质C对照品、杂质D对照品、杂质E对照品适量,用溶剂溶解并逐 级稀释,当浓度分别为 1. 5X10_3、、2. 0X10_3、2.
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