反相高效液相色谱检测阿哌沙班中间体ii的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种反相高效液相色谱检测阿嗽沙班合成过程中间体II的方法。
【背景技术】
[0002] 阿嗽沙班的化学名称为；1- (4-甲氧基苯基）-7-氧代-6- [4- (2-氧代-嗽 晚-1-基）苯基]-4, 5,6, 7-四氨-1H-化挫巧，4-C]-化晚-3-甲酯胺，分子式；C25H25N5O4， 分子量；459. 50,阿嗽沙班结构式如下所示：
[0003]
[0004] 阿嗽沙班目前未在中国境内上市销售；现已上市销售的阿嗽沙班产品有阿嗽 沙班片，阿嗽沙班片收载于国家食品药品监督管理总局《进口药品注册标准》，标准号： JX20120076。
[0005] 在阿嗽沙班合成过程中，采用起始物料I和起始物料II定向合成，通过反应制得 中间体I，再进一步获得中间体II。其中：
[0006] 起始物料I化学名称为；1-[4-(2-氧代嗽晚-1-基）-苯基]-3-(吗 咐-4-基）-5,6-二氨-2H-化晚-2-酬；分子式；C2化5N3O3;分子量；355. 43。
[0007] 起始物料II化学名称为；2-氯-2-[2-(4-甲氧基苯基）亚阱基]己酸己醋；分子 式；(：1孔3〔1馬〇3;分子量256. 69。
[0008] 中间体II化学名称为；1-(4-甲氧基苯基）-7-氧代-6-[4-(2-氧代嗽晚-1-基） 苯基]-4, 5, 6, 7-四氨-1H-化挫并化4-C]化晚-3-駿酸己醋；分子式；CsAsNA;分子量 488.54。
[0009] 中间体II是合成过程中对成品质量起倒重要作用的关键产物，其结构式如下所 示：
[0010]
[0011] 在阿嗽沙班合成过程中，成品采用定向合成，中间II作为成品的前一步产物，因 工艺的稳定性原因，每批产品质量均存在一定的差异且会存在一些有机杂质，该些杂质的 存在会严重影响其合成产品的质量和用药安全，因此需要对中间体II进行检测和质量控 审IJ，W确保成品的质量。
[0012] 反相高效液相色谱是一种常用的检测方法，采用非极性或相对极性较弱的固定 相，W极性较强的溶剂作为流动相，常用于分离、检测非极性和极性较弱的化合物；反相 高效液相色谱在现代液相色谱中的应用最为广泛，据统计，它占整个高效液相色谱应用的 80%左右。
[0013] 阿嗽沙班及其中间体II均为极性较弱的化合物，通常采用反相高效液相色谱检 测其中的杂质，如；阿嗽沙班片质量标准中就是采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的反 相高效液相色谱进行检测阿嗽沙班片中的有关物质，该方法采用梯度洗脱，流动相配制复 杂，系统平衡时间较长，操作繁琐，用于中间体II的检测，出峰太快，不太适合中间体II的 质量控制。
[0014] 因此，需要开发一种检测阿嗽沙班中间体II的新方法。
【发明内容】
[0015] 本发明的目的在于提供一种反相高效液相色谱检测阿嗽沙班中间体II的方法。
[0016] 本发明提供的反相高效液相色谱检测阿嗽沙班中中间体II的方法，它包括W下 步骤：
[0017]a、制备供试品溶液；称取中间体II用流动相溶解并稀释，得到浓度为0.4~ 0. 6mg/ml的供试品溶液；
[0018]b、采用反相高效液相色谱对供试品溶液进行检测：
[0019] 其中，色谱条件如下：
[0020] 色谱柱的固定相：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
[0021] 流动相为甲醇、0. 025-0. 035mol/L磯酸氨二钢溶液，两者按体积比30% ;70%~ 40% ; 60 % 混合；
[0022] 检测波长为270nm~290nm;
[0023] C、按面积归一化法计算供试品中单个杂质和总杂质的含量。
[0024] 进一步的，步骤a中，供试品溶液的浓度为0. 5mg/ml。
[00巧]进一步的，步骤b中，色谱柱的规格；内径为4. 6mm，长度为150-250mm，填料粒径 为3. 5-5ym。优选的，步骤b中，色谱柱的规格；内径为4. 6mm，长度为250mm，填料粒径为 Sum。
[0026] 进一步的，步骤b中，色谱柱为WelchUltimateXB-C18。
[0027] 进一步的，步骤b中，所述0. 025-0. 035mol/L磯酸氨二钢溶液为0. 03mol/L磯酸 氨二钢溶液、0. 〇25mol/L磯酸氨二钢溶液或0. 035mol/L磯酸氨二钢溶液。
[0028] 进一步的，步骤b中，甲醇与0. 03mol/L磯酸氨二钢溶液的体积比为30% ;70%~ 40% ;60%;甲醇与0.025mol/L磯酸氨二钢溶液的体积比为30% ;70%~40% ;60%;甲醇 与0. 035mol/L磯酸氨二钢溶液的体积比为30% ;70%~40% ;60%。
[0029] 进一步的，步骤b中，甲醇与0. 03mol/L磯酸氨二钢溶液的体积比为35% ;65%。
[0030] 进一步的，步骤b中，柱温为30°C~40°C;流速为0. 8ml/min~1. 2ml/min。
[0031] 进一步的，步骤b中，柱温为30°C或35°C或40°C;流速为0. 8ml/min或1.Oml/min 或 1. 2ml/min。
[0032] 进一步的，步骤b中，检测波长为28化m。
[0033] 进一步的，步骤b中，进样量为20yl。
[0034] 本发明反相高效液相色谱检测阿嗽沙班中间体II的方法，中间体II与各杂质成 分之间分离良好，流动相组成简单。同时，本发明方法的检测结果准确、可靠，通过控制阿嗽 沙班合成过程中中间产品的质量，达到了进一步加强成品合成过程控制的目的。
[00巧]显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离 本发明上述基本技术思想前提下，还可W做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0036]W下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本发明的上述内容再作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于W下的实例。凡基于本发明上述内容 所实现的技术均属于本发明的范围。
【附图说明】
[0037] 图1实施例1本发明方法对样品初步的检测结果。
[003引图2实施例1对比试验方法对供试品溶液的检测结果。
[0039] 图3试验例3的标准曲线图。
[0040] 图4试验例4专属性试验的检测结果。其中，图4-(a)为高温破坏、图4-化）为光 破坏、图4-(C)为碱破坏、图4-(d)为酸破坏、图4-(e)为氧化破坏。
【具体实施方式】
[0041] 本发明【具体实施方式】中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。
[0042] 高效液相色谱仪（型号；LC-20AT二元累，生产厂家：日本岛津公司）
[004引 电子天平（型号：AUW220D，生产厂家；日本岛津公司）
[0044] 实施例1
[0045] 1、确定检测波长
[0046] 精密称取阿嗽沙班中间体II适量，用流动相（甲醇-0. 03mol/L磯酸氨二钢=35; 65)配制成浓度为20yg/ml的溶液，作为供试品溶液。
[0047] 取上述供试品溶液，在200皿~400皿波长范围内进行扫描，试验结果见表1。
[004引表1本发明的紫外扫描结果
[0049]
[0050] 试验结果表明，检测波长在270nm~290nm范围内，均适合本发明的高效液相色谱 检测方法；优选的，检测波长为280 +2nm。
[0051] 2、高效液相色谱检测方法
[0052] 采用反相高效液相色谱法进行检测：
[0053] 色谱柱的填充剂：色谱柱的型号为WelchUltimateXB-C18,规格为；内径为 4. 6mm，长度为250mm，填充剂粒径为5ym;
[0054] 流动相：甲醇-0. 03mol/L磯酸氨二钢（体积比为35倘）；
[00巧]柱温；35°C;
[0056]流速；1.Oml/min;
[0057]检测波长；280nm;
[0058]进样量；20ul。
[0059] 制备供试品溶液；称取阿嗽沙班中间体II约25mg，置于50ml量瓶中，加流动相 (甲醇-0. 03mol/L磯酸氨二钢=35 ;65)，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶 液。
[0060] 供试品溶液的检测结果见图1，中间体II保留时间为18. 886min，理论塔板数（按 中间体II计算）为49067,分离度为2. 176。上述反相高效液相色谱法检测供试品溶液，结 果为；单个杂质为0. 455%，总杂质为2. 118%。
[0061] 检测阿嗽沙班中间体II的有关物质可采用本发明反相高效液相色谱法。
[0062] 对比试验；采用反相高效液相色谱进行检测
[0063] 按照《进口药品注册标准》阿嗽沙班片有关物质检测方法：
[0064] 色谱柱的填充剂；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Watersxbridgeshield 化18,150X4. 6mm，3. 5ym或其他性能相当色谱柱）；
[006引流动相；W30mmol/L醋酸锭溶液-己膳（90;10)为流动相A，30mmol/L醋酸锭溶 液-己膳巧；95)为流动相B，按下表进行梯度洗脱；
[0066]
[0067]流速；1. 5ml/min;
[0068]检测波长；280nm;
[0069] 制备供试品溶液；称取阿嗽沙班中间体II约25mg，置于50ml量瓶中，加溶剂（己 膳-水=50 ;50)，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
[0070] 供试品溶液的检测结果见图2,中间体II主峰的保留时间为1. 005min，保留时间 太靠前，不能满足本品有关物质检测的需要。
[0071] 为了进一步说明本发明的有益效果，本发明提供W下试验例：
[0072] 试验例1流动相筛选试验
[0073] 选择不同的流动相进行筛选试验，其他色谱条件如下：
[0074] 色谱柱的填充剂：色谱柱的型号为Welch