用于诊断和监测糖尿病的唾液蛋白糖基化测试的制作方法
【专利说明】
[0001] 政府利益
[0002] 本发明是在美国国立卫生研究院授予的拨款/合同号R43DE020973下的政府支 持下作出的。美国政府在本发明中享有某些权利。
技术领域
[0003] 本文的实施方案设及糖尿病的领域，并且更加具体地设及对患有糖尿病前期、糖 尿病或者糖尿病并发症的受试者的诊断和监测。
【背景技术】
[0004] 见于糖尿病前期、妊娠糖尿病和确诊的糖尿病的升高的葡萄糖水平会影响在生物 体液中发现的蛋白质生物标志物。例如，血糖控制可能影响到直接的、非酶的蛋白质的糖 化，其中通过在葡萄糖分子的醒基和蛋白质中的赖氨酸残基的氨基之间形成席夫碱，而使 葡萄糖共价键连接于祀蛋白。然后，席夫碱经历Amadori重排和氧化而形成晚期糖基化 终产物（advancedglycationendpro化ct)。晚期糖基化终产物的一个例子是血红蛋白 AleOlbAlc)。化Ale的血液水平代表平在过去3个月的平均血糖炬G)水平，反映了运载血 红蛋白的红细胞的寿命。
[0005] 使用化Ale监测葡萄糖稳态产生了大量的问题，包括它不能反映BG中的短期变 化、对化Ale水平的显著遗传和非血糖的影响、W及化Ale水平和平均BG水平之间的关系 中的显著的年龄依赖性和种族差异。使用糖化白蛋白或果糖胺作为替代物提供反映更短的 响应时间的优势（例如：代表在过去2-4周的平均BG水平），但是，妨碍化Ale的效用的各 种因素对该些糖化蛋白和先前的BG水平之间的关系的影响仍是有问题的。
【附图说明】
[0006] 通过如下详细描述，结合附图，本公开的实施方案将更容易被理解。实施方案通过 举例而非限制的方式在附图的图示中示出。
[0007] 根据各种实施方案，图1A和1B是示出了基准化aseline)唾液糖基化与果糖胺 (图1A)和血红蛋白Ale(图1B)的关系的曲线图；
[0008] 根据各种实施方案，图2是示出了随着时间推移，受试者中的唾液糖基化的曲线 图，其中针对对10个参与者的研究日标绘了每周的唾液糖基化；
[0009] 根据各种实施方案，图3A、3B和3C是=幅示出了唾液糖基化和在21天的时段内 的平均BG、BGSD、W及平均血糖波动幅度（MAGE)的关系的曲线图。其中针对21天的平均 血糖（图3A)、血糖标准偏差（图3B)和研究时间为21天和28天的MAGE(图3C)，唾液糖 基化被标绘；
[0010] 根据各种实施方案，图4A、4B和4C示出21天的平均BG与唾液糖基化、果糖胺及 化Ale的比较。其中针对唾液糖基化（图4A)、果糖胺（图4B)W及研究28天的血红蛋白 Ale(图4C)，21天内的平均血糖被标绘；
[0011] 根据各种实施方案，图5A和5B示出具有低血糖变化性和高血糖变化性的受试者 的21天的平均血糖和果糖胺的相关性，其中平均血糖与具有低血糖变化性和高血糖变化 性的个体的果糖胺（图5A)及唾液糖基化（图5B)相关；
[0012] 根据各种实施方案，图6A和6B示出本文所述的唾液糖基化方法中所设及的两个 化学反应；生成醒的邻二醇的高舰酸盐氧化（图6A)，W及4-氨基-3-阱基-5-琉基1，2， 4-S挫（AHMT)与醒的反应（图她）；
[0013] 根据各种实施方案，图7A和7B是示出了唾液总糖基化板测定（salivarytotal glycos^ationplateassay)的准确性的两张图，比较了牛胎球蛋白标准曲线（图7A)与 唾液总糖基化（7B);
[0014] 根据各种实施方案，图8A和8B为示出固相测定法的例子的数字图像（图8A)和 曲线图（图8B);
[0015] 根据各种实施方案，图9A和9B为示出固相测定法的颜色变化的时间进程的数字 图像（图9A)和曲线图（图9B);
[0016] 根据各种实施方案，图10AU0B和10C示出了板测定法和浸溃片（dipstick)测定 法的比较，包括显示视觉测定法和板测定法的比较（图10A)、浸溃片测定法和板测定法的 比较（图10B)、W及浸溃片测定法、板测定法和CGMS样品的比较（图10C)的曲线图；
[0017] 根据各种实施方案，图11A和11B示出浸溃片测试的概要图（图11A)和双膜浸溃 片测试的例子的原理图（图11B);
[001引根据各种实施方案，图12A和12B示出S膜、一步的横向流动测试（lateralflow test)的例子的原理图（图12A)和用于解释试验结果的比色图表（图12B);
[0019] 根据各种实施方案，图13A和13B示出显示了具有偏高舰酸钢浓度为30mg/10mL 缓冲液、50mg/10mL缓冲液和lOOmg/lOmL缓冲液的S膜（一步）唾液测试条的S个例子的 比较和它们检测胎球蛋白的功效（W百分比反射率衡量）的表格（图13A)，W及显示阴性 和阳性对照的=膜唾液测试条的两个例子的数字图像。
【具体实施方式】
[0020] 在下面的详细说明中，参照构成本文一部分的附图，且在附图中通过图示方式示 出其中的公开可W被实施的方案。应该理解的是，在不背离本公开的范围的情况下，可W利 用其它实施方案，W及可W做出结构或逻辑的改变。因此，下面的详细描述不应被认为具有 限制意义，并且根据本公开的实施方案的范围由所附的权利要求及其等同物限定。
[0021] 可有助于理解本公开的实施方案的方式，将各种操作依次描述为多个离散的 操作。然而，描述的顺序不应被解释为暗示该些操作是有顺序依赖性的。
[0022] 所述描述可W使用基于视角的描述，例如上/下、前/后、和顶部/底部。该样的 描述仅仅是用来便于论述，并且没有试图限制本公开的实施方案的应用。
[002引为了本公开的目的，短语"A/B"的意思是A或B。为了本公开的目的，短语"A和/ 或B"的意思是"(A)、做或者（A和B)"。为了本公开的目的，短语"A、B和C中的至少一 个"的意思是"(A)、炬）、似、（A和B)、（A和C)、炬和C)或（A、B和C)"。为了本公开的目 的，短语"(A)B"的意思是"做或者（AB)"，即，A是可选要素。
[0024] 该描述可W使用短语"在实施方案中（inanembodiment)"或者"在多个实施方 案中（inembodiments)"，它们各自可W指一个或者多个相同或者不同的实施方案。此外， 如关于本发明的实施方案中所使用的术语"包含"、"包括"、"具有"等等是同义的。
[0025]为了便于评述本公开的各种实施方案，提供了特定术语的如下解释：
[0026]本文所用的术语"分析物"指的是试图检测或测量的原子、分子、分子组、或天然来 源或合成来源的化合物（例如，醒、糖脂或糖蛋白）。分析物可W包括，但不限于醒、抗体、药 物、激素、抗原、半抗原、糖蛋白、糖脂、碳水化合物、脱辅基蛋白、和辅因子。
[0027]本文所用的术语"生物样品"是指从植物或动物受试者获得的任何样品。如本文所 用，生物样品包括对检测受试者中的糖基化概况（glycosylationprofile)、蛋白质量、或 蛋白质的糖基化模式有用的所有临床样品，包括但不限于细胞、组织和体液，如；血液；血 的衍生物和组分，如血清；提取的胆汁；活检或手术切除的组织，包括例如未固定的、冷冻 的、固定在福尔马林中和/或嵌入石蜡中的组织；眼泪；粘液；唾液；牛奶；皮肤擦伤；表面 清洗；尿液；疲液；汗液；精液；阴道分泌物；来自溃瘍和/或其他表面出疹、水泡、脈肿、和/ 或组织提取物的液体；细胞或器官；脑脊液；前列腺液；脈；或骨髓穿刺液。生物样品也可W 是实验室的研究样品，如细胞培养的上清液。在特定的例子中，所述样品是尿液或唾液。所 述样品可W采用本领域技术人员所熟知的方法收集或获得。
[0028]本文所用的术语"化学氧化"是指设及有意使生物样本与化学氧化试剂（诸如唾 液样品）接触的过程。如本文所用，术语"化学氧化"排除了自然发生的氧化过程，例如当 生物样品暴露在氧气中（例如可能存在于环境空气中）时发生的那些氧化过程。相反，所 述术语包括源自与固体或液体氧化剂的有意接触的化学氧化过程。一般来说，该种化学氧 化导致样品中全部或大部分的唾液酸和/或岩藻糖被氧化，如存在于样品中的至少50%、 至少70%、至少90%、或甚至更多的唾液酸和/或岩藻糖被氧化。