一种鉴别蜂蜜中淀粉糖浆掺假的液质联用(hplc-ms/ms)测定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种蜂蜜中淀粉糖浆掺假的检测方法，具体是利用液质联用(HPLC-MS / MS)法鉴别蜂蜜中淀粉糖浆掺假的定性判定方法。属于食品掺假鉴别及食品质量控制范围。
【背景技术】
[0002]蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物混合后，经巢脾转化、脱水、存储酿造而成的天然甜物质，其主要的成分是葡萄糖和果糖，同时还含有多种氨基酸、微量元素、矿物质、酶类等活性物质成分，拥有“大自然中最完美的营养食品”的美誉。近年来，国内和国际市场对蜂蜜的需求量不断扩大，然而蜂蜜的产量难以满足市场的需求，在巨大经济利益的驱使下，蜂蜜品质差、掺假造假的现象层出不穷，蜂蜜的真实性问题也一而再成为人们关注的焦点。由于蜜源不同，蜂蜜的种类繁多，蜂蜜的成分和内部组分含量本就存在很大的变化范围。随着掺假技术的发展，掺入的物质和蜂蜜的成分和比例越来越接近有的甚至达到以假乱真的目的，这都对检测方法的准确度和灵敏度提出了不小的挑战。
[0003]液质联用技术将色谱对复杂样品的高分离能力与质谱的高选择性、高准确度、高灵敏度结合起来，使其相较于其他方法具有分离能力强、定性分析结果可靠、检测限低、分析时间快、自动化程度高等优点。本课题组已确立淀粉糖浆的高效液相色谱的低聚寡糖“指纹区”及特征“指纹峰”M作为蜂蜜中淀粉糖浆掺假的鉴别指标，建立了淀粉糖浆掺假蜂蜜的高效液相色谱法(201310728497.4)。该法操作简单、易推广、检测成本低，但该法用于判定的“指纹峰在处理低浓度掺假样品时保留时间易受到柱温、样品基质等影响发生漂移，不能准确的判定低掺假量的样品。基于已建立的蜂蜜中淀粉糖浆掺假的高效液相色谱法，针对特征的“指纹峰”M，本发明进一步建立了的淀粉糖浆掺假的液质联用(HPLC-MS / MS)测定方法。适合于所有蜂蜜品种的淀粉糖浆掺假的鉴定测定。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于针对目前蜂蜜中淀粉糖浆频繁掺假现状，找到一种前处理简单、准确度好且可较好满足实际检测需要的蜂蜜中淀粉糖浆掺假的检测方法，满足蜂蜜掺假淀粉糖浆鉴别及质量控制需要。
[0005]为了实现上述发明目的，本发明公开了一种蜂蜜中淀粉糖浆掺假的检测方法，包括样品前处理、液相分离、质谱检测三个步骤。该方法是以淀粉糖浆及掺入淀粉糖浆蜂蜜在液相色谱中麦芽六糖至麦芽七糖之间存在的“指纹峰”M的两个特征子离子671m / z和689m / z为特征检测峰的液质联用(HPLC-MS / MS)测定方法。通过差异化分析比较不同蜜源的纯天然蜂蜜和不同工艺、不同原料生产的淀粉糖浆，找出了淀粉糖浆的内源性特征标识物。通过高效液相分离制备、质谱二级优化得到该内源性特征标识物的两个特征的子离子:m / z=1013 — 671 和 m / z=1013 — 689,依此确立以 671m / z 和 689m / z 的两个离子峰为淀粉糖浆的特征检测峰的液质联用(HPLC-MS / MS)检测方法。
[0006]本发明技术方案为:
[0007]本发明建立了一种蜂蜜中鉴别淀粉糖浆掺假的液质联用(HPLC-MS / MS)测定方法，该方法包括以下的步骤:
[0008](I)样品的预处理
[0009]每克蜂蜜样品溶于2?8mL蒸馏水中，所得溶液用0.22?0.45 μ m滤膜过滤；或为每克蜂蜜样品溶解于2?SmL蒸馏水中，然后样品溶液转移至固相萃取小柱，并至样液完全流出后，再用2?6倍柱体积的乙腈或甲醇水溶液(10?30%，V / V)洗脱，收集洗脱液。将洗脱液用0.22?0.45 μ m滤膜过滤待测定。
[0010](2)高效液相分离:
[0011]①色谱柱:低聚糖分析柱；
[0012]②流动相:三蒸水；
[0013]③柱温:60?85 O;
[0014]④流速:0.4 ?1.5mL / min ；
[0015]⑤进样量:5?1yL;
[0016](3)质谱检测:
[0017]①离子源:电喷雾离子化电离源ESI，正离子监测即ESI+ ；
[0018]②扫描方式:选择离子检测SRM ；
[0019]③喷雾电压:3500?5000V
[0020]④雾化气温度:280?400°C
[0021]⑤雾化气压力:25?40psi
[0022]⑥雾化气流速(氮气):6?12L / min
[0023]⑦鞘气温度:250?400°C
[0024]⑧碰撞能量:δ0?65V
[0025]选择离子条件:正离子SRM扫描分析时，离子选择通道(Q1 / Q3):m /z=1013 — 671 和 m / z=1013 — 689。
[0026](4)结果判定:
[0027]高效液相色谱图中，根据麦芽六糖至麦芽七糖之间存在的“指纹峰(即保留时间18.5?19.5min)的两个特征子离子671m / z和689m / z作为特征检测峰,可判定蜂蜜中掺入淀粉糖浆。如果不存在该两个特征子离子，则未掺入淀粉糖浆。适合于所有蜂蜜品种的淀粉糖浆掺假鉴定。
[0028]本发明为鉴别蜂蜜中掺入淀粉糖浆的液质联用(HPLC-MS / MS)测定方法。其特点为样品前处理简便、准确度好且可较好满足实际检测需要的蜂蜜中淀粉糖浆掺假的定性检测方法。
【附图说明】
[0029]图1淀粉糖浆特征的“指纹峰” M
[0030]图2 “指纹峰”M的一级质谱图
[0031]图3果葡糖浆样品的HPLC-MS / MS总离子流图
[0032]图4市售假蜂蜜样品的HPLC-MS / MS总离子流图
【具体实施方式】
[0033]下面通过具体实施例对本发明的技术方案作进一步说明:
[0034]实施例1
[0035]1.样品前处理
[0036]称取Ig果葡糖浆样品，精确到0.0Olg。溶于2mL水中，所得溶液用0.45 μ m过滤膜过滤，待测。
[0037]2.高效液相分离:
[0038]a)色谱柱:三菱 MCI GEL CK04SS(10mm 1.D X 200mm);
[0039]b)柱温:80°C ;
[0040]c)流动相:三蒸水；
[0041]d)流速为:0.4mL / min ；
[0042]e)进样量:5uL ；
[0043]3.质谱检测:
[0044]a)离子源:电喷雾离子化电离源ESI，正离子监测即ESI+ ；
[0045]b)扫描方式:选择离子检测SRM ；
[0046]c)喷雾电压:4500V
[0047]d)雾化气温度:370°C
[0048]e)雾化气压力:30psi
[0049]f)雾化气流速(氮气):10L / min
[0050]g)鞘气温度:400°C
[0051]h)碰撞能量:60V
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