抑制类风湿因子干扰的胶乳增强免疫比浊试剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种免疫检测试剂，特别是一种抑制类风湿因子干扰的胶乳增强免疫 比浊试剂。
[000引 0. 01-0. 2 % (W/V)指每lOOml溶剂中添加0. 01-0. 2g溶质，本文中类似之处意见 同此之处。
【背景技术】
[0003] 胶乳增强免疫比浊法是在免疫比浊法基础上发展的一种测定人体液特种标志蛋 白含量的检测方法。其基本原理是；将待测物质相对应的具有高特异性、高亲和力抗体包被 至纳米胶乳微球上，当此微球与含有待测样本混合时，在合适的反应条件下，抗体与样本中 抗原特异结合，形成抗原-抗体-胶乳微粒复合物，在短时间内迅速聚集在一起，改变反应 液的散光或透光性能，并且在一定范围内，反应液吸光度值变化与待测样本中的抗原含量 成正比关系，利用标准品绘制标准曲线，便可根据样本吸光度值变化测定待测物含量。由于 抗体特异性识别抗原，所W该方法具有很好的检测特异性；纳米胶乳微球的引入使反应液 浊度变化更为显著，从而提高试验的灵敏度，能测定体液中微量蛋白含量；同时胶乳增强免 疫比浊法能利用普通生化分析仪进行检测，操作简单，容易实现自动化，不易受人为操作和 外界因素干扰，检测稳定性和重复性好，可快速、准确获得检测结果，对疾病早期诊断和治 疗具有重要临床意义。
[0004] 胶乳增强免疫比浊法常规检测的一个限制是易于受到由可能存在于测试样品 中的嗜异性抗体引起的干扰，尤其是类风湿因子引起的干扰。类风湿因子（rheumatoid factor,R巧是抗人IgG分子化片段上抗原决定族的特异性抗体，是W变性IgG为祀抗原 的自身抗体。在商业免疫类检测试剂中所采用的抗体大多是动物来源的IgG类抗体，化段 与人IgG的化段具有较高的同源性，能被RF识别并结合，所W在待测物质为阴性、RF阳性 的检测样本中，免疫检测试剂有可能被RF捕获产生信号，从而导致假阳性结果。
[0005] 免疫检测试剂研制中，减少类风湿因子或异嗜性干扰的方法通常有；（1)从样品 中去除干扰性的免疫球蛋白或使其失活。比如使用IgG固相吸附剂吸附样本中的类风湿因 子，或使用含有2-琉基己醇的稀释液稀释样本，W降解IgM型类风湿因子，但该会使检测操 作复杂化，并且有可能在去除干扰蛋白的同时也减少了待测物质的含量或活性。（2)使用减 少干扰的封闭剂，大多为IgG，市场上有许多商品化的封闭剂。但由于类风湿因子或异嗜性 抗体的多样化，W及各种产品所使用的抗体不同，目前尚未有一种产品可W有效消除所有 干扰，通常需要使用不同产品进行组合、筛选，不但增加工作量、挺高试剂成本，另一方面由 于使用多种不明成分的封闭剂，也不可控制地引入新的干扰检测结果的因素。（3)修饰测定 抗体W使其更不易与类风湿因子反应。目前最常使用的一种方法是将检测IgG抗体酶切去 除化片段，用F(油'）2替代完整的IgG，既保留其识别结合抗体的活性，又消除化的干扰， 减少试剂的非特异性反应。但在IgG的酶切、纯化制备工艺中会损失一部分抗体且对抗体 活性也有一定程度影响，提高试剂成本，更重要的是试剂制备过程进一步复杂，对控制试剂 批间差设置了不可逾越的障碍，从而限制了此类试剂在临床上的推广。
【发明内容】
[0006] 为解决上述问题，本发明公开的抑制类风湿因子干扰的胶乳增强免疫比浊试剂， 试剂组成简单，且具有良好的通用性，针对胶乳增强免疫比浊试剂具有较为广泛的通用性， 可W比较有效地消除大多数类风湿因子的干扰，提高检测结果的特异性和准确性。
[0007] 本发明公开的抑制类风湿因子干扰的胶乳增强免疫比浊试剂，包括试剂R1和试 剂R2,其中试剂R2包括抗体致敏的胶乳微粒，试剂R1的PH值为5. 5-6. 0。优选为试剂R1 的PH值为 5. 5-5. 7。
[000引本发明公开的抑制类风湿因子干扰的胶乳增强免疫比浊试剂的一种改进，试剂R1 还包括0.01-0. 2% (W/V)的蛋白变性剂。优选为试剂R1还包括0.01-0. 1 % (W/V)的蛋白 变性剂。
[0009] 本发明公开的抑制类风湿因子干扰的胶乳增强免疫比浊试剂的一种改进，蛋白变 性剂为十二烷基硫酸钢、尿素、盐酸脈中的任一。
[0010] 本发明方案中控制PH和加入蛋白变性剂是基于；类风湿因子或异嗜性抗体多为 多重特异性抗体，相较于一般抗体与抗原的专一地特异性结合反应，其对不同物种的检测 试剂抗体结合能力相对较弱，利用该种亲和力上的差异，适当降低检测反应抑值或加入适 量的蛋白变性剂均可W解离蛋白间的相互作用，能在不影响检测抗体与待测抗原特异反应 的前提下，减弱类风湿因子对检测抗体的非特异结合反应，从而有效消除类风湿因子对检 测结果的干扰。
[0011] 因此，本发明方案提出一种简单且通用的胶乳增强免疫比浊检测试剂的配置，从 多个角度入手可W有效地消除大多数类风湿因子的干扰，提高检测结果的特异性和准确 性，试剂组成简单，具有较高的灵敏度，针对大多数胶乳增强免疫比浊试剂具有较为广泛的 通用性。
【具体实施方式】
[0012] 下面结合【具体实施方式】，进一步阐明本发明，应理解下述【具体实施方式】仅用于说 明本发明而不用于限制本发明的范围。
[0013] 本发明方案广泛通用地适用于多种胶乳增加免疫比浊试剂，包括而不限于采用胶 乳增强免疫比浊法的铁蛋白检测试剂、胃蛋白酶原I检测试剂、胃蛋白酶原II检测试剂、降 巧素原检测试剂、D二聚体检测试剂、肌巧蛋白I检测试剂等，W下实施例仅列举本发明方 案对铁蛋白检测试剂、胃蛋白酶原I检测试剂、降巧素原检测试剂=种检测试剂的应用W 说明本发明方案的优越性，但是该=种举例并非用于限制本发明方案的保护范围，需要表 明的是本方案对包括铁蛋白检测试剂、胃蛋白酶原I检测试剂、降巧素原检测试剂在内绝 大多数胶乳增加免疫比浊试剂均具有良好的通用性。
[0014] 实施例一针对铁蛋白检测试剂（胶乳增强免疫比浊法）
[00巧]铁蛋白检测试剂R2(pH7. 4) ;10mMPB缓冲液、150mM化Cl、l%BSA、0. 1 %吐 温-20、0. 1%叠氮钢、5%海藻糖、0. 1%铁蛋白多克隆抗体致敏的纳米胶乳微粒。
[0016] 不同类风湿因子含量的铁蛋白样本制备：
[0017] 在含有300yg/L铁蛋白纯品的样品中分别加入0、20、100、400IU/mL的类风湿因 子，类风湿因子有两种来源，购自两个不同厂家（RF-I、RF-II)。
[001引 （1)不同抑值铁蛋白检测试剂R1的比较
[0019] 铁蛋白检测试剂Rl-A(pH7. 4) ;10mMPB缓冲液、150mM化Cl、l%BSA、0. 1 %吐 温-20、0. 1%叠氮钢、1% 阳G6000。
[0020] 铁蛋白检测试剂Rl-B(p册.0)aOOmMMES缓冲液、150mM化Cl、l%BSA、0. 1%吐 温-20、0. 1%叠氮钢、1% 阳G6000。
[002U 铁蛋白检测试剂Rl-C(p册.8)aOOmMMES缓冲液、150mM化Cl、l%BSA、0. 1%吐 温-20、0. 1%叠氮钢、1% 阳G6000。
[002引 铁蛋白检测试剂Rl-D(p册.7)aOOmMMES缓冲液、150mM化Cl、l%BSA、0. 1%吐 温-20、0. 1%叠氮钢、1% 阳G6000。
[002引 铁蛋白检测试剂Rl-E(p册.5)aOOmMMES缓冲液、150mM化Cl、l%BSA、0. 1%吐 温-20、0. 1%叠氮钢、1% 阳G6000。
[0024]W上配制的五种铁蛋白检测试剂R1 (R1-A、R1-B、R1-C、R1-D、R1-E，各试剂的PH不同）与同一试剂R2配套使用，对待测样本铁蛋白含量进行检测。结果如表11所示，低值 RF(20IU/mL)对铁蛋白检测试剂基本没有干扰，两种高值RF都会对检测结果造成干扰，尤 其是当试剂R1抑值在7. 4时，检测结果受高值RF干扰较大，随R1抑值降低，RF干扰逐渐 降低，当R1抑值为5. 5时，铁蛋白含量检测结果基本不受添加的类风湿因子影响，与祀值一 致。说明在一定范围内降低R1抑值能有效