检测磺胺类药物的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法

文档序号:9260406阅读:360来源:国知局
检测磺胺类药物的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及水产品检测的技术领域,尤其设及一种检测横胺类药物的胶体金免疫 层析试纸条及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 横胺类药物(SAs)是具有对氨基苯横酷胺该一母核结构的一类药物的总称,多被 用来预防和治疗感染性疾病。横胺类药物的发展至今已有70多年的历史,先后合成的横胺 类药物多达8500种,其中,药物毒性作用小、治疗效果好的有几十种,临床上常用的则有20 多种,如SD、SMZ、SM,等。横胺类药物是最早用于抗感染的合成药,具有广泛的抗菌作用, 能很好的抑制大多数的革兰氏菌,也可W较好的抑制沙口氏菌、大肠杆菌和某些放线菌、衣 原体等病菌。虽然1940年W后,新出现的各种抗生素逐渐取代了横胺类药物的使用,但该 类药物W其抗菌作用广泛、性质稳定、价格便宜等优点,仍被广泛的用于畜牧和水产养殖业 中,来预防和治疗细菌感染性疾病,或被用作动物饲料添加剂,使动物饲料的利用率更高, 同时也加快动物的生长速度。
[0003] 横胺类药物可W通过各种途径进入动物体内,长期使用或使用不当时,药物会在 动物体内残留并累积,当转移到肉、蛋、乳等食品中时,会对人体健康造成危害,主要表现为 细菌的耐药性、过敏反应、对人体器官的毒性作用。横胺类药物残留损害泌尿系统,导致肾 损伤,药物的抗原性可W刺激体内抗体的形成,造成过敏反应,主要表现为皮疹、药热、光敏 性皮炎等症状,当产生剥脱性皮炎、多形性红斑时,可导致多器官衰竭而死亡。长时间摄入 含有横胺药物超标的食品,会使骨髓白细胞的生长受到抑制,引起再生障碍性贫血、溶血性 贫血、血小板减少症。当细菌对某一横胺药物形成耐药性W后,对其他的横胺药也容易形成 交叉的耐药性,长时间食用含有残留的横胺药物的食物后,残留的药物除对人体产生毒副 作用外,也容易产生耐药菌株,使药物失去治疗疾病的价值。
[0004] 目前,常用于检测横胺药物残留量的方法主要包括;理化分析法、微生物学检测法 和免疫分析检测法。常见的理化分析检测法有高效液相色谱法、色谱-质谱联用技术、薄层 色谱法、毛细管电泳法等,该些检测方法灵敏度高,检测结果可靠,常作为确证方法检测药 物残留,但设备昂贵,样品前处理过程复杂,对操作人员要求高,耗时较长,不适合批量样品 的快速检测。微生物学检测法不需要专业昂贵的仪器,但操作耗时长,特异性、敏感性差,容 易受其他药物的干扰,在定量上尚不成熟,检测结果有时不能满足国家最高残留限量的要 求,不能满足现代检测的需要。随着免疫学和免疫技术的飞速发展,免疫分析法迅速发展起 来,成为检测药物残留的一种新型方法。免疫分析法主要是利用抗原、抗体的特异性结合来 检测药物、蛋白质、激素、微生物等各种物质,主要分为;放射性免疫法、酶联免疫吸附法、免 疫传感器法、胶体金免疫层析技术等。胶体金免疫层析技术是一种新型的免疫标记技术,是 在免疫层析的基础上建立起来的,W胶体金为示踪物与抗原、抗体特异性反应相结合的一 种检测技术。该检测方法结果判读简单,不需要专业的操作人员,检测时间短,携带方便,特 别适合大批量样品的药物残留的快速筛查。
[0005] 在现有技术中,利用胶体金免疫法检测横胺类药物残留的研究也有不少,但大都 是针对单个横胺药物残留检测法的研究。王浩等研制了检测SM,的胶体金免疫试纸条,适 用于检测牛奶样品,最低检测限;25113/111以冯梁采用胶体金免疫层析技术,建立了检测SM2 残留的方法,研制的试纸条对SM2标准液的检出限达到了 5ng/mU猪尿样品的检出限;50 ng/mU用市售的化ISA试剂盒检测的48份猪尿样品,试纸条法与ELISA法检测的阳性结 果符合率可达96. 9%。邹新海成功研制了检测SMZ的胶体金免疫试纸条,优化了实验条件, 最终试纸条的检出限;100ng/mU与其他药物无交叉性反应,在牛奶样品中的加标回收率 为92. 49(^112. 6%。李奎等建立了快速检测横胺类药物残留的免疫胶体金法,适用于检测 鸡蛋和鸡肉样品,对SMM、SMD、SDM、SD四种横胺药物的检出限均为lOng/mU样品回收率为 44. 8%~60. 9%。而临床、养殖中常用的横胺药物有二十多种,在实际应用中,研究检测某一种 横胺药物残留的方法有很大局限性,多残留检测的方法更具有实际研究的价值。
[0006] 有鉴于此,本发明人研究和设计了一种检测横胺类药物的胶体金免疫层析试纸条 及其制备方法,本案由此产生。

【发明内容】

[0007] 本发明的目的在于提供一种特异性强、灵敏度高、操作简便,检测快速、准确并适 合现场使用的专口用于检测横胺类药物的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法,W便对多 种横胺类药物进行同时检测。
[000引为实现上述目的,本发明解决其技术问题的技术方案是: 一种检测横胺类药物的胶体金免疫层析试纸条,包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素包被 膜、吸水垫及PVC底板,所述样品垫、所述结合垫、所述硝酸纤维素包被膜及所述吸水垫依 次搭接在所述PVC底板上,所述结合垫包被设有横胺类单克隆抗体-胶体金标记物;所述硝 酸纤维素包被膜上设有检测线和质控线,所述检测线包被有横胺类药物抗原,所述质控线 包被有羊抗鼠IgG。
[0009] 一种检测横胺类药物的胶体金免疫层析试纸条的制备方法,包括W下步骤: 步骤一、胶体金的制备:取1个250mL烧杯,加入100mL0.01%氯金酸溶液,于恒温磁 力揽拌器上使用温度档350 °C对其进行加热,转速为3(K)r/min,加热至沸腾状态后,沸腾 时的实际温度为100 °C,向烧杯中快速加入500化1%巧樣酸=钢溶液,烧杯中的溶液变 为红色后再加热10min,直至溶液透亮,冷却至室温,4°C密封保存,即制得胶体金; 步骤二、金标抗体的制备及纯化;取调好抑为7. 4的所述胶体金1mL于1. 5mL离屯、 管中,向离屯、管中加入31?也/ml的横胺类药物单克隆抗体,用祸旋仪祸旋10min后静置20 min;向离屯、管中加入100化10%BSA溶液,用祸旋仪祸旋lOmin,静置10min,制得金标抗 体,即横胺类药物单克隆抗体-胶体金标记物; 同时,将制得的金标抗体溶液于4°C2500r/min,离屯、10min,去除下层沉淀,将上清 液转到另一离屯、管中,于4°C9000r/min,离屯、30min,去除上清液,将沉淀用胶体金稀释 溶液稀释至原体积的1/20,于4 °C保存备用; 步骤S、试纸条的组装;(1)将硝酸纤维素包被膜,即NC膜,和吸水垫分别贴于PVC底 板上,吸水垫压住NC膜上方1-2mm; (2)将粘贴好NC膜和吸水垫的PVC底板在切条机上切 割成4mm宽的试纸条;(3)将样品垫和结合垫切成4mm宽的条,同时将结合垫浸泡金标抗 体溶液中,并于37°C烘干,制得金标垫;(4)烘干后的金标垫剪成1cm长的小块并贴于PVC底板上,金标垫压住NC膜下方1-2mm,同时用样品垫压住金标垫下方1-2mm,根据试纸条 长度修剪样品垫;(5)在结合垫和吸收垫之间的NC膜上依次包被横胺类药物抗原和羊抗鼠 IgG,分别作为检测线和控制线,采用BioDot划膜仪进行包被划线,具体参数为平台移动速 度40mm/s,单位喷量:检测线为0. 8yL/cm,质控线为1. 0yL/cm,使得横胺类药物抗原包被 浓度为0. 05mg/mL;羊抗鼠IgG包被浓度为0. 8mg/mL。
[0010] 作为实施例的优选方式,在所述步骤=(3)中,还包括对样品垫和金标垫进行前处 理的步骤,即将样品垫与金标结合垫用切条机分别切成4mm宽的长条,用含有5%的庶糖、 5%BSA和终体积浓
当前第1页1 2 3 4 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1