海藻中多不饱和脂肪酸的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品分析技术领域，具体涉及一种海藻中多不饱和脂肪酸的测定方 法。
【背景技术】
[0002] 多不饱和脂肪酸（Polyunsaturafattyacids，PUFAs)是指含有两个或更多个 双键的长链脂肪酸。根据靠近双键碳原子的位置，PUFAS可分为，co-3、co-6等系列脂肪 酸。所谓《 _3系列PUFAs就是从碳链的甲基一端数起在碳原子数第3位上存在有双键的 PUFAS，主要包括二十碳五烯酸（EPA)、二十二碳六烯酸（DHA)、亚麻酸（GLA)、二十二碳五烯 酸（DPA) ;co-6系列的PUFAs是从碳链的甲基一端数起在碳原子数第6位上存在有双键的 PUFAs，主要包括亚油酸（LA，十八碳二烯酸）和花生四烯酸（AA，二十碳四烯酸）。《-3和 ?_6之间是不能互转化的。但在体内由于可竞争相同的酶系而能相互影响。AA、GLA、EPA 和DHA人体内不能合成，需要从食物中摄取，所以是人类的必需脂肪酸。PUFAS在机体内具 有较广泛的生理功能和生物学效应，而且双键愈多，不饱和程度愈高，营养价值也愈高。
[0003] 世界海藻资源丰富，有专家估计，全世界的海藻每年可提供3000亿吨的产量。海 洋藻类以及一些浮游生物中DHA和E以含量丰富，特别是一些海洋微型浮游植物，具有合成 DHA和EPA的独特能力。研究证实，在天然海藻中，金藻类、小球藻、甲藻类、硅藻类、红藻类、 褐藻类、绿藻类及隐藻类均含有丰富的ALA、SA、AA、DHA或EPA，这表明了从海洋藻类中开发 具有生物活性物质的巨大潜力。
[0004] 近年来，美国及日本等国家对多不饱和脂肪酸的提纯工艺进行了大量的研究，美 国研制出17种游离型脂肪酸制剂；西德研制出23种EPA和DHA制剂；日本生产含PUFAs 的各种食品有：DHA营养补品、DHA乳粉（乳儿用、幼儿用、孕妇用、哺乳妇用）、婴儿食品、饮 料、奶酪、鱼香肠、鱼饼、汤料、饼干、罐头食品等。从产品的市场销售情况来看也是明显呈上 升趋势，这也说明了EPA、DHA和D以的重要作用被越来越多的消费者所认可。随着我国经 济的发展，人们群众的生活水平越来越高，由于长期以来的饮食习惯和饮食结构，造成我国 心脑血管疾病发病率日渐增多，因而对多不饱合脂肪需求量逐渐增加。据市场调查，以食品 业的规模以及消费者的消费量来计算，我国市场每年约需要5000吨多不饱和脂肪酸。然而 目前，我国国内仅有极少数的公司在生产多不饱和脂肪酸，其产量大约每年300吨，远远满 足不了市场的需求。因此，多不饱和脂肪酸具有广阔的市场需求。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是克服现有技术的不足而提供一种海藻中多不饱和脂肪酸的测定 方法，该方法重现性好，所需样品量少，实验方法简单。
[0006] 海藻中多不饱和脂肪酸的测定方法，包括以下步骤：
[0007] 步骤1，取海藻干粉置于蒸馏水中浸泡，用珠磨机研磨，经冷冻离心后，将藻体沉淀 加至石油醚中，进行超声破壁；
[0008] 步骤2,将经步骤1超声破壁后的藻体溶液用纤维素滤膜过滤，滤液旋转蒸发，得 藻油；
[0009] 步骤3,将步骤2所得藻油加至含有NaOH、水、乙醇的混合液中，60°C回流后用正己 烷萃取两次，萃取液经无水硫酸钠脱水，得游离脂肪酸；
[0010] 步骤4,将步骤3所得游离脂肪酸加至2%甲醇硫酸溶液中，60°C回流，冷却后用正 己烷和水的混合液萃取两次，提取液经纳滤浓缩后经气相色谱测定不饱和脂肪酸含量。
[0011] 作为上述发明的进一步改进，步骤1中，海藻干粉的用量为20~70g，蒸馏水的用 量为50~200mL，浸泡时间为10~15h。
[0012] 作为上述发明的进一步改进，步骤1中冷冻离心的条件为0°C、10000rpm，离心时 间为15~20min。
[0013] 作为上述发明的进一步改进，步骤2中纤维素膜的孔径为0. 45ym，旋转蒸发温度 为 30 ~40 °C。
[0014] 作为上述发明的进一步改进，步骤3中NaOH、水、乙醇的混合液中NaOH、水、乙醇的 体积比为3~8 :5~12 :2~7。
[0015] 作为上述发明的进一步改进，步骤3中藻油的用量为0. 1~0. 5g，NaOH、水、乙醇 的混合液的用量为20~50mL。
[0016] 作为上述发明的进一步改进，步骤4中游离脂肪酸的用量为0. 1~0. 6g，2%甲醇 硫酸溶液的用量为10~60mL。
[0017] 本发明提供的检测方法简单，所需样品量少，为大批量分析海洋海藻中的多不饱 和脂肪酸、开发和利用海洋海藻资源及植物化学、药物化学等领域的研究提供了一种实用 有效的分析方法。
【具体实施方式】
[0018] 实施例1
[0019] 三角褐指藻中多不饱和脂肪酸的测定方法，包括以下步骤：
[0020] 步骤1，取海藻干粉置于蒸馏水中浸泡，用珠磨机研磨，经冷冻离心后，将藻体沉淀 加至石油醚中，进行超声破壁；
[0021] 步骤2,将经步骤1超声破壁后的藻体溶液用纤维素滤膜过滤，滤液旋转蒸发，得 藻油；
[0022] 步骤3,将步骤2所得藻油加至含有NaOH、7K、乙醇的混合液中，60°C回流后用正己 烷萃取两次，萃取液经无水硫酸钠脱水，得游离脂肪酸；
[0023] 步骤4,将步骤3所得游离脂肪酸加至2%甲醇硫酸溶液中，60°C回流，冷却后用正 己烷和水的混合液萃取两次，提取液经纳滤浓缩后经气相色谱测定不饱和脂肪酸含量。
[0024] 步骤1中，海藻干粉的用量为20g，蒸馏水的用量为50mL，浸泡时间为10h。
[0025] 步骤1中冷冻离心的条件为0°C、lOOOOrpm，离心时间为15min。
[0026] 步骤2中纤维素膜的孔径为0. 45ym，旋转蒸发温度为30°C。
[0027] 步骤3中NaOH、水、乙醇的混合液中NaOH、水、乙醇的体积比为3 :5 :2。
[0028] 步骤3中藻油的用量为0.lg，NaOH、7jC、乙醇的混合液的用量为20mL。
[0029] 步骤4中游离脂肪酸的用量为0.lg，2%甲醇硫酸溶液的用量为10mL。
[0030] 步骤4中，色谱条件为：色谱柱为DB-WAX(60m*0. 32mm*0. 25m)毛细管柱；柱温 230°C，恒温20min;进样口温度250°C，进样方式不分流进样；载气流速1. 7mL/min，进样量 1yL;检测器FID温度 300°C；H240mL/min,Air450mL/min,N240mL/min。
[0031] 实施例2
[0032] 等鞭金藻中多不饱和脂肪酸的测定方法，包括以下步骤：
[0033] 步骤1，取海藻干粉置于蒸馏水中浸泡，用珠磨机研磨，经冷冻离心后，将藻体沉淀 加至石油醚中，进行超声破壁；
[0034] 步骤2,将经步骤1超声破壁后的藻体溶液用纤维素滤膜过滤，滤液旋转蒸发，得 藻油；
[0035] 步骤3,将步骤2所得藻油加至含有NaOH、7K、乙醇的混合液中，60°C回流后用正己 烷萃取两次，萃取液经无水硫酸钠脱水，得游离脂肪酸；
[0036] 步骤4,将步骤3所得游离脂肪酸加至2%甲醇硫酸溶液中，60°C回流，冷却后用正 己烷和水的混合液萃取两次，提取液经纳滤浓缩后经气相色谱测定不饱和脂肪酸含量。
[0037] 步骤1中，海藻干粉的用量为40g，蒸馏水的用量为120mL，浸泡时间为13h。
[0038] 步骤1中冷冻离心的条件为0°C、lOOOOrpm，离心时间为17min。
[0039] 步骤2中纤维素膜的孔径为0. 45ym，旋转蒸发温度为35°C。
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