用于测量来自皮肤的抗微生物肽作为对微生物天然防护的客观量度的非侵入性方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及用于测量与由于微生物侵袭皮肤而引发的防御机制相关联的一种或 多种生物标记的量的方法、或基于一种或多种抗微生物肽生物标记的含量测量系统是否与 环境稳态平衡、以及这些生物标记的量的关联与相关性，因为它直接关联哺乳动物皮肤健 康的改善。
【背景技术】
[0002] 头皮/皮肤是显著的器官系统，由起到对环境侵袭的第一道防线功能的多个特化 组织构成。虽然早期的研究主要集中于皮肤的阻隔功能，已经变得清楚的一点是这个器官 是动态的：对甚至是环境中微小的变化感测并响应，从而帮助保持内稳态。环境影响诸如太 阳辐射、污染、或者甚至皮肤护理产品的施用导致复杂的级联事件，它们最终导致数百或者 数千个基因表达的改变。基因表达的这些改变一般被翻译成催化化学反应的蛋白生成的改 变（或积聚、释放、改性等等），最终导致细胞响应。随着这些化学反应的进行，常常留下代 谢副产物作为已经发生了何种化学过程的指示。分析与给定皮肤病症例如头皮肩相关联的 这些所得蛋白和小分子生物标记可提供有价值的信息，用于了解病症以及开发用于诊断和 /或改善皮肤病症目的的产品。头皮肩是一种常见的慢性复发性头皮病症，具有片状剥落和 瘙痒感。头皮肩的发病机理是复杂的，并且好像是头皮、微生物区系和宿主免疫系统之间相 互作用的结果。对这种病症的许多之前的工作已经集中于检查一些表面水平的现象。传统 的基于专家观察的评估及基于自我观察的评估与基于大型仪器的在生理水平上的表皮结 构和功能评估相结合。新的生物分子学能力达到了病理生理的理解深度，而非之前用传统 研究方法达到的理解深度；然而，对导致这种病症的关键症状的分子事件的清晰了解仍未 出现。为了解释这些关键分子事件，可通过皮肤表面的胶带剥除、随后通过化学或生物分析 方法，来非侵入性地获得生物分子取样。组胺最近被鉴定为头皮瘙痒的敏感生物标记。需 要另外的生物标记以允许更详细的头皮肩病症的病理生理描述，以及用作指示头皮肩治疗 方案程度和完成度的相关量度。受关注的一个此类区域是抗微生物肽（AMP)。
[0003] 抗微生物肽（AMP)是进化上保守的分子，涉及广泛多种生物体的防御机制。在细 菌、昆虫、植物和脊椎动物中产生的AMP保护生物体不受广泛多种传染性病原体的侵袭。在 哺乳动物中，这些肽防御细菌、病毒、真菌、和某些寄生虫。最近，已经证明了AMP的新生物 学效应，诸如内毒素中和作用、趋化及免疫调节活性、诱导血管新生和创伤修复。因此，这些 分子是先天免疫系统的关键组分和生物标记的引人注目的候选者。具体地，针对皮肤和头 皮，AMP对于皮肤和头皮健康是重要的，这是由于一旦表皮的物理结构已经受到损伤，它们 能够进行化学防御或形成屏障。AMP在生物体的主要屏障诸如皮肤和粘膜上皮以及皮肤中 潜在的微生物侵入部位诸如毛囊结构和汗腺上表达，从而阻止病原体定植宿主组织。此外， 这些肽以颗粒形式存储在吞噬细胞内，在那里它们帮助杀灭被吞噬的微生物。抗微生物肽 的作用模式存在差异，并且包括破坏细胞膜、干扰代谢、以及靶向细胞质组分。AMP难以分 类，这归因于它们显著的多样性。基于它们的氨基酸组成、大小和构象结构，可将AMP分成 若干类型，诸如具有a螺旋结构的肽、具有由二硫键稳定的0片层结构的肽、具有延伸结 构的肽、以及具有环状结构的肽。所有这些AMP的特性共同使得这些肽成为新型生物标记 的引人注目的候选者。
【发明内容】
[0004] 本发明的一个实施例涉及用于测量受试者皮肤健康的非侵入性方法，该非侵入性 方法包括收集来自受试者的上皮细胞/皮肤细胞样品；检测在上皮细胞样品/皮肤细胞 样品中的一种或多种抗微生物肽生物标记的含量；诊断受试者是否具有由于微生物侵袭 皮肤而引发的防御机制或基于一种或多种抗微生物肽生物标记的含量测量系统是否与环 境稳态平衡，该一种或多种抗微生物肽生物标记选自组蛋白H2B型1-M、组蛋白H2A、组蛋 白H4、蛋白S100-A7、蛋白S100-A8、蛋白S100-A9、组织蛋白酶G、中性粒细胞防御素3(防 御素，a3)(HNP-3)、皮离蛋白、核糖核酸酶7(RNA酶7)、人0防御素2(hBD-2)和0防御 素103 (hBD-3)或在表1中列出的那些，其中AMP家族包括BPI、防御素、组蛋白、成孔毒素、 S100蛋白、细胞毒素、丝氨酸蛋白酶S1、双氧化酶、转录调节物。
【附图说明】
[0005] 图1是示出无头皮肩受试者对头皮肩患者的hBD2含量的比较的图。
[0006] 图2是示出头皮肩患者在用去头皮肩洗发剂或非去头皮肩洗发剂治疗三周后 hBD2偏离基线的变化的图。
[0007] 图3是示出头皮肩患者在用包含1 %ZPT的洗发剂治疗三周后的hBD2归一化结果 的图。
[0008] 表1是相关抗微生物肽的列表。
[0009] 表2是通过iTRAQ方法检测的抗微生物肽的列表。示出在无头皮肩患者、头皮肩 患者在基线处和用包含1%ZPT的洗发剂或1 %的硫化硒洗发剂治疗三周的头皮肩患者之 间的比较。
【具体实施方式】
[0010] 尽管说明书通过特别指明并且清楚地要求保护本发明的权利要求作出结论，据 信，本发明通过下列【具体实施方式】将更好地理解。
[0011] 本发明可包含下列因素、由其组成、或基本上由其组成：本文所述的本发明的基本 要素和限定条件、以及本文所述的或其它适用于旨在供哺乳动物消费的组合物的任何附加 或任选成分、组分或限定条件。
[0012] 除非另外指明，所有的百分比、份数和比率以本发明组合物的总重量计。所有与所 列成分相关的此类重量均基于活性物质的含量计；并因此不包括可能包含在可商购获得的 原料中的载体或副产物。
[0013] 本发明的各个实施例中的组分和/或步骤，包括可任选加入的那些，详细描述于 下文。
[0014] 所有引用文献的相关部分均引入本文以供参考；任何文献的引用不可解释为是对 其作为本发明的现有技术的认可。
[0015] 除非另外特别说明，所有比率都是重量比率。
[0016] 除非另外特别说明，所有温度是摄氏度。
[0017] 除非另外指明，所有包括数量、百分比、分数和比例的量被理解为由词"约"所修 饰，并且量不旨在显示有效数字。
[0018] 除非另外指明，"一个"、"一种"和"所述"是指"一个或多个"。
[0019] 本发明中"包括"指可加入其它不影响最终结果的成分。该术语包括术语"由…组 成"和"基本上由…组成"。本发明的组合物和方法/过程可包括本文所述的本发明基本元 素和限制，以及本文所述的任何附加或任选成分、组分、步骤或限制；由本文所述的本发明 基本元素和限制，以及本文所述的任何附加或任选成分、组分、步骤或限制组成；和基本上 由本文所述的本发明基本元素和限制，以及本文所述的任何附加或任选成分、组分、步骤或 限制组成。
[0020] 本文"有效的"是指一定量的受试品活性足够高以使待治疗病症发生显著积极的 改善。受试品活性的有效量将随着待治疗的具体病症、病症的严重度、治疗持续时间、并发 治疗的性质、以及类似因素而发生改变。
[0021] 如本文所用，术语"差异含量"的生物分子可包括任何提高的或降低的含量。在一 个实施例中，差异含量是指含量增加了 ：至少5 % ;至少10% ;至少20 % ;至少30 % ;至少 40% ;至少50% ;至少60% ;至少70% ;至少80% ;至少90% ;至少100% ;至少110% ;至 少120% ;至少130% ;至少140% ;至少150% ;或更多。
[0022] 在另一个实施例中，差异含量是指含量减少了 ：至少5% ;至少10% ;至少20% ; 至少30% ;至少40% ;至少50% ;至少60% ;至少70% ;至少80% ;至少90% ;至少100% (即，不含生物分子）。生物分子以统计学上显著的差异含量表达（即，<0.20(双侧）的 P值用于确定统计学差异）
[0023]其使用StudentT-test、Welch，s2-sampleT-test或MatchedPairT-test进 行测定。
[0024] 术语"皮肤"是指脊椎动物的外蒙皮，其由两层细胞组成，分别是厚的内层（真皮） 和薄的外层（表皮）。表皮是皮肤外部的非血管层。它由从内到外的五层上皮构成：（1)基 底层（表皮基底层）；（2)棘层（表皮棘层）；(3)颗粒层（表皮颗粒层）；(4)透明层（表 皮透明层）；和（5)角质层（表皮角质层）。
[0025] 术语"样品"指来自受试者皮肤或表皮的任何制备物。
[0026] 术语"非侵入性"指不需要将器械或装置插入皮肤或身体孔口进行诊断或治疗的 方法。
[0027] 术语"粘合剂装置"指通过将粘合剂或粘附材料用于基底以移除皮肤的表皮层 的装置。例如，可使用粘合带诸如D-SquameR (聚丙稀酸酯粘合剂；CuDerm;Dallas TX)、Durapor、Sebutape? (丙稀酸类聚合物膜；CuDerm;Dallas,TX)、Tegaderm?、Duct胶 带（333DuctTape,Nashua胶带产品）、Sc〇tchKTape(3MScotch810,St.Paul,Minn.)、 Diamond?(TheSellotapeCompany；Eindhoven,theNetherlands)、Sentega?(聚丙稀胶 带，SentegaEikettenBV,Utrecht,TheNetherlands)来给皮肤取样。所述粘合剂可为任 何常用的压敏型粘合剂或那些在皮肤上快速固化的粘合剂（诸如氰基丙烯酸酯）。所述粘 合剂可位于柔性的或固体的背衬上以使取样更容易。恒压装置（例如D-Squame Pressure Instrument, CuDerm ;Dallas, TX)可用于在取样期间向粘合剂装置施压。
[0028] 来自组织的样品可通过本领域熟知的许多方法进行分离。用于分离样品的侵入性 方法包括使用针（例如在血液取样期间）、以及不同组织的活组织检查、起泡和激光穿孔。 由于这些