一种鸡蛋常用药物残留检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物检测技术领域，尤其涉及一种鸡蛋常用药物残留检测方法。
【背景技术】
[0002] 我国是家禽养殖大国，2005年禽蛋年总产量已达28795万吨，位居世界首位，其中 鸡蛋由于营养丰富、易被吸收、口感良好、价格便宜而深受消费者喜爱。鸡蛋占绝大部分禽 蛋市场，而90%以上的鸡蛋都是由农户和小企业生产的，尽管目前无公害食品蛋鸡饲养允 许使用的治疗药物受到严格限制，但实际生产中，为降低疫病风险，滥用误用抗生素现象十 分严重，同时通过环境和食物链的作用致使药物残留问题也日益加剧。药物残留对人体的 危害主要有抗生素类药物可引起人类发生不同程度的过敏反应，使细菌产生耐药性，给临 床上感染疾病的治疗带来困难；食用药物残留的动物源食品，可导致肠道菌群失调，致病 菌大量繁殖，给人类造成危害。由于药物残留危害极大，各国政府对食品安全高残留限量 (MRL)和休药期，同时各国都在努力建立重要药物残留检测方法，以监控和尽量减少药物残 留的发生。
【发明内容】
[0003] 为了防止市场上鸡蛋的常用药物残留危害人体健康，本发明的目的是提供一种鸡 蛋常用药物残留的检测方法，防止残留药物超标的鸡蛋进入市场。
[0004] 一种鸡蛋常用药物残留检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0005] 鸡蛋选择：随机选择1个鸡蛋打碎并在高速食品搅碎机中搅拌均匀；残留药物提 取：用电子秤取通过步骤A得到的鸡蛋5g，置于离心管中，加入一定比例的磷酸盐缓冲溶 液和乙腈溶液l〇ml，然后将所得溶液在振荡器中振荡一段时间，再将振荡所得溶液置于离 心机中离心一段时间并收集下层提取液，接着将下层提取液用稀释剂稀释至400ml ;溶液 净化：将SPE固相萃取柱用5ml甲醇，5ml超纯水依次淋洗活化，开启真空栗，控制流速将 提取液上柱，过柱完成后，用5ml甲醇，5ml超纯水冲洗萃取柱，继续抽真空IOmin以除去 柱中残留水分，最后，以6ml甲醇洗脱，收集洗脱液并在室温下用N 2吹扫至近干，用甲醇定 容至Iml ;残留药物检测：以液相色谱作为分离系统，质谱为检测系统，步骤C所得溶液在 质谱部分和流动相分离，被离子化后，经质谱的质量分析器将离子碎片按质量数分开，经检 测器得到质谱图；在本步骤中色谱条件为流动相为乙腈和〇. 1%甲酸溶液，柱温25°C，流速 0. 4ml/min ;进样量20 μ 1 ;质谱条件为电喷雾离子源；正离子扫描；雾化气、脱溶剂气、锥孔 气为氮气，碰撞气为氩气；源温度和脱溶剂气温度分别为90和350°C;脱溶剂流速和锥孔气 流速分别为500和70L/h ;毛细管电压为4kV。
[0006] 作为本发明的进一步改进，所述磷酸盐缓冲溶液和乙腈溶液的比例为1 :1~1 :5。
[0007] 作为本发明的进一步改进，所述振荡时间为15~30min。
[0008] 作为本发明的进一步改进，所述稀释剂为甲醇溶液。
[0009] 作为本发明的进一步改进，所述离心时间为10~20min。
[0010] 作为本发明的进一步改进，所述液相色谱所采用的色谱柱粒度为5 μ m。
[0011] 作为本发明的进一步改进，所述流速为3~5ml/min。
[0012] 作为本发明的进一步改进，所述SPE固相萃取柱为Oasis HLB。
[0013] 本发明的有益效果在于：
[0014] 1、本发明的装置简单、操作方便和适用范围广，可同时检测抗生素类药物残留，磺 胺类药物残留，抗球虫药物残留；
[0015] 2、本发明药物提取采用乙腈相比于采用乙酸乙酯，二氯甲烷有如下优点：乙酸乙 酯提取浸出杂质多，且过SPE柱后基质干扰较大；二氯甲烷提取属于中等极性溶剂，有可能 提取出脂类物质，因此提取浓缩后需脱去脂类物质，且乙腈的提取效果较好；
[0016] 3、采用本发明检测准确度高，效果稳定，耗时少，为监控鸡蛋品质和评定无公害 鸡蛋提供了有效的检测手段。
[0017] 为了对本发明有益效果作进一步阐述，本发明人进行了大量运用性试验，特别说 明的是，本发明试验旨在说明本发明技术的有益效果，绝不仅限于本发明的范围。
[0018] 实验1 :样品提取液的选择
[0019] 综合考虑本发明检测的抗生素类药物残留、磺胺类药物残留、抗球虫药物残留的 性质，分别用乙酸乙酯、二氯甲烷、乙腈作为提取液，从三者的提取时间，提取效率，带入的 杂质多少、是否带入脂类物质等几方面进行比较。
[0020] 以乙酸乙酯、二氯甲烷、乙腈作为提取液与磷酸盐缓冲溶液一定比例混合，共 l〇ml，然后将所得溶液在振荡器中振荡一段时间，再将振荡所得溶液置于离心机中离心一 段时间并收集下层提取液，接着将下层提取液用稀释剂稀释至400ml，用检测器检测。
[0021] 表1不同提取液对药物残留提取情况比较分析
[0024] 从上述实验结果表明，虽然乙腈所耗费的提取时间长，但他的回收率高，带入杂质 数量少，不带入脂类物质无需浓缩脱脂，因此本发明选择乙腈作为提取液。
[0025] 实验2 :稀释条件对提取率的影响
[0026] 本发明步骤B中将下层提取液稀释至400ml，并不是随意增加这一步骤，而是由于 提取液中含有大量极性有机溶剂，直接进行SPE净化，目标抗生素可能会被有机溶剂带出 而无法保留在SPE柱上，对此，本实验以常见的抗生素类药物残留、磺胺类药物残留、抗球 虫药物残留作为分析对象，对稀释条件对提取率的影响做一个比较分析。
[0027] 表2稀释条件对提取率的影响
[0029] 实验结果表明，稀释后的提取率明显提高。
【具体实施方式】
[0030] 为了方便本领域的技术人员理解，下面将结合实施例对本发明做进一步的描述。 实施例仅仅是对该发明的举例说明，不是对本发明的限定，实施例中未作具体说明的步骤 均是已有技术，在此不做详细描述。
[0031] 仪器与试剂
[0032] 液相色谱仪、质谱联用仪器、固相萃取装置、氮吹仪、Oasis HLB固相萃取柱、电子 秤、振荡器；
[0033] 磷酸钠缓冲液、甲醇、超纯水、乙腈、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、四 环