一种阴道分泌物染色液及其制备方法与染色方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及细胞染色技术领域，尤其涉及一种阴道分泌物染色液及其制备方法与染色方法。
【背景技术】
[0002]细胞核内的染色质主要是脱氧核糖核酸(DNA)，在DNA双螺旋结构中，两条链上的磷酸基朝向外侧，带负电荷，容易与带正电荷的碱性染料以离子键或氢键结合，从而使染色质附着相应的颜色。细胞核是染色质的储存场所，染色质致密，则细胞核着色深；染色质疏松，则细胞核着色浅。分泌物细胞质中蛋白等电点PI为3?6，当pH>PI时，蛋白中游离的羧基基团增多，可以与带正电荷的碱性染料结合，从而使细胞质附着相应的颜色。细胞质所带负电荷多，则细胞质染色相对较深；细胞质所带负电荷少，则细胞质染色相对较浅。并且由于分泌物中的细胞并非同步增殖，因此处于不同细胞周期内的细胞着色程度存在差异。处于生长期和分裂期的细胞由于DNA和蛋白质合成旺盛而呈现细胞核着色深，细胞质着色相对较浅的现象。而处于凋亡时期的细胞由于细胞膜通透性加强、蛋白质中酸性氨基酸位点暴露、染色质DNA片段降解而使细胞核质染色区分不明显。
[0003]目前，国内应用较为广泛的阴道分泌物染色液主要是瑞氏-姬姆萨染色液和革兰氏染色液，但这两种染色液都具有操作步骤繁琐、染色时间长等缺点，不利于大规模临床应用。
[0004]因此，现有技术还有待于改进和发展。
【发明内容】
[0005]鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种阴道分泌物染色液及其制备方法与染色方法，旨在解决现有染色液存在操作步骤繁琐、染色时间长，及不利于大规模临床应用的问题。
[0006]本发明的技术方案如下:
一种阴道分泌物染色液的制备方法，其中，包括步骤:
A、按重量份计，分别称取蓝色喊性染料1~3份、红色喊性染料6~8份、缓冲盐1~3份，醇溶剂8~12份、去离子水75~85份；
B、将上述称取的蓝色碱性染料、红色碱性染料、缓冲盐，醇溶剂和去离子水在22~28°C下混合均匀，并静置过夜；
C、向静置过夜后的混合液中加入碱性物质0.02-0.5份、细胞膜保护剂0.01-0.5份、染色促进剂0.01-0.5份、表面活性剂0.002-0.2份、渗透压调节剂0.01-0.5份，最后再静置过夜，得到染色液。
[0007]所述的阴道分泌物染色液的制备方法，其中，所述蓝色碱性染料为亚甲蓝、天青
I1、甲基绿、甲基紫、甲苯胺蓝中的一种或多种。
[0008]所述的阴道分泌物染色液的制备方法，其中，所述红色碱性染料为中性红、藏红T、曙红Y、甲基红中的一种或多种。
[0009]所述的阴道分泌物染色液的制备方法，其中，所述碱性物质为无水碳酸钠、碳酸氢钠、醋酸钾、醋酸钠、醋酸钙、硼砂中的一种或多种。
[0010]所述的阴道分泌物染色液的制备方法，其中，所述细胞膜保护剂为海藻糖、蔗糖、甘露醇、甘氨酸中的一种或多种。
[0011]所述的阴道分泌物染色液的制备方法，其中，所述染色促进剂为细胞溶解酶、粘液分解剂溴己新、氨溴索、乙酰半胱氨酸中的一种或多种。
[0012]所述的阴道分泌物染色液的制备方法，其中，所述表面活性剂为烷基酚聚氧乙烯醚、高碳脂肪醇聚氧乙烯醚、脂肪酸聚氧乙烯酯、脂肪酸甲酯乙氧基化物、聚丙二醇的环氧乙烷加成物、失水山梨醇酯、蔗糖酯中的一种或多种。
[0013]所述的阴道分泌物染色液的制备方法，其中，所述渗透压调节剂为甘油、PVP、葡萄糖、果糖、多聚葡萄糖中的一种或多种。
[0014]一种阴道分泌物染色液，其特征在于，采用如上任一所述的阴道分泌物染色液的制备方法制备而成。
[0015]一种阴道分泌物染色液的染色方法，其中，采用湿片染色法对阴道分泌物进行染色，所述湿片染色法为:将经洗脱液洗脱的阴道分泌物滴加到载玻片上或样本管中，之后将如上所述染色液与阴道分泌物混合均匀，使所述染色液对阴道分泌物进行染色。
[0016]有益效果:本发明由于采用蓝色碱性染料和红色碱性染料混合制得染色液，使得制得的染色液具有通用染色液的染色效果，并且能大大缩短染色时间，使通常在5~30分钟内完成的染色时间缩短为20s，极大提高了染色效率，加快了临床样本的筛查速度。
【附图说明】
[0017]图1为传统方法的染色效果图。
[0018]图2~图9为本发明方法的染色效果图。
【具体实施方式】
[0019]本发明提供一种阴道分泌物染色液及其制备方法与染色方法，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0020]本发明提供一种阴道分泌物染色液的制备方法，其包括步骤:
A、按重量份计，分别称取蓝色喊性染料1~3份、红色喊性染料6~8份、缓冲盐1~3份，醇溶剂8~12份、去离子水75~85份；
B、将上述称取的蓝色碱性染料、红色碱性染料、缓冲盐，醇溶剂和去离子水在22~28°C下混合均匀，并静置过夜；
C、向静置过夜后的混合液中加入碱性物质0.02-0.5份、细胞膜保护剂0.01-0.5份、染色促进剂0.01-0.5份、表面活性剂0.002-0.2份、渗透压调节剂0.01-0.5份，最后再静置过夜，得到染色液。
[0021]进一步地，按重量份计，分别称取蓝色碱性染料I份、红色碱性染料8份、缓冲盐I份，醇溶剂10份、去离子水80份，以制备阴道分泌物染色液。
[0022]进一步地，所述蓝色碱性染料可以为亚甲蓝、天青I1、甲基绿、甲基紫、甲苯胺蓝中的一种或多种。
[0023]进一步地，所述红色碱性染料可以为中性红、藏红T、曙红Y、甲基红中的一种或多种。
[0024]本发明的主要改进之处在于，染色液中包含蓝色碱性染料和红色碱性染料，所述蓝色碱性染料和红色碱性染料为碱性染料，所述碱性染料可充分浸润细胞，对分泌物中的各类细胞的细胞核和细胞质均可进行染色，并对分泌物中各类细胞可进行区分。
[0025]进一步地，所述缓冲盐可以为MES、硼酸盐、磷酸盐、Tris-HCU Bistris-HCUHEPES, PIPES中的一种或多种。且所述缓冲盐的浓度为2~500mmol/L，缓冲盐pH为5.0?7.8。
[0026]进一步地，所述醇溶剂可以为无水乙醇、甲醇、乙二醇中的一种。
[0027]进一步地，所述碱性物质可以为无水碳酸钠、碳酸氢钠、醋酸钾、醋酸钠、醋酸钙、硼砂中的一种或多种。
[0028]进一步地，所述细胞膜保护剂可以为海藻糖、蔗糖、甘露醇、甘氨酸中的一种或多种。
[0029]进一步地，所述染色促进剂可以为细胞溶解酶、粘液分解剂溴己新、氨溴索、乙酰半胱氨酸中的一种或多种。
[0030]进一步地，所述表面活性剂可以为烷基