广金钱草总黄酮提取物的特征图谱及其建立方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物医药领域，具体的，本发明涉及一种从广金钱草中提取总黄酮提 取物的方法和一种广金钱草总黄酮提取物特征图谱及其建立方法和应用。
【背景技术】
[0002] 广金钱草是一种药用植物，具有利湿退黄、利尿通淋的功效。广金钱草中含有丰富 的黄酮类物质。广金钱草总黄酮提取物是一类具有相同母核结构2-苯基色原酮的黄酮类 物质。黄酮的功效是多方面的，它可以有效清除体内的氧自由基、改善血液循环、降低胆固 醇，降低血糖、增进伤口愈合和止痛。然而，广金钱草黄酮的提取工艺和确定其中黄酮类物 质组成的方法仍有待改进。
[0003] 同时，广金钱草分布广泛，分布于福建、湖南、广西和广东等省区，因此，如何有效 确定广金钱草的来源、并建立广金钱草总黄酮提取物特征图谱是一个尚待解决的问题。
【发明内容】
[0004] 本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的 在于提出一种从广金钱草中提取总黄酮提取物的方法、一种确定广金钱草中黄酮类物质组 成的方法以及一种确定广金钱草来源的方法。
[0005] 在本发明的第一方面，本发明提出了一种从广金钱草中提取总黄酮提取物的方 法。根据本发明的实施例，该方法包括：将广金钱草样品与乙醇混合，并通过回流或超声方 法进行提取，以便获得总黄酮提取物，其中，所述乙醇的浓度为25~95%，所述广金钱草的 重量与所述乙醇的体积比为25mg :25~100ml，优选25mg :50ml。通过上述提取方法，既可 以确保完全提取广金钱草中的总黄酮，提取效率高，又可以使得后期液相色谱分析中峰的 分离度良好。
[0006] 根据本发明的实施例，上述从广金钱草中提取总黄酮提取物的方法可以进一步包 括下列附加技术特征至少之一：
[0007] 根据本发明的实施例，上述方法采用超声方法进行提取10~40分钟，优选20分 钟。通过上述超声提取方法，既节约了提取时间，又确保了完全提取广金钱草中的总黄酮， 使得提取效率高，利于黄酮的药用和液相色谱分析。
[0008] 根据本发明的实施例，上述乙醇的浓度为75%。发明人惊奇的发现，广金钱草样品 在75%乙醇里面提取效率最高，且液相色谱分析中峰的分离度良好。
[0009] 在本发明的第二方面，本发明提出了一种建立广金钱草总黄酮提取物特征图谱的 方法，根据本发明的实施例，该方法包括：按照前面所述的方法，从广金钱草中提取总黄酮 提取物；对所述总黄酮提取物进行液相色谱分析，并基于所得到的液相色谱分析结果建立 所述广金钱草总黄酮提取物特征图谱。发明人发现，通过上述提取方法，广金钱草中的总黄 酮可以被高效提取。对上述总黄酮提取物进行液相色谱分析得色谱分析图，从而可以建立 广金钱草总黄酮提取物的特征图谱。根据本发明的实施例，上述建立广金钱草总黄酮提取 物特征图谱的方法准确度高、稳定性高。
[0010] 根据本发明的实施例，上述建立广金钱草总黄酮提取物特征图谱的方法可以进一 步包括下列附加技术特征至少之一：
[0011] 根据本发明的实施例，所述液相色谱分析采用下列条件：采用甲醇-〇. 1%甲酸体 系进行梯度洗脱，色谱柱为Waters BEH C18 (2. ImmX 100mm，1. 8微米），柱温为25摄氏度， 流速为0. 2ml/min ;进样量：1微升，检测波长为272nm，洗脱条件：
[0012]
[0013] 在上述色谱条件下，色谱峰可以达到很好的分离效果，从而建立广金钱草总黄酮 提取物的特征图谱。根据本发明的实施例，上述液相色谱分析条件下的建立广金钱草总黄 酮提取物特征图谱的方法具有高稳定性和准确性的特点。在本发明的第三方面，本发明提 出了一种确定广金钱草中黄酮类物质组成的方法，根据本发明的实施例，该方法包括：按照 上述方法，从广金钱草中提取总黄酮提取物；对总黄酮提取物进行液相色谱分析，并基于所 得到的液相色谱分析结果确定所述广金钱草中黄酮类物质的组成。发明人发现，通过上述 提取方法，广金钱草中的总黄酮可以被高效提取。对上述总黄酮提取物进行液相色谱分析 得色谱分析图，从而可以准确确定广金钱草中黄酮类物质的组成。根据本发明的实施例，上 述确定广金钱草中黄酮类物质组成的方法准确度高、稳定性高。
[0014] 根据本发明的实施例，上述确定广金钱草中黄酮类物质组成的方法可以进一步包 括下列附加技术特征至少之一：
[0015] 根据本发明的实施例，该方法中的液相色谱分析采用下列条件：采用甲醇-0. 1% 甲酸体系进行梯度洗脱，色谱柱为Waters BEH C18 (2. ImmX IOOmm, 1.8微米），柱温为25摄 氏度，流速为〇. 2ml/min，进样量：1微升，检测波长为272nm，洗脱条件是：
[0016]
[0017] 在上述色谱条件下，色谱峰可以达到很好的分离效果，从而有效确定广金钱草中 黄酮类物质组成。根据本发明的实施例，上述液相色谱分析条件下的确定广金钱草中黄酮 类物质组成的方法具有高稳定性和准确性的特点。
[0018] 在本发明的第四方面，本发明提出了一种确定广金钱草来源的方法，根据本发明 的实施例，该方法包括：按照上述提取广金钱草中总黄酮提取物的方法，从广金钱草中提取 总黄酮提取物；以及对所述总黄酮提取物进行液相色谱分析，并基于所得到的液相色谱分 析结果确定所述广金钱草的来源。发明人发现，通过上述提取方法，广金钱草中的总黄酮 可以被高效提取。对上述总黄酮提取物进行液相色谱分析得色谱分析图，从而可以准确确 定广金钱草的来源。根据本发明的实施例，上述确定广金钱草来源的方法准确度高、稳定性 尚。
[0019] 根据本发明的实施例，上述确定广金钱草来源的方法可以进一步包括下列附加技 术特征至少之一：
[0020] 根据本发明的实施例，该方法中的液相色谱分析采用的检测波长为272nm。在此检 测波长条件下，色谱峰可以达到很好的分离效果，从而有效确定广金钱草来源。
[0021] 根据本发明的实施例，该方法中的液相色谱分析采用下列条件：采用甲醇-0. 1% 甲酸体系进行梯度洗脱，色谱柱为Waters BEH C18 (2. ImmX IOOmrn, 1.8微米），柱温为25摄 氏度，流速为〇. 2ml/min，进样量：1微升，洗脱条件是：
[0022]
[0023] 在上述色谱条件下，色谱峰可以达到很好的分离效果，从而有效确定广金钱草来 源。根据本发明的实施例，上述液相色谱分析条件下的确定广金钱草来源的方法具有高稳 定性和准确性的特点。
[0024] 根据本发明的实施例，上述基于所得到的液相色谱分析结果确定所述广金钱草的 来源包括：(a)将所述液相色谱分析结果的色谱图与预定的对照图谱进行比对；以及（b)判 断所述色谱图与所述对照图谱的相似性，并且基于所述相似性确定所述广金钱草的来源。 通过对比分析结果色谱图和对照色谱图的相似性，可以有效确定广金钱草的来源。根据本 发明的实施例，上述确定广金钱草来源的方法具有高稳定性和准确性的特点。
[0025] 根据本发明的实施例，在步骤（b)中，所述相似性是基于图谱中下列至少之一位 置是否存在峰而确定的：15. Olmin、15. 71min、16. 60min、18. 04min、19. 77min、21. 38min、 22. 78min、23. 18min、23. 73min、27. 2min、29. 51min、31. 08min、31. 72min、32. 98min，其中， 所述位置的峰代表如下：15. Olmin代表vicenin-2,18. 04min代表木犀草素-6-C- a -L- P比 喃阿拉伯糖-8-〇β -D-吡喃葡萄糖苷，19. 77min代表vicenin-l，23. 18min代表木犀草 素-6-C- β -D-吡喃葡萄糖-8-C- β -吡喃木糖苷，23. 73min代表夏佛塔苷，27. 20min代表 染料木素-7-0-β -D-呋喃芹糖基-(I - 6)-O-β -D-吡喃葡萄糖苷，31. 08min代表新夏佛 塔苷，31. 72min代表异牡荆苷，32. 98min代表Vicenin-3。根据本发明的实施例，上述位置 的峰形和相对保留时间稳定，通过对比待确定广金钱草的色谱图峰形和对照色谱图峰形， 可以有效确定广金钱草的来源。
[0026] 根据本发明的实施例，在步骤（b)中，所述相似性是基于图谱中下列位置是 否存在峰而确定的：15.01min、15.71min、18.04min、19.77min、22.78min、23.18min、 23.73min、27.2min、29.51min、31.08min、31.72min、32.98min，其中，所述位置的峰 代表如下：15. Olmin代表vicenin-2,18. 04min代表木犀草素-6-C-a -L-吡喃阿 拉伯糖-8-C- β -D-吡喃葡萄糖苷，19. 77min代表vicenin-1，23. 18min代表木犀草 素-6-C- β -D-吡喃葡萄糖-8-C- β -吡喃木糖苷，23. 73min代表夏佛塔苷，27. 20min代表 染料木素-7-0-β -D-呋喃芹糖基-(1 - 6)-0-β -D-吡喃葡萄糖苷，31. 08min代表新夏佛 塔苷，31. 72min代表异牡荆苷，32. 98min代表Vicenin-3。根据本发明的实施例，上述位置 的峰形和相对保留时间具有稳定性，通过对比待确定广金钱草的色谱图峰形和对照色谱图 峰形，可以有效确定广金钱草的来源。
[0027] 本领域技术人员能够理解，上述图谱中位置峰的确定的方法和效果同样适用于建 立广金钱草总黄酮提取物特征图谱的方法和确定广金钱草中黄酮类物质组成的方法。
[0028] 本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变 得明显，或通过本发明的实践了解到。
【附图说明】
[0029] 图1是根据本发明实施例1的对照品紫外扫描图；
[0030] 图2是根据本发明实施例1的对广金钱草总黄酮提取物进行液相色谱分析时，不 同甲酸浓度作为色谱流动相的色谱图；
[0031] 图3是根据本发明实施例1的对广金钱草总黄酮提取物进行液相色谱分析时，不 同柱温下的色谱图；
[0032] 图4是根据本发明实施例1的对广金钱草总