雷帕霉素衍生物的纯化的制作方法
【专利说明】雷帕霉素衍生物的纯化
[0001] 相关申请的交叉参考
[0002] 本申请要求2013年3月15日提交的美国临时申请号61/799, 857的优先权，将该 申请完整地引入本文作为参考。
[0003] 发明背景
[0004] 本发明提供从在合成过程中生成的具有类似极性的不需要的副产物中 纯化40-0-雷帕霉素衍生物的经济和有效的方式。雷帕霉素也称作西罗莫司， CAS[53123_88_9])。它是商购的由潮解性链霉菌（Streptomyces hygroscopicus)合 成的大环内酯天然产物。优选的衍生物40-0-(2-乙氧基乙基）雷帕霉素、乌米莫司 (Umirolimus) (INN/USAN)、Biolimus A9?(也称作BA9?)是活性药物成分，其被研发为用 于冠状动脉支架的药物涂层以预防平滑肌细胞增殖和再狭窄。这种^ limus'家族的其 它成员包括依维莫司（CAS[159351-69-6])、唑罗莫司（CAS[221877-54-9])和坦罗莫司 (CAS[162635-04-03])。已知该族成员在体内具有免疫抑制、抗真菌、抗肿瘤和/或抗炎活 性，并且用于治疗移植排斥、感染性疾病、自身免疫疾病和特征在于过度细胞增殖的病症。
[0005] BA9的化学结构由31-元三烯大环内酯组成，其保护核心雷帕霉素环结构且区别 仅在于在40位上添加了侧链，其中雷帕霉素的羟基已经被乙氧基乙基烷基化。
[0006] BA9与西罗莫司和其它西罗莫司衍生物相比的化学结构提供在图1中。BA9在结 构上与雷帕霉素（也称作西罗莫司）相关。该结构由在40位上具有乙氧基乙基化的雷帕 霉素31-元大环内酯三烯内酯环组成。
[0007] BA9、如西罗莫司一样结合胞内亲免蛋白FKBP12。认为得到的大环内酯/FKBP12复 合物随后以与西罗莫司类似的方式结合mTOR，即对于细胞周期进展具有决定性的蛋白质。 mTOR的失活导致几种特异性信号传导途经的抑制和在Gl-S期时的细胞周期阻止。
[0008] 由于BA9和其它雷帕霉素衍生物的治疗价值，所以该族活性剂的改进的制备方法 是期望的。本发明解决了这一问题和其它需求。
[0009] 发明概述
[0010] 本发明提供用于得到具有式I的结构的纯化的固体化合物的方法：
[0011]
[0012] 其中R1选自H ;Ra- (0) d-Rb，其中Ra是C丨5亚烷基，Rb是C丨 5烷基或C丨5亚烷基-OH， 且下标d是选自0_1的整数；C1 5烷基；C 6 i。芳基C i 5烷基；羟基C i 5烷基；
[0013] C6 i。芳基C1 5烷氧基；C1 5烷氧基C1 5烷基；酰基；酰基C1 5烷基；氨基C1 5烷基；C1 5 烷基氣基C1 5烷基；醜基氣基C i 5烷基；C i 5烷氧基幾基氣基C i 5烷基；和
[0014] C61。芳基。
[0015] 该方法包括：a)形成包含具有式I的结构的粗化合物和非极性溶剂的混合物，该 步骤在足以溶解所述化合物的条件下进行；b)使至少部分具有式I的结构的化合物固化； c)从所述混合物的溶剂中分离至少部分固化的化合物；和由此得到纯化的固体化合物。
[0016] 在另一个实施方案中，本发明提供BA9的晶体形式。
[0017] 附图简述
[0018] 图1显示西罗莫司、Biolimus A9和相关衍生物的化学结构。
[0019] 图2显示雷帕霉素衍生物的制备和本发明衍生物的纯化的方案。
[0020] 图3显示对BA9批号2A观察到的X-射线粉末衍射（XRPD)图案。
[0021 ] 图4显示对BA9批号2A观察到的示差扫描量热法（DSC)的热分析图。
[0022] 图5显示对BA9批号2B观察到的XRPD图案。
[0023] 图6显示对BA9批号2B观察到的DSC热分析图。
[0024] 图7显示对BA9批号2B观察到的光学显微照片。
[0025] 图8显示对BA9批号2B观察到的动态蒸汽吸附（DVS)动力学图。
[0026] 图9显示DVS实验后对BA9批号2B观察到的XRPD图案以及BA9形式I的参比图 案的覆盖。
[0027] 图10显示得自溶剂浆液的XRPD图案和BA9形式I的参比图案的覆盖。
[0028] 图11显示在抗溶剂结晶实验中得到的XRPD图案和BA9形式I的参比图案的覆盖。
[0029] 图12显示使用KBr片中的样品得到的BA9形式I的红外光谱。
[0030] 发明详述
[0031] I. -般介绍
[0032] 本发明提供用于纯化雷帕霉素衍生物包括Biolimus A9(BA9)的方法。该方法包 括从非极性有机溶剂中固化雷帕霉素衍生物，随后分离纯化的产物并且任选从极性有机溶 剂和水的混合物中沉淀。该方法的不同步骤如本文所述。发现有效地除去各种杂质因令人 惊奇的简便、经济的方法导致。这些优点如下文详细描述。
[0033] 通过降温简单固化可以由此从不需要的40-0衍生物杂质和非-40-0衍生物中清 洁地分离40-0衍生物的发现是令人惊奇和不可预测的。这在经济上是有利的，因为不需要 的副产物具有的类似极性通常数倍于期望的产物且它们难以使用大规模色谱技术分离。这 些方法可以用于制备显示优良稳定性的BA9的晶体形式。
[0034] II.定义
[0035] 术语"纯化的"是指已经加工除去杂质的化合物。杂质可以包括溶剂、用于制备化 合物的试剂、原料和产生所述化合物的反应副产物。在一些实施方案中，纯化的化合物基本 上不含其它种类。
[0036] 术语"粗化合物"是指包含期望的化合物（例如如本文所述的式I的化合物）和 至少另一种类的混合物，所述另一种类选自溶剂、试剂例如碱、原料和产生期望的化合物的 反应副产物。
[0037] "烷基"是指具有所示碳原子数的直链或支链饱和脂族基团。烷基可以包括任意 数里的碳，例如 C1 2、C1 3、C1 4、C1 5、C1 6、C1 7、C1 8、C1 9、C1 1CI、C2 3、C2 4、C2 5、C2 6、C3 4、C3 5、C3 6、 C4 5、C46和C56。例如，C16烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁 基、叔丁基、戊基、异戊基、己基等。烷基还可以指具有至多20个碳原子的烷基，例如、但不 限于庚基、辛基、壬基、癸基等。
[0038] "亚烷基"是指具有所示碳原子数并且连接至少两个其它基团的直链或支链饱和 脂族基团，即二价烃基。连接至亚烷基的两个部分可以连接至亚烷基的同一原子或不同原 子。例如，直链亚烷基可以是-(CH 2)n-的二价基团，其中η是1、2、3、4、5或6。有代表性的 亚烷基包括但不限于亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚异丙基、亚异丁基、亚仲丁基、亚戊基和亚 己基。
[0039] "链烯基"是指具有至少2个碳原子和至少1个双键的直链或支链烃。链烯基可以 包括任意数量的碳，例如 C2、C2 3、C2 4、C2 5、C2 6、C2 7、C2 8、C2 9、C2 10、C3、C3 4、C3 5、C3 6、C4、C4 5、 C4 6、C5、C5 6和C6。链烯基可以具有任意适合数量的双键，包括、但不限于1、2、3、4、5或5个 以上。链烯基的实例包括但不限于乙烯基（vinyl)(乙烯基（ethenyl))、丙烯基、异丙烯基、 1-丁烯基、2-丁烯基、异丁烯基、丁二烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、异戊烯基、1，3-戊二烯基、 1，4_戊二烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、1，3-己二烯基、1，4-己二烯基、1，5-己二 烯基、2,4_己二烯基或1，3,5_己三烯基。
[0040] "炔基"是指具有至少2个碳原子和至少1个三键的直链或支链烃。炔基可以包括 任意数量的碳，例如 c2、C2 3、C2 4、C2 5、C2 6、C2 7、C2 8、C2 9、C2 10、C3、C3 4、C3 5、C3 6、C4、C4 5、C4 6、 C5、C5 6和C6。炔基的实例包括、但不限于乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、异丁炔基、 仲丁炔基、丁二炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、异戊炔基、1，3-戊二炔基、1，4-戊二炔基、1-己 炔基、2-己炔基、3-己炔基、1，3-己二炔基、1，4-己二炔基、1，5-己二炔基、2,4_己二炔基 或1，3, 5-己三炔基。
[0041] "芳基"是指具有任意适合的环原子数和任意适合的环数的芳族环系。芳基可以包 括任意适合的环原子数，例如6、7、8、9、10、11、12、1