尿液中巯基类化合物检测试剂盒及制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及医学检验领域的尿液检测试剂，具体设及一种尿液中琉基类化合物检 测试剂盒及制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 在全世界危害女性健康的恶性肿瘤中，宫颈癌是全球女性中仅次于乳腺癌的最常 见的妇科恶性肿瘤之一。在一些发展中国家其发病率居首位，据国际癌症研究中屯、估计，每 年大约有371200的宫颈癌新发病例，占所有肿瘤的9. 8%，占女性新发病例的15%，其中 78 %的病例发生在发展中国家，发达国家仅占4. 4 %。我国地域广阔、人口众多，根据90年 代卫生部全国肿瘤防治研究办公室组织的大规模全国人口死亡原因调查显示，每年有新 发病例约10万，占世界宫颈癌新发病例总数的四分之一。经过几十年广泛开展妇科普查， 宫颈癌的发病率及死亡率降低了近68%，但从全国范围来看，宫颈癌的患病率仍居妇科恶 性肿瘤的第一位。
[0003] 宫颈癌前病变和宫颈癌发病过程中（早中晚期）整个琉基分子将不可逆的脱落并 从尿液中排出体外，而机体正常情况下并无琉基分子脱落，因此检测尿液中的琉基化合物 可用于宫颈癌的筛查和辅助诊断。临床数据及多篇文献表明：尿液琉基化合物浓度显著增 高常见于子宫颈组织癌变过程。
[0004] 现有技术中存在利用琉基可将憐鹤酸还原成鹤蓝而呈蓝色的特性制备出用于提 示宫颈癌病变的尿液中琉基类代谢物检测试剂盒，比如CN104181155A中就公开了一种相 关试剂盒及其制备方法，但由于尿液中除了琉基类代谢物具有还原性外，尿液中的尿酸和 Vc同样具有还原性，同样可W与憐鹤酸反应而显色，该文献中采用对照试剂中添加隶离子 排除琉基代谢物的方法，通过对照组和检测组的颜色深浅的比对来排除尿酸和Vc的干扰， 虽然运种方法可W排除假阳性的问题，但是肉眼分辨深浅，很容易造成误判，特别是在琉基 类代谢物含量较低时对照组和检测组的显色非常接近，分辨误差大，容易造成假阴性误判， 从而大大降低了该检测试剂的准确性和精确性，限制该产品的实际应用，且尿液中含有蛋 白会对试剂的准确性产生干扰
【发明内容】
[0005] 本发明提供了一种尿液中琉基类化合物检测试剂盒及制备方法和应用，用W解决 目前琉基检测试剂假阴性误判突出，检测准确性和精确度低的问题。
[0006] 为了解决上述技术问题，本发明的技术方案是：所述尿液中琉基类化合物检测试 剂盒，包括检测试剂、对照试剂和显色试剂；
[0007] 其中，所述检测试剂为包含亚隶离子化合物和=氯乙酸的水溶液；
[0008] 所述对照试剂为包含隶离子化合物、亚隶离子化合物和=氯乙酸的水溶液；
[0009] 所述显色试剂为包含憐鹤酸、娃鹤酸和裡离子化合物的缓冲溶液。
[0010] 其中对照试剂与检测试剂中=氯醋酸可破坏尿液中蛋白质分子的结构，使得干扰 蛋白质沉淀，避免假阳性产生，在=氯醋酸和憐鹤酸的分步作用下，近100%的蛋白质可W被除去，提高测定结果的准确性，试剂中亚隶离子可与尿液中的无机盐结合，防止其干扰整 个反应过程，加强试剂测定的稳定性。对照试剂中隶离子可选择性与尿液中琉基代谢物反 应，与检测试剂比对后排出假阳性问题。显色试剂中的娃鹤酸可优先与尿液中的还原性物 质如尿酸、Vc等反应，避免其与憐鹤酸发生还原反应，从而有效避免了因尿酸、Vc显色干扰 对照组和检测组的显色比对，导致假阴性误判。
[0011] 进一步的，所述亚隶离子化合物选自硝酸亚隶或氯化亚隶，所述隶离子化合物选 自硫酸隶、硝酸隶或氯化隶，所述裡离子化合物选自硫酸裡或碳酸裡。
[0012] 进一步的，所述亚隶离子化合物为氯化亚隶，所述隶离子化合物为氯化隶，所述裡 离子化合物为碳酸裡。
[0013] 进一步的，所述检测试剂中，亚隶离子的浓度为0. 001mo1/LS氯醋酸的质 量浓度为lOwt%;所述对照试剂中，亚隶离子的浓度为0.OOlmol/l，隶离子的浓度为 0. 04-0. 045mol/l，S氯醋酸质量浓度为lOwt%;所述显色试剂中，憐鹤酸的浓度为36-57g/ 以娃鹤酸的浓度为8. 5-20邑/1，裡离子的浓度为1-2. 7mmol/L。所述离子浓度是指W亚隶 离子、隶离子或裡离子的浓度，相应亚隶离子化合物、隶离子化合物或裡离子化合物的浓度 要根据上述离子浓度进行换算，比如亚隶离子的浓度为0.OOlmol/l，则氯化亚隶的浓度为 0.OOlmol/l，隶离子浓度为0. 04-0. 045mol/l，则氯化隶的浓度为0. 04-0. 045mol/l，裡离 子的浓度为1-2. 7mmol/l，则碳酸裡的浓度为0. 5-1. 35mmol/L。所述隶离子的浓度如果低 于0. 04mol/L时，则在琉基代谢物浓度较高时，存在不能完全反应的情况，则之后还是会与 憐鹤酸反应显色，则会做出阴性的误判。
[0014] 进一步的，所述缓冲溶液为乙酸钢/乙酸缓冲体系，抑值为4. 8-5. 6。在此区间憐 鹤酸试剂有良好的显色反应。
[0015] 进一步的，所述检测试剂的量为1ml，对照试剂的量为1ml，显色试剂的量为4ml。
[0016] 本发明还提供了上述尿液中琉基类化合物检测试剂盒的制备方法，包括如下步 骤：
[0017] 1)检测试剂的制备：将亚隶离子化合物和S氯醋酸溶于蒸馈水中，保持无菌环境 将其分装入5ml安飯瓶并拉丝灌封；
[0018] 2)对照试剂的制备：将隶离子化合物、亚隶离子化合物和=氯醋酸溶于蒸馈水 中，而后在无菌环境下将其分装入5ml安飯瓶中并拉丝灌封；
[0019] 扣显色试剂制备：
[0020] a、称取憐鹤酸溶于蒸馈水中，然后加入裡离子化合物；
[0021] b、称取娃鹤酸溶于蒸馈水中；
[0022] C、配置乙酸钢/乙酸缓冲体系的缓冲溶液，所述缓冲溶液中乙酸钢浓度为 0. 2mol/l，乙酸浓度为 0. 3mol/L;
[0023] t将a、b、C步骤所制备的试剂案按1: (1~1. 5) : (1. 5~2. 0)的体积比混合均 匀，并分装入5ml安飯瓶并拉丝灌封。
[0024] 进一步的，所述显色试剂制备中步骤a配置的试剂中，所述憐鹤酸的浓度为 160g-200g/l，所述裡离子化合物的浓度为2. 3-4. 7mmol/L。
[00巧]进一步的，所述显色试剂制备中步骤b配置的试剂中，所述娃鹤酸的浓度为 30g-60g/L〇
[00%] 本发明还提供了上述尿液中琉基类化合物检测试剂盒在宫颈癌的筛查和辅助诊 断方面的应用。
[0027] 本发明提供的技术方案利用琉基能将憐鹤酸还原成鹤蓝而呈现蓝色的特性来检 测尿液中琉基，但憐鹤酸能够破坏了蛋白质的结构，产生蛋白质沉淀，干扰检测结果，出现 假阳性现象，在=氯醋酸和憐鹤酸的分步作用下，近100%的蛋白质可W被除去，提高测定 结果的准确性；；试剂中的碳酸裡或硫酸裡对憐鹤酸的还原反应有很好的催化作用；对照 试剂与检测试剂中的亚隶离子可先与尿液中的无机盐结合，防止其干扰整个反应过程，加 强试剂测定的稳定性；对照试剂中隶离子能与尿液中琉基结合，而检测试剂中不含隶离子 故尿液中若含琉基将还原憐鹤酸从而使其变蓝；最为重要的是显色试剂中的娃鹤酸可与尿 液中的还原性物质如尿酸、Vc等优先反应，从而排除因尿酸、Vc的干扰导致的假阴性问题， 与现有技术相比，本发明提供的技术方案工艺简单、稳定性高，检测结果假阳性率和假阴性 率低等特点，适合用于宫颈癌的筛查和辅助诊断。
【具体实施方式】
[0028] 本发明中所用试剂和器皿均为市购商品。 阳〇29] 实施例1
[0030] 制作1000个尿液中琉基类化合物检测试剂盒，过程如下：
[0031] 一、检测试剂的制备：将氯化亚隶和=氯醋酸分别溶于蒸馈水，配置亚氯化亚隶浓 度为0.OOlmol/l，=氯醋酸质量浓度为lOwt%，保持无菌环境将其分装入5ml安飯瓶并拉 丝灌封，每个安飯瓶装量1ml，据此制备检测试剂1000支；
[0032] 二、对照试剂的制备：将氯化隶、氯化亚隶和=氯醋酸溶于蒸馈水，配置氯化隶的 浓度为0. 〇4mol/l，氯化亚隶的浓度为0. 001mol/l，S氯醋酸质量浓度为lOwt%，在无菌环 境下将其分装入5ml安飯瓶中并拉丝灌封，每个安飯瓶装量1ml，据此制备对照试剂1000 支；
[0033] S、显色试剂的制备：其中憐鹤酸的浓度为38旨/1，碳酸裡的浓度为1. 13mmol/l， 娃鹤酸的浓度为11.4g/L。
[0034]a、称取适量憐鹤酸充分溶于蒸馈水中，最后加入碳酸裡，其中憐鹤酸浓度为160g/ 以碳酸裡的浓度为350mg/l，4°C冷藏备用；
[0035] b、称取适量娃鹤酸充分溶于蒸馈水中，其中娃鹤酸浓度为40g/l，4°C冷藏备用；
[0036] C、缓冲溶液的制备：将0. 2mol/L乙酸钢水溶液与0. 3mol/L乙酸水溶液按 5. 9:4. 1的体积比混合，pH值为4. 8,置2°C- 8°C冷藏保存备用；
[0037] t将a、b、c步骤所制备的试剂按1:1. 2:2. 0混合，并将混合均匀的试剂分装入5ml 安飯瓶并拉丝灌封，每个安飯瓶装量为4ml，制备1000支。
[003引四、将一、二、S制备好的安飯瓶分别按检测试剂1支、对照试剂1支，显色试剂1 支，即可制作试剂盒1000盒。
[0039] 实施例2
[0040] 制作1000个尿液中琉基类化合物检测试剂盒，过程如下：
[0041] 一、检测试