羟丙基倍他环糊精的定量检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及药物分析领域，尤其设及径丙基倍他环糊精的定量检测方法。
【背景技术】
[0002] 曲札巧巧为拉萨大黄的主要脂溶性成分，是一种二苯乙締巧类化合物。今年研究 结果表明，二苯乙締巧类化合物具有抗氧化清除自由基、抗肿瘤、降血脂、抗动脉粥样硬化 等生物活性。注射用曲札巧巧由昆明制药集团股份有限公司生产。注射用曲札巧巧W曲札 巧巧为主药，W径丙基倍他环糊精为辅料，其中曲札巧巧的质量分数为16. 6667 %，径丙基 倍他环糊精的质量分数为83. 3333%。
[0003] 由于主药和辅料的稳定性都会影响药品的品质，因此，对注射用曲札巧巧的质量 评价需检测曲札巧巧的含量还需要检测径丙基倍他环糊精的含量。但是由于注射用曲札巧 巧中组分相对复杂，且曲札巧巧的含量较大，因此对径丙基倍他环糊精的定量较为不易。
[0004] 高效快速的高效液相色谱-蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD)，与普通的HPLC方法 相比，蒸发光散射器在测定没有紫外吸收或仅在紫外末端有吸收的成分上有较大的优势和 较广泛的应用。因此，应当建立利用HPLC-ELSD对注射用曲札巧巧中径丙基倍他环糊精含 量进行测定的方法。
【发明内容】
[0005] 有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供径丙基倍他环糊精的定量检测方 法。该方法精密度、重复性、准确度皆良好，适用于对曲札巧巧中径丙基倍他环糊精的检测。
[0006] 本发明提供的径丙基倍他环糊精的定量检测方法，WHPLC-ELSD为检测器，W水 和乙腊的混合物为流动相，根据检测结果对径丙基倍他环糊精定量。
[0007] 对一种物质进行定量检测时需要对该方法进行精密度、重复性和准确度等多方面 的鉴定，对本发明提供方法的鉴定结果表明：
[0008] 精密度：同一份径丙基倍他环糊精标准品，连续进样六次，保留时间的相对标准偏 差为0. 095%，而峰面积的的相对标准偏差为0. 86%，小于2%，说明该方法的精密度良好。
[0009] 重复性：取径丙基倍他环糊精供试品，由同一分析人员精密称取6份，平行操作测 定6份供试品溶液，结果表明，含量相对标准偏差为0. 64%，在规定范围内，说明此本发明 提供方法的重复性较好。
[0010] 准确度：在样品中加入已知量的标准品，W本发明提供的方法对径丙基倍他环糊 精进行定量，计算加样回收率。在80 %、100 %、120 % =个浓度范围内，每组浓度平行=次检 测回收率总平均值为100. 28%，RSD为1. 206%，符合回收率要求。说明该方法具有良好的 准确度。 W11] 在本发明的实施例中，流动相中水和乙腊的体积比为（40~50) : (50~60)。
[0012] 在一些实施例中，流动相中水和乙腊的体积比为45:55。
[0013] 液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要 求流动相对样品具有一定的溶解能力且与样品不产生化学反应，其黏度要尽量小，w便得 到好的分离效果；且流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。其沸点不可W太低，否则 容易产生气泡，导致实验无法进行。对于径丙基倍他环糊精而言，本发明所采用的的流动相 能够保证更好的检测效果，优于其他流动相。
[0014] 在本发明的实施例中，流动相的流速为0. 8ml?min1~1. 2ml?min1。
[0015] 在一些实施例中，流动相的流速为1. 0ml?min1。
[0016] 流动相的流速过高会降低塔板数，而塔板数的降低会导致样品分离度的降低。
[0017] 在本发明的实施例中，HPLC-ELSD的漂移管溫度为90°C~95°C。
[0018] 在一些实施例中，HPLC-ELSD的漂移管溫度为93°C。
[0019] 在本发明的实施例中，HPLC-ELSD的色谱柱为地enomenexlima畑2色谱柱。
[0020] 对本发明提供的方法而言，径丙基倍他环糊精的极性，更适宜本发明所采用的色 谱柱。色谱柱的尺寸会对分离结果产生影响，其内径会对流动相的流速产生影响，长度较短 的色谱柱运行时间短，柱压较低；长度较长的色谱柱分辨率高，但运行时间增长。 阳02U 在本发明的实施例中，HPLC-ELSD的色谱柱的尺寸为4. 6mmX(100mm~250mm)， 5um〇
[0022] 在一些实施例中，HPLC-ELSD的色谱柱的尺寸为4. 6mmX250mm，5um。
[0023] 对柱溫的选择需考虑待分离物质本身的特性，柱溫影响流动相对待测物质的溶解 度也会影响柱压。一般情况下，提高柱溫有利于提高分离度，但溫度过高会导致柱压过低， 不利于物质的检出。
[0024] 在本发明的实施例中，HPLC-ELSD色谱柱的柱溫为20°C~30°C。 阳0巧]在一些实施例中，HPLC-ELSD色谱柱的柱溫为25°C。 阳0%] 在本发明的实施例中，HPLC-ELSD的洗脱方式为等度洗脱。
[0027] 在本发明的实施例中，HPLC-ELSD的载气为氮气，载气流量为2.化/min~2.化/ min。
[0028] 在一些实施例中，HPLC-ELSD的载气为氮气，载气流量为2.化/min。
[0029] 在本发明的实施例中，定量采用标准曲线法。
[0030] 具体的，定量方法为：根据径丙基倍他环糊精样品浓度与HPLC-ELSD检测所得峰 面积绘制标准曲线，根据标准曲线获得径丙基倍他环糊精中有效成分的含量。
[0031] 标准曲线的绘制方法为：W径丙基倍他环糊精的浓度为横坐标，WHPLC-ELSD检 测色谱图中径丙基倍他环糊精的峰面积为纵坐标绘制标准曲线。
[0032] 采用本发明提供的方法，径丙基倍他环糊精的保留时间为3. 5min~3. 6min。
[0033] 在一些实施例中，进样量为10yL。 W34] 本发明提供的方法对径丙基倍他环糊精的定量检测范围为160yg/mL~ 4000yg/血。
[0035] 实验表明，采用本发明提供的方法对注射用曲札巧巧进行检测，其中的曲札巧巧 成分的检出峰不会对径丙基倍他环糊精的检出峰产生干扰，说明本发明提供的方法可W用 于注射用曲札巧巧中倍他环糊精的定量检测。
[0036] 本发明提供的方法能够用于对注射用曲札巧巧中径丙基倍他环糊精的定量检测。
[0037] 在本发明的实施例中，对注射用曲札巧巧中径丙基倍他环糊精定量时，样品的前 处理方法为，将注射用曲札巧巧溶解于超纯水后，进入HPLC-ELSD检测，进样量为10yL。
[0038] 本发明提供的径丙基倍他环糊精的定量检测方法，W HPLC-ELSD为检测器，W水 和乙腊的混合物为流动相，根据检测结果对径丙基倍他环糊精定量。采用本发明提供的方 法对径丙基倍他环糊精样品进行定量能够具有良好的精密度、重复性和准确度。且实验表 明，采用该方法对注射用曲札巧巧中的径丙基倍他环糊精进行定量检测，径丙基倍他环糊 精的色谱峰和曲札巧巧的色谱峰相互不产生干扰，采用该方法能够实现对注射用曲札巧巧 中径丙基倍他环糊精的准确定量。
【附图说明】
[0039]图1示本发明提供方法对不同待测液的检测谱图，其中，图1-a示空白的色谱图； 图1-b示对照溶液的色谱图；图1-C示样品溶液的色谱图。
【具体实施方式】
[0040] 本发明提供了注射用曲札巧巧中径丙基倍他环糊精的定量检测方法，本领域技术 人员可W借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改 动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应 用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
【发明内容】
、精神和范围内 对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0041] 本发明采用的仪器和试剂皆为普通市售品，皆可于市场购得。
[0042] 其中BP221S型分析天平（Sartorius公司）；
[0043] 叫tiMate3000高效液相色谱仪（美国戴安公司）；
[0044] Alltech2000型蒸发光散射检测器（美国奥泰科技中国有限公司）；
[0045]PhenomenexLuna畑2柱（美国菲罗口公司）；
[0046] 径丙基倍他环糊精（西安德立生物医药股份有限公司20121127);
[0047] 乙腊（色谱纯，韩国德山药品工业株批号：DA2J21);
[0048] 注射用曲札巧巧（昆药集团股份有限公司批号：20121031-01)，
[0049] 注射用曲札巧巧W曲札巧巧为主药，W径丙基倍他环糊精为辅料，其中曲札巧巧 的质量分数为16. 6667%，径丙基倍他环糊精的质量分数为83. 3333%;
[0050] 超纯水（超纯水净化系统制得）。
[0051] 下面结合实施例，进一步阐述本发明： 阳0巧实施例1
[0053] 精密称取径丙基倍他环糊精适量加水溶解制成每1ml中含有4mg的溶液，作为 储备液。精密量取储备液 2ml、4ml、5ml、6ml、7. 5ml、10ml、15ml、20ml分别置 50ml、50ml、 50ml、50ml、50ml、50ml、50ml、50ml容量瓶中，分别加水稀释，定容至刻度线，摇匀。精密量取 10y1进高效液相进行测定，色谱条件为：
[0054]色谱柱：PhenomenexLuna饥掉ym(4. 6mmX250mm)色谱柱； 阳05引流动相冰-乙腊（45: 5W二元等度洗脱；
[0056]流速：1ml?min1;
[0057] 漂移管溫度：93°C ;
[0058] 载气流量：2.化/min;
[0059]柱溫：25°C。
[0060] 测定结果见表1:
[0061] 表1径丙基倍他环糊精线性实验测定结果
阳〇6引 W对照品的浓度（yg/ml)为横坐标，W峰面积的平均值为纵坐标进行线性回归 计算，得到线性回归方程：Y= 2822. 8X-185098,r= 0. 9997(n= 9)。 W64] 可见，线性方程的r值为0. 9997,表明本发明提供的方法能够具有良好的线性。检 测范围为 160yg/ml~4000yg/ml。 W65] 实施例2
[0066] 精密称取径丙基倍他环糊精适量加水溶解制成每1ml中含有4mg的溶液，作为储 备液。精密量取储备液7. 5ml置50ml量瓶中，定容至50mL。精密量取径丙基倍他环糊精溶 液10y1，注入高效液相色谱仪，连续进样六次，色谱条件为：
[0067]色谱柱：PhenomenexLuna畑25ym(4. 6mmX250mm)色谱柱； W側流动相冰-乙腊（45: 二元等度洗脱；
[0069]流速：1ml?min1;
[0070] 漂移管溫度：93°C;
[0071] 载气流量：2.化/min;