对羟基苯丙氨酸酪氨酸尿液检测试剂的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及对羟基苯丙氨酸酪氨酸尿液检测试剂，本发明还涉及人体尿液中单羟酚类代谢物的检测方法。
【背景技术】
[0002]癌症的早期筛查是目前降低癌症发病率和死亡率的一个非常重要的手段。目前常见的检测方法包括各种肿瘤标志物，红外线、X光等。肿瘤标志物需要到医院抽血，需要专门的设备进行检测，红外线和X光也同样如此。目前的筛查方法都涉及各种仪器设备，方法复杂，费用高。尿中肿瘤标志物的检测一直是国际上研究的热点，利用尿中肿瘤标志物来筛查早期癌症已得到科学研究者和消费者的普遍认可。
[0003]癌症筛查试剂需要具有很好的灵敏度和特异性，但是灵敏度和特异性是一对矛盾，提高灵敏度必降低特异性，人体尿液中的成分非常复杂，任何生理方面的变化都会使得尿液中的成分发生很大的变化，所以癌症筛查试剂的灵敏度和特异性是本领域的一个难点。
【发明内容】
[0004]为了解决上述技术问题，本发明提供了一种新的对羟基苯丙氨酸酪氨酸尿液检测试剂，所述检测试剂至少由酸性溶液、磷钼酸和/或磷钼酸可溶性盐混合而成，所述酸性溶液至少含有H+、Ni2+、Hg+、N03离子，所述磷钼酸和/或磷钼酸可溶性盐在检测试剂中的浓度为 45-900 mmol/Lo
[0005]作为本发明优选的技术方案之一，所述检测试剂中Hg+的浓度与磷钼酸的浓度比为 1:0.9-2 ο
[0006]作为本发明优选的技术方案之一，所述检测试剂中Hg+的浓度为50-1000mmol/L。
[0007]作为本发明优选的技术方案之一，所述检测试剂中H+的浓度为100-4000mmol/L。
[0008]作为本发明优选的技术方案之一，所述检测试剂中Hg+的浓度与Ni 2+的浓度比为1:1-4。
[0009]作为本发明优选的技术方案之一，所述检测试剂中NO3的浓度为500-3000mmol/
L0
[0010]作为本发明优选的技术方案之一，所述检测试剂还含有浓度为100-200mmol/L的硫酸根离子。
[0011]作为本发明优选的技术方案之一，所述检测试剂还含有浓度为25-500mmol/L的钼酸根离子。
[0012]单羟酚类代谢物的检测方法，包括以下步骤，
-获取待测人体尿液；
-将检测试剂与待测人体尿液混合，得到混合液，
所述检测试剂为含有H+、Ni2+、Hg+、N03离子的酸性溶液，所述检测试剂中Hg +的浓度为50-100mmOl/L，所述检测试剂还含有浓度为50-900mmOl/L的磷钼酸和/或磷钼酸可溶性盐；
-判断混合液的颜色，当混合液的颜色为砖红色或褐色或玫红色时，则表示待测人体尿液含有单羟酚类代谢物，当混合液的颜色为白色或淡黄色时，则表示待测人体尿液不含有单羟酚类代谢物。
[0013]参考以下详细说明更易于理解本申请的上述以及其他特征、方面和优点。
【具体实施方式】
[0014]除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。
[0015]如本文所用术语“由…制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
[0016]连接词“由…组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由…组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。
[0017]当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“I至5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“I至4”、“1至3”、“1-2”、“1-2和
4-5”、“1_3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。
[0018]此外，本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显旨指单数形式。
[0019]对羟基苯丙氨酸酪氨酸尿液检测试剂，所述检测试剂至少由酸性溶液、磷钼酸和/或磷钼酸可溶性盐混合而成，所述酸性溶液至少含有H+、Ni' Hg\ NO3离子，所述磷钼酸和/或磷钼酸可溶性盐在检测试剂中的浓度为45-900 mmol/Lo
[0020]磷钼酸
本发明所述的磷钼酸是指磷酸与三氧化钼反应生成的磷钼酸和/磷钼酸可溶性盐，磷钼酸是通用的显色试剂，但是本发明的磷钼酸能够抑制尿液中蛋白质或多肽影响，使得检测尿液中单羟酚类代谢物更为准确。虽然其机理未得到普遍认可，但是本发明的发明人认为:尿液中的多肽或蛋白质表面存在大量的负电荷，会吸附大量的亚汞离子或镍离子，使得亚汞离子、镍离子、硝酸根离子的酸性溶液与单羟酚类代谢物无法发生显色反应。磷钼酸的存在下，使得检测尿液中单羟酚类代谢物更为准确。
[0021]将三氧化钼加入到反应器中，并按(质量比)三氧化钼:水=1:10的比例加入搅拌均匀，再加入85%磷酸(三氧化钼:磷酸摩尔比为12:1-6:1)，煮沸3-6小时，反应前溶液为乳白色，前期为金黄色，后期为绿色，反应进行中应保持反应液平稳沸腾并加水保持液面高度，反应后期pH值控制在0-1.0左右，再经真空抽滤除去滤渣，滤液滴加30%过氧化氢溶液，使溶液由绿色转变成黄色，然后蒸发浓缩至溶液温度为105°C时，将溶液缓慢冷却结晶，最后离心分离制得磷钼酸晶体。
[0022]从所述检测试剂还含有浓度为50-900mmol/L的磷钼酸和/或磷钼酸可溶性盐，由于本发明的磷钼酸在检测试剂中可能存在不同程度的电离，所以本发明的磷钼酸的浓度是以磷钼酸加入检测试剂之前的量为基础计算。此外，本发明的可溶性盐是指在检测试剂的酸性溶液中可溶。
[0023]显佴试剂
作为单羟酚类代谢物的显色试剂，本发明的检测试剂为含有H+、Ni2+、Hg+、N03离子的酸性溶液，酸性溶液与单羟酚类代谢物反应，得到砖红色或褐色或玫红色的反应产物，而不存在单羟酚类代谢物时，则获得白色或接近黄色或灰白色的反应产物。
[0024]作为本发明一种优选的技术方案，从获得更为明显的反应产物角度出发，所述检测试剂中H+的浓度为100-4000mmol/L。本发明中的磷钼酸虽然在水溶液中会电离出氢离子，但是为了简便地描述本发明，本发明中的氢离子的浓度不将磷钼酸电离出的氢离子计算在内，并将磷钼酸当做不发生电离的多元酸来计算。
[0025]作为本发明一种优选的技术方案，从获得更为明显的反应产物角度出发，所述检测试剂中Hg+的浓度为lO-lOOOmmol/L，优选地，Hg+的浓度为50-100mmol/L，本发明的磷钼酸能够有效地让显色反应按照预计的方式进行，尤其是在亚汞离子浓度低的情况下。所述检测试剂中Hg+的浓度与磷钼酸的浓度比为1:0.9-2ο采用上述的比例可以更有经济、有效地获得有效的检测效果。
[0026]作为本发明一种优选的技术方案，从获得更为明显的反应产物角度出发，所述检测试剂中NO3的浓度为500-14000mmol/L。
[0027]作为本发明一种优选的技术方案，从获得更为明显的反应产物角度出发，所述检测试剂中还包括SO42，所述的SO42浓度为50-3000mmol/L。
[0028]钼酸根离子
作为本发明一种优选的技术方案，从抑制本发明中人体尿液中干扰物质出发，所述检测试剂还含有钼酸根离子，所述钼酸根离子在检测试剂中的浓度为25-500mmol/L。钼酸根离子可以与磷钼酸起到协同作用，使得显色反应更加稳定。
[0029]其他离子
作为本发明一种优选的技术方案，从获得离子平衡角度来，本发明的检测试剂还可以包含任意的正、负离子，该正、负离子只要不与检测试剂中的离子或其他成分发生化学反应，尤其是不能发生沉淀反应。如可以选择硫酸根离子等带有负电荷的离子，以及钠离子等带有正电荷的离子。需要指出的是，本发明的实施例中，其他离子可能不会指出，如无指出，根据电离平衡的原理，缺少的正、负离子是指含有硫酸根离子或钠离子。所以，本发明前述的各种离子比例并不受电离平衡的限制，可以是任意的选择。
[0030]此外，本发明中的检测试剂还会含有少量的氢氧根离子。
[0031]检测方法
人体尿液中单羟酚类代谢物的检测方法，包括以下步骤， -获取待测人体尿液；
-将检测试剂与待测人体尿液混合，得到混合液，
所述检测试剂为含有H+、Ni2+、Hg+、N03离子的酸性溶液，所述检测试剂还含有磷钼酸和/磷钼酸可溶性盐，所述磷钼酸和/磷钼酸可溶性盐的在检测试剂中的浓度为50-900mmol/L ；
-判断混合液的颜色，当混合液的颜色为砖红色或褐色或玫红色时，则表示待测人体尿液含有单羟酚类代谢物，当混合液的颜色为白色、淡黄色时，则表示待测人体尿液不含有单羟酚类代谢物。
[0032]实施方式:
实施方式1，对羟基苯丙氨酸酪氨酸尿液检测试剂，所述检测试剂至少由酸性溶液、磷钼酸和/或磷钼酸可溶性盐混合而成，所述酸性溶液至少含有H+、Ni' Hg\ NO3离子，所述磷钼酸和/或磷钼酸可溶性盐在检测试剂中的浓度为45-900 mmol/Lo