一种同时检测禽肉组织中多种药物残留量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种色谱检测方法，特别涉及一种超高效液相色谱串联质谱检测药物 残留的方法，属于色谱分析领域。
【背景技术】
[0002] 禽肉一般指鸡肉、鸭肉、鹅肉等，以高蛋白、低脂肪、高营养而著称，在人们的日常 生活中扮演着具有举足轻重的意义。现在市场上销售的禽肉大多是规模化养殖的，由于规 模化养殖过程中禽类聚集的密度大，一旦有一只家禽生病则会快速的传染开来，出现流行 病疫。所以，一般养殖户都会在养殖过程中添加适量的药物以防止病疫的出现，相应的在在 国标中也有明确的药物使用种类和时间的要求。
[0003] -些不法养殖户为了提高禽类的养殖密度，防止病疫的出现非法使用国家法律法 规明文禁用的药物来防治禽病，更有甚者使用违禁药物促进禽类生长。国家食品药品监督 管理部门发现后，作出相当高的重视，对于各地的禽肉制品进行严格的抽查检验工作，检测 的对象主要包括了以下药物成分：
[0004] 金刚烷胺类药物，主要有盐酸金刚烷胺、盐酸金刚乙胺，作为人用抗病毒药，常用 于感冒的防治，农业部第560号公告将其列为养殖类禁用药物。
[0005] 喹乙醇，又称喹酰胺醇，对人具有致畸形、致突变、致癌作用，美国和欧盟将其列入 禁用饲料添加剂，《中国兽药典》（2005版）也明确规定禁止在家禽及水产养殖中使用喹乙 醇。
[0006] 替米考星，欧盟对替米考星的限量标准为家禽肌肉、皮、脂肪75 μ g/kg，肝 1000 μ g/kg，肾250 μ g/kg ;日本对替米考星的限量标准是鸡肝及可食用下水lmg/kg，我国 仅对鸡肉产品参考欧盟的限量要求制定了限量标准。
[0007] 地塞米松，一种糖皮脂腺激素，日本在肯定列表制度中规定其限量为0. 003mg/kg， 而且仅限部分兽类动物使用，我国农业部第235号公告禁止禽类使用地塞米松。
[0008] 但是，现有的禽肉中药物残留的检测方法大多比较老旧，是从其它检测方法修改 调整而来，具有种类参差不齐、成本高、检测周期长、操作难度大等问题。如金刚烷胺类药物 残留的检测常用的是气相色谱法；喹乙醇及其代谢物多采用高效液相色谱仪配备紫外检测 器；地塞米松和替米考星残留常用液相色谱-串联质谱法进行检测。各种检测方法采用的 仪器、检测方法、试剂等均存在不同程度的差异，而且可检测的范围及精密度均存在巨大差 异，如何提出一种简便、快捷、经济、可靠的检测方法，一次性完成多种药物的残留检测势在 必行。
【发明内容】
[0009] 本发明的目的在于克服现有技术中药物残留检测方法老旧、标准不统一的缺陷， 提供一种禽肉组织中多种药物残留的检测方法。本发明方法能够检测盐酸金刚烷胺、盐酸 金刚乙胺、替米考星、地塞米松、喹乙醇代谢物等药物残留成分，既可以检测其中一种成分， 也可以一次性检测多种。本发明的方法是QuEChERS/超高效液相色谱串联质谱法（ultra pressure liquid chromatography-tandem mass spectrometry，UPLC-MS/MS)，是一种先进 的快速检测方法。
[0010] 为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
[0011] 一种禽肉组织中药物残留的检测方法，包括以下步骤：
[0012] (1)取禽肉样品，加入氯化钠和乙腈，（剧烈）振摇1~5分钟，最好是2分钟，加 入2~5倍体积的1~4mol/L的氢氧化钠溶液，最好是2mol/L氢氧化钠溶液3倍（体积 质量比ml/g)，再振荡30秒至5分钟，最好是1~2分钟。然后，30~50°C超声提取10~ 40分钟，最好超声提取20~30分钟。离心，吸取上清液备用（可以将此上清液储存于蒸发 瓶中备用），其余溶液蒸干。离心过程中，转速大于3000r/min，如4000r/min离心5min，吸 取上层乙腈IOml于蒸发瓶中，其余溶液蒸干。
[0013] (2)向步骤⑴蒸干得到的残渣中加入浓盐酸，调节pH约1~3。优选的，使用的 是1~6mol/L盐酸进行pH调节。经过调节PH=I~3,最好是pH约等于2.0。然后，加 入乙臆振荡提取，最好是加入10.0 ml乙臆振荡2min。经过乙臆振荡提取的溶液，尚心后，吸 取上清液和步骤（1)中吸取的上清液合并（合并于蒸发瓶中，方便浓缩处理），30~50°C浓 缩至干，得到样品提取液残渣。
[0014] 优选的，离心过程中，转速大于3000r/min，如4000r/min离心5min，吸取上层乙腈 IOml合并于第一次提取液中，最好是在40°C浓缩至近干，得到样品提取液残渣，待净化。
[0015] (3)向样品提取液残渣中加入基质固相分散剂，乙酸乙酯2ml，涡旋2min，取上层 液体，氮气吹干，然后加入1.0 mL 30vol %甲醇溶液（含0.1 vol %甲酸），超声溶解，过膜，待 进样。
[0016] 具体的来说，超声溶解使用的溶液是是含有30%甲醇和0. 1 %甲酸，余量为水的 混合溶液。
[0017] 所述基质固相分散剂是用量为0. 6g。所述基质固相分散剂是C18和无水硫酸钠。 其中，C18使用量为50mg，无水硫酸钠使用量为550mg。
[0018] (4)采用高效液相色谱-串联质谱进行检测。以含5mmol/L乙酸铵0. 1 %甲酸水 和甲醇为流动相梯度洗脱。
[0019] 进一步，梯度洗脱程度为：流动相：A为含5mmol/L乙酸铵的0. 1%甲酸水，B为甲 醇；梯度洗脱程序，梯度条件为：10% B :0~30秒；10%~90% B :30秒~2分钟；90% B : 2~4分钟；90%~10% B :4~4. 5分钟；10% B :4· 5~6. 5分钟。
[0020] 本发明的检测方法，应用了最新的QuEChERS技术和超高效液相色谱串联质谱检 测法，通过QuEChERS技术简捷、方便的样品预处理工艺，实现了禽肉样品的高效快速处理。 同时，通过对样品处理过程的不断优化改良使得样品处理速度，目标检测物回收率提高，使 得多种药物成分能够在一次性的检测分析过程中快速检出，检测结果重现性好，适合推广 应用。
[0021] 与现有技术相比，本发明的有益效果：
[0022] 1.本发明的检测方法节省检测时间：由原来按国标和地方标准或行业标准用时4 小时/单样单项缩减至4小时/单样五项目，用时仅不到原来的1/3。
[0023] 2.本发明的检测方法节省物料（消耗材料）成本：试剂消耗由原来的50元/样， 减缩到10元/样。如果用试剂盒检测，试验盒检测仅单项目费用在50元左右，新方法相比 于试剂盒法成本降幅更大，优势更明显。
[0024] 3.本发明的检测方法减少设备投入：由于一齐分析把原来单项检测5倍的用时缩 短为1倍用时，仪器的使用频率减至1/5,维护成本和故障成本大大降低。
[0025] 4.本发明的检测方法环保：前处理简单，试剂用量大大减少，对环境的污染也随 之降低，实现了低碳环保。
【附图说明】：
[0026] 图1为七种化合物的Ql扫描质谱图。
【具体实施方式】
[0027] 以下对检测过程中的部分参数进一步的优化选择，经过发明人长期大量的试验研 究，当采用以下色谱/质谱检测参数时，检测结果更加准确可靠。
[0028] 色谱-质谱条件：
[0029] 色谱柱：Phenomenex Kinetex (IOOmmX 4. 6mm，2. 6 μ m)，柱温：35°C，流速：0· 3mL/ min，进样量：5yL，流动相：A为含5mmol/L乙酸铵的0. 1%甲酸水，B为甲醇；梯度洗脱程序 见表1。
[0030] 表1洗脱梯度程序
[0032] 质谱工作参数：
[0033] 电喷雾离子源（electrospray ionization mass spectrometry conditions， ESI);正、负离子扫描模式；多反应监测（MRM)采集方式；脱溶剂温度：350°C ;干燥气流速： 10. 0