一种用液相色谱法分离测定克利贝特及其有关物质的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于分析化学领域，具体涉及液相色谱法分离测定克利贝特及其有关物质 的方法。
【背景技术】
[0002] 克利贝特是一类一线降脂药物，可降低总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和载 脂蛋白B的浓度，对于各种类型的高脂血症均有效。英文名称为Clinofibrate，化学名称 为 2, 2'-(4, 4'-Cyclohexylidenediphenoxy)_2, 2'-dimethyldibutaoic acid，分子式为 。28氏6〇6。
[0004] 在合成克利贝特的过程中，有几个重要的中间体可能由于去除不完全而影 响药物的纯度，这些影响药物纯度的杂质称为工艺杂质；而降解杂质是在药物生产或 贮藏过程中产生的。上述有关物质皆无治疗作用，还可能影响药物的稳定性和疗效， 甚至危害人体健康，对于克利贝特主要控制的有关物质有5个，分别是有关物质1 : 4,4'-(Cyclohexane-l，l_diyl)diphenol;有关物质 2:[2,2'-(4,4'_cyclohexylidene diphenoxy)]_2, 2,-dimethyl diethyl butyrate;有关物质 3:2-{4-[l-(4-Hydroxy-phenyl) -cyclohexyl] -phenoxy} -2-methyl-butyric acid ethyl ester ;有关物质 4 : 2-{4-[I-(4-Hydroxy-phenyl)-cyclohexyl]-phenoxy}-2-methyl-butyric acid ;有关物 M 5:2- (4-{1-[4- (1-Ethoxycarbonyl-lmethyl-propoxy)-phenyl]-cyclohexyl}-phenoxy )-2-methyl-butyric acid。结构式分别为：
[0005]
[0007] 对于合成克利贝特中引入的有关物质和贮藏过程中产生的降解杂质，在原料药中 是需要进行质量控制的。因此，实现克利贝特及其有关物质的分离，在克利贝特的质量控制 方面具有重要的现实意义。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的在于提供一种分析克利贝特的纯度以及分离其有关物质的方法，从 而实现克利贝特与其有关物质的分离和测定，以保证克利贝特的纯度，实现其终产品的质 量控制。
[0009] 本发明所述的用液相色谱法分析克利贝特的纯度以及分离其有关物质的方法，是 采用辛烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的缓冲盐溶液-有机相为流动相。
[0010] 上述所说的色谱柱以辛烷基硅烷键合硅胶为填料，选自Alltima、Kromasil或 Apollo等品牌。
[0011] 上述所说的有机相选自以下化合物：甲醇、乙腈、异丙醇、四氢呋喃，优选乙腈。
[0012] 上述所说的方法，其流动相缓冲盐溶液-有机相采用梯度洗脱。
[0013] 上述所说的方法中，缓冲盐溶液中包含的缓冲盐选自磷酸盐、甲酸盐、乙酸盐、柠 檬酸盐、高氯酸盐等，优选磷酸盐。
[0014] 其中缓冲盐溶液中包含的缓冲盐的浓度为0. 03mol/L。
[0015] 本发明所述的分离测定方法，可按照以下方法实现：
[0016] 1)取克利贝特样品适量，用流动相溶解样品，配制成每ImL含克利贝特及其有关 物质0. 1~I. 5mg的样品溶液。
[0017] 2)设置流动相流速为0. 5~2. 5mL/min，流动相流速优选1.0 mL/min，检测波长为 205~250nm，检测波长优选231nm，柱温箱温度为20~40°C，柱温箱温度优选25°C。
[0018] 3)取1)的样品溶液10~50 μ L，注入液相色谱仪，完成克利贝特与有关物质的分 离测定。其中：
[0019] 高效液相色谱仪的型号，无特别要求，本发明采用的色谱仪为岛津高效液相
[0020] 色谱仪：LC_2〇AT，CBM_2〇A，SIL_2〇AC，SPD-M 2〇A，CTO-lOASvp
[0021] 色谱柱：C8(Alltima，250X4. 6mm，5 μπι)
[0022] 流动相：A相：0· 03mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液（pH 2. 2) ;B相：乙腈
[0023] 流速：1. OmT,/mi η
[0024] 检测波长：23Inm
[0025] 柱温：25°C
[0026] 进样体积：10 μ L
[0027] 洗脱梯度：
[0029] 本发明采用C8(Alltima，250X4.6mm，5ym)，能够有效的分离克利贝特及其有关 物质。本发明解决了克利贝特及其有关物质的分离测定问题，从而确保了克利贝特原料药 的质量可控。
【附图说明】
[0030] 图1为实施例1时的系统适用性HPLC图；
[0031 ] 图2为实施例1时的克利贝特HPLC图；
[0032] 图3为实施例2时的系统适用性HPLC图；
[0033] 图4为实施例2时的克利贝特HPLC图；
[0034] 图5为实施例3时的系统适用性HPLC图；
[0035] 图6为实施例3时的克利贝特HPLC图；
[0036] 图7为实施例3的溶剂HPLC图；
【具体实施方式】：
[0037] 以下通过实例形式，对本发明涉及的克利贝特及其有关物质检测方法作进一步的 详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上 述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
[0038] 实施例1
[0039] 仪器与条件
[0040] 岛津高效液相色谱仪：LC-20AT，CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CT0-10ASvp ;
[0041] 色谱柱：C8(Alltima，250X4. 6mm，5 μπι)
[0042] 流动相：A相：0. 03mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液（pH 2. 2) ;B相：乙腈
[0043] 洗脱梯度：
[0045] 流速：1. OmT,/mi η
[0046] 检测波长：23Inm
[0047] 柱温：25°C
[0048] 进样体积：10 μ L
[0049] 实验步骤
[0050] 取克利贝特适量，用流动相溶解样品，配制成含克利贝特约lmg/mL的克利贝特溶 液；分别取克利贝特的已知杂质适量，用流动相溶解，配制成含各杂质浓度约为〇.5mg/ml 的杂质混合溶液；取杂质混合溶液及克利贝特溶液适量，配制成系统